林懷印，孟肖，趙智東

1.衡水市第二人民醫(yī)院，河北 衡水 053000

2.衡水市中醫(yī)醫(yī)院，河北 衡水 053000

腦梗死是指腦局部供血障礙導(dǎo)致的腦組織缺血、缺氧引起的腦組織壞死、軟化，從而產(chǎn)生相應(yīng)腦功能缺損癥狀的綜合征[1]。多數(shù)患者是因?yàn)槟X動脈粥樣硬化、血管狹窄或閉塞所致，還可能是身體其它部位血栓脫落，阻塞腦血管所致。腦梗死又稱缺血性腦卒中，主要因高血壓、動脈瘤、動靜脈畸形等原因引起腦血管破裂，形成腦血栓和腦栓塞。其病因包括血管壁病變，心臟病和血流動力學(xué)改變，血液成分和血液流變學(xué)改變以及腦血管痙攣，受壓或外傷等，可引發(fā)高血壓、心臟病、糖尿病及高血脂癥等危險因素，降低認(rèn)知功能，損傷血管內(nèi)皮細(xì)胞受損，加重機(jī)體炎癥反應(yīng)，具有發(fā)病率高、死亡率高和致殘率高的特點(diǎn)[2]。神經(jīng)髓鞘是包裹在神經(jīng)細(xì)胞軸突周圍的一層膜，可以防止軸突之間的干擾，增加傳導(dǎo)速度，對軸突修復(fù)有促進(jìn)作用[3]?？缒んw受體蛋白（Notch1）信號通路維持神經(jīng)元，平衡正常生長發(fā)育的神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞，而血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞分裂及血管生長，二者參與中樞神經(jīng)系統(tǒng)病變，通過調(diào)節(jié)腦部炎性因子，參與腦缺血缺氧的損傷過程。隨著醫(yī)療技術(shù)的發(fā)展進(jìn)步，對腦卒中的靶向藥物研究逐漸豐富，依達(dá)拉奉是一種新型自由基清除劑，能捕獲新生的高活性自由基，減輕腦缺血引起的腦水腫以及腦組織損傷，目前用于臨床治療腦梗死等顱腦損傷疾病[4]。臨床缺乏采用依達(dá)拉奉治療腦梗死髓鞘再生、認(rèn)知功能及VEGF/Notch1 信號通路的定向研究，故本研究主要討論不同濃度的依達(dá)拉奉，對腦卒中大鼠神經(jīng)髓鞘再生、認(rèn)知功能及VEGF/Notch1 信號通路的作用機(jī)制，為相關(guān)研究提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動物

50 只SPF 級SD 雄性大鼠，鼠齡4～6 周，體質(zhì)量（220±20）g，由廣西醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動物中心提供[動物許可證編號SYKG（桂）2018-0005]，大鼠于本院實(shí)驗(yàn)動物中心飼養(yǎng)，溫度（24±2）℃，濕度50%～80%，12 h 晝夜交替，正常飲食及攝水，該動物實(shí)驗(yàn)在河北醫(yī)科大學(xué)動物實(shí)驗(yàn)室完成，按照《實(shí)驗(yàn)動物管理?xiàng)l例》規(guī)定進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。動物實(shí)驗(yàn)經(jīng)河北醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動物倫理委員會批準(zhǔn)（倫理批準(zhǔn)號2016-0106）。

1.2 藥物、主要試劑與儀器

依達(dá)拉奉注射液由昆明積大制藥有限公司提供，批號2004L00488，規(guī)格：5 mL∶10 mg；阿司匹林腸溶片購于拜耳醫(yī)藥保健有限公司，批號BJ16177，規(guī)格：100 mg。

戊巴比妥鈉（批號57330）購于BIOCAM 公司；蘇木素–伊紅（HE）染色液（批號20190472）購于湖南金盛徠生物科學(xué)有限公司；DAB 試劑盒（貨號DA1010）購于北京索萊寶科技有限公司；二抗IgG（貨號A21020-1）購于亞科因（武漢）生物技術(shù)有限公司；甘油醛-3-磷酸脫氫酶（GAPDH）（批號C1319-100）購于北京普利萊基因技術(shù)有限公司；；VEGF 一抗（貨號K106558P）購于北京索萊寶科技有限公司Notch1 一抗（貨號Sfk13818）購于上海士鋒生物科技有限公司。

