王夢(mèng)蕾，賈瑞康，趙飛躍，劉齊超，劉妍，殷苗苗,，范志彬，劉會(huì)云,*

1.河北省中成胃藥創(chuàng)新研究重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，河北 邯鄲 056004

2.河北省中藥大品種培育技術(shù)創(chuàng)新中心，河北 邯鄲 056004

3.邯鄲制藥股份有限公司，河北 邯鄲 056004

流行性感冒（簡(jiǎn)稱(chēng)流感）是一種十分常見(jiàn)的由流感病毒感染引起的具有季節(jié)流行性特點(diǎn)的傳染性呼吸道疾病。據(jù)統(tǒng)計(jì)，全球范圍內(nèi)每年約有10 億人感染流感，300 萬(wàn)～500 萬(wàn)重癥病例，30 萬(wàn)～50 萬(wàn)死亡病例，嚴(yán)重威脅人類(lèi)健康[1]。目前感染人群的主要是甲型和乙型流感病毒，其中甲型流感病毒抗原性多變，傳染性強(qiáng)，在全球范圍內(nèi)流行[2]。兒童是流感尤其是甲型流感（簡(jiǎn)稱(chēng)甲流）的高發(fā)人群，感染后容易出現(xiàn)危重癥病例[3]。目前臨床上常用的抗病毒治療藥物包括奧司他韋、扎納米韋和阿比多爾等化學(xué)藥，以及連花清瘟膠囊（顆粒）、金花清感顆粒、疏風(fēng)解毒膠囊和銀黃口服液等中成藥[4]。傳統(tǒng)中藥因其多成分、多靶點(diǎn)的特點(diǎn)，在甲流等多種感染性疾病的預(yù)防和治療中展現(xiàn)出天然的優(yōu)勢(shì)[5]。

小兒風(fēng)熱清合劑（口服液）是在經(jīng)典名方銀翹散的基礎(chǔ)上，綜合考慮小兒感冒會(huì)出現(xiàn)的咳嗽咳痰、鼻塞流涕、咽紅腫痛、發(fā)熱甚至高熱、消化不良等癥狀，辨證加減研制而成，由金銀花、黃芩、連翹、板藍(lán)根、柴胡、牛蒡子、荊芥穗、石膏、梔子等20味中藥材組成[6-7]。2021 年《兒童流行性感冒中西醫(yī)結(jié)合防治專(zhuān)家共識(shí)》將小兒風(fēng)熱清合劑（口服液）作為流感風(fēng)熱犯衛(wèi)證的治療推薦用藥[8]。臨床試驗(yàn)證實(shí)，小兒風(fēng)熱清合劑（口服液）治療兒童甲流，用藥5 d，病毒轉(zhuǎn)陰率為100%，痊愈率為88.33%，表明小兒風(fēng)熱清合劑（口服液）治療小兒甲流具有良好的有效性和安全性[9]。目前對(duì)于小兒風(fēng)熱清合劑（口服液）防治甲流的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)和作用機(jī)制的研究還較少。

網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)基于系統(tǒng)生物學(xué)理論，以網(wǎng)絡(luò)的形式解釋中藥復(fù)雜的作用模式，能夠分析人體的健康狀態(tài)和藥物的有效靶點(diǎn)[10]。該方法通過(guò)構(gòu)建“藥物–成分–靶點(diǎn)”網(wǎng)絡(luò)，能夠篩選出藥物發(fā)揮作用的關(guān)鍵成分和潛在靶點(diǎn)，為藥物與疾病間的關(guān)系提供新的理解。目前網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)已被廣泛應(yīng)用于中藥治療各種疾病的研究中，如流感、高尿酸血癥、缺血性心臟病和子宮內(nèi)膜異位癥等[11-16]。分子對(duì)接技術(shù)通過(guò)分析空間結(jié)構(gòu)和相互作用力，將小分子對(duì)接到大分子中，從而實(shí)現(xiàn)藥物設(shè)計(jì)或是結(jié)構(gòu)優(yōu)化[17]。通過(guò)分子對(duì)接可以從空間結(jié)構(gòu)角度驗(yàn)證藥物分子與靶點(diǎn)蛋白之間的結(jié)合。

