葉志明，劉冰，張陸勇（.廣東藥科大學(xué)新藥研發(fā)中心，廣東廣州 50006；. 廣東藥科大學(xué)藥學(xué)院，廣東廣州 50006）

潰瘍性結(jié)腸炎（Ulcerative colitis，UC）是一種復(fù)雜的胃腸道慢性炎癥性疾病[1-2]，其特征是結(jié)腸持續(xù)發(fā)生炎癥，伴有紅斑、糜爛、顆粒狀、出血、易碎性和潰瘍等癥狀[3]。UC的典型組織病理學(xué)改變包括隱窩密度降低及結(jié)構(gòu)扭曲、黏膜表面不規(guī)則、嚴(yán)重的彌漫性跨黏膜炎癥和腸上皮屏障功能受損。研究[2]表明，包括炎癥反應(yīng)在內(nèi)的多種因素可誘發(fā)UC。目前用于治療UC的藥物主要有水楊酸制劑、激素、免疫抑制劑、生物學(xué)制劑等[3-4]，長期使用容易引起不良反應(yīng)[5]。因此，尋找新的有效藥物對治療UC 具有重要意義。常春藤皂苷元（Hederagenin，Hed）分子式為C30H48O4，是主要來源于五加科常春藤屬植物中華常春藤提取物的一種五環(huán)三萜類化合物，廣泛分布于續(xù)斷、威靈仙、白頭翁、金銀花等多種中藥[6]。常春藤皂苷元具有抗癌、抗炎、抗抑郁、抗菌、抗病毒、抗糖尿病等多種藥理作用。研究顯示，常春藤皂苷元具有很強(qiáng)的抗炎藥理活性，可治療多種炎癥相關(guān)疾病[7-9]，如常春藤皂苷元能通過抑制促炎因子分泌來減輕乙醇引起的肝損傷[10]；在小鼠腦缺血再灌注模型中，常春藤皂苷元可抑制炎癥因子白細(xì)胞介素6（IL-6）的表達(dá)，改善腦組織損傷[11]。然而，尚未見常春藤皂苷元對UC作用的研究報(bào)道。因此，本實(shí)驗(yàn)擬通過體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)觀察常春藤皂苷元對葡聚糖硫酸鈉（Dextran sodium sulfate，DSS）誘導(dǎo)小鼠UC 的作用，并探討相關(guān)機(jī)制，以期為UC的防治研究提供一定的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 細(xì)胞RAW264.7 小鼠單核巨噬細(xì)胞白血病細(xì)胞，購自賽百慷（上海）生物技術(shù)股份有限公司。使用DMEM 培養(yǎng)基（含有10%胎牛血清、100 U·mL-1青霉素、100 μg·mL-1鏈霉素）在37 ℃、5% CO2加濕培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

1.2 動物SPF 級雄性C57BL/6 小鼠30 只，6～8 周齡，體質(zhì)量（22±2）g，由廣東省醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動物中心提供，實(shí)驗(yàn)動物生產(chǎn)許可證號：SCXK（粵）2018-0002，動物質(zhì)量合格證號：44007200103458。小鼠飼養(yǎng)在廣東藥科大學(xué)SPF 級實(shí)驗(yàn)動物中心，12 h 晝夜交替，溫度為22～26 ℃，濕度為50%～70%，實(shí)驗(yàn)動物使用許可證號：SYXK（粵）2017-0125。動物實(shí)驗(yàn)經(jīng)廣東藥科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動物管理與使用委員會批準(zhǔn)，動物倫理批文號：gdpulacspf2022102。

