李妹妍　楊煜潔　夏輝

摘 要：為探究在酶解羽毛粉替代魚(yú)粉的飼料中蛋氨酸對(duì)大口黑鱸（Micropterus salmoide）生長(zhǎng)性能和肌肉品質(zhì)的影響，配制三種飼料，對(duì)照組投喂基礎(chǔ)飼料，晶體組添加晶體蛋氨酸，螯合組添加鋅螯合蛋氨酸。挑選初始體重為（9.68±0.05）g（平均值±標(biāo)準(zhǔn)差）的大口黑鱸幼魚(yú)180尾，隨機(jī)分到9個(gè)養(yǎng)殖缸中，每個(gè)養(yǎng)殖缸20尾，并將9個(gè)養(yǎng)殖缸隨機(jī)分成3組（每組3重復(fù)），進(jìn)行8周養(yǎng)殖。結(jié)果表明，添加兩種蛋氨酸后，大口黑鱸WGR與SGR顯著提高（P＜0.05）。兩種蛋氨酸對(duì)大口黑鱸肌肉水分和粗脂肪均無(wú)顯著影響（P＞0.05）；晶體組肌肉粗蛋白含量顯著提高（P＜0.05），螯合組無(wú)顯著改變（P＞0.05）；兩種蛋氨酸沒(méi)有改變大口黑鱸肌肉組織學(xué)結(jié)構(gòu)和TPA數(shù)據(jù)（P＞0.05）。兩種蛋氨酸都提高了大口黑鱸血清AKP、T-SOD和T-AOC活性（P＜0.05）；同時(shí)，添加鋅螯合蛋氨酸降低了大口黑鱸血清MDA含量（P＜0.05）。綜上所述，酶解羽毛粉替代部分魚(yú)粉的飼料中添加蛋氨酸可以提高大口黑鱸的生長(zhǎng)性能，同時(shí)不改變其肌肉品質(zhì)，并提高大口黑鱸抗氧化能力。

關(guān)鍵詞：大口黑鱸（Micropterus salmoide）；蛋氨酸；生長(zhǎng)性能；肌肉品質(zhì)

大口黑鱸（Micropterus salmoides）又名加州鱸，屬鱸形目，太陽(yáng)魚(yú)科，黑鱸屬，原產(chǎn)美國(guó)加利福尼亞州密西西比河水系，引入我國(guó)后，因其肉質(zhì)細(xì)膩鮮美、營(yíng)養(yǎng)成分豐富、抗病力強(qiáng)、適應(yīng)溫度范圍廣、養(yǎng)殖周期短等特點(diǎn)，迅速成為我國(guó)主要的淡水肉食性魚(yú)類之一，我國(guó)2022年鱸魚(yú)養(yǎng)殖產(chǎn)量已達(dá)102萬(wàn)噸[1]。大口黑鱸為肉食性魚(yú)類，對(duì)蛋白質(zhì)需求相對(duì)較高，目前商品飼料中，魚(yú)粉占比較高，達(dá)50%～55%[2-3]，所以亟待尋找適宜的大口黑鱸飼料魚(yú)粉替代物。羽毛粉作為家禽產(chǎn)業(yè)副產(chǎn)品之一，具有蛋白質(zhì)含量高、氨基酸含量高、抗?fàn)I養(yǎng)因子少等優(yōu)點(diǎn)，但羽毛粉缺乏蛋氨酸和賴氨酸，用羽毛粉替代魚(yú)粉時(shí)，可能會(huì)對(duì)生物造成一定程度的應(yīng)激或者其他負(fù)面影響[4]。羽毛粉對(duì)肌肉蛋白質(zhì)和脂肪的影響可能因?yàn)樯锏姆N類不同而不同。蔣步國(guó)等[5]實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)羽毛粉會(huì)降低奧尼羅非魚(yú)肌肉中的粗蛋白含量并提高粗脂肪含量，Cao等[6]實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明羽毛粉降低了大菱鲆肌肉中粗蛋白和粗脂肪含量，在Campos等[7]實(shí)驗(yàn)中羽毛粉沒(méi)有改變歐洲鱸魚(yú)肌肉中粗蛋白和粗脂肪含量。

