滕秋梅　張德楠　余麗敏　何成新　張中峰　徐廣平

摘要：目前多數(shù)經(jīng)濟(jì)作物種植過(guò)程中存在氮肥用量過(guò)多成效甚微的問(wèn)題。為探討減少氮肥用量且施加固氮菌劑對(duì)烤煙生長(zhǎng)及土壤特性的影響，設(shè)置減半氮肥（對(duì)照CK）、施全量氮肥（T2）、減半氮肥配接種固氮菌劑（T3）共3個(gè)處理，通過(guò)盆栽試驗(yàn)，分析減氮配施固氮菌對(duì)不同品種烤煙農(nóng)藝性狀、生物量、葉片養(yǎng)分含量、土壤化學(xué)性質(zhì)和土壤微生物的影響。結(jié)果表明，T2、T3處理下烤煙的株高、莖粗、葉長(zhǎng)、葉生物量、總生物量差異不顯著。葉片全氮、全磷、全鉀含量均表現(xiàn)為T2＞T3；土壤全磷、全鉀、速效磷和堿解氮含量在T2和T3處理間沒(méi)有顯著差異。土壤細(xì)菌、放線菌數(shù)量均表現(xiàn)為T3＞T2，真菌數(shù)量則表現(xiàn)為T2＞T3，其中NC102、KRK26在T3處理下細(xì)菌數(shù)量比T2分別多44.77%、22.65%；放線菌的數(shù)量分別多33.81%、31.77%；真菌數(shù)量比T2分別少19.28%、15.54%。經(jīng)過(guò)主成分分析得出，土壤有機(jī)碳、全氮、全磷、細(xì)菌與葉片全鉀、全氮、全磷、株高、葉長(zhǎng)、葉寬、莖生物量等均顯著正相關(guān)，說(shuō)明不同烤煙在不同處理下的農(nóng)藝性狀、生物量、葉片養(yǎng)分含量、土壤化學(xué)性質(zhì)、土壤微生物數(shù)量之間具有顯著的相關(guān)關(guān)系。可見(jiàn)，減氮配施固氮菌菌劑對(duì)不同品種烤煙的影響與全量施氮相似，減氮配施固氮?jiǎng)┛娠@著改善烤煙生長(zhǎng)的土壤微環(huán)境。