1.3 藥物及試劑常春藤皂苷元（HPLC≥98%，CAS號：465-99-6），南京春秋生物工程有限公司；DSS（分子量為36 000～50 000，批號：0216011080），美國MP 公司；柳氮磺吡啶（批號：H31020557），上海信誼天平藥業(yè)有限公司；Gibco DMEM 培養(yǎng)基（批號：8120373）、南美胎牛血清（批號：2243863），美國Gibco公司；脂多糖（LPS，批號：L2880）、噻唑藍(lán)四唑溴化銨（MTT），美國Sigma 公司；人尿糞隱血測試盒（批號：C027-1-1），南京建成生物工程研究所；TLR4 抗體（批號： 19811-1-AP），武漢三鷹生物技術(shù)公司；核轉(zhuǎn)錄因子κB（NF-κB）抗體（批號：ab32536），英國Abcam 公司；p-NF-κB 抗體（批號：3033S），美國CST 公司；β-actin 抗體（批號：GTX109639）、 山羊抗兔 IgG 二抗（ 批號：GTX213110-01），美國Gene Tex 公司；BCA蛋白定量試劑盒（批號：SK258367），美國Thermo Fisher 科技公司；HE染液（批號：BL700B），北京蘭杰柯科技有限公司；IL-1β ELISA 檢測試劑盒（批號：EK201B）、IL-6 ELISA 檢測試劑盒（批號：EK206）、腫瘤壞死因子α（TNF-α）ELISA 檢測試劑盒（批號：EK282），杭州聯(lián)科生物技術(shù)股份有限公司。

1.4 主要儀器1510 型全波長酶標(biāo)儀、EVOS M5000型智能細(xì)胞成像系統(tǒng)，美國Thermo Fisher 科技公司；Microfugu20R型高速冷凍離心機(jī)、Allegra X-12R大型離心機(jī)，美國Beckman Coulter 公司；HF151UV型CO2培養(yǎng)箱，香港力康生物醫(yī)療科技控股有限公司；伯樂小型垂直電泳轉(zhuǎn)印系統(tǒng)，美國Bio-Rad 公司；3300 Mini 型化學(xué)發(fā)光成像系統(tǒng)，上海勤翔科學(xué)儀器有限公司。

1.5 體外實(shí)驗(yàn)

1.5.1細(xì)胞培養(yǎng)、分組及干預(yù) RAW264.7 細(xì)胞用含10%胎牛血清的DMEM 培養(yǎng)基在37 ℃、5% CO2標(biāo)準(zhǔn)加濕培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。常春藤皂苷元溶于DMSO中，配制成濃度為50 mmol·L-1的母液，臨用前用DMEM 培養(yǎng)基配制成相應(yīng)濃度。細(xì)胞分組：空白組、LPS 組（1 μg·mL-1）、LPS+2.5 μmol·L-1常春藤皂苷元組、LPS+5 μmol·L-1常春藤皂苷元組和LPS+10 μmol·L-1常春藤皂苷元組；采用LPS（1 μg·mL-1）干預(yù)24 h 建立體外細(xì)胞炎癥模型，并用常春藤皂苷元（2.5、5、10 μmol·L-1）共孵育24 h進(jìn)行干預(yù)。

1.5.2MTT 法檢測細(xì)胞存活率 將RAW264.7 細(xì)胞消化并計(jì)數(shù)，以每孔5×103個(gè)細(xì)胞接種于96孔板中，細(xì)胞貼壁后，用不同濃度藥物（0、2.5、5、10、20、40 μmol·L-1常春藤皂苷元）處理細(xì)胞24 h。藥物干預(yù)結(jié)束后，每孔中加入180 μL 無血清培養(yǎng)基和20 μL MTT 溶液（5 mg·mL-1），在37 ℃下避光孵育4 h。吸棄上清液，每孔加入150 μL DMSO，使用酶標(biāo)儀在570 nm波長下測量吸光度（A）值。計(jì)算：細(xì)胞存活率（%）=（A實(shí)驗(yàn)組-A空白組）/（A對照組-A空白組）×100%。

