摘 要：【目的】研究建立枸杞果實(shí)中溴氰蟲酰胺及其代謝物殘留檢測的液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜法?！痉椒ā胯坭焦麑?shí)樣品采用分散法處理，用乙腈提取，C18凈化，超高效液相色譜-三重四級桿質(zhì)譜聯(lián)用儀檢測，外標(biāo)法定量?！窘Y(jié)果】應(yīng)用該方法檢測枸杞鮮果、干果中溴氰蟲酰胺及其代謝物，平均回收率為83.9%～108.8%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）為4.2%～9.6%，定量限均為0.01 mg/kg?！窘Y(jié)論】該方法可以快速、準(zhǔn)確測定枸杞果實(shí)中溴氰蟲酰胺農(nóng)藥及其代謝物。

關(guān)鍵詞：枸杞； 溴氰蟲酰胺； 超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法（UPLC-MS/MS）

中圖分類號：O657.63； TS207.5+3" " 文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A" " 文章編號：1002-204X（2023）04-0064-06

doi：10.3969/j.issn.1002-204x.2023.04.014

Study on Detection of Cyantraniliprole and Its Metabolites in Wolfberry

Niu Yan1，2， Zhang Fengfeng1，2， Yang Jing1，2， Chen Xiang1，2， Zhao Zidan1，2， Wu Yan1，2*

（1.Ningxia Key Laboratory of Research and Evaluation of Agricultural Product Quality and Safety Standards， Yinchuan， Ningxia 750002； 2.Ningxia Institute of Quality Standard and Testing Technology for Agricultural Products， Yinchuan， Ningxia 750002）

Abstract [Objective] Cyantraniliprole and its metabolites residue in Lycium fruit was detected by ultra performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry（UPLC-MS/MS）. [Method] The samples were processed using the method， extracted with acetonitrile， purified with C18 ， detected by UPLC-MS/MS and quantified by external standard method. [Result] The recoveries were 83.9%～108.8%， relative standard deviations （RSD） were 4.2%～9.6%，" and the quantification limit was 0.01 mg/kg. [Conclusion] This method can quickly and accurately detect cyantraniliprole pesticides and its metabolites.

Key words Wolfberry; Cyantraniliprole; UPLC-MS/MS

枸杞產(chǎn)業(yè)是寧夏特色優(yōu)勢產(chǎn)業(yè)。枸杞子（Lycium barbarum L.）是我國傳統(tǒng)名貴中藥材，具有增強(qiáng)免疫力、防衰老、抗腫瘤、抗氧化等多方面的藥理作用[1-4]。在枸杞生產(chǎn)過程中，為了防治枸杞蟲害，通常會使用殺蟲劑。溴氰蟲酰胺（cyantraniliprole）第二代魚尼丁受體作用劑類殺蟲劑[5]，通過改變苯環(huán)上的各種極性基團(tuán)具有更高效的作用[6]。其對豇豆豆野螟[7]、甜菜夜蛾[8]、玉米田小地老虎[9]、甘蔗螟蟲[10]等有較好的防治效果。在中國，溴氰蟲酰胺已在柑橘類、仁果類、茄果類等水果蔬菜上獲準(zhǔn)登記使用，并已制定了相關(guān)的臨時最大殘留限量[11]，但尚未制定檢測方法標(biāo)準(zhǔn)。溴氰蟲酰胺分析方法有液相色譜法、液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法[12-15]，并在少量作物上進(jìn)行殘留動態(tài)研究[16-18]。枸杞果實(shí)中溴氰蟲酰胺及其代謝物檢測方法研究目前尚未見報道。該方法建立了以乙腈為提取溶劑，經(jīng)C18凈化，采用超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法（UPLC-MS/MS）測定枸杞中溴氰蟲酰胺及其代謝物的分析方法，操作簡單，結(jié)果準(zhǔn)確。課題組開展枸杞中溴氰蟲酰胺及其代謝物殘留檢測，旨在為中國制定溴氰蟲酰胺及其代謝物在枸杞中的 MRL值提供分析方法，對于枸杞產(chǎn)業(yè)的發(fā)展也具有重要意義。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料、試劑、儀器設(shè)備

供試材料為寧杞7號枸杞鮮果和干果，采自寧夏農(nóng)林科學(xué)院農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)與檢測技術(shù)研究所試驗(yàn)基地。