關(guān)鍵詞：減氮；固氮菌劑；烤煙；生長(zhǎng)；土壤特性

中圖分類號(hào)：S143.1；S572.06文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A

文章編號(hào)：1002-1302（2023）21-0072-07

目前我國(guó)在大多數(shù)作物種植過(guò)程中普遍存在氮肥使用量高、利用率低的問(wèn)題［1］?；视绕涫堑实倪^(guò)量施用會(huì)導(dǎo)致土壤板結(jié)酸化、氮淋失、水土流失、土壤微生物生物量下降和潛在的大氣污染等環(huán)境問(wèn)題和生態(tài)危機(jī)［2-3］。針對(duì)當(dāng)前化肥超量使用在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中的現(xiàn)狀，有機(jī)肥替代化肥是改善措施之一。施用大豆和海藻等有機(jī)肥，可以改善作物土壤的理化性質(zhì)，并能影響土壤細(xì)菌群落結(jié)構(gòu)以及作物生長(zhǎng)發(fā)育［4］。除用有機(jī)肥代替化肥外，Tao等聚焦于將微生物菌劑應(yīng)用于提高肥料利用效率和促進(jìn)農(nóng)作物生長(zhǎng)［5］。微生物菌劑的施用可提高土壤營(yíng)養(yǎng)成分含量，增加微生物的多樣性；它所產(chǎn)生的某些代謝產(chǎn)物可以刺激植株根系生長(zhǎng)，幫助植株更好地?cái)z取養(yǎng)分，從而促進(jìn)作物生長(zhǎng)［5-7］；同時(shí)可以在一定程度上減少氮肥的用量，避免對(duì)環(huán)境的污染［8］。林麗云等認(rèn)為，化肥配施微生物菌劑對(duì)作物的生長(zhǎng)有顯著的影響［9］。李鳳霞等認(rèn)為，氮肥減量30%配施微生物菌劑可使土花椰菜產(chǎn)量明顯增加［10］。其中固氮菌作為一種有機(jī)營(yíng)養(yǎng)型細(xì)菌，在作物增產(chǎn)、土壤環(huán)境改善、生物固氮等問(wèn)題上具有重要作用［11-13］。胡夢(mèng)媛等認(rèn)為，固氮菌與化肥配施可以使作物產(chǎn)量增加20％以上［14］。賈雨雷等認(rèn)為，化肥菌草固氮菌肥+75%化肥在一定程度上可以促進(jìn)巨菌草生長(zhǎng)，改善其營(yíng)養(yǎng)品質(zhì)和土壤理化性質(zhì)［15］。以上結(jié)果均表明，有機(jī)肥和微生物菌劑的合理配置在促進(jìn)作物生長(zhǎng)和提高產(chǎn)量以及減少化肥用量上表現(xiàn)出巨大的潛力和良好的應(yīng)用前景?？緹熓且环N以質(zhì)量為主兼顧產(chǎn)量的特殊葉用經(jīng)濟(jì)作物?？緹熢谠耘噙^(guò)程中對(duì)氮素營(yíng)養(yǎng)非常敏感，氮含量直接影響植株的生長(zhǎng)發(fā)育、干物質(zhì)積累等重要生理生化過(guò)程，對(duì)煙株體內(nèi)重要的有機(jī)物如蛋白質(zhì)、葉綠素、煙堿等的含量也有顯著影響，進(jìn)而影響烤煙的品質(zhì)［16-18］。有關(guān)施用有機(jī)肥、不同水平氮肥或接種微生物菌劑配施化肥對(duì)烤煙生長(zhǎng)、產(chǎn)質(zhì)量、抗病性以及植煙土壤理化性質(zhì)等影響的研究較多［4，19-22］。但針對(duì)氮肥與固氮菌劑的聯(lián)合使用對(duì)不同品種烤煙生長(zhǎng)狀況、葉片營(yíng)養(yǎng)含量、土壤化學(xué)性質(zhì)及土壤微生物特性等方面的系統(tǒng)研究仍處在初級(jí)階段。本研究利用盆栽試驗(yàn)，使用固氮菌（巨大芽孢桿菌）接種烤煙，探討以有機(jī)肥為底肥，氮肥減量配接種固氮菌劑條件下對(duì)烤煙的生長(zhǎng)、葉片營(yíng)養(yǎng)含量、土壤化學(xué)性質(zhì)及土壤微生物的影響，討論在減少氮肥用量的條件下固氮菌和有機(jī)肥替代化肥能否滿足烤煙對(duì)氮素的營(yíng)養(yǎng)需求，旨在為化肥減量施用、固氮菌劑在農(nóng)業(yè)中的應(yīng)用與推廣以及農(nóng)業(yè)可持續(xù)發(fā)展提供理論依據(jù)和參考。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

供試烤煙有NC102和KRK26共2個(gè)品種，來(lái)自廣西中煙工業(yè)有限責(zé)任公司邵陽(yáng)煙葉基地。供試的固氮菌為巨大芽孢桿菌，從廣西壯族自治區(qū)平果市果化鎮(zhèn)石漠化地區(qū)植物根際土壤中分離篩選所得，具體篩選方法參照曹彥強(qiáng)等的做法［23］。供試肥料：氮肥為硝酸銨；磷鉀肥為磷酸二氫鉀（執(zhí)行標(biāo)準(zhǔn)：HG/T 2321—2016《肥料級(jí)磷酸二氫鉀》；P2O5≥51.5%、K2O≥34%）；有機(jī)肥即草炭灰（有機(jī)質(zhì)含量>50%，氮含量2%）。供試盆栽土壤采自中國(guó)科學(xué)院廣西植物研究所試驗(yàn)田，土壤pH值、有機(jī)碳含量、全氮含量、全磷含量、全鉀含量、速效磷含量、速效鉀含量、交換性鈣含量、交換性鎂含量、堿解氮含量分別為5.27、32.99 g/kg、1.30 g/kg、0.60 g/kg、9.62 g/kg、1.23 mg/kg、5.07 mg/kg、209.59 mg/kg、18.60 mg/kg、83.81 mg/kg。