本研究通過(guò)構(gòu)建小兒風(fēng)熱清合劑（口服液）防治甲流的“藥物–活性成分–潛在靶點(diǎn)”網(wǎng)絡(luò)，篩選出小兒風(fēng)熱清合劑（口服液）防治甲流的關(guān)鍵成分以及潛在靶點(diǎn)，通過(guò)功能富集來(lái)揭示其影響的信號(hào)通路和調(diào)控功能，利用分子對(duì)接技術(shù)從空間結(jié)構(gòu)上驗(yàn)證這些成分與潛在靶點(diǎn)之間的相互作用，從而為小兒風(fēng)熱清合劑（口服液）防治甲流提供一定的理論基礎(chǔ)。

1 方法

1.1 小兒風(fēng)熱清合劑（口服液）活性成分篩選

針對(duì)小兒風(fēng)熱清合劑（口服液）中的20 味藥材，分別在中藥系統(tǒng)藥理學(xué)數(shù)據(jù)庫(kù)分析平臺(tái)（TCMSP，https://tcmsp-e.com）[18]和BATMEN-TCM（http://bionet.ncpsb.org.cn/batman-tcm）數(shù)據(jù)庫(kù)[19]中進(jìn)行檢索，并對(duì)結(jié)果進(jìn)行合并，獲得小兒風(fēng)熱清合劑（口服液）的基本成分。隨后根據(jù)口服生物利用度（OB）≥30%和成藥相似性（DL）≥0.18 對(duì)其進(jìn)行篩選，獲得小兒風(fēng)熱清合劑（口服液）的活性成分。其中OB 為口服藥物由腸胃吸收并經(jīng)過(guò)肝臟達(dá)到體循環(huán)血液中藥量的百分比，DL 為化合物與已知藥物的相似性。

1.2 小兒風(fēng)熱清合劑（口服液）防治甲流潛在靶點(diǎn)篩選

使用TCMSP 對(duì)小兒風(fēng)熱清合劑（口服液）所有活性成分進(jìn)行檢索，獲得小兒風(fēng)熱清合劑（口服液）發(fā)揮作用的預(yù)測(cè)靶點(diǎn)。同時(shí)使用關(guān)鍵字“influenza A”在數(shù)據(jù)庫(kù)GeneCards（https://www.genecards.org/）[20]中進(jìn)行檢索，獲得甲流相關(guān)的潛在靶點(diǎn)。取兩集合的交集，作為小兒風(fēng)熱清合劑（口服液）防治甲流的潛在靶點(diǎn)。

1.3 “藥材–活性成分–潛在靶點(diǎn)”網(wǎng)絡(luò)的構(gòu)建

使用Cytoscape 軟件[21]構(gòu)建小兒風(fēng)熱清合劑（口服液）防治甲流的“藥材-活性成分-潛在靶點(diǎn)”網(wǎng)絡(luò)，對(duì)網(wǎng)絡(luò)基本參數(shù)進(jìn)行，并根據(jù)節(jié)點(diǎn)的度（degree）值對(duì)活性成分和潛在靶點(diǎn)分別進(jìn)行排序，篩選排名靠前的活性成分和潛在靶點(diǎn)。

1.4 潛在靶點(diǎn)蛋白互作網(wǎng)絡(luò)的構(gòu)建

在STRING 數(shù)據(jù)庫(kù)（https://cn.string-db.org/）[22]中檢索小兒風(fēng)熱清合劑（口服液）防治甲流潛在靶點(diǎn)，物種設(shè)置為Homo sapiens，根據(jù)檢索結(jié)果構(gòu)建蛋白互作網(wǎng)絡(luò)。將網(wǎng)絡(luò)導(dǎo)出使用Cytoscape 軟件繪制網(wǎng)絡(luò)圖，并通過(guò)計(jì)算網(wǎng)絡(luò)連接度篩選網(wǎng)絡(luò)中top 20 核心蛋白。