試劑：溴氰蟲酰胺（批號為1052035，純度為93%，德國Dr公司）；溴氰蟲酰胺代謝物J9Z38（批號為20200417，純度為96.9%，上海甄準(zhǔn)生物科技有限公司）；乙腈（色譜純，美國默克試劑公司）；甲醇（色譜純，美國默克試劑公司）；無水硫酸鎂（分析純，國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司）；氯化鈉（分析純，140 ℃烘烤4 h，國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司）；C18吸附劑40～63 μm，美國安捷倫公司）；試驗(yàn)用水為去離子水。

儀器設(shè)備：超高效液相色譜-三重四級桿質(zhì)譜聯(lián)用儀（Thermo TSQ Quantum），美國賽默飛公司生產(chǎn)；高速離心機(jī)（Heal Force Neofuge 18R型），香港力康發(fā)展有限公司生產(chǎn)；渦流混合器（MS3 digital型），德國IKA艾卡公司生產(chǎn)；電子天平（PL202-L型），瑞士梅特勒-托利多儀器有限公司生產(chǎn)；組織搗碎機(jī)（SMT-Y09型），深圳斯瑪特智能電器發(fā)展有限公司生產(chǎn)；水浴恒溫振蕩器（THZ-82A），金壇榮華儀器公司生產(chǎn)；超純水機(jī)及精密移液槍及其他試驗(yàn)室常用儀器設(shè)備。

1.2 樣品前處理

將枸杞鮮果、干果樣品放置冰箱中，于-18 ℃冷凍保存。試驗(yàn)時將鮮、干枸杞樣品取出，鮮樣用高速組織搗碎機(jī)打漿，干樣用高速萬能粉碎機(jī)（可加少量的液氮）粉碎（30 g樣品粉碎時間為30 s），分別置于樣品瓶中，于-18 ℃條件下冷凍備用。

1.3 樣品的提取與凈化

稱取經(jīng)前處理的枸杞鮮果10.00 g、干果5.00 g（精確至 0.01 g）于50 mL離心管，加入20 mL乙腈，在水浴恒溫振蕩器上振蕩40 min；再加入1.0 g氯化鈉、4 g無水硫酸鎂，蓋上蓋子，振搖約1 min，放入離心機(jī)中，以4 000 r/min的轉(zhuǎn)速離心5 min，吸取2 mL上清液于15 mL離心管中（提前稱好100 mg C18），渦旋凈化后過0.22 μm濾膜，用超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法（UPLC-MS/MS）測定。

1.4 液相色譜條件

色譜柱：Eclipse Plus C18柱（100 mm×2.1 mm，1.8 μm），或性能相當(dāng)者；柱溫：35 ℃；流速：0.3 mL/min；進(jìn)樣量：1 μL；流動相梯度見表1。

1.5 質(zhì)譜條件的優(yōu)化

取1 mL 10 mg/L的溴氰蟲酰胺及其代謝物標(biāo)準(zhǔn)工作液，在正離子模式下進(jìn)行母離子全掃描，得到溴氰蟲酰胺母離子[M]+（m/z 475.1）、代謝物母離子[M]+ （m/z 456.87）。對母離子施加不同的碰撞能量，對產(chǎn)生的子離子進(jìn)行全掃描，得到相對豐度較高的溴氰蟲酰胺子離子[M]+（m/z 285.8）和[M]+（m/z 443.9），溴氰蟲酰胺代謝物子離子[M]+（m/z 187.9）和[M]+（m/z 298.9）。質(zhì)譜條件：離子源為電噴霧離子源ESI；掃描方式為正離子源；離子噴霧電壓為3.5 kV； 毛細(xì)管傳輸溫度為300 ℃；碰撞壓力為1.5 mTorr；鞘氣為30 arb；輔氣為10 arb；檢測方式為多反應(yīng)監(jiān)測模式（SRM）。質(zhì)譜檢測參數(shù)見表2。