為模擬自然狀態(tài)下的接種環(huán)境，試驗(yàn)土壤不進(jìn)行滅菌。盆栽試驗(yàn)所用容器為塑料花盆（規(guī)格為 28 cm×32 cm）。

1.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì)

試驗(yàn)于2020年4月在中國(guó)科學(xué)院廣西植物研究所進(jìn)行。該地區(qū)年平均相對(duì)濕度73%～79%，日照時(shí)長(zhǎng)1 670 h、溫度19.3 ℃。試驗(yàn)采用完全隨機(jī)設(shè)計(jì)，共包括3個(gè)處理，分別為施50%大田推薦劑量即7.5 g氮肥的對(duì)照處理（CK），施全量大田推薦劑量15 g氮肥（T2），施50%大田推薦劑量即7.5 g氮肥配合100 mL固氮菌劑（T3）［24］。每個(gè)處理設(shè)置5個(gè)重復(fù)，2種烤煙共計(jì)30盆。

試驗(yàn)花盆使用0.5% KMnO4溶液浸泡3～5 min 消毒，而后清洗干凈，待自然風(fēng)干后裝填由 1 kg 土（上層）、1.5 kg草木灰（中層）、1 kg土（底層）組成的培養(yǎng)基質(zhì)（基質(zhì)高約為花盆高度的3/4），以80%最大田間持水量為標(biāo)準(zhǔn)加水至培養(yǎng)基質(zhì)中，平衡1 d后每個(gè)花盆移植1株烤煙進(jìn)行適應(yīng)性生長(zhǎng)。待烤煙長(zhǎng)至有5～6張真葉時(shí)，在苗根際打孔，接種菌劑（將篩選純化的巨大芽孢桿菌菌株接種至 LB 液體培養(yǎng)基中，搖床培養(yǎng)（30 ℃、180 r/min）至對(duì)數(shù)期。用注射器進(jìn)行灌根接種，接種量為100 mL，使最終濃度達(dá)到106 CFU/g。接種10 d 后，在植物根部以澆灌的方式施加肥料。控制肥料比例為 N ∶P ∶K=1 ∶1 ∶2.5［24］，T2處理組施加氮肥15 g、磷酸二氫鉀30 g。T1、T3處理對(duì)應(yīng)的減氮（1/2氮）處理的施氮量為7.5 g/株，各處理磷、鉀肥用量一致，即每株磷酸二氫鉀均為30 g，分3～4次施加。

1.3 測(cè)定指標(biāo)及方法

烤煙移栽后90 d，每個(gè)處理選擇生長(zhǎng)狀況較一致的3株烤煙，用鋼卷尺和游標(biāo)卡尺測(cè)定烤煙莖粗（莖基部直徑）、株高（莖基部至生長(zhǎng)點(diǎn)上方的高度）、葉長(zhǎng)（葉子為中成熟葉）和葉寬；采用收獲法測(cè)定生物量。于烤煙成熟期采取植株樣品，將采集的煙株按不同器官（根、莖、葉）分開，分別稱鮮質(zhì)量后裝信封袋，置于烘箱內(nèi)烘至恒質(zhì)量，稱量各部位干質(zhì)量，最后取3株烤煙的平均值。用粉碎機(jī)將烘干的樣品粉碎后過(guò)篩。植物全碳、全氮、全磷、全鉀含量的測(cè)定分別采用重鉻酸鉀氧化-外加熱法、凱氏定氮法、鉬銻抗比色法、火焰光度法，全鈣和全鎂含量均采用絡(luò)合滴定法測(cè)定［25］。