1.5 小兒風(fēng)熱清合劑（口服液）防治甲流潛在靶點(diǎn)功能富集分析

基因本體（GO，http://geneontology.org/）[23]主要包括生物過(guò)程（BP）、分子功能（MF）和細(xì)胞組分（CC）3 個(gè)獨(dú)立的部分。京都基因和基因組數(shù)據(jù)庫(kù)（KEGG，https://www.kegg.jp/）是一個(gè)用于基因功能系統(tǒng)分析的數(shù)據(jù)庫(kù)，其中的PATHWAY 包含了分子相互作用網(wǎng)絡(luò)（通路）在基因?qū)用娴拿枋鯷24]。本研究使用R 語(yǔ)言（https://www.r-project.org/）中的clusterProfiler[25]對(duì)小兒風(fēng)熱清合劑（口服液）抗流感的潛在靶點(diǎn)進(jìn)行GO 和KEGG 富集分析，并對(duì)結(jié)果進(jìn)行可視化，揭示其涉及的主要信號(hào)通路和調(diào)控功能，了解其可能發(fā)揮作用的分子機(jī)制。

1.6 分子對(duì)接

在Pubchem 數(shù)據(jù)庫(kù)（https://pubchem.ncbi.nlm.nih.gov/）[26]中下載活性成分的3D 空間結(jié)構(gòu)。在Uniport數(shù)據(jù)庫(kù)（https://www.uniprot.org/）[27]中下載潛在靶點(diǎn)的3D 空間結(jié)構(gòu)。使用PyMol 軟件[28]對(duì)潛在靶點(diǎn)進(jìn)行預(yù)處理，包括去除水分子和配體。使用Autodock 軟件[29]進(jìn)行活性成分和潛在靶點(diǎn)的分子對(duì)接，主要內(nèi)容包括分子加氫、計(jì)算電荷、對(duì)接范圍選定和分子對(duì)接?；钚猿煞趾蜐撛诎悬c(diǎn)之間的結(jié)合能≤-5 kJ/mol 時(shí)認(rèn)為兩者的結(jié)合較為穩(wěn)定。對(duì)接結(jié)果通過(guò)PyMol 軟件進(jìn)行可視化。

2 結(jié)果

2.1 小兒風(fēng)熱清合劑（口服液）中活性成分

從小兒風(fēng)熱清合劑（口服液）20 味藥材中，成功獲得了192 種無(wú)重復(fù)的活性成分，但在數(shù)據(jù)庫(kù)中沒(méi)有檢索到僵蠶對(duì)應(yīng)的活性成分?；钚猿煞址N類(lèi)較多的藥材包括甘草、板藍(lán)根、黃芩、赤芍、連翹和金銀花，對(duì)應(yīng)種類(lèi)數(shù)目分別為92、39、36、29、23、23。部分活性成分見(jiàn)表1。

表1 小兒風(fēng)兒清合劑（口服液）關(guān)鍵活性成分及其源藥材Table 1 Key active ingredients of Xiaoer fengreqing mixture (Oral Liquid) and its source medicinal materials

2.2 小兒風(fēng)熱清合劑（口服液）防治甲流潛在靶點(diǎn)

小兒風(fēng)熱清合劑（口服液）防治甲流潛在靶點(diǎn)篩選結(jié)果如圖1 所示，首先從TCMSP 中獲得284個(gè)無(wú)重復(fù)的小兒風(fēng)熱清合劑（口服液）靶點(diǎn)，隨后從GeneCards 中獲得了2 737 個(gè)與甲型流感相關(guān)的潛在靶點(diǎn)。將兩部分取交集后，獲得了141 個(gè)小兒風(fēng)熱清合劑（口服液）抗甲流的潛在靶點(diǎn)。

圖1 小兒風(fēng)熱清合劑（口服液）抗甲流潛在靶點(diǎn)篩選結(jié)果Fig.1 Screening results of potential targets of Xiaoer Fengreqing Mixture (oral liquid) against influenza A

2.3 “藥材–活性成分–潛在靶點(diǎn)”網(wǎng)絡(luò)的構(gòu)建

如圖2 所示，“藥材–活性成分–潛在靶點(diǎn)”網(wǎng)絡(luò)由352 個(gè)節(jié)點(diǎn)組成，其中正方形節(jié)點(diǎn)代表小兒風(fēng)熱清合劑（口服液）藥材（19 種），三角形節(jié)代表活性成分（192 種），圓形節(jié)點(diǎn)代表潛在靶點(diǎn)（141 種）。從整體網(wǎng)絡(luò)來(lái)看，除蘆根、炒六神曲和淡竹葉外，每種藥材皆含有多種抗甲流活性成分，活性成分與潛在靶點(diǎn)之間為多對(duì)多的相互作用模式。體現(xiàn)了中藥成分復(fù)雜，多途徑、多靶點(diǎn)發(fā)揮作用的特點(diǎn)。

