劉 沖,張 靜,李 勝,楊婷婷

1.湖北省黃石市婦幼保健院/湖北理工學(xué)院附屬婦幼保健院檢驗(yàn)科,湖北黃石 435000;2.湖北省黃石愛康醫(yī)院醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)科,湖北黃石 435000;3.湖北省黃石婦幼保健院/湖北理工學(xué)院附屬婦幼保健院公共衛(wèi)生科,湖北黃石 435000

急性呼吸道感染是兒童最常見的感染性疾病之一,疾病進(jìn)展迅速且易合并多系統(tǒng)嚴(yán)重疾病[1]。在我國(guó)急性呼吸道感染是5歲以下兒童病死的主要原因,對(duì)家庭及社會(huì)造成較重負(fù)擔(dān)[2]。兒童急性呼吸道感染的病因復(fù)雜,主要涉及病毒、細(xì)菌和真菌感染。其中80%以上感染是由病毒引起的,近年來出現(xiàn)的一些非典型病原體如新型冠狀病毒、支原體、衣原體等同樣對(duì)兒童的生命健康構(gòu)成嚴(yán)重威脅[3-4]。早期明確病因?qū)和毙院粑栏腥炯膊〉闹委熀皖A(yù)防有著重要意義,目前診斷急性呼吸道感染的方法主要包括免疫學(xué)方法、病原體分離培養(yǎng)、病原核酸檢測(cè)等手段[5]?？焖倏乖涂贵w檢測(cè)通常具有快速、簡(jiǎn)便和經(jīng)濟(jì)的特點(diǎn),適用于初步篩查和快速診斷[6]。病原體核酸檢測(cè)則更加精確和準(zhǔn)確,可提供詳細(xì)的病原體信息,并且在病原體的早期檢測(cè)和潛伏期感染的診斷中具有較高的靈敏度和特異度[7]。臨床醫(yī)生需要依據(jù)患者情況選擇方法。本研究收集2020年1月1日至2022年12月31日黃石市婦幼保健院及黃石愛康醫(yī)院兒科門診、住院患者的血清標(biāo)本及咽拭子標(biāo)本進(jìn)行血清IgM抗體及核酸檢測(cè),對(duì)常見病原體進(jìn)行分析,同時(shí)進(jìn)行方法學(xué)比較,現(xiàn)將結(jié)果報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 依據(jù)《實(shí)用兒科學(xué)》中的診斷標(biāo)準(zhǔn),收集2020年1月1日至2022年12月31日在黃石市婦幼保健院及黃石愛康醫(yī)院兒科住院及門診就診的排除新型冠狀病毒感染的未成年人急性呼吸道感染患者15 784例,其中男8 435例、女7 349例,年齡0 d至18歲,參考王衛(wèi)平主編的《兒科學(xué)》,將納入研究的未成年人分為新生兒組(0～28 d)、嬰兒組(>28 d至1歲)、幼兒組(>1～3歲)、兒童組(>3～14歲)、青少年組(>14～<18歲)。本研究經(jīng)過黃石市婦幼保健院及黃石愛康醫(yī)院倫理委員會(huì)審查并通過。

1.2儀器與試劑 ABI7500核酸擴(kuò)增儀;日本奧林巴斯公司CX22LED熒光顯微鏡檢測(cè)抗體熒光;呼吸道病原體抗體檢測(cè)使用西班牙CIRCLELL試劑盒;呼吸道病原體核酸檢測(cè)使用武漢中幟生物七項(xiàng)呼吸道病原體核酸檢測(cè)試劑盒。

1.3方法

1.3.1標(biāo)本采集 采集所有患者外周血3 mL注入促凝管中,以4 000 r/min離心5 min后收集血清用于病原抗體檢測(cè)。

1.3.2抗體檢測(cè) 所有入院就診患者在使用抗菌藥物前采集3 mL靜脈血離心分離血清,采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)檢測(cè)病原體血清IgM抗體,操作按照CIRCLELL試劑盒核酸檢測(cè)說明書進(jìn)行,同時(shí)以間接免疫熒光法作為參考方法對(duì)標(biāo)本進(jìn)行檢測(cè),以間接免疫熒光法為參考基準(zhǔn)分析結(jié)果的準(zhǔn)確性。