采植物樣的同時(shí)采集花盆里的土壤（移栽后130 d）。清除地被物后用土鉆取0～10 cm的土 300 g，剔除石礫和植物殘根等雜物后迅速裝入滅菌的采樣袋中。帶回實(shí)驗(yàn)室后過(guò)2 mm篩，一部分樣品立即進(jìn)行土壤微生物數(shù)量測(cè)定；另一部分樣品自然風(fēng)干后用于土壤養(yǎng)分的測(cè)定。土壤pH值采用pH計(jì)測(cè)定，土壤有機(jī)碳、全氮、全磷、速效磷、全鉀、速效鉀含量的測(cè)定分別用重鉻酸鉀氧化-外加熱法、用半微量凱式法、氫氧化鈉堿熔-鉬銻抗比色法、雙酸浸提法、氫氧化鈉堿熔-火焰光度法、用乙酸銨浸提-火焰光度法［25］。土壤微生物數(shù)量的測(cè)定參照許光輝等的方法進(jìn)行［26］，通過(guò)稀釋平板計(jì)數(shù)法進(jìn)行細(xì)菌、放線菌、真菌數(shù)量的測(cè)定，采用的培養(yǎng)基分別為牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基、改良高氏1號(hào)（苯酚 500 mg/L）培養(yǎng)基、馬?。∕artin）孟加拉紅-鏈霉素（鏈霉素30 mg/L）培養(yǎng)基。

1.4 數(shù)據(jù)處理

采用SPSS 22.0軟件統(tǒng)計(jì)分析，使用ANOVA單因素方差分析、Duncans檢驗(yàn)和最小顯著性差異（LSD）法對(duì)同一品種烤煙不同處理間的植物和土壤化學(xué)性質(zhì)進(jìn)行顯著性分析與多重比較（α=0.05）；同一處理不同烤煙品種間的差異采用配對(duì)t檢驗(yàn)進(jìn)行分析。用Origin 2018作圖；圖和表中的數(shù)據(jù)為3個(gè)重復(fù)的平均值和標(biāo)準(zhǔn)誤差；以植物的農(nóng)藝性狀、葉片營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)含量、土壤化學(xué)性質(zhì)和土壤微生物指標(biāo)通過(guò)CANOCO 5.0軟件完成PCA分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 接種固氮菌劑對(duì)烤煙農(nóng)藝性狀的影響

由圖1可知，參試的2個(gè)品種烤煙，T2、T3處理下的農(nóng)藝性狀均顯著大于CK（P<0.05）；而T2、T3處理間烤煙的農(nóng)藝性狀的差異均沒(méi)有達(dá)到顯著水平（P>0.05）。不同烤煙品種在同一施肥處理下的株高、莖粗、葉長(zhǎng)、葉寬均沒(méi)有顯著差異（P>0.05）。

2.2 接種固氮菌劑對(duì)烤煙生物量的影響

由圖2可知，同一處理下不同品種烤煙的生物量差異均不顯著（P>0.05）。2個(gè)烤煙品種的根、莖、葉生物量以及總生物量均表現(xiàn)為T2、T3>CK，差異均顯著（P<0.05）。T2處理下的根、莖生物量均顯著大于T3，而葉生物量和總生物量與T3均沒(méi)有顯著差異（P>0.05），說(shuō)明減氮配施固氮菌劑不影響烤煙產(chǎn)量（以葉為主）。

2.3 接種固氮菌劑對(duì)烤煙葉片養(yǎng)分含量的影響

由表1可知，除全碳、全鎂外，不同烤煙品種CK與處理的葉片養(yǎng)分含量均差異顯著（P<0.05）。T2、T3處理下全氮、全磷、全鉀含量均顯著大于CK，全碳含量與CK的差異沒(méi)有達(dá)到顯著水平（P>0.05）。T2處理的全氮、全鉀含量均顯著大于T3，NC102的T2處理全氮、全鉀含量比T3分別增加17.20%、24.52%，KRK26的T2處理全氮、全鉀含量比T3分別增加11.20%、7.40%。NC102的T2處理全鈣、全鎂含量與T3處理存在顯著差異。KRK26的T2處理全磷含量與T3存在顯著差異。

2.4 接種固氮菌劑對(duì)烤煙土壤化學(xué)性質(zhì)的影響

由表2可知，不同烤煙品種在不同處理下土壤的pH值均無(wú)顯著差異（P>0.05）。2種煙葉土壤T2、T3處理下全磷、全鉀、 速效磷、 堿解氮含量間沒(méi)有顯著差異，但均顯著大于CK；速效鉀含量則是CK處理最大。同一處理不同品種烤煙對(duì)土壤化學(xué)性質(zhì)的影響有差異，如NC102中土壤有機(jī)碳含量顯著大于KRK26。

