摘要：為驗(yàn)證在優(yōu)化樣品溶劑與優(yōu)化色譜條件下，采用高效液相色譜儀同時(shí)測(cè)定兩種不同復(fù)方磺胺類藥物中主要組分含量的可行性，文章通過對(duì)照品含量對(duì)比試驗(yàn)、線性范圍試驗(yàn)、重復(fù)性試驗(yàn)、準(zhǔn)確度試驗(yàn)、耐用性試驗(yàn)、專屬性試驗(yàn)、穩(wěn)定性試驗(yàn)和添加回收率試驗(yàn)等，采用高效液相色譜法同時(shí)測(cè)定復(fù)方磺胺間甲氧嘧啶鈉粉和復(fù)方磺胺氯噠嗪鈉粉兩種藥物中的磺胺間甲氧嘧啶鈉、磺胺氯噠嗪鈉和甲氧卞啶3種化合物含量，對(duì)本試驗(yàn)采用的高效液相色譜法進(jìn)行方法學(xué)驗(yàn)證。試驗(yàn)結(jié)果表明，兩種復(fù)方磺胺類藥物中的磺胺間甲氧嘧啶鈉、磺胺氯噠嗪鈉和甲氧卞啶3種化合物能被完全分離，峰型良好；線性范圍試驗(yàn)表明，上述3種化合物的峰面積與其濃度線性關(guān)系較好，濃度線性范圍較廣，3種化合物濃度較好的范圍分別為：磺胺間甲氧嘧啶鈉6～205 μg·mL-1、磺胺氯噠嗪鈉6～202 μg·mL-1、甲氧卞啶1～39 μg·mL-1，判定系數(shù)均為R2=0.999 9。方法學(xué)驗(yàn)證結(jié)果表明，本試驗(yàn)采用的高效液相色譜法重復(fù)性好、準(zhǔn)確度高、耐用性強(qiáng)，具有良好的專屬性和穩(wěn)定性。在添加回收試驗(yàn)中，上述3種化合物的添加回收率均大于98%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差值（RSD）為0.06%～0.75%，均滿足方法學(xué)要求。

關(guān)鍵詞：高效液相色譜法；磺胺間甲氧嘧啶鈉；磺胺氯噠嗪鈉；甲氧卞啶

磺胺類藥物是人工合成的抗菌藥，具有抗菌譜廣、性質(zhì)穩(wěn)定等優(yōu)點(diǎn)?？咕鲂┘籽跗S啶（TMP）自1969年被首次發(fā)現(xiàn)后，與磺胺類藥物聯(lián)合使用可顯著增強(qiáng)藥物的抗菌作用，擴(kuò)大疾病治療范圍[1-3]。因此，即使后來有大量抗生素相繼問世，磺胺類藥物仍廣泛應(yīng)用于獸醫(yī)臨床學(xué)，用于治療和預(yù)防動(dòng)物疾病。

目前，《中國(guó)獸藥典》2020年版一部[4]和《獸藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)》2017年版化學(xué)藥品卷[5]規(guī)定的磺胺類獸藥檢測(cè)方法各不相同，有永停滴定法、紫外可見分光光度計(jì)法和高效液相色譜法（HPLC）。與高效液相色譜法相比，永停滴定法的操作較為繁瑣，易引起測(cè)量誤差，對(duì)操作者的經(jīng)驗(yàn)要求更高；采用紫外可見分光光度計(jì)法檢測(cè)時(shí)，由于磺胺類藥物結(jié)構(gòu)都有共軛雙鍵，在做鑒別和組分含量測(cè)定時(shí)存在專屬性弱等缺點(diǎn)，而且檢測(cè)機(jī)構(gòu)在檢測(cè)不同種類的磺胺類獸藥時(shí)，平行采用不同檢測(cè)方法存在費(fèi)時(shí)、費(fèi)力、檢測(cè)效率低的問題。因此，若建立一個(gè)可同時(shí)檢測(cè)多種磺胺類獸藥的色譜條件可有效解決這些問題。本研究通過參考其他學(xué)者的相關(guān)研究[6-10]，優(yōu)化樣品溶劑，建立利用高效液相色譜法能同時(shí)檢測(cè)復(fù)方磺胺氯噠嗪鈉粉和復(fù)方磺胺間甲氧嘧啶鈉粉的色譜條件，保證檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確可靠，有效提高檢測(cè)效率，為磺胺類獸藥檢測(cè)方法的改進(jìn)提供參考。