DYCZ-24DN 垂直電泳槽、DYCZ-40 電泳儀均購于中國北京六一儀器廠；TDZ4-WS 低速離心機(jī)購于上海盧湘儀離心機(jī)儀器有限公司；RT-6100 酶標(biāo)分析儀購于Rayto 公司；BX53 光學(xué)顯微鏡購于上海通灝光電科技有限公司；UNION-A 免疫分析儀購于深圳市亞輝龍生物科技有限公司。

1.3 大鼠分組及動物模型建立

對參與實(shí)驗(yàn)的大鼠常規(guī)飼養(yǎng)，設(shè)立對照組、模型組、阿司匹林組和依達(dá)拉奉1.5、3 mg/kg 組，每組10 只。除對照組外，其余大鼠均建立大腦中動脈梗死模型[5]。用40 mg/kg 劑量2%戊巴比妥鈉對大鼠進(jìn)行ip 麻醉后，將大鼠固定于動物手術(shù)臺消毒，確保術(shù)區(qū)的無菌狀態(tài)，于頸部皮膚行正中縱向切口，暴露并鈍性分離左側(cè)頸總動脈，用動脈夾暫夾閉。頸外動脈遠(yuǎn)端結(jié)扎并切斷，頸外動脈殘端系絲線以阻止血液流出，而后松開夾閉頸總動脈的動脈夾。線栓由頸外動脈殘端插入頸內(nèi)動脈，插入距頸總動脈分叉約18 mm 處，遇阻力則停止插入。大鼠向?qū)?cè)轉(zhuǎn)彎、同側(cè)眼裂減小和對側(cè)肢體癱瘓，提示腦卒中大鼠模型復(fù)制成功。造模期間動物膝關(guān)節(jié)無破損癥狀，動物無死亡，實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)完整無脫落。

1.4 給藥方法[6]

建模成功后，將依達(dá)拉奉注射液用生理鹽水稀釋成0.5 mg/mL 濃度備用，依達(dá)拉奉1.5、3 mg/kg組大鼠分別尾iv 1.5、3 mg/kg 依達(dá)拉奉注射液，2次/d，連續(xù)7 d。阿司匹林組將阿司匹林以生理鹽水配成10 mg/mL 混懸液，造模后第7 天注射4 mg/kg的阿司匹林溶液，給藥1 次，其余大鼠尾iv 等量（約2 mL）的生理鹽水。

1.5 穿梭箱聯(lián)合水迷宮實(shí)驗(yàn)觀察大鼠認(rèn)知功能

在穿梭箱的頂部裝置蜂鳴報(bào)警器，在底部在穿梭箱的鋪一層電柵。用食物將大鼠引導(dǎo)至穿梭箱內(nèi)部的任一側(cè)10 s 后，打開蜂鳴報(bào)警，待警報(bào)鈴聲響5 s 后，經(jīng)過穿梭箱底部的電柵給電刺激大鼠，大鼠逃到箱內(nèi)另一側(cè)時，蜂嗚自動停止。觀察大鼠蜂鳴期間主動逃避次數(shù)以及被電次數(shù)，1 次/d，10 個循環(huán)/次。

設(shè)置水深52 cm、水溫25 ℃的水迷宮，安全島高度低于液面，設(shè)置成50 cm。記錄各組大鼠游到安全島的時間，在第20 天時統(tǒng)計(jì)訓(xùn)練所用的時間結(jié)果，比較學(xué)習(xí)潛伏期及記憶潛伏期所用時間，時間越長表明認(rèn)知功能損傷越重。