圖2 “藥材–活性成分–潛在靶點(diǎn)”網(wǎng)絡(luò)Fig.2 “Medicinal materials-active ingredients-potential targets” network

如圖3 所示，所有藥材中，甘草含有的抗甲流活性成分種類(lèi)最為豐富，高達(dá)72 種，黃芩、板藍(lán)根、連翹、防風(fēng)和金銀花等次之。排名靠前的活性成分主要為黃酮類(lèi)，包括槲皮素（quercetin）、木犀草素（luteolin）、山柰酚（kaempferol）、漢黃芩素（wogonin）、柚皮素（naringenin）等，此外還有植物甾醇類(lèi)如β-谷甾醇（beta-sitosterol）、豆甾醇（stigmasterol）；萜類(lèi)如β-胡蘿卜素（beta-carotene）；蒽醌類(lèi)如蘆薈大黃素（aloe-emodin）；生物堿類(lèi)如左旋千金藤啶堿（L-spd）、巴馬?。╬almatine）、黃連素（berberine）；多酚類(lèi)如鞣花酸（ellagic acid）等，這些活性成分很有可能是發(fā)揮藥效的關(guān)鍵成分。其中槲皮素作用的潛在靶點(diǎn)最為豐富，高達(dá)90 種，梔子、柴胡、連翹、金銀花和炒六神曲均含有該成分。潛在靶點(diǎn)包括前列腺素內(nèi)過(guò)氧化物合酶 2（PTGS2）、熱休克蛋白（HSP90AA1）、前列腺素內(nèi)過(guò)氧化物合酶1（PTGS1）、鈣調(diào)蛋白3（CALM3）、雌激素受體1（ESR1）、一氧化氮合酶2（NOS2）和絲氨酸蛋白酶1（PRSS1）等，這些潛在靶點(diǎn)可能作為藥物作用位點(diǎn)，調(diào)控機(jī)體表達(dá)，發(fā)揮抗甲流作用。其中PTGS2 能夠與179 種抗甲流活性成分相互作用，幾乎涵蓋了所有活性成分。

圖3 活性成分和潛在靶點(diǎn)連接度Fig.3 Active ingredients and potential targets with connectivity

2.4 潛在靶點(diǎn)蛋白互作網(wǎng)絡(luò)的構(gòu)建

如圖4 所示，潛在靶點(diǎn)蛋白互作網(wǎng)絡(luò)由139 個(gè)節(jié)點(diǎn)和3 278 條邊構(gòu)成，節(jié)點(diǎn)代表潛在靶點(diǎn)，點(diǎn)的大小及顏色深淺反映對(duì)應(yīng)度的高低，邊代表2 個(gè)潛在靶點(diǎn)之間存在相互作用。網(wǎng)絡(luò)中除了跨膜蛋白2C（ITM2C）和嘌呤霉素敏感性氨肽酶蛋白抗體（NPEPPS）沒(méi)有與任何一個(gè)潛在靶點(diǎn)相連外，其他所有潛在靶點(diǎn)之間皆存在相互作用。整個(gè)網(wǎng)絡(luò)的平均連接度為47，表明這些潛在靶點(diǎn)之間的相互作用較為密切。其中矩陣形式排列的為連接度前20 名的潛在靶點(diǎn)，包括蛋白激酶B1（AKT1）、腫瘤壞死因子（TNF）、白細(xì)胞介素-6（IL6）、腫瘤蛋白p53（TP53）、白蛋白（ALB）、白細(xì)胞介素-1β（IL1B）和基質(zhì)金屬蛋白酶-9（MMP9）等。這些潛在靶點(diǎn)在整個(gè)蛋白互作網(wǎng)絡(luò)中占據(jù)關(guān)鍵地位，其變化能給網(wǎng)絡(luò)帶來(lái)較大的影響。