1" 材料和方法

1.1" "試驗(yàn)材料

1.1.1 儀器 WatersE2695 高效液相色譜系統(tǒng)配置2998 PDA檢測(cè)器；Agilent1100型高效液相色譜儀配置紫外檢測(cè)器；ME155DU型電子天平（梅特勒-托利多（上海）有限公司）；超純水儀（型號(hào)7146，Thermo）；BT-50超聲波分散器（丹東百特儀器有限公司）；SHZ-D（Ⅲ）循環(huán)式真空泵（鞏義市予華儀器有限責(zé)任公司）。

1.1.2 藥品試劑 磺胺間甲氧嘧啶對(duì)照品（含量99.5%，批號(hào)C0031610，中國(guó)獸醫(yī)藥品監(jiān)察所）；甲氧芐啶對(duì)照品（含量99.8%，批號(hào)H0161704，中國(guó)獸醫(yī)藥品監(jiān)察所）；磺胺氯噠嗪鈉對(duì)照品（含量99.9%，批號(hào)FS009103，PANPHY）；復(fù)方磺胺間甲氧嘧啶鈉粉（規(guī)格為100 g，其中含磺胺間甲氧嘧啶鈉10 g、甲氧卞啶2 g，批號(hào)E086442，禮藍(lán)（上海）動(dòng)物保健有限公司）；磺胺氯噠嗪鈉粉（規(guī)格為1 000 g，其中含磺胺氯噠嗪鈉100 g、甲氧卞啶20 g，批號(hào)21111001，開封嘉駿生物科技有限公司）；超純水（實(shí)驗(yàn)室自制，符合GB/T 6682-2008規(guī)定的一級(jí)水要求）；磷酸（優(yōu)級(jí)純，天津市大茂化學(xué)試劑廠）。

1.2" "試驗(yàn)設(shè)計(jì)

在以往檢測(cè)磺胺類藥物的色譜條件基礎(chǔ)上[6-10]，調(diào)試色譜條件，選定樣品溶劑，在優(yōu)化的色譜條件和優(yōu)選溶劑下，采用高效液相色譜法同時(shí)測(cè)定復(fù)方磺胺間甲氧嘧啶鈉粉和復(fù)方磺胺氯噠嗪鈉粉中的主要組分含量，上述檢測(cè)方法簡(jiǎn)稱新方法。通過設(shè)置對(duì)照品含量對(duì)比試驗(yàn)、線性范圍試驗(yàn)、重復(fù)性試驗(yàn)、準(zhǔn)確度試驗(yàn)、耐用性試驗(yàn)、專屬性試驗(yàn)、穩(wěn)定性試驗(yàn)和添加回收率試驗(yàn)等，對(duì)新方法進(jìn)行方法學(xué)驗(yàn)證。

1.2.1 色譜條件 通過調(diào)式，試驗(yàn)確定新方法色譜條件為：Agilent 5 HC-C18（2） 250×4.6 mm色譜柱，柱溫35 ℃，進(jìn)樣量20 μL，波長(zhǎng)240 nm，

流動(dòng)相為0.1%磷酸溶液-乙腈（80∶20），流速為1.0 mL·min-1。按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算含量。結(jié)合《中國(guó)獸藥典》2020年版一部規(guī)定，理論塔半數(shù)按甲氧卞啶峰計(jì)算應(yīng)不低于5 000，分離度應(yīng)大于1.5。