1.5.3ELISA 法測定細(xì)胞上清液中IL-1β、IL-6、TNF-α 水平 RAW264.7 細(xì)胞分組及干預(yù)同“1.5.1”項(xiàng)下。細(xì)胞培養(yǎng)24 h 后收集上清液，嚴(yán)格按照ELISA試劑盒說明書步驟操作，測定炎癥因子IL-1β、IL-6、TNF-α水平。

1.5.4Western Blot 法檢測細(xì)胞中TLR4/NF-κB 通路相關(guān)蛋白的表達(dá)水平 將RAW264.7 細(xì)胞接種于6 孔板中，細(xì)胞分組及干預(yù)同“1.5.1”項(xiàng)下。培養(yǎng)24 h 后收集各組細(xì)胞，冰上加入RIPA 細(xì)胞裂解液30 min后，以4 ℃、12 000 r · min-1（離心半徑=8 cm）離心30 min，收集上清液；采用BCA 法測定蛋白濃度。制膠（10%分離膠、4%濃縮膠），上樣后以SDSPAGE 電泳法分離蛋白樣品（80 V、20 min 跑上層膠，120 V、60 min 跑下層膠）；電泳結(jié)束后進(jìn)行蛋白轉(zhuǎn)膜（300 mA、60 min）；用5%脫脂奶粉封閉1 h后，TBST 洗膜3 次，每次10 min；4 ℃下孵育一抗［TLR4（1∶1 000）、NF-κB（1∶1 000）、p-NF-κB（1∶1 000）、β-actin（1∶1 000）］過夜；TBST 洗膜3 次，每次10 min，室溫下孵育二抗1 h；滴加ECL 化學(xué)發(fā)光液顯色，在凝膠成像系統(tǒng)中曝光，拍照；采用ImageJ 圖像分析軟件測定各蛋白條帶灰度值，以β-actin為內(nèi)參，對目的蛋白進(jìn)行半定量分析。

1.6 體內(nèi)實(shí)驗(yàn)

1.6.1分組、模型復(fù)制、給藥及樣本采集 C57BL/6小鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)7 d 后，隨機(jī)分成6 組：空白組、模型組、柳氮磺吡啶組（200 mg·kg-1）及常春藤皂苷元低、中、高劑量組（12.5、25、50 mg·kg-1）[8]，每組5 只。小鼠自由飲用3% DSS 溶液7 d，誘導(dǎo)建立UC模型[12]。造模同時(shí)按照上述劑量以20 mL·kg-1體積單次灌胃給藥，空白組及模型組給予等量生理鹽水灌胃，每日1 次，連續(xù)7 d。第8 天，經(jīng)苯巴比妥鈉麻醉后處死小鼠，解剖分離結(jié)腸組織；測量結(jié)腸從直腸近端至回盲部的長度；剪取遠(yuǎn)端結(jié)腸組織，分為2 份，1 份立即用4%多聚甲醛溶液固定，另1 份于-80 ℃下保存。

1.6.2疾病活動指數(shù)（DAI）評價(jià) 實(shí)驗(yàn)過程每日記錄小鼠體質(zhì)量、大便性狀及便血情況，并參照相關(guān)研究[13]進(jìn)行DAI 評分，以評估UC 嚴(yán)重程度，DAI 評分標(biāo)準(zhǔn)見表1。計(jì)算：DAI=體質(zhì)量下降評分+大便性狀評分+大便隱血情況評分。小鼠出現(xiàn)體質(zhì)量明顯下降，DAI顯著升高，小鼠糞便松散或稀便并出現(xiàn)隱血或肉眼血便，則表示UC模型復(fù)制成功。

1.6.3小鼠結(jié)腸組織病理學(xué)觀察 取4%多聚甲醛溶液固定后的結(jié)腸組織，經(jīng)過脫水、石蠟包埋、組織切片后，進(jìn)行常規(guī)HE染色；在顯微鏡下觀察結(jié)腸組織病理情況并拍照。根據(jù)相關(guān)研究[14]進(jìn)行病理學(xué)評分，評分標(biāo)準(zhǔn)如下： 0分：無炎癥跡象；1分：低白細(xì)胞浸潤；2 分：中度白細(xì)胞浸潤；3 分：高白細(xì)胞浸潤，中度纖維化，高血管密度，結(jié)腸壁增厚，中度杯狀細(xì)胞丟失，局灶性隱窩丟失；4分：白細(xì)胞透壁浸潤，杯狀細(xì)胞大量丟失，廣泛纖維化，彌漫性隱窩丟失。