1.6 ELISA 法檢測各組大鼠血清髓鞘堿性蛋白（MBP）含量

大鼠尾靜脈采血1 mL，收集血清備用。待血液凝固離心5 min 后，取塑料EP 管，將凝固血液倒入管中封口，于-20 ℃冰箱保存。按照試劑盒說明書操作。

1.7 Pal-Weigert 染色觀察大鼠神經(jīng)髓鞘形態(tài)

麻醉大鼠，切開胸膛暴露心臟，從心尖插入灌注針至主動脈，灌注100 mL、4 ℃的4%多聚甲醛。然后對大鼠開顱取腦，參照大鼠腦立體定位圖譜，切取大鼠內(nèi)囊前囟尾側(cè)大約2.5 mm 的腦組織，放入4 ℃的4%多聚甲醛進(jìn)行固定，12 h 后將腦組織經(jīng)蔗糖脫水，切片機(jī)切取厚冠狀切片（厚30 mm），重鉻酸鉀水溶液預(yù)染3 d，0.5%的鉻酸中放置1 h，蒸餾水再次漂洗后，放入染液（用10%蘇木素醇10 mL＋冰醋酸1 mL＋蒸餾水100 mmL 混勻調(diào)配）6 h 進(jìn)行染色，用4%的高錳酸鉀水溶液分色30 s，看見清晰的灰白質(zhì)后再放入0.01 mol/L 的PBS 中，再用脫色液（1%草酸＋1%亞硫酸鉀混勻調(diào)配）分色5 min 至白質(zhì)清晰可見，用飽和碳酸鋰1 mL＋500 mL蒸餾水返藍(lán)，正常神經(jīng)髓鞘呈深藍(lán)色，于0.01 mol/L PBS 中漂洗20 min 后，用2%伊紅水溶液復(fù)染5 min，乙醇脫水3 min 后，光鏡下觀察Pal-Weigert 髓鞘染色。

1.8 2,3,5-氯化三苯基四氮唑（TTC）染色測定各組大鼠腦梗死體積

大鼠于給藥后12 h 做深度麻醉，0.9%氯化鈉注射液200 mL 心臟灌注后，斷頭取腦，-20 ℃快速冷凍15 min，由前向后每隔2 mm 冠狀行腦組織切片，將腦片置于2% TTC 生理鹽水溶液中（對照組織染成紅色，模型組織蒼白），37 ℃避光孵育30 min，期間每隔8 min 翻動1 次，顯色完畢后10%福爾馬林固定3～5 h，數(shù)碼相機(jī)拍照。用Image-Pm Plus6.0圖像分析系統(tǒng)計(jì)算腦梗死體積。

1.9 免疫印跡法檢測各組大鼠VEGF/Notch1 水平

將組織樣品剪切為細(xì)小碎片，加入裂解液，于12 000 r/min 離心10 min，留取上清液，收集蛋白，采用Bradford 法檢測。每100 μL 的蛋白混合等體積5×上樣緩沖液，100 浴箱中100 ℃加熱5 min，待變性發(fā)生后，進(jìn)行10% SDS-PAGE 凝膠電泳，通過轉(zhuǎn)膜、封閉及洗膜后加一抗VEGF（1∶500）、Notch1（1∶500），4 ℃孵育過夜，過氧化物酶抗兔IgG 二抗（1∶2 500），2 h 封閉完成后加入洗滌液進(jìn)行洗滌，10 min/次，重復(fù)3 次。用DAB 顯色試劑盒在X 膠片感光、顯影、定影完成后在暗室中完成顯色。以GAPDH 蛋白為內(nèi)參，IPP 6.0 軟件檢測蛋白電泳帶灰度值與GAPDH 條帶灰度值比值，比較對比值。

1.10 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

采用GraphPadPrism 軟件進(jìn)行分析，所有數(shù)據(jù)符合正態(tài)分布，采用表示，組間采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，多組間采用單因素方差分析，P＜0.05 表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 各組大鼠認(rèn)知功能比較

與對照組比較，模型組主動逃避次數(shù)減少，被電次數(shù)、學(xué)習(xí)和記憶潛伏時間增加（P＜0.05）；與模型組比較，依達(dá)拉奉1.5、3 mg/kg 組主動逃避次數(shù)增加，被電次數(shù)、學(xué)習(xí)和記憶潛伏時間減少（P＜0.05），且呈劑量相關(guān)性，見表1。

表1 各組大鼠認(rèn)知功能比較（，n=10）Table 1 Comparison of cognitive function in each group (,n=10)

表1 各組大鼠認(rèn)知功能比較（，n=10）Table 1 Comparison of cognitive function in each group (,n=10)

與對照組比較：*P＜0.05；與模型組比較：#P＜0.05；與依達(dá)拉奉1.5 mg·kg-1 組比較：&P＜0.05*P＜0.05 vs control group;#P＜0.05 vs model group;&P＜0.05 vs edaravone 1.5 mg·kg-1 group

2.2 各組大鼠血清MBP 含量比較

與對照組比較，模型組血清MBP 含量顯著升高（P＜0.05）；與模型組比較，依達(dá)拉奉1.5、3 mg/kg組血清MBP 含量均顯著下降（P＜0.05），且呈劑量相關(guān)性，見圖1。

圖1 各組大鼠血清MBP 水平比較（，n=10）Fig.1 Comparison of serum MBP levels in each group(,n=10)