2 結(jié)果與討論

2.1 標(biāo)準(zhǔn)工作曲線

將溴氰蟲酰胺標(biāo)準(zhǔn)品配置成1 000 mg/L的標(biāo)準(zhǔn)溶液，為了消除基質(zhì)效應(yīng)的影響，將枸杞空白樣品提取液作為溶劑，將1 000 mg/L的標(biāo)準(zhǔn)溶液逐級稀釋為0.01、0.02、0.05、0.10、0.20、0.5、1.0 mg/L系列標(biāo)準(zhǔn)溶液。在儀器條件下測定，以標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度和峰面積做標(biāo)準(zhǔn)曲線，得出溴氰蟲酰胺及其代謝產(chǎn)物線性回歸方程分別為y=834 450 x，y=162 492 x，其相關(guān)系數(shù)分別為0.999 6，0.999 1。在0.01～1.00 mg/L范圍內(nèi)，溴氰蟲酰胺及其代謝產(chǎn)物的進(jìn)樣質(zhì)量濃度（x）與色譜峰面積（y）間線性關(guān)系良好，定量限均在0.01 mg/kg。詳見圖1。

2.2 提取溶劑的選擇

提取溶劑的選擇應(yīng)該是與殘留分析的化合物有良好的溶解性和穩(wěn)定性，適于樣品制備和色譜分析，不僅要求目標(biāo)物被提取充分，而且提取的雜質(zhì)干擾越少越好。根據(jù)溴氰蟲酰胺及其代謝物性質(zhì)，采取常用的提取劑有乙腈、甲醇、乙醚。

在提取溶劑研究中，對比了3種提取溶劑對枸杞鮮果、干果樣品溴氰蟲酰胺及代謝物的提取效果，結(jié)果見圖2。通過在不同溶劑中的提取率試驗(yàn)及色譜掃描峰面積與相當(dāng)標(biāo)準(zhǔn)偏差值的比較可知，用甲醇或乙醚提取枸杞樣品中的溴氰蟲酰胺及其代謝物時，回收率均不能達(dá)到分析檢測的要求；而有乙腈提取時，回收率在83.9%～108.8%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）為4.2%～9.6%，完全能滿足分析檢測要求。因此，確定溶解性和穩(wěn)定性最好的乙腈作為枸杞鮮果、干果樣品的提取溶劑。同時，進(jìn)行了不同提取次數(shù)對提取效果的影響研究試驗(yàn)。結(jié)果表明，提取1次與提取2次、3次差異不大，從提取效率角度考慮，提取1次完全可以達(dá)到較好的效果，最終確定乙腈提取1次。

2.3 吸附劑的優(yōu)化

針對目前常用的色譜前處理凈化方法固相萃?。⊿PE）、分散法，通過測定添加回收率的方法，對各個凈化方法進(jìn)行篩選，結(jié)果（圖3）表明，固相萃取與分散法凈化效果差異不顯著。從前處理效率考慮，固相萃取較分散法用時長；從成本考慮，固相萃取較分散法費(fèi)用高。綜合后最終確定最佳凈化方法為C18分散凈化法。

分別考察了不同質(zhì)量的C18對凈化效果和回收率的影響。結(jié)果（圖4）表明，選用50、100、150 mg C18，鮮果、干果2種基質(zhì)中溴氰蟲酰胺及代謝產(chǎn)物的回收率分別為66.2%～84.1%、85.1%～105.0%和 63.1%～72.2%，最終選用100 mg C18。鑒于2種基質(zhì)中溴氰蟲酰胺及其代謝產(chǎn)物均滿足農(nóng)藥殘留檢測的要求，因此未進(jìn)一步研究基質(zhì)效應(yīng)的影響。

2.4 回收率和精確度

溴氰蟲酰胺及其代謝產(chǎn)物在0.01、0.1、1.0 mg/kg 添加水平下，每個添加水平作5個重復(fù)，枸杞空白試樣同時進(jìn)行測定。枸杞鮮果、干果平均回收率為83.9%～108.8%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）為4.2%～9.6%（表3）。符合農(nóng)殘分析的要求，方法高效、快速，具有可行性，溴氰蟲酰胺及代謝物在枸杞鮮、干果空白及0.1 mg/L添加回收總離子流圖見圖5。

3 結(jié)論

枸杞鮮果、干果樣品采用分散法處理，用乙腈提取，C18凈化，對方法的回收率、精密度進(jìn)行了探討。溴氰蟲酰胺及其代謝物在枸杞鮮果、干果中3個添加質(zhì)量濃度水平的回收率為 83.9%～108.8%，測定的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為4.2%～9.6%，定量限均為0.01 mg/kg，表明方法的精密度和準(zhǔn)確性較好，符合農(nóng)殘分析的要求[19-20]，具有可行性。

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