圖4 潛在靶點(diǎn)蛋白互作網(wǎng)絡(luò)Fig.4 Potential target protein interaction network

2.5 小兒風(fēng)熱清合劑（口服液）防治甲流潛在靶點(diǎn)功能富集分析

如圖5 所示，點(diǎn)的大小代表對(duì)應(yīng)功能或通路富集的基因數(shù)目，顏色代表顯著性。共富集到2 545 個(gè)BP、53 個(gè)CC、149 個(gè)MF 和176 個(gè)KEGG 通路。小兒風(fēng)熱清合劑（口服液）防治甲流潛在靶點(diǎn)涉及的BP 主要包括對(duì)各種物質(zhì)和刺激的反應(yīng)，如外源性刺激、氧化應(yīng)激、活性氧、肽和細(xì)菌來(lái)源分子等。對(duì)應(yīng)分子主要定位在細(xì)胞膜、囊泡腔和轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)復(fù)合物等。這些分子行使的主要分子功能包括轉(zhuǎn)錄因子、核受體、磷酸酶結(jié)合、蛋白酶結(jié)合和細(xì)胞因子等。涉及的通路包括脂質(zhì)與動(dòng)脈粥樣硬化、糖尿病并發(fā)癥中的晚期搪基化終產(chǎn)物及其受體（AGE-RAGE）信號(hào)通路、IL-17 信號(hào)通路、丙/乙型肝炎和前列腺癌等。表明這些靶點(diǎn)多作為受體調(diào)控細(xì)胞對(duì)外源信號(hào)的反應(yīng)，可能影響炎癥性病變、病毒感染和細(xì)胞癌變等過(guò)程。

圖5 潛在靶點(diǎn)GO 功能富集分析及KEGG 通路Fig.5 GO Functional enrichment analysis of potential targets and KEGG pathway

2.6 分子對(duì)接

除了槲皮素、木犀草素、山柰酚、柚皮素等在藥材中廣泛存在且公認(rèn)具有抗病毒、抗炎作用的黃酮類(lèi)活性成分外，還發(fā)現(xiàn)有許多非黃酮類(lèi)活性成分。排名前10 的活性成分和排名前10 的非黃酮類(lèi)活性成分，除去重復(fù)成分，共計(jì)17 個(gè)。其中脹果香豆素甲無(wú)3D 空間結(jié)構(gòu)，其余16 個(gè)成分分別和潛在靶點(diǎn)進(jìn)行分子對(duì)接。如圖6 所示，其中活性成分按排名順序從上至下，潛在靶點(diǎn)按排名順序從左至右。每個(gè)方格代表1 對(duì)活性成分和潛在靶點(diǎn)的分子對(duì)接結(jié)果，對(duì)應(yīng)背景顏色反映結(jié)合能的大小，越低顏色越深，數(shù)字為對(duì)應(yīng)結(jié)合能，大字體代表其低于閾值的數(shù)值，紅色字體代表結(jié)合能低的4 對(duì)活性成分和潛在靶點(diǎn)，篩選進(jìn)行后續(xù)對(duì)接模式的可視化。整體來(lái)看，160 對(duì)分子對(duì)接中有133 對(duì)能夠形成較為穩(wěn)定的結(jié)構(gòu)?；钚猿煞纸嵌瓤?，柚皮素、β-胡蘿卜素、豆甾醇能夠和所有前10 的潛在靶點(diǎn)形成穩(wěn)定結(jié)構(gòu)。從潛在靶點(diǎn)角度看，ESR1、PTGS1、PRSS1 和ADRB2能夠和所有前10 的活性成分形成穩(wěn)定結(jié)構(gòu)，HSP90AA1、PTGS1、ESR1、PRSS1 和ADRB2 能夠和所有前10 的非黃酮類(lèi)活性成分形成穩(wěn)定結(jié)構(gòu)。

圖6 有效分子和潛在靶點(diǎn)分子對(duì)接的結(jié)合能Fig.6 Binding energy between effective molecules and potential targets in molecular docking