2.5 接種固氮菌劑對(duì)烤煙土壤微生物的影響

由圖3可知，2種烤煙在不同處理下土壤細(xì)菌（圖3-a）、放線菌（圖3-c）數(shù)量均表現(xiàn)為T3處理最大；相反，真菌數(shù)量（圖3-b）表現(xiàn)為T3處理最小。NC102、KRK26在T3處理下細(xì)菌數(shù)量比T2分別多44.77%、22.65%；放線菌數(shù)量比T2分別多33.81%、31.77%；真菌數(shù)量比T2分別少19.28%、15.54%。

2.6 烤煙的生長(zhǎng)指標(biāo)、葉片養(yǎng)分含量、土壤化學(xué)性質(zhì)和土壤微生物之間的主成分分析

圖4為烤煙生長(zhǎng)指標(biāo)、葉片養(yǎng)分含量、土壤化學(xué)性質(zhì)和土壤微生物數(shù)量間的主成分分析（PCA）結(jié)果。第一和第二主成分的累計(jì)貢獻(xiàn)率達(dá)到總方差的74.64%，表明排序結(jié)果可信，能夠較好地反映不同烤煙品種在不同處理下農(nóng)藝性狀、葉片養(yǎng)分含量、土壤化學(xué)性質(zhì)和微生物特性之間的關(guān)系。第一排序軸（解釋了45.23%）與株高、莖粗、葉生物量、根生物量、葉長(zhǎng)、葉寬、葉片全鉀含量、葉片全氮含量、葉片全磷含量和細(xì)菌數(shù)量、速效磷含量、土壤有機(jī)碳含量、土壤全氮含量、土壤全磷含量、全鎂含量呈正相關(guān)（夾角＜90°，下同），與其他因子呈負(fù)相關(guān)。第二排序軸（解釋了29.41%）與葉片全鎂含量、葉片全鈣含量呈正相關(guān)，與其他因子呈負(fù)相關(guān)。NC102和KRK26分布在主成分兩軸的兩側(cè)，不同品種的不同處理均能各自聚為一類，說(shuō)明不同品種和不同處理對(duì)烤煙各指標(biāo)的影響顯著，但各個(gè)指標(biāo)的響應(yīng)存在顯著差異。如土壤有機(jī)碳含量、土壤全氮含量、土壤全磷含量、細(xì)菌數(shù)量均與葉片全鉀含量、株高、莖生物量、葉生物量、根生物量、葉長(zhǎng)、葉寬、葉片全氮含量、葉片全磷含量顯著正相關(guān)，與葉片全碳含量、莖粗顯著負(fù)相關(guān)；速效磷含量與葉片全鎂、全鈣含量顯著正相關(guān)；葉片全碳含量、莖粗與土壤pH值、全鉀含量、堿解氮含量、放線菌數(shù)量顯著正相關(guān)。細(xì)菌數(shù)量與土壤pH值、速效磷含量呈正相關(guān)，放線菌數(shù)量與pH值、全氮含量、堿解氮含量正相關(guān)，真菌數(shù)量與pH值、堿解氮含量、速效鉀含量正相關(guān)。