1.6.4ELISA法測定結(jié)腸組織中IL-1β、IL-6、TNF-α水平[15]取小鼠結(jié)腸組織適量，加入生理鹽水進(jìn)行勻漿（60 Hz，120 s）后，以4 ℃、12 000 r·min-1（離心半徑=8 cm）離心30 min，收集勻漿上清液；采用BCA蛋白檢測試劑盒測定蛋白濃度；嚴(yán)格按照ELISA試劑盒說明書步驟操作，測定炎癥因子IL-1β、IL-6、TNF-α水平。

1.6.5Western Blot 法檢測結(jié)腸組織中TLR4/NF-κB 通路相關(guān)蛋白的表達(dá)水平 取小鼠結(jié)腸組織適量，加入生理鹽水進(jìn)行勻漿（60 Hz，120 s）后，以4 ℃、12 000 r·min-1（離心半徑=8 cm）離心30 min，收集勻漿上清液；采用BCA 法測定蛋白濃度。按照“1.5.4”項(xiàng)下方法檢測小鼠結(jié)腸組織中TLR4、p-NFκB 、NF-κB蛋白表達(dá)水平。

1.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理方法采用GraphPad Prism 8.0.2統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析；計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示；多組間比較采用單因素方差分析（One-way ANOVA），兩兩比較采用LSD 檢驗(yàn)；以P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 常春藤皂苷元對RAW264.7 細(xì)胞存活率的影響結(jié)果見圖1。與空白組（0 μmol·L-1組）比較，2.5～10 μmol·L-1常春藤皂苷元對RAW264.7 細(xì)胞無明顯毒性作用，細(xì)胞存活率無明顯變化（P＞0.05），故選擇該濃度范圍作為后續(xù)實(shí)驗(yàn)中常春藤皂苷元的干預(yù)濃度。

圖1 常春藤皂苷元對RAW264.7 細(xì)胞存活率的影響（±s，n=3）Figure 1 Effect of hederagenin on cell viability of RAW264.7 cells（±s，n=3）

2.2 常春藤皂苷元對LPS 刺激的RAW264.7 細(xì)胞炎癥因子表達(dá)水平的影響結(jié)果見表2。與空白組比較，LPS 組RAW264.7 細(xì)胞的IL-1β、IL-6、TNF-α表達(dá)水平顯著升高（P＜0.01）。與LPS 組比較，常春藤皂苷元2.5、5、10 μmol·L-1濃度組RAW264.7細(xì)胞的IL-1β、TNF-α 表達(dá)水平明顯降低（P＜0.05，P＜0.01），常春藤皂苷元5、10 μmol·L-1濃度組RAW264.7 細(xì)胞的IL-6 表達(dá)水平明顯降低（P＜0.05，P＜0.01）。結(jié)果表明，常春藤皂苷元能夠抑制LPS刺激RAW264.7細(xì)胞的炎癥因子分泌。

2.3 常春藤皂苷元對LPS 刺激的RAW264.7 細(xì)胞TLR4/NF-κB 通路的影響結(jié)果見圖2。與空白組比較，LPS組RAW264.7細(xì)胞的TLR4、p-NF-κB/NF-κB蛋白表達(dá)水平顯著升高（P＜0.01）。與LPS 組比較，常春藤皂苷元2.5、5、10 μmol·L-1濃度組RAW264.7細(xì)胞的TLR4、p-NF-κB/NF-κB蛋白表達(dá)水平明顯降低（P＜0.05，P＜0.01）。結(jié)果表明，常春藤皂苷元能夠抑制LPS 刺激的RAW264.7 細(xì)胞TLR4/NF-κB 信號通路的激活。