1.2.2 對(duì)照品溶液配制 試驗(yàn)分別精準(zhǔn)稱定磺胺間甲氧嘧啶鈉對(duì)照品0.051 38 g和磺胺氯噠嗪鈉對(duì)照品0.050 52 g，置于2個(gè)50 mL容量瓶中，精密稱定甲氧卞啶對(duì)照品0.019 96 g于100 mL容量瓶中，分別在裝有上述3種化合物的容量瓶中加入一定量的50%甲醇溶液，使用超聲波使其溶解，再用50%甲醇溶液定容至刻度，制得磺胺間甲氧嘧啶鈉、磺胺氯噠嗪鈉和甲氧卞啶對(duì)照品儲(chǔ)備液。試驗(yàn)分別精準(zhǔn)量取上述對(duì)照品儲(chǔ)備液5 mL放入同一50 mL容量瓶中，用流動(dòng)相稀釋至刻度，即得含磺胺間甲氧嘧啶鈉102.76 μg·mL-1、磺胺氯噠嗪鈉101.04 μg·mL-1和甲氧卞啶19.96"μg·mL-1的混合對(duì)照品溶液，同法分別制得含磺胺間甲氧嘧啶鈉102.76 μg·mL-1的對(duì)照品溶液，含磺胺氯噠嗪鈉101.04 μg·mL-1的對(duì)照品溶液和含甲氧卞啶19.96 μg·mL-1的對(duì)照品溶液。

1.2.3 供試品溶液配制 試驗(yàn)分別精準(zhǔn)稱定復(fù)方磺胺間甲氧嘧啶鈉粉1.027 1 g和復(fù)方磺胺氯噠嗪鈉粉1.021 2 g置于2個(gè)100 mL容量瓶中，分別用50%甲醇溶液溶解并定容，得到復(fù)方磺胺間甲氧嘧啶鈉粉與復(fù)方磺胺氯噠嗪鈉粉供試品原液。然后分別精準(zhǔn)量取上述供試品原液5 mL，置于2個(gè)50 mL容量瓶中，用流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，作為2種供試品溶液。上述2種供試品溶液經(jīng)0.22 μm微孔濾膜濾過，續(xù)濾液用于高效液相色譜分析。同時(shí)稱取質(zhì)量為0.25 g不含磺胺類成分、以淀粉為主的空白輔料樣品，處理方法同上，制得空白輔料溶液。

1.3" "方法學(xué)驗(yàn)證試驗(yàn)

在新方法條件下，筆者分別進(jìn)行對(duì)照品含量對(duì)比試驗(yàn)、線性范圍試驗(yàn)、重復(fù)性試驗(yàn)、準(zhǔn)確度試驗(yàn)、耐用性試驗(yàn)、專屬性試驗(yàn)、穩(wěn)定性試驗(yàn)和添加回收率試驗(yàn)等，對(duì)本研究方法進(jìn)行方法學(xué)驗(yàn)證。

1.3.1 對(duì)照品含量對(duì)比試驗(yàn) 試驗(yàn)分別精準(zhǔn)量取1.2.2項(xiàng)下的磺胺間甲氧嘧啶鈉、磺胺氯噠嗪鈉、甲氧卞啶對(duì)照品溶液和混合對(duì)照品溶液各20 μL，注入高效液相色譜儀。在新方法條件下，測(cè)定對(duì)照品溶液化合物的峰面積及保留時(shí)間，確定新方法是否可以同時(shí)對(duì)上述幾種化合物進(jìn)行檢測(cè)。