3 討論與結(jié)論

固氮菌屬于有機(jī)營(yíng)養(yǎng)型細(xì)菌，每年固定得到的氮肥達(dá)1億t以上，在解決氮素來(lái)源問(wèn)題上具有巨大的潛力。固氮菌不僅可以提高土壤固氮量，有利于植物根系激素調(diào)節(jié)，增加植物抗病抗逆能力，促進(jìn)植物更健康的生長(zhǎng)，且固氮菌與化肥配施可以使作物產(chǎn)量增加20％以上［14］。本研究減氮配施固氮菌劑對(duì)烤煙的農(nóng)藝性狀（株高、葉長(zhǎng)、葉寬等）和葉生物量的影響相較于施全量氮肥處理的差異沒(méi)有達(dá)到顯著水平（圖1、表2），說(shuō)明接種固氮菌劑可顯著減少氮肥用量且不影響作物的生長(zhǎng)和產(chǎn)量，適量固氮菌劑在一定程度上具有氮肥促進(jìn)植物生長(zhǎng)的同等效應(yīng)，可代替氮肥在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)上的使用。與此結(jié)果相似，葉文雨等認(rèn)為，從巨菌草根中分離得到固氮菌能提高大麥（Hordeum vulgare）的葉長(zhǎng)、根長(zhǎng)、根質(zhì)量等［27］；宋時(shí)麗等的研究也得出類似的結(jié)果［8-9］。這也說(shuō)明微生物菌劑在實(shí)現(xiàn)化肥零增長(zhǎng)和農(nóng)業(yè)可持續(xù)發(fā)展等方面具有良好前景。

葉片能明顯反映養(yǎng)分的供應(yīng)情況，在營(yíng)養(yǎng)診斷中葉片的營(yíng)養(yǎng)狀況是最重要的量化指標(biāo)［17］。適量的磷、鉀營(yíng)養(yǎng)還能促進(jìn)脂肪代謝和香氣物質(zhì)的合成。微生物菌劑可提高植物對(duì)氮、磷、鉀的吸收在許多作物上已有報(bào)道［9，16］。與前人的研究結(jié)果相似，本研究中減氮配施固氮菌劑處理的烤煙葉片全氮、全磷、全鉀含量均顯著大于對(duì)照，說(shuō)明減氮配施固氮菌劑有利于增加烤煙對(duì)氮、磷、鉀素的吸收，改善煙葉的品質(zhì)，同時(shí)可以提高煙葉的抗倒伏性能。此外，本研究還得出全量施氮后烤煙葉片全氮、全磷、全鉀含量高于減氮配施固氮菌劑處理。可能是因?yàn)榈貐⑴c植物蛋白合成及光合作用等生長(zhǎng)代謝及生命活動(dòng)，全量施氮處理的氮肥使用量較減氮配施固氮菌劑處理多50%，施入充足的氮素更容易被烤煙吸收和利用，因此體內(nèi)的全氮含量會(huì)增多［11］。植物葉片中的養(yǎng)分含量與土壤中養(yǎng)分含量的高低顯著相關(guān)。劉宇輝等認(rèn)為，微生物肥和化肥配施有助于增強(qiáng)土壤養(yǎng)分的供貯能力，加強(qiáng)養(yǎng)分循環(huán)，并能使得土壤有機(jī)質(zhì)保持平衡［12］。與此結(jié)果相對(duì)應(yīng)，本研究得出減氮配施固氮菌后烤煙土壤全磷、全鉀、速效磷和堿解氮含量顯著高于對(duì)照處理（表3），表明接種固氮菌和施入全量氮肥均可以增加烤煙土壤中全磷、全鉀、速效磷和堿解氮含量。這與菌劑的生理活性有密切關(guān)系，烤煙土中含有許多礦物質(zhì)成分，在土壤中添加菌劑后，通過(guò)菌株的固氮、溶磷、解鉀作用，提高土壤中烤煙可利用氮、磷、鉀元素［14］。而速效鉀含量均是減半施氮肥處理高于減氮配施固氮菌，可能是因?yàn)槭┤氲牡驶蚓鷦?huì)加速鉀細(xì)菌對(duì)難溶態(tài)和固定態(tài)鉀的分解，且植物吸收的量較大，所以土壤的留存量較少。減氮配施固氮菌后土壤全磷、全鉀、速效磷和堿解氮含量與全量施氮肥間沒(méi)有顯著差異（表5）。說(shuō)明接種的固氮菌對(duì)烤煙土壤全磷、全鉀、速效磷和堿解氮的貢獻(xiàn)效果可能與另一半氮肥相似。不同烤煙品種的全量施氮處理葉片全鈣、全鎂、全磷、全鉀與減氮配施固氮菌處理存在顯著差異。可能與巨大芽孢桿菌菌劑中的有益微生物調(diào)控植物激素水平、解磷促鉀能力，以及提高土壤磷、鉀、鈣等生物有效性及利用率相關(guān)［13，15，28］。