選擇4 對(duì)結(jié)合能低的活性成分和潛在靶點(diǎn)進(jìn)行分子對(duì)接模式的探索，如圖7 所示，其中青色分子為活性成分，橘黃色為潛在靶點(diǎn)，藍(lán)色為氫鍵。

圖7 有效分子和潛在靶點(diǎn)分子對(duì)接模式Fig.7 Molecular docking model of effective molecules and potential targets

β-carotene 和ADRB2，以及stigmasterol 和PTGS1 之間沒(méi)有發(fā)現(xiàn)氫鍵相互作用。β-sitosterol 通過(guò)1個(gè)氫鍵與PRSS1的Arg-71相互作用。β-sitosterol通過(guò)1 個(gè)氫鍵與PTGS1 的Cys-41 相互作用。這些結(jié)果從分子結(jié)構(gòu)上驗(yàn)證了活性成分和潛在靶點(diǎn)之間的相互作用關(guān)系。

3 討論

甲流是由甲型流感病毒引起的一種急性呼吸道傳染病，每年呈季節(jié)性流行[8]。多數(shù)患者為自限性，但仍有部分患者發(fā)展為重癥，因此其預(yù)防和治療對(duì)人類(lèi)健康尤為重要。小兒風(fēng)熱清合劑（口服液）由經(jīng)典名方銀翹散加減而來(lái)，是純中藥制劑，安全性高，嬰幼兒可服用。本研究從小兒風(fēng)熱清合劑（口服液）中篩選得到了192 個(gè)活性成分，141 個(gè)防治甲流的潛在靶點(diǎn)，通過(guò)富集分析揭示了這些潛在靶點(diǎn)涉及的功能和通路，并通過(guò)構(gòu)建的“藥材–活性成分–潛在靶點(diǎn)”網(wǎng)絡(luò)篩選較為核心的活性成分和潛在靶點(diǎn)，最后通過(guò)分子對(duì)接從空間結(jié)構(gòu)角度對(duì)活性成分和潛在靶點(diǎn)的相互作用進(jìn)行了驗(yàn)證。

針對(duì)小兒風(fēng)熱清合劑（口服液）防治甲流活性成分排名靠前的部分進(jìn)行了文獻(xiàn)檢索，發(fā)現(xiàn)前10 名的關(guān)鍵活性成分中大多數(shù)是具有抗病毒、抗菌、抗炎和抗氧化功能的黃酮類(lèi)化合物（7/10）。其中槲皮素能夠與病毒膜表面蛋白相互作用從而阻止病毒進(jìn)入，如單純皰疹病毒和甲流病毒，同時(shí)還能與病毒復(fù)制所必須的特定蛋白酶相互作用阻止其復(fù)制，如丙型肝炎病毒、艾滋病毒和新型冠狀病毒[30]。木犀草素能夠抑制病毒外殼蛋白Ⅰ復(fù)合物的表達(dá)，影響甲流病毒的進(jìn)入[31]。山柰酚能夠抑制MAPKs 途徑，抵抗流感引起的炎癥[32]。柚皮素和黃芩素能夠在安全濃度下有效的抑制甲流核蛋白的產(chǎn)生[33]。除了黃酮類(lèi)成分，排名靠前的還有植物甾醇類(lèi)如β-谷甾醇、豆甾醇，萜類(lèi)如β-胡蘿卜素，蒽醌類(lèi)如蘆薈大黃素，生物堿類(lèi)如左旋千金藤啶堿，多酚類(lèi)如鞣花酸等。研究表明β-谷甾醇能夠通過(guò)阻斷視黃酸誘導(dǎo)基因蛋白Ⅰ信號(hào)傳導(dǎo)和干擾素介導(dǎo)的有害免疫反應(yīng)，緩解由流感病毒產(chǎn)生的急性肺損傷[34]。蘆薈大黃素可以降低病毒誘導(dǎo)的犬腎細(xì)胞病變效應(yīng)，并以濃度依賴的方式抑制甲型流感病毒的復(fù)制[35]。日本開(kāi)展的一項(xiàng)隨機(jī)、雙盲、安慰劑對(duì)照、平行組臨床試驗(yàn)表明，在年齡小于40 歲的亞組中，與安慰劑組相比，聯(lián)合服用β-胡蘿卜素和短乳桿菌KB290 可以對(duì)流感病毒感染起到顯著預(yù)防作用（流感發(fā)病率：試驗(yàn)組為1.9%，安慰劑組為3.9%）[36]。在1 項(xiàng)斑塊減少中和實(shí)驗(yàn)中，結(jié)果顯示當(dāng)濃度為50 mmol/L 時(shí)，鞣花酸抑制了＞50%的斑塊形成，實(shí)驗(yàn)證實(shí)了鞣花酸的抗甲流病毒活性[37]。