1.3.2 線性范圍試驗(yàn) 試驗(yàn)分別精準(zhǔn)量取1.2.2項(xiàng)下的磺胺間甲氧嘧啶鈉、磺胺氯噠嗪鈉和甲氧卞啶對(duì)照品儲(chǔ)備液20 mL，分別置于3個(gè)100 mL容量瓶中，加流動(dòng)相稀釋至刻度，共得到3份第一次稀釋的線性對(duì)照品溶液。從這3份第一次稀釋的線性對(duì)照品溶液中分別吸取10 mL置于3個(gè)20 mL容量瓶中，用流動(dòng)相定容，再次得到3份第二次稀釋的線性對(duì)照品溶液，以此類推，經(jīng)過連續(xù)5次稀釋，分別得到含磺胺間甲氧嘧啶鈉205.52、102.76、51.38、25.69、12.84、6.42 μg·mL-1的對(duì)照品溶液；含磺胺氯噠嗪鈉202.18、101.09、50.54、25.27、12.64、6.32 μg·mL-1的對(duì)照品溶液；含甲氧卞啶39.92、19.96、9.98、4.99、2.50、1.25 μg·mL-1的對(duì)照品溶液。試驗(yàn)分別精準(zhǔn)量取3種對(duì)照品溶液20 μL，在新方法條件下，注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖。在1.2.1色譜條件下，分別測(cè)得磺胺間甲氧嘧啶鈉、磺胺氯噠嗪鈉和甲氧卞啶的峰面積（Area），共得到3種化合物峰面積（Area）與質(zhì)量濃度（C）的回歸方程，計(jì)算二者的相關(guān)系數(shù)，以此檢驗(yàn)新方法是否可以同時(shí)測(cè)定3種化合物的含量。

1.3.3 重復(fù)性試驗(yàn) 試驗(yàn)精準(zhǔn)量取1.2.2項(xiàng)下含有磺胺間甲氧嘧啶鈉102.76 μg·mL-1、磺胺氯噠嗪鈉101.09 μg·mL-1和甲氧卞啶19.96 μg·mL-1的對(duì)照品混合溶液以及1.2.3項(xiàng)下復(fù)方磺胺間甲氧嘧啶鈉粉供試品溶液和復(fù)方磺胺氯噠嗪鈉粉供試品溶液各20 μL，連續(xù)進(jìn)樣6次，采用新方法測(cè)定上述化合物各自的峰面積，計(jì)算相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差，檢驗(yàn)新方法的重復(fù)性。

1.3.4 準(zhǔn)確度試驗(yàn) 目前，《中國(guó)獸藥典》2020年版一部[4]規(guī)定，復(fù)方磺胺氯噠嗪鈉粉中的磺胺氯噠嗪鈉和甲氧卞啶含量均采用高效液相色譜法進(jìn)行檢測(cè)；《獸藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)》2017年版化學(xué)藥品卷[5]規(guī)定，復(fù)方磺胺間甲氧嘧啶鈉粉中的磺胺間甲氧嘧啶鈉含量采用容量法進(jìn)行檢測(cè)，甲氧卞啶含量采用紫外可見分光光度法檢測(cè)，上述檢測(cè)方法均為目前標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的方法。

在準(zhǔn)確度試驗(yàn)中，按1.2.3項(xiàng)下制作供試品溶液的操作流程，將復(fù)方磺胺間甲氧嘧啶鈉粉和復(fù)方磺胺氯噠嗪鈉粉各分為5份，采用優(yōu)化色譜條件與選定溶劑后的高效液相色譜法與標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定方法進(jìn)行檢測(cè)對(duì)比，共設(shè)5個(gè)平行試驗(yàn)，檢驗(yàn)新方法的準(zhǔn)確度。

1.3.5 耐用性試驗(yàn) 試驗(yàn)分別采用WatersE2695型高效液相色譜儀和Agilent 1100型高效液相色譜儀檢測(cè)1.2.3項(xiàng)下的復(fù)方磺胺間甲氧嘧啶鈉粉和復(fù)方磺胺氯噠嗪鈉粉供試品溶液組分含量，均在新方法條件下測(cè)定，設(shè)3個(gè)平行試驗(yàn)，比較不同儀器檢測(cè)結(jié)果的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差，檢驗(yàn)新方法的耐用性。

1.3.6 專屬性試驗(yàn) 試驗(yàn)采用新方法測(cè)定。通過觀察1.2.2項(xiàng)下的對(duì)照品混合溶液和1.2.3項(xiàng)下的輔料溶液、復(fù)方磺胺氯噠嗪鈉粉溶液和復(fù)方磺胺間甲氧嘧啶鈉可溶粉溶液的高效液相色譜圖以及PDA檢測(cè)的光譜圖，判定本試驗(yàn)色譜條件的專屬性。