1.3.3核酸檢測(cè) 選取2021年12月至2022年5月在黃石市婦幼保健院及黃石愛康醫(yī)院兒科住院及門診就診的排除新型冠狀病毒感染的未成年人急性呼吸道感染患者384例,同時(shí)進(jìn)行病原體血清IgM抗體檢測(cè)和病原體核酸檢測(cè)。咽拭子采集后放置標(biāo)本保存液中,漩渦振蕩2 min充分混勻,取沉淀提取病原體核酸,按照試劑盒說明書進(jìn)行病原體核酸提取純化,取5 μL純化后的模板,按照試劑盒說明書使用ABI7500核酸擴(kuò)增儀檢測(cè)。

1.3.4結(jié)果第三方驗(yàn)證 對(duì)抗體檢測(cè)和核酸檢測(cè)結(jié)果不一致的標(biāo)本送武漢艾迪康醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)公司進(jìn)行基因高通量測(cè)序。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS22.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理。計(jì)數(shù)資料用頻數(shù)、百分率表示,組間比較采用χ2檢驗(yàn),以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。采用Kappa一致性檢驗(yàn)對(duì)血清IgM抗體檢測(cè)及核酸檢測(cè)結(jié)果的一致性進(jìn)行分析。

2 結(jié) 果

2.12020-2022年呼吸道病原體IgM抗體總體檢出情況 收集的15 784標(biāo)本中,共計(jì)檢出呼吸道病原體IgM抗體3 867例,檢出率為24.50%,2020、2021、2022年呼吸道病原體抗體檢出率分別為17.62%、28.70%、25.89%,不同年份之間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=167.699,P<0.001)。呼吸道病原體IgM抗體檢出率最高的為肺炎支原體(2 407例,15.25%),其次為乙型流感病毒(593例,3.76%),第三為軍團(tuán)菌(340例,2.15%)。除腺病毒在不同年份的檢出率差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=1.455,P=0.483)外,其他病原體IgM抗體在不同年份的檢出率差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P<0.05)。見表1。

表1 2020-2022年采集標(biāo)本中呼吸道病原體IgM抗體檢出情況比較[n(%)]

2.2呼吸道病原體感染季節(jié)分布 不同季節(jié)未成年人呼吸道病原體IgM抗體檢出率比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=123.351,P<0.001),其中秋季檢出率最高(29.86%),冬季最低(20.49%);不同病原體感染的高峰季節(jié)也有所不同,乙型流感病毒和呼吸道合胞病毒感染高峰均是冬季,肺炎支原體及軍團(tuán)菌感染高峰是秋季。不同季節(jié)乙型流感病毒、副流感病毒、呼吸道合胞病毒、肺炎支原體、肺炎衣原體、軍團(tuán)菌、Q熱立克次體IgM抗體檢出率比較,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P<0.05)。見表2。

2.3呼吸道病原體感染在不同年齡組的分布情況 不同年齡組呼吸道病原體IgM抗體檢出率不同,其中以兒童組檢出率最高(33.87%),新生兒組檢出率最低(3.46%);不同年齡組乙型流感病毒、副流感病毒、呼吸道合胞病毒、肺炎支原體、軍團(tuán)菌、Q熱立克次體IgM抗體檢出率比較,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P<0.05)。見表3。

表3 不同年齡未成年人采集標(biāo)本中呼吸道病原體IgM抗體檢出情況比較[n(%)]

2.4呼吸道病原體感染在不同性別的分布情況 8 435例男性未成年人患者中呼吸道病原體IgM抗體檢出率為23.09%,7 349例女性未成年人患者中呼吸道病原體抗體IgM檢出率為26.11%,男、女患者IgM抗體檢出率比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=19.341,P<0.001)。不同性別間乙型流感病毒、肺炎支原體、Q熱立克次體IgM抗體檢出率比較,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=6.296、17.522、5.938,均P<0.05),其他病原體IgM抗體檢出率在不同性別未成年人患者中比較,差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見表4。

表4 不同性別未成年人采集標(biāo)本中呼吸道病原體IgM抗體檢出情況比較[n(%)]

