張小云，潘勝男，連建春

南京醫(yī)科大學(xué)附屬淮安第一醫(yī)院檢驗科，江蘇淮安 223021

類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎（rheumatoid arthritis，RA）是一種以慢性侵蝕性關(guān)節(jié)炎為主要特征的全身性自身免疫性疾病，致殘率高。研究表明，RA患者血液存在多種抗環(huán)瓜氨酸肽抗體（anti-cyclic citrullinated peptide antibody，抗CCP抗體）及免疫復(fù)合物，在自身免疫損害中發(fā)揮重要作用[1-3]?？笴CP抗體和抗突變型瓜氨酸波形蛋白抗體（anti-mutated citrullinated vimentin antibody，抗MCV抗體）是RA最為重要的自身抗體，對RA的診斷和預(yù)后評估具有重要意義。文獻(xiàn)報道25-羥維生素D[25-hydroxyvitamin D，25（OH）D]在人體內(nèi)有免疫調(diào)節(jié)作用，自身免疫性疾病患者體內(nèi)25（OH）D水平降低且與疾病活動性有關(guān)。本研究比較RA患者血清中抗CCP抗體、抗MCV抗體、25（OH）D水平并分析其與相關(guān)臨床重要指標(biāo)之間的關(guān)系，研究抗CCP抗體、抗MCV抗體和25（OH）D在RA診斷及其活動性判斷中的價值。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2016年8月至2021年11月南京醫(yī)科大學(xué)附屬淮安第一醫(yī)院收治的466例RA患者納入RA組，其中男103例，女363例，年齡17～87歲，平均（57.61±13.34）歲。所有RA患者均符合美國風(fēng)濕病學(xué)會/歐洲抗風(fēng)濕病聯(lián)盟發(fā)布的RA診斷標(biāo)準(zhǔn)[2]：至少有一個關(guān)節(jié)腫痛和滑膜炎，X線檢查顯示典型的RA骨破壞改變；排除合并其他自身免疫性疾病、嚴(yán)重感染性疾病、器官功能衰竭或惡性腫瘤的患者。將同期住院的非RA的其他自身免疫性疾病及代謝性疾病患者100例納入非RA組，其中男22例，女78例；年齡18～83歲，平均（55.50±9.50）歲；全身性骨關(guān)節(jié)炎10例，系統(tǒng)性紅斑狼瘡50例，干燥綜合征10例，強(qiáng)直性脊柱炎10例，痛風(fēng)20例，均符合國內(nèi)外的相應(yīng)診治標(biāo)準(zhǔn)。選取同期健康體檢者100人納入對照組，其中男22例，女78例；年齡17～78歲，平均（57.44±11.08）歲，均無自身免疫性疾病家族史。本研究經(jīng)南京醫(yī)科大學(xué)附屬淮安第一醫(yī)院倫理委員會批準(zhǔn)（倫理審批號：KY-2022-027-01），所有受試者均簽署知情同意書。

1.2 研究方法

分別抽取三組受試者的靜脈血約3ml，靜置30min后，離心分離血清，–80℃保存待測。魏氏法檢測紅細(xì)胞沉降率（erythrocyte sedimentation rate，ESR），免疫散射比濁法檢測C反應(yīng)蛋白（C-reactive proten，CRP）、補(bǔ)體C3和C4；雙抗體夾心法檢測抗CCP抗體、抗MCV抗體；電化學(xué)發(fā)光法檢測25（OH）D；嚴(yán)格按照試劑說明書進(jìn)行操作。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法

采用SPSS 23.0軟件對結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析。計量資料符合正態(tài)分布的采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，組間比較采用單因素方差分析；繪制受試者操作特征曲線分析抗CCP抗體、抗MCV抗體、25（OH）D診斷RA的效能；抗MCV抗體與各臨床指標(biāo)的相關(guān)性采用Pearson相關(guān)性分析。P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 三組受試者的血清抗MCV抗體、抗CCP抗體和25（OH）D水平比較