蛋氨酸（Met）作為魚(yú)類生長(zhǎng)的必需氨基酸之一，生物體不能自身合成，在多種生理反應(yīng)中起到關(guān)鍵作用，如轉(zhuǎn)甲基化、抗氧化和免疫細(xì)胞的增殖和分化等[8]。近年來(lái)，對(duì)不同物種的研究證明了Met在修飾基因表達(dá)、細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)、營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)代謝和免疫應(yīng)答方面有重要作用[9]，進(jìn)而影響蛋白質(zhì)、脂肪和碳水化合物在機(jī)體內(nèi)的沉積[10]。魚(yú)肉品質(zhì)受營(yíng)養(yǎng)成分、理化和質(zhì)地參數(shù)等多方面的影響，主要表現(xiàn)為肌肉蛋白質(zhì)和脂肪含量。此外，質(zhì)地參數(shù)（硬度、黏附性、內(nèi)聚性、彈性和咀嚼性）也是衡量肉質(zhì)的重要指標(biāo)[11]。孫樹(shù)奎等[12]實(shí)驗(yàn)表明，在鯉飼料中添加晶體蛋氨酸或者微囊蛋氨酸對(duì)其生長(zhǎng)性能均無(wú)顯著影響，但提高了肌肉中粗脂肪的含量。毛華東等[8]發(fā)現(xiàn)，添加蛋氨酸可以提高綠鰭?cǎi)R面鲀幼魚(yú)生長(zhǎng)性能，提高機(jī)體抗氧化能力，但過(guò)高會(huì)降低肌肉粗蛋白和粗脂肪含量。不同形式的蛋氨酸對(duì)生物的影響不同，鋅螯合蛋氨酸是一種新型飼料添加劑，具有可溶性強(qiáng)，吸收率高，穩(wěn)定性好等優(yōu)點(diǎn)[13]。目前，有關(guān)蛋氨酸對(duì)大口黑鱸的影響方面的研究尚少，本研究旨在探討酶解羽毛粉替代魚(yú)粉后，添加蛋氨酸（晶體蛋氨酸與鋅螯合蛋氨酸）對(duì)大口黑鱸生長(zhǎng)性能肌肉品質(zhì)和抗氧化能力的影響。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)設(shè)計(jì)與飼料制作

本試驗(yàn)主要探究用25%的酶解羽毛粉替代魚(yú)粉后，添加兩種蛋氨酸對(duì)大口黑鱸的影響。以25%的酶解羽毛粉替代魚(yú)粉作為基礎(chǔ)日糧，在此基礎(chǔ)上，分別添加晶體蛋氨酸和鋅螯合蛋氨酸，對(duì)大口黑鱸幼魚(yú)進(jìn)行8周養(yǎng)殖。分析兩種蛋氨酸添加對(duì)大口黑鱸的生長(zhǎng)性能、肌肉品質(zhì)和抗氧化能力產(chǎn)生的影響。

試驗(yàn)飼料利用魚(yú)粉、豆粕、酶解羽毛粉作為蛋白源，按表1配制成三種試驗(yàn)飼料，分別記為對(duì)照組（硫酸鋅）、晶體組（添加晶體蛋氨酸）和螯合組（添加鋅螯合蛋氨酸）。將所有原料通過(guò)粉碎機(jī)研磨成細(xì)粉，經(jīng)80目篩過(guò)濾，逐級(jí)混勻后放入攪拌機(jī)充分混合均勻，再用膨化機(jī)擠壓膨化為直徑2.5 mm的飼料顆粒。在通風(fēng)處干燥約8 h，將干燥的飼料留樣用于測(cè)定飼料營(yíng)養(yǎng)成分，其余飼料儲(chǔ)存在-20 ℃?zhèn)溆谩?/p>

1.2 試驗(yàn)用魚(yú)與飼養(yǎng)管理

試驗(yàn)用大口黑鱸幼魚(yú)購(gòu)于天津市某養(yǎng)殖場(chǎng)，品種為優(yōu)鱸3號(hào)，經(jīng)過(guò)2周暫養(yǎng)馴化后，從中選取魚(yú)體健壯、規(guī)格均一（9.68 g±0.05 g）的大口黑鱸180尾，隨機(jī)分到9個(gè)養(yǎng)殖缸中，每缸20尾，并將9個(gè)養(yǎng)殖缸隨機(jī)分成3組。養(yǎng)殖試驗(yàn)為期56 d，每天定時(shí)投喂2次（8：00和17：00），每次投喂體重的2%～3%，并于投喂1 h后吸底以便清除殘餌。24 h供氧。每天檢測(cè)水中氨氮、溶氧、pH值、溫度等。養(yǎng)殖期間，水中氨氮＜0.50 mg/L，溶解氧（5.90±0.61）mg/L，pH值7.5±0.5，水溫（25.50±1.3）℃。每天定時(shí)排污及換水，換水量為1/2。養(yǎng)殖期間記錄大口黑鱸的死亡狀況。