2.3 各組大鼠神經(jīng)髓鞘形態(tài)比較

對照組內(nèi)囊神經(jīng)纖維髓鞘染成深藍(lán)色，且著色清晰，背景為極淺的淡黃色；模型組髓鞘崩解、破壞、脫失嚴(yán)重，髓鞘稀疏，部分區(qū)域有髓鞘斷裂缺失，染色變淺；依達(dá)拉奉1.5、3 mg/kg 組及阿司匹林組內(nèi)囊的髓鞘脫失明顯減少，髓鞘分布較致密，染色較深，且以依達(dá)拉奉3 mg/kg 組尤其明顯，見圖2。

圖2 各組大鼠神經(jīng)髓鞘形態(tài)比較（×200）Fig.2 Comparison of nerve myelin morphology of rats in each group (×200)

2.4 各組大鼠腦梗死體積比較

與對照組比較，模型組梗死體積升高（P＜0.05），與模型組比較，依達(dá)拉奉1.5、3 mg/kg 組梗死體積均顯著下降（P＜0.05），見表2、圖3。

圖3 各組大鼠腦梗死體積比較Fig.3 Comparison of cerebral infarction volume in each group

表2 各組大鼠腦梗死體積比較（，n=10）Table 2 Comparison of cerebral infarction volume of rats in each group (,n=10)

表2 各組大鼠腦梗死體積比較（，n=10）Table 2 Comparison of cerebral infarction volume of rats in each group (,n=10)

與對照組比較：*P＜0.05；與模型組比較：#P＜0.05；與依達(dá)拉奉1.5 mg·kg-1組比較：&P＜0.05*P＜0.05 vs control group;#P＜0.05 vs model group;&P＜0.05 vs edaravone 1.5 mg·kg-1 group

2.5 各組大鼠VEGF/Notch1 水平比較

與對照組比較，模型組VEGF 水平下降，Notch1水平升高（P＜0.05）；與模型組比較，依達(dá)拉奉1.5、3 mg/kg 組VEGF 水平升高，Notch1 水平下降（P＜0.05），見表3、圖4。

圖4 各組大鼠VEGF/Notch1 水平Fig.4 VEGF/Notch1 levels in each group

表3 各組大鼠VEGF/Notch1 水平比較（，n=10）Table 3 Comparison of VEGF/Notch1 levels in each group(,n=10)

表3 各組大鼠VEGF/Notch1 水平比較（，n=10）Table 3 Comparison of VEGF/Notch1 levels in each group(,n=10)

與對照組比較：*P＜0.05；與模型組比較：#P＜0.05；與依達(dá)拉奉1.5 mg·kg-1組比較：&P＜0.05*P＜0.05 vs control group;#P＜0.05 vs model group;&P＜0.05 vs edaravone 1.5 mg·kg-1 group

3 討論

我國屬于腦梗死高發(fā)病率國家，有較高的致殘率和致死率，對人類健康產(chǎn)生威脅，降低人類生活質(zhì)量[7]。臨床對腦梗死的治療多從抑制神經(jīng)元凋亡、清除自由基及降低神經(jīng)炎癥反應(yīng)等進(jìn)行溶栓，但因大部分患者去醫(yī)院就診的時效性影響，致使療效不明顯[8]。依達(dá)拉奉作為一種神經(jīng)保護(hù)劑在腦梗死治療中開始廣泛，本研究發(fā)現(xiàn)依達(dá)拉奉調(diào)控Notch 信號通路促使血管新生，改善腦認(rèn)知功能。