RA組患者的血清抗MCV抗體和抗CCP抗體水平顯著高于非RA組和對照組（P<0.05）；RA組患者的血清25（OH）D水平顯著低于對照組（P<0.05），見表1。

表1 三組受試者的血清抗MCV抗體、抗CCP抗體和25（OH）D水平比較（±s）

表1 三組受試者的血清抗MCV抗體、抗CCP抗體和25（OH）D水平比較（±s）

注：與RA組比較，*P<0.05

組別 抗MCV抗體（U/ml）抗CCP抗體（RU/ml）25（OH）D（ng/ml）對照組（n=100） 18.08±2.46* 10.44±2.82* 31.89±4.22*非RA組（n=100）19.72±2.63* 15.53±3.52* 15.08±2.98 RA組（n=466） 538.20±46.22 583.60±40.37 15.53±3.94

2.2 抗CCP抗體、抗MCV抗體、25（OH）D及三者聯(lián)合對RA的診斷效能

抗CCP抗體、抗MCV抗體、25（OH）D診斷RA的曲線下面積（area under the curve，AUC）分別為0.74、0.81、0.75，三項聯(lián)合診斷RA的AUC為0.90，敏感度為83.70%，特異性為82.40%，見表2。

表2 抗CCP抗體、抗MCV抗體、25（OH）D及三項聯(lián)合對RA的診斷效能

2.3 RA患者的抗MCV抗體與各臨床指標(biāo)的相關(guān)性分析

在RA患者中，抗MCV抗體與ESR、CRP均呈正相關(guān)，與補(bǔ)體C3、C4均呈負(fù)相關(guān)（P<0.05），見表3。

表3 RA患者的抗MCV抗體與各臨床指標(biāo)的相關(guān)性分析

3 討論

RA是一種主要累及全身多個關(guān)節(jié)，特別是以小關(guān)節(jié)受累為特征的自身免疫性疾病，隨著疾病進(jìn)展，可出現(xiàn)關(guān)節(jié)的畸形和活動受限，甚至出現(xiàn)多系統(tǒng)、多器官損害，嚴(yán)重影響患者的生活質(zhì)量[4-5]。早期診斷RA的血清學(xué)指標(biāo)主要為類風(fēng)濕因子（rheumatoid factor，RF），RF雖然敏感度高，但特異性差。尋找新型RA相關(guān)抗體，有助于提高RA的診斷效率。2000年，人工合成環(huán)瓜氨酸肽成功，之后其被逐漸應(yīng)用于RA的臨床診斷。同時，與RF聯(lián)合運(yùn)用可大大提高不典型RA診斷的準(zhǔn)確率，避免漏診[6-7]。目前，瓜氨酸相關(guān)自身抗體在RA診斷和預(yù)后評估中日益成為重要的血清指標(biāo)。瓜氨酸相關(guān)自身抗體家族包括抗MCV抗體、抗核周因子、抗CCP抗體和抗角蛋白抗體等，其可在RA患者的滑液、滑膜細(xì)胞和血清中被檢測到。波形蛋白是一種細(xì)胞骨架蛋白。波形蛋白在凋亡的巨細(xì)胞內(nèi)瓜氨酸化，改變蛋白結(jié)構(gòu)，可進(jìn)一步增加潛在的抗原決定簇[8]?？笴CP抗體和抗MCV抗體同屬抗瓜氨酸化蛋白抗體家族。CCP抗原決定簇可通過人工進(jìn)行合成，而MCV抗原來源于天然物質(zhì)；CCP分子相比波形蛋白分子小20倍，因此其抗原決定簇相對減少，僅1～2個潛在決定簇，而波形蛋白有45個可被瓜氨酸化的潛在抗原位點(diǎn)，故抗MCV抗體在臨床上具有較高的特異性和敏感度[9]。