土壤微生物屬于土壤生態(tài)系統(tǒng)的重要組成部分，它們能夠分解土壤中的有機(jī)質(zhì)為作物吸收利用，放線菌還能分泌一些能夠抑制某些病原菌生長(zhǎng)繁殖的物質(zhì)，其活性與農(nóng)作物生長(zhǎng)發(fā)育的營(yíng)養(yǎng)供應(yīng)密切相關(guān)［29-30］。在多數(shù)情況下，固氮菌能與多種根際微生物共同作用，影響根際微生物的數(shù)量和優(yōu)勢(shì)菌群的形成，從而促進(jìn)植物的生長(zhǎng)。本研究發(fā)現(xiàn)2種烤煙在減量配施固氮菌劑處理下可以顯著提高烤煙土壤細(xì)菌和放線菌的數(shù)量，降低真菌的數(shù)量（圖3），這與Zhou等的結(jié)論［31］相一致。減量配施固氮菌劑處理在施加50%氮肥的情況下添加固氮菌劑，土壤微生物活化土壤養(yǎng)分、氮素轉(zhuǎn)化速率提高［32］，同時(shí)減量配施固氮菌劑處理下固氮菌劑的微生物與植物體競(jìng)爭(zhēng)氮素，使得固氮菌劑的固氮能力增強(qiáng)，微生物活動(dòng)增強(qiáng)［33］；施加固氮菌劑后可促進(jìn)植物根系營(yíng)養(yǎng)元素的吸收利用與分泌物的形成，土壤中氮含量的增加給有益微生物菌群（如細(xì)菌和放線菌等）提高了競(jìng)爭(zhēng)營(yíng)養(yǎng)的動(dòng)力［20］，在提高細(xì)菌、放線菌數(shù)量的同時(shí)對(duì)真菌產(chǎn)生拮抗作用，減少有害菌群（如真菌）的數(shù)量，使土壤向有益微生物菌群、“健康細(xì)菌型”方向發(fā)展［34］，這同時(shí)也與巨大芽孢桿菌調(diào)節(jié)土壤微生物多樣性的能力相關(guān)［28］；說(shuō)明減氮配施固氮菌劑對(duì)烤煙根際土壤細(xì)菌、放線菌、真菌等微生物組成結(jié)構(gòu)具有一定調(diào)節(jié)的作用，這與李鳳霞等的研究結(jié)果［10］一致。賈雨雷等認(rèn)為，適宜比例肥料配合微生物菌劑的使用可以改善土壤微生物組成結(jié)構(gòu)比例及區(qū)系環(huán)境，分解土壤養(yǎng)分供植物吸收，提高養(yǎng)分有效性，肥料與微生物菌劑相互影響，在促進(jìn)作物生長(zhǎng)方面形成協(xié)同效應(yīng)［15］。該結(jié)果進(jìn)一步說(shuō)明固氮菌具有抗病抗逆能力，在固氮的同時(shí)能為植物提供更安全的生長(zhǎng)環(huán)境。另外，接種固氮菌劑對(duì)土壤細(xì)菌和放線菌的增加效果顯著優(yōu)于施全量氮素。原因之一可能是固氮菌劑的進(jìn)入可以促進(jìn)烤煙根際分泌物的增加，從而促進(jìn)根際細(xì)菌和放線菌數(shù)量的增加，還可能是因?yàn)楣痰氖┤胩岣吡送寥兰?xì)菌和放線菌生境的養(yǎng)分含量以及增加養(yǎng)分來(lái)源，營(yíng)養(yǎng)的改善有利于其數(shù)量的增加。