1.3 樣品采集

養(yǎng)殖試驗(yàn)結(jié)束后，統(tǒng)計(jì)每缸大口黑鱸的尾數(shù)，稱取最終重量以及采食量，計(jì)算存活率（SR）、增重率（WGR）、特定增長(zhǎng)率（SGR）和飼料系數(shù)（FCR）。饑餓24 h后，每個(gè)缸中隨機(jī)選取9尾魚(yú)用MS-222麻醉，紗布吸干魚(yú)體表面水分后稱重，測(cè)體長(zhǎng)和全長(zhǎng)，計(jì)算肥滿度（CF）。之后在冰上進(jìn)行尾靜脈采血，于4 ℃靜置12 h，3 000 r/min離心10 min后取上清，至于-80 ℃?zhèn)溆?。取?nèi)臟及肝臟進(jìn)行稱重，計(jì)算肝體比（HSI）和臟體比（VSI）。取3尾大口黑鱸背鰭下方相同位置的肌肉，測(cè)定肌肉紋理數(shù)據(jù)，其余放入離心管中備用，用于測(cè)定肌肉中水分、粗蛋白、粗脂肪。另每缸隨機(jī)選取2尾魚(yú)，用于測(cè)定全魚(yú)水分、粗蛋白和粗脂肪。

1.4 測(cè)定指標(biāo)與方法

1.4.1 飼料、肌肉及全魚(yú)組成

按照國(guó)標(biāo)方法測(cè)定水分、粗蛋白、粗脂肪和灰分。

1.4.2 肌肉組織學(xué)

將同一位置的背部肌肉樣本放入組織固定液（乙醇∶冰醋酸∶甲醛=17∶1∶2）中經(jīng)脫水、石蠟包埋后制成切片后，用光學(xué)顯微鏡觀察肌肉形態(tài)。

1.4.3 肌肉紋理輪廓分析

每組三尾魚(yú)的樣本用于紋理輪廓分析（TPA），包括：硬度、內(nèi)聚性、彈性、咀嚼性和黏附性。

1.4.4 酶活測(cè)定

使用南京建成生物工程研究所試劑盒測(cè)定酶活。用于稀釋的組織勻漿液為：0.02 M TRIS-HCl，0.25 M蔗糖，2 mM EDTA，0.1 M氟化鈉，0.5 mM甲基磺酰氟和0.01 M巰基乙醇，pH值7.4。

1.5 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析

試驗(yàn)數(shù)據(jù)用平均值+標(biāo)準(zhǔn)差（mean±SD）表示，采用SPSS19.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行單因素方差分析（one-way ANOVA），差異顯著者用Dancons進(jìn)行多重比較，P＜0.05為差異顯著。

2 結(jié)果

2.1 兩種蛋氨酸對(duì)大口黑鱸生長(zhǎng)性能和形態(tài)的影響

飼料中蛋氨酸的添加對(duì)大口黑鱸的SR、FCR、VSI和CF無(wú)顯著影響（P＞0.05）。晶體組和螯合組WGR和SGR顯著高于對(duì)照組（P＜0.05），但晶體組和螯合組之間無(wú)顯著差異（P＞0.05）。蛋氨酸的添加增加了大口黑鱸的HSI，晶體組HSI最高，顯著高于對(duì)照組（P＜0.05），但螯合組與其他兩組間均無(wú)顯著差異（P＞0.05），見(jiàn)圖1。

2.2 兩種蛋氨酸對(duì)大口黑鱸全魚(yú)和肌肉的營(yíng)養(yǎng)成分的影響

兩種蛋氨酸的添加沒(méi)有顯著改變大口黑鱸全魚(yú)水分（ P ＞0.05），但全魚(yú)粗脂肪含量顯著提高 （ P ＞0.05）。與對(duì)照組相比，螯合組全魚(yú)粗蛋白含量顯著提高（P＜0.05），晶體組無(wú)顯著差異（P＞0.05）。大口黑鱸肌肉中的水分和粗脂肪沒(méi)有顯著差異（P＞0.05），晶體組肌肉粗蛋白含量顯著高于其他兩組（P＜0.05），見(jiàn)表2。