圖2 常春藤皂苷元對脂多糖（LPS）刺激的RAW264.7 細(xì)胞TLR4、p-NF-κB、NF-κB 蛋白表達(dá)水平的影響（±s，n=3）Figure 2 Effects of hederagenin on protein expression levels of TLR4，p-NF-κB and NF-κB in RAW264.7 cells stimulated with LPS（±s，n=3）

表2 常春藤皂苷元對脂多糖（LPS）刺激的RAW264.7 細(xì)胞IL-1β、IL-6、TNF-α 表達(dá)水平的影響（±s，n=3）Table 2 Effects of hederagenin on the expression levels of IL-1β，IL-6 and TNF-α in RAW264.7 cells stimulated by LPS（±s，n=3）

表2 常春藤皂苷元對脂多糖（LPS）刺激的RAW264.7 細(xì)胞IL-1β、IL-6、TNF-α 表達(dá)水平的影響（±s，n=3）Table 2 Effects of hederagenin on the expression levels of IL-1β，IL-6 and TNF-α in RAW264.7 cells stimulated by LPS（±s，n=3）

注：與空白組比較，##P＜0.01；與LPS組比較，*P＜0.05，**P＜0.01

TNF-α/（pg·mL-1）122.3±29.87 1 253±145.9##1 032±62.52*882.5±122.0*611.5±65.48**組別空白組LPS組LPS+2.5 μmol·L-1常春藤皂苷元組LPS+5 μmol·L-1常春藤皂苷元組LPS+10 μmol·L-1常春藤皂苷元組IL-1β/（pg·mL-1）151.1±19.50 1 513±189.9##1 231±143.1*837.6±59.33**635.4±95.89**IL-6/（pg·mL-1）198.7±19.91 1 627±190.6##1 370±80.96 1 071±168.1*783.2±87.32**

2.4 常春藤皂苷元對UC 小鼠體質(zhì)量、DAI、結(jié)腸長度的影響結(jié)果見圖3。與空白組比較，模型組小鼠的體質(zhì)量持續(xù)降低（P＜0.01），DAI 評分顯著升高（P＜0.01），結(jié)腸長度顯著縮短（P＜0.01）。與模型組比較，常春藤皂苷元低、中、高劑量組小鼠的體質(zhì)量明顯增加（P＜0.05，P＜0.01），DAI 評分明顯降低（P＜0.05，P＜0.01）；常春藤皂苷元中、高劑量組小鼠的結(jié)腸長度明顯增加（P＜0.05，P＜0.01）。結(jié)果表明，常春藤皂苷元對DSS 誘導(dǎo)的UC 小鼠具有治療作用。

圖3 常春藤皂苷元對潰瘍性結(jié)腸炎小鼠體質(zhì)量、疾病活動指數(shù)（DAI）、結(jié)腸長度的影響（±s，n=5）Figure 3 Effects of hederagenin on the body mass and disease activity index（DAI） score and colonic length in ulcerative colitis mice（±s，n=5）

2.5 常春藤皂苷元對UC 小鼠結(jié)腸組織病理變化影響結(jié)果見圖4?？瞻捉M小鼠的結(jié)腸組織紋理清晰，形態(tài)完整，無充血，黏膜腸上皮細(xì)胞排列整齊。與空白組比較，模型組小鼠的結(jié)腸組織出現(xiàn)明顯的上皮細(xì)胞損傷，包括隱窩結(jié)構(gòu)彌漫性損傷、杯狀細(xì)胞丟失和大量中性粒細(xì)胞浸潤至固有層，結(jié)腸組織病理學(xué)評分顯著升高（P＜0.01）；與模型組比較，常春藤皂苷元低、中、高劑量組小鼠結(jié)腸組織病理損傷有不同程度的改善，尤其高劑量組小鼠結(jié)腸組織具有相對完整的隱窩結(jié)構(gòu)，上皮變形較少，炎癥細(xì)胞浸潤明顯減少，中、高劑量組的結(jié)腸組織病理學(xué)評分明顯降低（P＜0.05，P＜0.01）。結(jié)果表明，常春藤皂苷元能夠有效改善DSS 誘導(dǎo)的UC 小鼠結(jié)腸組織病理損傷。