PCA分析得出土壤pH值、速效磷、速效鉀、堿解氮等與細(xì)菌、放線菌顯著相關(guān)，說(shuō)明接種固氮菌劑后，土壤中有效養(yǎng)分的變化對(duì)土壤微生物數(shù)量產(chǎn)生了顯著的影響，此結(jié)果與Lin等的研究結(jié)果［33］類似。在本研究的不同處理間土壤pH值雖然沒(méi)有顯著差異，但也可能對(duì)某些微生物類群在土壤中的分布產(chǎn)生重要的影響［33］。微生物菌劑會(huì)在某種程度上保持和提升土壤pH值［35］。本研究種植煙葉后土壤pH值沒(méi)有顯著變化，給最適生長(zhǎng)pH值為6～8非鹽堿土的固氮菌提供了非常適宜的生長(zhǎng)環(huán)境，而土壤酸堿性影響微生物定殖，使得菌劑附著在植物根系的微生物達(dá)到較好的生長(zhǎng)狀態(tài)［36］。另外，速磷、堿解氮等速效養(yǎng)分的提升可為細(xì)菌、放線菌群落提供充足的養(yǎng)分。適宜的生長(zhǎng)環(huán)境加上充足的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)會(huì)加快微生物的繁殖速度，使土壤微生物數(shù)量提高。因此，烤煙土壤中三大微生物數(shù)量的變化可能也會(huì)加速土壤養(yǎng)分循環(huán)，增強(qiáng)烤煙的養(yǎng)分吸收，從而促進(jìn)烤煙生長(zhǎng)。

PCA分析還得出烤煙的農(nóng)藝性狀、葉片養(yǎng)分含量、土壤化學(xué)性質(zhì)和土壤微生物間具有顯著相關(guān)關(guān)系（圖4），說(shuō)明固氮菌劑和氮肥處理下對(duì)烤煙生長(zhǎng)的促進(jìn)效果是受到多個(gè)因素的綜合影響。另外，不同烤煙品種之間在接菌處理下對(duì)土壤微生物數(shù)量（細(xì)菌、真菌、放線菌）、農(nóng)藝性狀特別是葉生物量和總生物量的影響沒(méi)有顯著差異，這在一定程度上說(shuō)明減半施氮配接種固氮菌劑適用于不同的烤煙品種。在今后的研究中可以將減氮配施固氮菌這一措施應(yīng)用于其他品種的烤煙，以更一步佐證本研究的結(jié)論。至于在同一接種處理下不同種烤煙的葉片營(yíng)養(yǎng)元素含量、土壤化學(xué)性質(zhì)有異，可能與不同品種烤煙需要的營(yíng)養(yǎng)元素含量不同有關(guān)［37］。因此，在使用氮肥與固氮菌劑調(diào)節(jié)植物生長(zhǎng)時(shí)，需要考慮土壤碳、氮、磷、鉀等元素含量和其他環(huán)境限制因素，土壤性質(zhì)對(duì)固氮菌劑附著在植物根際的微生物菌群的活性影響及其與土壤微生物的協(xié)同拮抗效應(yīng)，模型擬合預(yù)測(cè)氮肥與固氮菌劑的最佳比例及體系效應(yīng)，篩選高效、復(fù)合固氮菌達(dá)適地、適植、適菌、適量的良好綜合效果，進(jìn)而推動(dòng)高效固氮菌應(yīng)用、作物增產(chǎn)及可持續(xù)發(fā)展。

綜上所述，減半施氮同時(shí)接種固氮菌沒(méi)有影響烤煙的農(nóng)藝性狀、生物量和植物葉片營(yíng)養(yǎng)積累量，但表現(xiàn)出能夠提高土壤中細(xì)菌和放線菌數(shù)量的作用，在烤煙種植上接種固氮菌劑，主要表現(xiàn)為改善土壤微環(huán)境。

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收稿日期：2023-01-09

基金項(xiàng)目：廣西重點(diǎn)研發(fā)計(jì)劃（編號(hào)：AB18126065）；廣西科學(xué)院創(chuàng)新團(tuán)隊(duì)項(xiàng)目（編號(hào)：CQZ-E-1909）；廣西自然科學(xué)基金（編號(hào)：2020GXNSFBA297048）。

作者簡(jiǎn)介：滕秋梅（1991—），女，廣西靈山人，碩士，助理研究員，主要從事喀斯特退化土壤修復(fù)和根際生態(tài)研究。E-mail：tqm1907@163com。

通信作者：張中峰，博士，研究員，主要從事退化土壤修復(fù)研究。E-mail：zfzhang@gxib.cn。