2.3 兩種蛋氨酸對(duì)大口黑鱸肌肉組織學(xué)切片的影響

兩種蛋氨酸的添加，沒(méi)有改變大口黑鱸背部肌肉的形態(tài)。見(jiàn)圖2。

2.4 兩種蛋氨酸對(duì)大口黑鱸肌肉質(zhì)構(gòu)特性的影響

飼料中添加蛋氨酸對(duì)大口黑鱸肌肉的硬度、黏附性、內(nèi)聚性、彈性和咀嚼性的影響不顯著（P＞0.05），見(jiàn)表3。

縮放比例為60 μm。En表示肌內(nèi)膜；MF表示肌纖維；N表示細(xì)胞核。

2.5 兩種蛋氨酸對(duì)大口黑鱸非特異性免疫與抗氧化性能的影響

兩種蛋氨酸均顯著提高了血清中堿性磷酸酶（AKP）的活性（P＜0.05），且晶體組顯著高于螯合組，血清酸性磷酸酶（ACP）活性無(wú)顯著差異（P＞0.05）。肝臟中AKP與ACP活性均無(wú)顯著差異（P＞0.05）。飼料中添加蛋氨酸顯著提高了抗氧化酶的活性，血清中總抗氧化能力（T-AOC）與總超氧化物歧化酶（T-SOD）活性均顯著高于對(duì)照組（P＜0.05）。與對(duì)照組相比，鋅螯合蛋氨酸顯著降低了血清中丙二醛（MDA）的含量（P＜0.05），見(jiàn)表4。

3 討論

3.1 兩種蛋氨酸對(duì)大口黑鱸生長(zhǎng)性能的影響

生長(zhǎng)性能是魚(yú)類營(yíng)養(yǎng)狀況的重要指標(biāo)。作為蛋白質(zhì)翻譯的初始氨基酸，Met是控制蛋白質(zhì)合成代謝的限速氨基酸，對(duì)水生動(dòng)物的生長(zhǎng)性能有著顯著的影響。在本試驗(yàn)中，與對(duì)照組相比，兩種蛋氨酸的添加均顯著提高了大口黑鱸的WGR與SGR，這在其他水產(chǎn)養(yǎng)殖生物中也有類似結(jié)果[14-17]。

3.2 兩種蛋氨酸對(duì)大口黑鱸肌肉質(zhì)地的影響

魚(yú)類肌肉營(yíng)養(yǎng)成分是肌肉營(yíng)養(yǎng)價(jià)值的體現(xiàn)，同時(shí)直接影響其肌肉品質(zhì)[16]。在常規(guī)營(yíng)養(yǎng)組成中，蛋白質(zhì)含量和脂肪含量對(duì)于評(píng)價(jià)肌肉的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值十分重要，肌肉的蛋白質(zhì)水平可以反映肌肉最基本的營(yíng)養(yǎng)水平[15]。在本試驗(yàn)中，添加蛋氨酸使大口黑鱸全魚(yú)粗脂肪含量升高，但肌肉中粗脂肪含量沒(méi)有差異，脂肪可能沉積于內(nèi)臟團(tuán)中。與對(duì)照組相比，晶體組大口黑鱸肌肉中蛋白質(zhì)含量增加，螯合組無(wú)顯著影響，而三組間肌肉脂肪含量均無(wú)顯著差異。蛋氨酸的添加對(duì)魚(yú)體蛋白的影響可能因?yàn)轸~(yú)的品種、飼料配方結(jié)構(gòu)、氨基酸補(bǔ)充的種類和比例及研究條件不同而產(chǎn)生不同結(jié)果[14-15，19-20]。

質(zhì)構(gòu)特性是一種感官質(zhì)量，表現(xiàn)為機(jī)械特性，在肌肉食品中表現(xiàn)為硬度、黏附性、內(nèi)聚性、彈性和咀嚼性，是評(píng)價(jià)魚(yú)肉品質(zhì)高低的重要指標(biāo)[21]。肌肉纖維直徑對(duì)肉的質(zhì)地特征有很大影響[11]。在本試驗(yàn)中，大口黑鱸背部肌肉組織學(xué)結(jié)構(gòu)與TPA數(shù)據(jù)均無(wú)顯著改變，說(shuō)明了飼料中蛋氨酸的添加并未使大口黑鱸的肌肉質(zhì)地發(fā)生改變。