圖4 常春藤皂苷元對潰瘍性結(jié)腸炎小鼠結(jié)腸組織病理變化的影響（HE 染色，×100；±s，n=5）Figure 4 Effect of hederagenin on pathological changes of colonic tissue in ulcerative colitis mice（HE staining，×100；±s，n=5）

2.6 常春藤皂苷元對UC 小鼠結(jié)腸組織中炎癥因子水平的影響結(jié)果見表3。與空白組比較，模型組小鼠結(jié)腸組織中的促炎細(xì)胞因子IL-1β、IL-6、TNF-α表達(dá)水平顯著升高（P＜0.01）。與模型組比較，常春藤皂苷元中、高劑量組小鼠結(jié)腸組織中IL-1β、IL-6、TNF-α 表達(dá)水平顯著降低（P＜0.05，P＜0.01）。結(jié)果表明，常春藤皂苷元能夠抑制DSS 誘導(dǎo)UC小鼠結(jié)腸組織中的炎癥因子表達(dá)。

表3 常春藤皂苷元對潰瘍性結(jié)腸炎小鼠結(jié)腸組織中IL-1β、IL-6、TNF-α 水平的影響（±s，n=5）Table 3 Effects of hederagenin on IL-1β，IL-6 and TNF-α levels in colonic tissue of ulcerative colitis mice（±s，n=5）

表3 常春藤皂苷元對潰瘍性結(jié)腸炎小鼠結(jié)腸組織中IL-1β、IL-6、TNF-α 水平的影響（±s，n=5）Table 3 Effects of hederagenin on IL-1β，IL-6 and TNF-α levels in colonic tissue of ulcerative colitis mice（±s，n=5）

注：與空白組比較，##P＜0.01；與模型組比較，*P＜0.05，**P＜0.01

TNF-α/（pg·mg-1）35.57±11.11 198.50±8.53##72.25±7.74**167.50±20.42 136.40±13.67**108.70±11.76**組別空白組模型組柳氮磺吡啶組常春藤皂苷元低劑量組常春藤皂苷元中劑量組常春藤皂苷元高劑量組劑量/（mg·kg-1）--200 12.5 25 50 IL-1β/（pg·mg-1）26.71±5.34 220.20±31.06##87.17±12.30**184.50±19.67*166.20±20.14*123.70±22.75**IL-6/（pg·mg-1）30.48±8.05 167.00±25.86##83.13±13.11**143.50±23.93 109.80±17.48*94.44±17.41**

2.7 常春藤皂苷元對UC 小鼠結(jié)腸組織TLR4/NF-κB通路的影響結(jié)果見圖5。與空白組比較，模型組小鼠結(jié)腸組織中TLR4、p-NF-κB/NF-κB蛋白表達(dá)水平顯著升高（P＜0.01）；與模型組比較，常春藤皂苷元低、中、高劑量組小鼠結(jié)腸組織中TLR4、p-NF-κB/NF-κB 蛋白表達(dá)水平明顯降低（P＜0.05，P＜0.01）。結(jié)果表明，常春藤皂苷元能夠抑制DSS 誘導(dǎo)UC 小鼠結(jié)腸組織TLR4/NF-κB通路的激活。

圖5 常春藤皂苷元對潰瘍性結(jié)腸炎小鼠結(jié)腸組織中TLR4、p-NF-κB、NF-κB 蛋白表達(dá)水平的影響（±s，n=5）Figure 5 Effects of hederagenin on protein expression levels of TLR4，p-NF-κB and NF-κB in colonic tissue of ulcerative colitis mice（±s，n=5）