1.3.7 穩(wěn)定性試驗(yàn) 試驗(yàn)采用新方法測(cè)定。精密量取1.2.2項(xiàng)下的混合對(duì)照品溶液20 μL，其中含磺胺間甲氧嘧啶鈉102.76 μg·mL-1、磺胺氯噠嗪鈉101.09 μg·mL-1、甲氧卞啶19.96 μg·mL-1，分別于0、24、48 h時(shí)測(cè)定，每時(shí)間段連續(xù)進(jìn)樣3針，得到上述3種化合物的峰面積，檢驗(yàn)新方法的穩(wěn)定性。

1.3.8 添加回收率試驗(yàn) 按照《中國(guó)獸藥典》2020年版一部規(guī)定的藥物回收率添加方法，添加后各組分含量為其供試品含量的80%、100%、120%，按照（實(shí)測(cè)含量-樣品含量）/實(shí)際添加量×100%，計(jì)算各組分的添加回收率，分別測(cè)定已確定含量的復(fù)方磺胺間甲氧嘧啶鈉粉（磺胺間甲氧嘧啶為標(biāo)示量的99.4%，甲氧卞啶為標(biāo)示量的96.4%）約500 mg，置于3個(gè)100 mL容量瓶中，分別在3個(gè)100 mL容量瓶中按照從少至多的順序依次加入磺胺間甲氧嘧啶鈉對(duì)照品30、50、70 mg，在這3個(gè)100 mL容量瓶中同樣按從少至多的順序依次加入甲氧卞啶對(duì)照品6、10、14 mg，按照1.2.3項(xiàng)下供試品溶液的配置方法制成3份復(fù)方磺胺間甲氧嘧啶鈉粉供試品溶液，采用新方法測(cè)定3份供試品溶液的組分含量；另測(cè)定已確定含量的復(fù)方磺胺氯噠嗪鈉粉（磺胺氯噠嗪鈉為標(biāo)示量的104.0%，甲氧卞啶為標(biāo)示量的98.2%）約500 mg，操作與測(cè)定方法同上，測(cè)定3個(gè)化合物的添加回收率。

1.4" "化合物含量的測(cè)定與數(shù)據(jù)處理

試驗(yàn)分別精準(zhǔn)量取上述1.2.2項(xiàng)下的對(duì)照品溶液和1.2.3項(xiàng)下的供試品溶液各20 μL，在新方法條件下，將待檢測(cè)溶液注入高效液相色譜儀，記錄磺胺間甲氧嘧啶鈉、磺胺氯噠嗪鈉和甲氧卞啶的色譜圖，按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算，即得到化合物含量。采用Excel、Empower、Origin 8等軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理和作圖。

2" 結(jié)果與分析

2.1" "對(duì)照品含量對(duì)比試驗(yàn)

采用新方法對(duì)1.2.2項(xiàng)下的不同對(duì)照品溶液進(jìn)行測(cè)定（圖1）。試驗(yàn)結(jié)果表明，圖1中a對(duì)應(yīng)1.2.2項(xiàng)下的混合對(duì)照品溶液，其中磺胺間甲氧嘧啶鈉、磺胺氯噠嗪鈉、甲氧卞啶能被完全分離，峰型良好，且該混合對(duì)照品溶液與1.2.2項(xiàng)下的磺胺間甲氧嘧啶鈉、磺胺氯噠嗪鈉、甲氧卞啶對(duì)照品溶液相應(yīng)色譜峰的保留時(shí)間與峰面積基本相同。由此可見，在新方法條件下，可以通過高效液相色譜法（HPLC）同時(shí)測(cè)定磺胺間甲氧嘧啶鈉、磺胺氯噠嗪鈉、甲氧卞啶的含量。

2.2" "線性范圍試驗(yàn)