3.3 兩種蛋氨酸對(duì)非特異性免疫與抗氧化指標(biāo)的影響

AKP和ACP被認(rèn)為是必不可少的免疫指標(biāo)，它們反映了免疫系統(tǒng)中巨噬細(xì)胞激活細(xì)胞內(nèi)消化和吞噬抗原的能力[22]。AKP是一種特異性較低的膜結(jié)合酶，主要參與體內(nèi)物質(zhì)（如磷酸基團(tuán)）的轉(zhuǎn)運(yùn)和代謝以及動(dòng)物骨骼的礦化，骨骼釋放的AKP與成骨作用有關(guān)[23]。幼年動(dòng)物血液AKP主要來(lái)自骨骼，隨著動(dòng)物長(zhǎng)大成熟和骨骼成年化，來(lái)自骨骼的AKP逐漸減少[24]。在本試驗(yàn)中，兩種蛋氨酸均顯著提高了幼魚(yú)血清AKP活性，但肝臟中AKP活性無(wú)明顯差異，推測(cè)血清中的AKP來(lái)自成骨細(xì)胞和生長(zhǎng)中的骨軟骨細(xì)胞。結(jié)合上述大口黑鱸生長(zhǎng)性能表現(xiàn)，認(rèn)為血清中AKP活性上升是因?yàn)榇罂诤邝|幼魚(yú)的快速生長(zhǎng)導(dǎo)致的。

在抗氧化活性方面，機(jī)體抗氧化作用有多層次相互協(xié)同的特點(diǎn)，T-AOC是反映機(jī)體內(nèi)各種抗氧化酶的總活性，具有清除活性氧、判斷機(jī)體健康狀況的重要作用。T-SOD是抗氧化酶之一，其功能是通過(guò)刺激兩個(gè)超氧自由基解離成過(guò)氧化氫和氧來(lái)清除細(xì)胞環(huán)境中的有害活性氧（ROS）[25]。在本試驗(yàn)中，兩種蛋氨酸添加后，血清T-AOC活性和T-SOD活性都顯著升高。MDA是ROS引起脂質(zhì)過(guò)氧化和氧化損傷的重要指標(biāo)，可以反映魚(yú)類的抗氧化狀況。本研究結(jié)果表明，鋅螯合蛋氨酸的添加，使大口黑鱸血清中MDA含量顯著減少，說(shuō)明蛋氨酸對(duì)大口黑鱸抗氧化能力有增強(qiáng)作用，降低其對(duì)機(jī)體的損害。這一觀察結(jié)果與先前Kishawy等[26]的研究結(jié)果一致。

4 結(jié)論

在用25%的酶解羽毛粉替代魚(yú)粉后，兩種蛋氨酸的添加都能提高大口黑鱸的生長(zhǎng)性能，同時(shí)不改變大口黑鱸的肌肉質(zhì)地，且均能提高大口黑鱸的抗氧化能力。

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Effects of two types of methionine on growth performance， muscle quality and antioxidant capacity of largemouth bass （Micropterus salmoide）

LI Meiyan， YANG Yujie， XIA Hui

（Ocean College， Hebei Agriculture University， Qinhuangdao 066000，China）

Abstract：To investigate the effect of methionine on growth performance and muscle quality of the largemouth bass Micropterus salmoide in feeds with keratinase-hydrolyzed feather meal replacing fish meal. Three diets were formulated， with the control group on a basal diet， the crystalline group with crystalline methionine， and the chelated group with zinc chelated methionine. 180 juvenile largemouth bass with an initial body weight of （9.68±0.05）g （mean±SD） were selected and randomly assigned to 9 culture tanks with 20 fish each， and the 9 tanks were randomly divided into 3 groups and cultured for 8 weeks. The results showed that the addition of two kinds of methionine significantly increased the WGR and SGR of largemouth bass （P<0.05）. Two kinds of methionine had no significant effect on muscle moisture and crude lipid of largemouth bass （P>0.05）， muscle crude protein content was significantly increased in the crystalline group （P<0.05）， and there wasno significant change in the chelated group （P>0.05）， and the two types of methionine did not change the histological structure of largemouth bass muscle and TPA data （P>0.05）. Two kinds of methionine increased the activities of AKP， T-SOD and T-AOC in serum of largemouth bass （P<0.05）， while the addition of zinc chelated methionine decreased serum MDA content of largemouth bass （P<0.05）. In conclusion， the addition of methionine to feeds in which keratinase-hydrolyzed feather meal replaces part of the fish meal can improve the growth performance of largemouth bass without altering its muscle quality and improve the antioxidant capacity of largemouth bass.

Key words：Micropterus salmoide; methionine; growth performance; muscle quality

（收稿日期：2023-11-15）

作者簡(jiǎn)介：李妹妍（1995-），女，在讀研究生，研究方向：水產(chǎn)動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)與飼料。E-mail：245428126@qq.com。