本研究結(jié)果顯示，通過水迷宮聯(lián)合穿梭箱實(shí)驗(yàn)，與模型組比較，依達(dá)拉奉干預(yù)后，大鼠主動逃避次數(shù)增加，被電次數(shù)、學(xué)習(xí)和記憶潛伏時間減少，說明依達(dá)拉奉治療組大鼠的學(xué)習(xí)、記憶、行為能力提升，改善認(rèn)知功能。當(dāng)患者發(fā)生腦出血時，依達(dá)拉奉發(fā)揮清除氧自由基的生物活性，控制脂質(zhì)過氧化的產(chǎn)生，對神經(jīng)細(xì)胞及內(nèi)皮細(xì)胞產(chǎn)生的氧化作用進(jìn)行有效抑制，降低發(fā)生腦水腫發(fā)生幾率，保護(hù)神經(jīng)系統(tǒng)及神經(jīng)元結(jié)構(gòu)。有研究證實(shí)，當(dāng)對機(jī)體靜脈注射依達(dá)拉奉時，大部分藥物都會通過血腦屏障發(fā)揮作用，降低鈣離子、鎂離子水平紊亂水平，恢復(fù)腦組織正常供血，抑制神經(jīng)炎性反應(yīng)，從多方面改善神經(jīng)認(rèn)知功能[9]。對血管性癡呆大鼠進(jìn)行迷宮、穿梭箱實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)，依達(dá)拉奉組大鼠電擊次數(shù)明顯減少，動逃避次數(shù)增加，說明依達(dá)拉奉組大鼠能改善血管性癡呆大鼠包括記憶、學(xué)習(xí)和行為方面的認(rèn)知能力，發(fā)揮對大鼠的腦保護(hù)作用[10]。有研究表明，通過定位航行及空間探索的水迷宮實(shí)驗(yàn)，依達(dá)拉奉組大鼠逃避潛伏期明顯縮短，在原平臺象限內(nèi)的游泳時間明顯延長，穿環(huán)數(shù)明顯增多，說明經(jīng)依達(dá)拉奉干預(yù)后，可部分改善由于長期、反復(fù)的慢性癇性發(fā)作引起的認(rèn)知功能減退，學(xué)習(xí)記憶能力下降情況，減少認(rèn)知功能障礙[11]。

本研究結(jié)果顯示，與模型組相比，依達(dá)拉奉各劑量組血清MBP 含量顯著逐漸降低，對神經(jīng)髓鞘Pal-Weigert 染色后發(fā)現(xiàn)，對照組內(nèi)囊神經(jīng)纖維髓鞘染成深藍(lán)色，且著色清晰，模型組染色變淺，存在髓鞘稀疏有缺失情況，經(jīng)藥物干預(yù)后，髓鞘脫失緩解，染色加深，以依達(dá)拉奉3 mg/kg 組更為明顯，說明經(jīng)依達(dá)拉奉可調(diào)控MBP 蛋白含量，改善神經(jīng)髓鞘形態(tài)。正常生理下的髓鞘結(jié)構(gòu)緊湊，對有髓神經(jīng)纖維起到高膜阻抗和低電容作用，有利于跳躍式神經(jīng)沖動傳導(dǎo)的正常發(fā)生。MBP 屬于強(qiáng)堿性膜蛋白中的神經(jīng)髓鞘所特有的、重要的脂蛋白，主要由少突膠質(zhì)細(xì)胞分泌[12]。在正常情況下MBP 蛋白在血液中的含量非常少，腦卒中時，腦組織缺氧，少突膠質(zhì)細(xì)胞開始凋亡，MBP 脫落于腦脊液并從血腦屏障漏到血液，使得血清MBP 蛋白水平異常升高。有研究顯示，缺血性腦卒中的發(fā)生，會造成腦組織缺血損傷和出現(xiàn)過量氧自由基，髓鞘脫失，MBP 穿過血腦屏障于腦脊液中大量釋放，升高血清MBP 水平，說明未經(jīng)治療的大鼠在腦缺血早期髓鞘和血腦屏障破壞嚴(yán)重[13]。依達(dá)拉奉具有捕獲自由基的優(yōu)勢，調(diào)控機(jī)體內(nèi)黃嘌呤氧化酶和次黃嘌呤氧化酶活性，對缺血再灌注損傷中產(chǎn)生自由基進(jìn)行有效清除，抑制神經(jīng)細(xì)胞過氧化，降低神經(jīng)細(xì)胞的死亡率，減輕機(jī)體因腦缺血或腦缺血引起的腦水腫及神經(jīng)細(xì)胞損傷。腦的缺血缺氧性損傷通過依達(dá)拉奉干預(yù)，使位于前腦室下區(qū)的神經(jīng)干細(xì)胞激活，出現(xiàn)少突膠質(zhì)祖細(xì)胞，再遷移到內(nèi)囊區(qū)分化為成熟的少突膠質(zhì)細(xì)胞，調(diào)控MBP 蛋白含量，促進(jìn)髓鞘再生，減輕腦損害。相關(guān)研究表明，依達(dá)拉奉在腦梗死的治療中，通過調(diào)節(jié)花生四烯酸代謝水平，實(shí)現(xiàn)抑制腦缺血所致的腦水腫及大腦皮質(zhì)水腫的目的，清除自由基，降低MBP 含量，實(shí)現(xiàn)維持中樞神經(jīng)系統(tǒng)髓鞘結(jié)構(gòu)和功能的穩(wěn)定[14]。研究發(fā)現(xiàn)，依達(dá)拉奉聯(lián)合相關(guān)神經(jīng)因子聯(lián)合治療腦出血，能有效清除氧自由基，降低MBP 蛋白水平，改善神經(jīng)功能缺損[15]。