這些已有的研究結(jié)果驗(yàn)證了小兒風(fēng)熱清合劑（口服液）防治甲流的物質(zhì)基礎(chǔ)。針對(duì)潛在靶點(diǎn)排名靠前的部分進(jìn)行了文獻(xiàn)檢索。PTGS2 編碼一種炎癥介質(zhì)環(huán)氧合酶-2 蛋白，在甲流病毒感染后期，其轉(zhuǎn)錄和翻譯被下調(diào)，導(dǎo)致宿主的防御水平降低，從而促進(jìn)病毒復(fù)制過(guò)程[38]。HSP90AA1 編碼細(xì)胞表面的熱休克蛋白，甲流病毒的血凝素通過(guò)與其結(jié)合介導(dǎo)病毒的進(jìn)入[39]。NOS2 是一種炎癥因子，研究發(fā)現(xiàn)其在抵抗甲流病毒感染宿主后引起的其它致病菌感染中起到重要作用[40]。PPARG 被認(rèn)為是細(xì)胞因子風(fēng)暴調(diào)節(jié)的潛在位點(diǎn)，流感感染會(huì)使其表達(dá)下調(diào)，同時(shí)其穩(wěn)定表達(dá)能夠控制由病毒感染引起的促炎反應(yīng)[41]。ADRB2 可以通過(guò)介導(dǎo)去甲腎上腺素響應(yīng)多種Toll 樣受體信號(hào)，快速誘導(dǎo)分泌IL-10，從而阻斷多種促炎細(xì)胞因子的分泌[42]。此外，有研究證實(shí)，槲皮素、木犀草素等黃酮類(lèi)成分可與血管緊張素轉(zhuǎn)化酶Ⅱ結(jié)合，作用于PTGS1 發(fā)揮抗病毒作用[43]?；谝陨涎芯?，小兒風(fēng)熱清合劑（口服液）核心靶點(diǎn)相互作用所涉及的PTGS2、HSP90AA1、PTGS1、NOS2、PPARG、ADRB2 等靶點(diǎn)可能是小兒風(fēng)熱清合劑（口服液）防治甲流的潛在核心靶點(diǎn)。

潛在靶點(diǎn)的富集結(jié)果顯示，小兒風(fēng)熱清合劑（口服液）能夠影響甲流、乙型肝炎、丙型肝炎、皰疹病毒感染和人巨細(xì)胞病毒感染等通路，體現(xiàn)了其抗病毒的活性。此外還涉及IL-17、PI3K-Akt、HIF-1、FoxO 和MAPK 等信號(hào)通路，表明其可能通過(guò)調(diào)控這些通路分子來(lái)實(shí)現(xiàn)抗病毒。針對(duì)活性成分和潛在靶點(diǎn)之間的相互作用，通過(guò)分子對(duì)接的方式進(jìn)行了模擬，發(fā)現(xiàn)排名靠前的活性成分和潛在靶點(diǎn)多數(shù)能夠在空間結(jié)構(gòu)上形成較為穩(wěn)定的結(jié)構(gòu)，符合中藥多靶點(diǎn)的作用機(jī)制。

綜上所述，本研究基于網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)對(duì)小兒風(fēng)熱清合劑（口服液）防治甲流的成分基礎(chǔ)和作用機(jī)制進(jìn)行了初步探索，揭示了小兒風(fēng)熱清合劑（口服液）發(fā)揮藥效可能影響的功能和通路，可進(jìn)一步結(jié)合實(shí)驗(yàn)手段進(jìn)行驗(yàn)證，這些結(jié)果可為相關(guān)研究提供參考和幫助。

利益沖突所有作者均聲明不存在利益沖突