2.5血清IgM抗體檢測(cè)與核酸檢測(cè)結(jié)果比較 384例比對(duì)標(biāo)本中,血清IgM抗體檢測(cè)陽(yáng)性115例,陽(yáng)性率為29.95%;核酸檢測(cè)陽(yáng)性131例,陽(yáng)性率為34.11%。核酸檢測(cè)的陽(yáng)性率高于血清IgM抗體檢測(cè),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.007),二者診斷一致性較好(Kappa=0.809,P<0.001),見表5。對(duì)常見的7種呼吸道病原體分別采用血清IgM抗體檢測(cè)和核酸檢測(cè),結(jié)果顯示除腺病毒使用兩種檢測(cè)方法的一致性一般外(Kappa=0.492,P<0.001),甲型流感病毒、乙型流感病毒、副流感病毒、呼吸道合胞病毒、肺炎支原體、肺炎衣原體采用兩種方法檢測(cè)的一致性較好(均Kappa>0.75,P<0.001)。見表6～12。

表5 呼吸道病原體血清IgM抗體檢測(cè)與核酸檢測(cè)總體結(jié)果(n)

表6 甲型流感病毒IgM抗體檢測(cè)與核酸檢測(cè)結(jié)果比較(n)

表7 乙型流感病毒IgM抗體檢測(cè)與核酸檢測(cè)結(jié)果比較(n)

表8 副流感病毒IgM抗體檢測(cè)與核酸檢測(cè)結(jié)果比較(n)

表9 腺病毒IgM抗體檢測(cè)與核酸檢測(cè)結(jié)果比較(n)

表10 呼吸道合胞病毒IgM抗體檢測(cè)與核酸檢測(cè)結(jié)果比較(n)

表11 肺炎支原體IgM抗體檢測(cè)與核酸檢測(cè)結(jié)果比較(n)

表12 肺炎衣原體IgM抗體檢測(cè)與核酸檢測(cè)結(jié)果比較(n)

2.6兩種檢測(cè)方法結(jié)果不一致的標(biāo)本分析 比對(duì)的384例血清和咽拭子標(biāo)本中,有8例標(biāo)本核酸檢測(cè)結(jié)果為陰性,血清IgM抗體檢測(cè)結(jié)果為陽(yáng)性;有24例標(biāo)本核酸檢測(cè)結(jié)果為陽(yáng)性,血清IgM抗體檢測(cè)結(jié)果為陰性。將上述32例標(biāo)本進(jìn)行測(cè)序分析,結(jié)果顯示測(cè)序結(jié)果與核酸檢測(cè)結(jié)果一致。

3 討 論

急性呼吸道感染是未成年人的常見病和多發(fā)病,近年來隨著抗菌藥物的廣泛使用,未成年人急性呼吸道感染的主要病因已經(jīng)由細(xì)菌感染逐步轉(zhuǎn)變?yōu)椴《炯胺堑湫秃粑啦≡w感染[8]。針對(duì)呼吸道感染不同的病因,臨床上的治療手段也有所不同,細(xì)菌感染主要以使用抗菌藥物治療為主,而病毒及非典型病原體感染則以對(duì)癥治療為主,因此明確病因?qū)χ笇?dǎo)臨床合理使用抗菌藥物、減少抗菌藥物耐藥有著重要的意義[9]。呼吸道病毒和非典型病原體感染在臨床癥狀和體征上難以與細(xì)菌感染區(qū)別,目前主要的診斷方法包括病原體培養(yǎng)、血清學(xué)方法、病原體核酸檢測(cè)等。因?yàn)椴≡w培養(yǎng)時(shí)間長(zhǎng)、陽(yáng)性率低,因此非臨床首選方法[10];而血清學(xué)檢測(cè)則因?yàn)榭焖?、便捷常常作為首選,但也存在著假陽(yáng)性和假陰性的缺點(diǎn)[11]。近年來隨著分子診斷技術(shù)的提高,病原體核酸檢測(cè)被臨床大規(guī)模應(yīng)用,作為對(duì)臨床血清學(xué)診斷的一種補(bǔ)充,該方法具有快速、準(zhǔn)確的優(yōu)勢(shì),能夠提供更為精確的病原體診斷結(jié)果[12]。早期迅速、準(zhǔn)確地進(jìn)行呼吸道病原體檢測(cè)并了解本地區(qū)的流行病學(xué)特征對(duì)于兒童急性呼吸道感染的診斷與治療具有重要意義,這有助于指導(dǎo)臨床醫(yī)生制訂個(gè)體化的治療方案、合理使用抗菌藥物,并對(duì)公共衛(wèi)生干預(yù)措施進(jìn)行優(yōu)化以應(yīng)對(duì)感染的流行。