3 討論

潰瘍性結(jié)腸炎（UC）是人類炎癥性腸病的主要形式之一，具有較高的發(fā)病率，嚴(yán)重影響人類健康和造成巨大的社會經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)。研究[1-2]表明，遺傳因素、環(huán)境因素、微生物因素和腸道免疫系統(tǒng)中的分子相互作用能夠促進(jìn)UC的發(fā)生發(fā)展。目前臨床上UC的治療藥物主要包括糖皮質(zhì)激素類、免疫抑制劑等，存在較多副作用，因此迫切需要發(fā)掘更高效、安全的治療藥物。

本研究結(jié)果顯示，常春藤皂苷元干預(yù)DSS誘導(dǎo)的UC 小鼠后，可顯著緩解其體質(zhì)量降低、水樣腹瀉、便血及結(jié)腸長度縮短等癥狀，明顯降低DAI評分；有效改善UC小鼠結(jié)腸組織病理損傷；抑制小鼠結(jié)腸組織中的炎癥因子IL-1β、IL-6、TNF-α表達(dá)。結(jié)果表明，常春藤皂苷元能夠通過抗炎活性對DSS 誘導(dǎo)的UC小鼠發(fā)揮防治作用。

TLR4/NF-κB 通路與炎癥細(xì)胞因子的產(chǎn)生密切相關(guān)。Toll 樣受體（Toll-like receptors，TLRs）是先天免疫系統(tǒng)中一個(gè)保守的模式識別受體家族，通過識別不同的危險(xiǎn)相關(guān)分子模式、病原相關(guān)分子模式和外源性配體，以介導(dǎo)相關(guān)的免疫反應(yīng)[16]。TLR4 是第一個(gè)被發(fā)現(xiàn)的TLRs 成員，它通過識別和結(jié)合多種內(nèi)源性和外源性配體，并轉(zhuǎn)導(dǎo)這些信號，調(diào)節(jié)炎癥介質(zhì)和細(xì)胞因子的表達(dá)，在免疫防御和免疫調(diào)節(jié)中發(fā)揮重要作用[17-19]。NF-κB 是TLR4 信號通路的下游效應(yīng)器，是一種普遍存在的重要核轉(zhuǎn)錄因子，介導(dǎo)多種炎癥的發(fā)生發(fā)展[20-22]。TLR4 與內(nèi)源性或外源性配體結(jié)合后，NF-κB 抑制因子激酶被NF-κB 誘導(dǎo)激酶磷酸化，活化的NF-κB 可刺激IL-1β、IL-6 和TNF-α等炎癥因子大量分泌[23]。本研究結(jié)果表明，DSS誘導(dǎo)能夠激活TLR4/NF-κB 信號通路，上調(diào)UC 小鼠結(jié)腸組織中TLR4蛋白表達(dá)和NF-κB蛋白磷酸化水平，而常春藤皂苷元能夠抑制結(jié)腸組織中TLR4蛋白表達(dá)及NF-κB 蛋白磷酸化水平，并降低IL-1β、IL-6 和TNF-α 等炎癥因子的分泌水平。此外，通過體外實(shí)驗(yàn)也表明，常春藤皂苷元能夠抑制LPS 誘導(dǎo)的RAW267.4 細(xì)胞TLR4/NF-κB 信號通路激活。研究結(jié)果表明，通過抑制TLR4/NF-κB通路來減輕炎癥反應(yīng)可能是常春藤皂苷元發(fā)揮抗UC的重要機(jī)制。

綜上所述，常春藤皂苷元對DSS 誘導(dǎo)的UC 小鼠具有防治作用，能夠有效改善其結(jié)腸組織病理損傷，抑制炎癥因子IL-1β、IL-6、TNF-α分泌，其作用機(jī)制可能與抑制TLR4/NF-κB通路有關(guān)。