Notch 信號通路維持神經(jīng)元和神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞的正常生長發(fā)育，調(diào)節(jié)微血管形成，在γ-分泌酶作用下激活，裂解釋放出Notch1 受體胞內(nèi)活性片段（NICD），可不經(jīng)其他信號轉(zhuǎn)導(dǎo)分子的作用而直接進(jìn)入細(xì)胞核，與轉(zhuǎn)錄因子或其他調(diào)節(jié)子結(jié)合，從而調(diào)節(jié)各種細(xì)胞活動。VEGF 是近年來發(fā)現(xiàn)的生長因子，具有促內(nèi)皮細(xì)胞分裂的作用，正常情況下VEGF并不在腦內(nèi)表達(dá),多數(shù)血管新生處于靜息狀態(tài)，在梗死發(fā)生后，VEGF 開始大量合成分泌，促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞的分裂和血管生長，建立起梗死后的側(cè)支循環(huán)結(jié)構(gòu)。本文研究結(jié)果顯示，與模型組相比，依達(dá)拉奉組VEGF 升高，Notch1 水平下降，腦梗死體積減少，并有濃度有相關(guān)性，說明依達(dá)拉奉可通過下調(diào)Notch 信號通路，促進(jìn)VEGF 活性，改善腦梗死體積。依達(dá)拉奉利用分子量小、脂溶性高的特點(diǎn)，可快速穿透血腦屏障進(jìn)行氧自由基的清除，保護(hù)細(xì)胞膜免受損傷，對小膠質(zhì)細(xì)胞的活化進(jìn)行抑制，減少炎癥介質(zhì)釋放，實(shí)現(xiàn)治療缺血性腦損傷的作用，縮小腦梗死后半暗帶范圍，減少梗死體積，改善血管修復(fù)功能[16]。動物實(shí)驗(yàn)證實(shí)，依達(dá)拉奉對VEGF 的生物活性進(jìn)行促進(jìn)，通過分泌VEGF抑制神經(jīng)炎癥，修復(fù)血管功能，發(fā)揮腦保護(hù)作用[17]。相關(guān)研究表明，經(jīng)依達(dá)拉奉干預(yù)后，慢性腦缺血大鼠VEGF 活性升高，抑制炎癥反應(yīng)，降低白細(xì)胞介素（IL-1β）、腫瘤壞死因子-α（TNF-α）水平，提高血管修復(fù)的功能，發(fā)揮腦保護(hù)作用[18]。研究顯示，Notch 通路的激活會促進(jìn)活化小膠質(zhì)細(xì)胞，導(dǎo)致炎性介質(zhì)浸潤組織，損傷神經(jīng)元，在腦缺血發(fā)生早期對Notch 通路進(jìn)行抑制，可大大降低炎癥損傷，有利于組織的修復(fù)[19]。有研究表明，依達(dá)拉奉干預(yù)后，通過抑制Notch 信號通路表達(dá)，影響小膠質(zhì)細(xì)胞的激活，調(diào)控核因子-κB（NF-κB）介導(dǎo)，減少炎性因子的產(chǎn)生，進(jìn)而引起Notch1 信號通路下游NICD 水平下調(diào)，減輕激活小膠質(zhì)細(xì)胞介導(dǎo)的炎性反應(yīng)，減輕神經(jīng)損傷[20]。有研究發(fā)現(xiàn)，依達(dá)拉奉治療缺血性腦損傷大鼠，其機(jī)制可能是通過抑制Notch 信號通路的表達(dá)，降低小膠質(zhì)細(xì)胞的活化性，減少Notch1、NICD、轉(zhuǎn)錄因子（Hes-1）及小膠質(zhì)細(xì)胞標(biāo)記物離子鈣接頭蛋白（Iba1）水平，從而降低白細(xì)胞介素（IL-6）、IL-1β、TNF-α 水平，減少炎癥因子釋放，改善神經(jīng)損傷[21]。

綜上所述，依達(dá)拉奉可促進(jìn)VEGF 活性，抑制炎癥反應(yīng)，調(diào)控Notch1 信號通路，影響小膠質(zhì)細(xì)胞的激活，降低MBP 蛋白表達(dá)，促進(jìn)神經(jīng)髓鞘再生，提升認(rèn)知功能。

利益沖突所有作者均聲明不存在利益沖突