近年來，抗MCV抗體作為RA診斷指標(biāo)的研究越來越多。龔艷會等[10]研究顯示，檢測RA患者血清抗MCV抗體，其敏感度為71.60%，特異性為93.10%；蔡艷娟等[11]研究顯示抗MCV抗體診斷RA的敏感度和特異性分別為89.87%、91.21%，明顯高于RF；申旺等[12]研究顯示抗CCP抗體和抗MCV抗體診斷RA的敏感度分別為83.80%和91.40%，診斷RF陰性的RA的敏感度分別為65.20%和81.00%。本研究結(jié)果與既往研究結(jié)果接近。

25（OH）D作為維生素D的主要代謝形式，是評價體內(nèi)維生素D的最佳指標(biāo)。研究報道維生素D缺乏與自身免疫性疾病相關(guān)，RA患者血清25（OH）D水平明顯降低且與疾病活動性相關(guān)[13]。維生素D可抑制單核細(xì)胞向樹突狀細(xì)胞分化，從而減少可向T細(xì)胞提呈抗原的細(xì)胞數(shù)量，這在RA的發(fā)生發(fā)展中起重要作用。此外，維生素D抑制B細(xì)胞的成熟分化，抑制免疫球蛋白的產(chǎn)生，從而影響調(diào)節(jié)性免疫應(yīng)答[14]。然而，也有研究發(fā)現(xiàn)部分RA患者血清25（OH）D水平升高。出現(xiàn)RA患者血清25（OH）D水平不一致的原因可能是由研究樣本量小及臨床癥狀的異質(zhì)性引起的[15-17]。本研究結(jié)果顯示，RA患者的血清25（OH）D水平明顯低于健康人群，診斷RA的敏感度為48.80%，特異性為89.30%。

研究發(fā)現(xiàn)抗MCV抗體在RA患者中呈高表達(dá)，并與多項臨床指標(biāo)呈正相關(guān)。Avdeeva等[18]研究發(fā)現(xiàn)抗MCV抗體與ESR、CRP呈正相關(guān)，抗MCV抗體陽性患者的關(guān)節(jié)疾病活動度評分高于抗體陰性的患者。Keskin等[19]研究發(fā)現(xiàn)RA患者的抗MCV抗體與ESR、CRP呈正相關(guān)。劉利君等[20]研究發(fā)現(xiàn)抗MCV抗體與ESR、CRP無明顯的相關(guān)性，但與X線顯示的骨質(zhì)破壞相關(guān)。隨著X線分期的增高，抗MCV抗體水平呈現(xiàn)出增高趨勢，抗MCV抗體水平升高提示RA患者的骨破壞加重。申旺等[12]研究顯示抗MCV抗體水平在CRP>50mg/L、有關(guān)節(jié)腔積液的RA患者中明顯升高；在RA緩解組中，抗MCV抗體水平在治療3個月后明顯下降；在RA未緩解組中，治療前后的抗MCV抗體水平變化不大。但I(xiàn)nnala等[21]研究顯示，RF、抗CCP抗體和抗MCV抗體均不能夠單獨(dú)反映RA的疾病活動性，但三者聯(lián)合可有效反映RA的疾病活動性。本研究顯示抗MCV抗體與RA疾病活動性指標(biāo)ESR、CRP均呈正相關(guān)，與補(bǔ)體C3、C4均呈負(fù)相關(guān)。雖然目前關(guān)于抗MCV抗體與RA疾病活動性的相關(guān)性研究結(jié)果不一致，但大部分研究認(rèn)為二者具有一定的相關(guān)性，提示抗MCV抗體檢測有利于對RA患者骨破壞情況、炎癥反應(yīng)等臨床特征進(jìn)行判斷，為臨床醫(yī)生診治RA患者提供幫助。

綜上，抗CCP抗體、抗MCV抗體和25（OH）D在RA患者中具有較高的敏感度和特異性，有助于RA患者的臨床診斷?？筂CV抗體有助于判斷疾病的活動性，可作為RA活動性的新型診斷指標(biāo)。