本研究結(jié)果顯示,收集的本地區(qū)2020-2022年共計(jì)15 784例病例中,9種病原體的血清IgM抗體的總檢出率為24.50%,該結(jié)果與國(guó)內(nèi)外其他文獻(xiàn)報(bào)告的結(jié)果基本一致[1,13],其中肺炎支原體的IgM抗體檢出率最高,為15.25%,其次是乙型流感病毒、軍團(tuán)菌,混合感染的檢出率較低,因此本地區(qū)未成年人急性呼吸道感染最主要的病原體為肺炎支原體,研究結(jié)果與國(guó)內(nèi)相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道的肺炎支原體感染屬于日常檢出率最高的非典型呼吸道病原體結(jié)論一致[14]。肺炎支原體是兒童社區(qū)獲得性肺炎的最主要致病微生物,占10%～40%,且每隔3～7年會(huì)暴發(fā)流行一次[15],兒童感染肺炎支原體后主要以發(fā)熱和咳嗽為主,影像學(xué)主要表現(xiàn)為肺間質(zhì)炎癥,與其他致病菌感染難以區(qū)分,容易造成誤診[16]。本研究結(jié)果顯示,本地區(qū)肺炎支原體感染主要季節(jié)為夏秋季節(jié),感染的年齡段主要分布在幼兒及兒童,且感染受性別影響,感染率呈逐年上升的趨勢(shì),臨床應(yīng)引起足夠的重視。未成年男女患者在病原體IgM抗體總檢出率及乙型流感病毒、肺炎支原體、Q熱立克次體IgM抗體檢出率比較,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),說明未成年部分病原體感染存在性別差異。不同病原體感染存在一定的季節(jié)差異,本研究顯示本地區(qū)夏秋季節(jié)感染率高于春冬季,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05》。但不同類別的病原體也存在差異,如乙型流感病毒感染高峰期是冬季和春季,肺炎支原體高發(fā)于夏季和秋季,研究結(jié)果與相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道基本一致[17-18]。不同年齡段未成年人中,其中以>3～14歲入學(xué)入托兒童感染率最高,為33.87%,這可能與該年齡段兒童在幼兒園、學(xué)校發(fā)生的校內(nèi)感染有關(guān),因此要注意做好學(xué)齡兒童的呼吸道感染預(yù)防與監(jiān)測(cè)工作,時(shí)刻警惕小范圍內(nèi)的呼吸道感染暴發(fā)。

呼吸道感染病原體檢測(cè)對(duì)于臨床診斷和治療有著重要意義,目前診斷呼吸道感染最常用的手段是血清學(xué)方法。但是血清學(xué)診斷早期呼吸道感染靈敏度低,且容易受到體內(nèi)諸如異嗜性抗體、類風(fēng)濕因子等的干擾而出現(xiàn)假陽(yáng)性結(jié)果,因此單純使用血清學(xué)IgM抗體檢測(cè)方法診斷呼吸道感染病原體容易產(chǎn)生誤診和漏診[19]。本研究采用的多重呼吸道病原體核酸檢測(cè)能夠同時(shí)檢測(cè)多種呼吸道病原體,相對(duì)于傳統(tǒng)的血清學(xué)檢測(cè)方法具有高靈敏度和高特異度、快速出結(jié)果、節(jié)約資源等優(yōu)勢(shì),目前已被廣泛應(yīng)用于臨床實(shí)踐中,病原體核酸檢測(cè)對(duì)于呼吸道感染的診斷、流行病學(xué)調(diào)查和疫情監(jiān)測(cè)等方面具有重要意義。

綜上所述,本地區(qū)未成年人呼吸道感染主要以肺炎支原體感染、乙型流感病毒感染多見,夏秋季節(jié)是未成年人呼吸道感染的高發(fā)季節(jié),其中入學(xué)兒童為高發(fā)病群體。臨床診斷未成年人呼吸道感染時(shí)需要考慮季節(jié)、年齡等因素,依據(jù)不同的需求及時(shí)選擇不同的病原學(xué)檢測(cè)方法,為早發(fā)現(xiàn)、早治療呼吸道感染提供實(shí)驗(yàn)室依據(jù),且應(yīng)依據(jù)不同病原體合理用藥,避免盲目使用抗菌藥物。