采用新方法對(duì)1.3.2項(xiàng)下配制的溶液進(jìn)行測(cè)定，得到磺胺間甲氧嘧啶鈉、磺胺氯噠嗪鈉、甲氧卞啶的峰面積與各自質(zhì)量濃度的線性關(guān)系方程（表1）。由表1可知，上述3個(gè)化合物線性方程判定系數(shù)均接近1，表明磺胺間甲氧嘧啶鈉、磺胺氯噠嗪鈉、甲氧卞啶的峰面積與各自質(zhì)量濃度的線性關(guān)系良好。試驗(yàn)結(jié)果表明，在特定濃度范圍內(nèi)，在新方法條件下，可以通過高效液相色譜法（HPLC）同時(shí)測(cè)定磺胺間甲氧嘧啶鈉、磺胺氯噠嗪鈉、甲氧卞啶的含量，其中磺胺間甲氧嘧啶鈉峰面積在6.42～205.52 μg·mL-1范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，磺胺氯噠嗪鈉峰面積在6.32～202.19 μg·mL-1范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，甲氧卞啶峰面積在1.25～39.92 μg·mL-1范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.3" nbsp;重復(fù)性試驗(yàn)

采用新方法對(duì)1.2.2和1.2.3項(xiàng)下配制的溶液進(jìn)行測(cè)定（表2）。由表2可見，1.2.2項(xiàng)下的混合對(duì)照品溶液面積最大RSD值為0.21%，1.2.3項(xiàng)下的復(fù)方磺胺間甲氧嘧啶鈉粉（E086442）面積最大RSD值為0.26%，復(fù)方磺胺氯噠嗪鈉粉（21111001）面積最大RSD值為0.29%。試驗(yàn)結(jié)果表明，在新方法條件下，采用高效液相色譜法（HPLC）同時(shí)測(cè)定磺胺間甲氧嘧啶鈉、磺胺氯噠嗪鈉、甲氧卞啶含量的重復(fù)性良好。

2.4" "準(zhǔn)確度試驗(yàn)

試驗(yàn)分別采用新方法和目前標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定方法對(duì)1.2.3項(xiàng)下的供試品溶液進(jìn)行測(cè)定（表3）。試驗(yàn)結(jié)果表明，新方法測(cè)定的不同化合物百分含量結(jié)果與目前標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定方法測(cè)定的結(jié)果相近。采用優(yōu)化色譜條件后的HPLC法測(cè)定不同化合物的RSD最大值為1.03%，符合檢驗(yàn)方法允許的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差規(guī)定值（1.5%）。試驗(yàn)結(jié)果說明，在新方法條件下，采用高效液相色譜法（HPLC）同時(shí)測(cè)定磺胺間甲氧嘧啶鈉、磺胺氯噠嗪鈉、甲氧卞啶含量具有較好的準(zhǔn)確度。

2.5" "耐用性試驗(yàn)

在新方法條件下，試驗(yàn)分別采用WatersE2695

型高效液相色譜儀和Agilent1100型高效液相色譜儀測(cè)定1.2.3項(xiàng)下的供試品溶液組分含量（表4）。試驗(yàn)結(jié)果表明，利用WatersE2695型高效液相色譜儀測(cè)定的復(fù)方磺胺間甲氧嘧啶鈉粉（E086442）和復(fù)方磺胺氯噠嗪鈉粉（21111001）的最大RSD值分別為1.03%和0.85%；利用Agilent1100型高效液相色譜儀測(cè)定的復(fù)方磺胺間甲氧嘧啶鈉粉（E086442）和復(fù)方磺胺氯噠嗪鈉粉（21111001）的最大RSD值分別為1.02%和1.00%。試驗(yàn)顯示，利用這2種型號(hào)高效液相色譜儀測(cè)定的上述化合物的百分含量比較接近。結(jié)果表明，在新方法條件下，采用高效液相色譜法（HPLC）同時(shí)測(cè)定磺胺間甲氧嘧啶鈉、磺胺氯噠嗪鈉、甲氧卞啶含量的耐用性良好。

2.6" "專屬性試驗(yàn)

