摘要：通過(guò)體外和體內(nèi)實(shí)驗(yàn)研究了薯蕷皂苷元衍生物ML5 的神經(jīng)保護(hù)作用，并對(duì)其機(jī)制進(jìn)行了探討。結(jié)果表明，ML5 可改善β 淀粉樣蛋白（Aβ）所致的小鼠學(xué)習(xí)和認(rèn)知障礙，保護(hù)海馬區(qū)神經(jīng)元；ML5 具有減輕過(guò)氧化氫（ H2O2）誘導(dǎo)的人神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞（ SH-SY5Y）損傷的功效，且提高三磷酸腺苷（ATP）和線粒體膜電位的水平；免疫印跡和免疫熒光結(jié)果顯示，ML5 可激活核因子紅細(xì)胞系2 相關(guān)因子2（ NRF2） 信號(hào)通路， 增加NRF2、血紅素加氧酶-1（ HO-1） 及NAD（P）H 醌脫氫酶（ NQO-1）的表達(dá)水平。ML5 可能是一種治療阿爾茨海默癥（ AD）的有效藥物，通過(guò)靶向NRF2 通路，進(jìn)而發(fā)揮抗氧化和神經(jīng)保護(hù)作用。

關(guān)鍵詞：阿爾茨海默癥；薯蕷皂苷元；ML5；NRF2；神經(jīng)保護(hù)

中圖分類號(hào)：R965 文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A

1906 年，阿爾茨海默癥（AD）首次被描述為一種神經(jīng)退行性疾病，表現(xiàn)為進(jìn)行性認(rèn)知和行為障礙，是最為普遍的癡呆形式[1-3]。AD 作為一種多因素神經(jīng)退行性疾病，其病理特征表現(xiàn)為β 淀粉樣蛋白（Aβ）在細(xì)胞外聚集形成淀粉樣斑塊，而細(xì)胞內(nèi)則形成神經(jīng)纖維纏結(jié)（NETs），該纏結(jié)由過(guò)度磷酸化的Tau 蛋白聚集而成[4]。近年來(lái)，氧化應(yīng)激-線粒體級(jí)聯(lián)反應(yīng)在AD 的發(fā)病機(jī)制中得到廣泛關(guān)注[5-6]?；钚匝醯纳珊颓宄Ш?，導(dǎo)致線粒體的結(jié)構(gòu)和功能出現(xiàn)異常，從而引發(fā)氧化應(yīng)激[7]。研究表明，氧化應(yīng)激不僅是AD 的早期事件，也是NETs 形成的主要因素[8]。因此，針對(duì)線粒體的抗氧化劑可能是一種有效的AD 治療方法。

核因子紅細(xì)胞系2 相關(guān)因子2（NRF2）是細(xì)胞保護(hù)系統(tǒng)的主要調(diào)節(jié)因子，參與調(diào)控血紅素加氧酶-1（HO-1）和NAD（P）H 醌脫氫酶（NQO-1）等II 期解毒酶和抗氧化劑的表達(dá)[9-10]。重要的是，越來(lái)越多的研究表明NRF2 及其靶基因在AD 等神經(jīng)退行性疾病中與線粒體功能、氧化應(yīng)激、突觸形態(tài)和功能及Aβ 沉積等有關(guān)[11-14]。

薯蕷皂苷元是一種天然甾體皂苷，主要存在于山藥等天然植物中[15]。近年來(lái)隨著人們對(duì)其藥理活性認(rèn)識(shí)的不斷深入，在醫(yī)藥領(lǐng)域取得了顯著療效[16]。共價(jià)修飾治療藥物可以提高治療效果，迄今為止，已經(jīng)設(shè)計(jì)和合成了多種薯蕷皂苷元衍生物，大多數(shù)都表現(xiàn)出較母體更強(qiáng)的藥理活性。ML5 是基于薯蕷皂苷設(shè)計(jì)合成的多靶點(diǎn)化合物，已有研究證實(shí)ML5 在體外具有較強(qiáng)的抗氧化能力和雙側(cè)頸總動(dòng)脈結(jié)扎（BCCAO）大鼠的神經(jīng)保護(hù)活性[17]。本文將進(jìn)一步研究ML5 對(duì)Aβ1-42 注射小鼠的治療作用及可能的作用機(jī)制。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 實(shí)驗(yàn)試劑

人神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞（SH-SY5Y），購(gòu)自中國(guó)科學(xué)院上海細(xì)胞庫(kù)；DMEM/F12 培養(yǎng)基，購(gòu)自美國(guó)Hyclone公司； 胎牛血清購(gòu)自美國(guó)Gibco 公司。噻唑藍(lán)（MTT）、三磷酸腺苷（ATP）、JC-1 和尼氏染色試劑盒由上海Beyotime 公司提供；Aβ1-42 購(gòu)自中國(guó)強(qiáng)耀生物公司；二甲基亞砜（ DMSO）購(gòu)自美國(guó)Sigma Aldrich公司；抗體NRF2、HO-1、PSD95、SYN 及二抗購(gòu)自美國(guó)Proteintech 公司，抗體NQO-1 購(gòu)自武漢賽維爾公司； ECL 試劑盒購(gòu)自上海翌圣公司； 多奈哌齊（Donepezil）購(gòu)自上海麥克林有限公司；ML5 由華東理工大學(xué)藥學(xué)院馬磊課題組提供， 其結(jié)構(gòu)如圖1所示。