試驗(yàn)采用新方法測(cè)定1.2.2項(xiàng)下的對(duì)照品溶液與1.2.3項(xiàng)下的供試品溶液組分含量（圖2）。試驗(yàn)結(jié)果表明，3種化合物保留時(shí)間與峰面積基本一致，在色譜圖中，甲氧卞啶、磺胺氯噠嗪鈉和磺胺間甲氧嘧啶鈉峰附近未發(fā)現(xiàn)明顯干擾峰。在光譜圖中，經(jīng)PDA檢測(cè)器對(duì)1.2.3項(xiàng)下的供試品溶液的色譜主峰進(jìn)行識(shí)別和定位，發(fā)現(xiàn)與對(duì)應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)品一致。試驗(yàn)結(jié)果表明，在新方法條件下，高效液相色譜法（HPLC）同時(shí)測(cè)定磺胺間甲氧嘧啶鈉、磺胺氯噠嗪鈉、甲氧卞啶含量的專屬性良好。

2.7" "穩(wěn)定性試驗(yàn)

采用新方法測(cè)定1.2.2項(xiàng)下的混合對(duì)照品溶液組分含量（表5）。測(cè)定結(jié)果顯示，甲氧卞啶的RSD值為0.06%，磺胺間甲氧嘧啶鈉的RSD值為0.04%，磺胺氯噠嗪鈉的RSD值為0.08%。試驗(yàn)結(jié)果表明，在新方法條件下，高效液相色譜法（HPLC）同時(shí)測(cè)定磺胺間甲氧嘧啶鈉、磺胺氯噠嗪鈉、甲氧卞啶含量所采用的溶劑在48 h內(nèi)具有良好的穩(wěn)定性。

2.8" "添加回收率試驗(yàn)

采用新方法測(cè)定1.3.8項(xiàng)下的供試品溶液組分含量（表6和表7）。試驗(yàn)結(jié)果顯示，經(jīng)測(cè)定1.3.8項(xiàng)下的復(fù)方磺胺間甲氧嘧啶鈉可溶性粉溶液中（表6），磺胺間甲氧嘧啶鈉的平均回收率為100.39%，RSD值為0.24%；甲氧卞啶的平均回收率為100.86%，RSD值為0.75%。在測(cè)定1.3.8項(xiàng)下的復(fù)方磺胺氯噠嗪鈉可溶性粉溶液中（表7），磺胺氯噠嗪鈉的平均回收率為98.63%，RSD值為0.24%；甲氧卞啶的平均回收率為100.45%，RSD值為0.52%。試驗(yàn)結(jié)果表明，在新方法條件下，通過高效液相色譜法（HPLC）同時(shí)測(cè)定磺胺間甲氧嘧啶鈉、磺胺氯噠嗪鈉、甲氧卞啶含量的回收率符合方法學(xué)要求。

3" 結(jié)論與討論

目前，已有越來越多的學(xué)者通過試驗(yàn)將當(dāng)前標(biāo)準(zhǔn)中的一些磺胺類獸藥檢測(cè)方法從容量分析法和紫外分光光度計(jì)法轉(zhuǎn)變?yōu)椴捎酶咝б合嗌V法進(jìn)行測(cè)定，如陳錫龍等[11]通過高效液相色譜法同時(shí)測(cè)定復(fù)方磺胺間甲氧嘧啶預(yù)混劑中磺胺間甲氧嘧啶及甲氧芐啶含量；王雪靜[12]通過高效液相法測(cè)定復(fù)方磺胺對(duì)甲氧嘧啶片中的磺胺對(duì)甲氧嘧啶和甲氧芐啶含量，建立了測(cè)定不同磺胺類獸藥的色譜條件。本研究結(jié)果表明，應(yīng)用同一色譜條件可同時(shí)檢測(cè)復(fù)方磺胺間甲氧嘧啶鈉粉和復(fù)方磺胺氯噠嗪鈉粉2種磺胺類獸藥，在該色譜條件下，磺胺間甲氧嘧啶鈉、磺胺氯噠嗪鈉和甲氧卞啶3種組分能有效被分離，分離度和塔板數(shù)均符合標(biāo)準(zhǔn)要求，該方法具有線性范圍廣、準(zhǔn)確度高、耐用性好和回收率高的優(yōu)點(diǎn)。

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