張?jiān)啵瑥垍R源，關(guān)建華，陳云龍（天津中醫(yī)藥大學(xué)，天津 301617）

特應(yīng)性皮炎（Atopic dermatitis，AD）原稱(chēng)為“異位性皮炎”“遺傳過(guò)敏性皮炎”，是皮膚科臨床常見(jiàn)的與遺傳過(guò)敏素質(zhì)有關(guān)的慢性炎癥性皮膚病，表現(xiàn)為皮膚干燥、瘙癢、多形性皮損并有滲出傾向，常伴發(fā)哮喘、過(guò)敏性鼻炎[1]。其中劇烈的瘙癢對(duì)患者身心健康造成嚴(yán)重危害，不僅會(huì)引起“瘙癢-搔抓”循環(huán)，加重皮損部位的皮膚屏障功能異常，促使AD癥狀進(jìn)一步加劇，還會(huì)嚴(yán)重影響睡眠，甚至導(dǎo)致患者自卑以及抑郁等精神問(wèn)題的發(fā)生，嚴(yán)重影響其生活質(zhì)量[2]。因此，緩解AD的瘙癢癥狀是治療AD的重要環(huán)節(jié)。

AD 瘙癢機(jī)制復(fù)雜，其中組胺受體以及胸腺基質(zhì)淋巴細(xì)胞生成素（Thymic stromal lymphopoietin，TSLP）、白細(xì)胞介素（IL）13、IL-31 等細(xì)胞因子在瘙癢的形成中發(fā)揮了重要作用[3]。經(jīng)典的瘙癢途徑是由特異性IgE 抗體介導(dǎo)的I 型超敏反應(yīng)，肥大細(xì)胞活化脫顆粒，釋放組胺，與組胺受體結(jié)合后引發(fā)瘙癢神經(jīng)信號(hào)傳導(dǎo)，從而導(dǎo)致瘙癢的產(chǎn)生[4]。因此，組胺受體拮抗劑如H1、H4受體拮抗劑已被廣泛應(yīng)用于銀屑病和AD等伴有瘙癢癥狀的皮膚炎癥治療中[5-8]。TSLP在AD 的發(fā)病中同樣具有重要作用，不僅可促進(jìn)Th2細(xì)胞分化以及引發(fā)瘙癢，還與AD的持續(xù)時(shí)間、嚴(yán)重程度和表皮屏障功能息息相關(guān)[9]。IL-13、IL-31是典型的Th2 相關(guān)細(xì)胞因子，被認(rèn)為是AD 發(fā)病機(jī)制與治療的關(guān)鍵靶點(diǎn)。IL-13、IL-31在AD患者皮膚組織中的表達(dá)顯著上調(diào)，IL-13可激活神經(jīng)元上的IL-31R后傳導(dǎo)瘙癢，誘發(fā)抓撓行為，而阻斷IL-31可顯著緩解AD患者的瘙癢癥狀[10-11]。

黃連解毒湯由黃連、黃芩、黃柏、梔子4味中藥組成，是清熱解毒的經(jīng)典方劑，具有抗菌、消炎、抗腫瘤、調(diào)節(jié)免疫等多種藥理作用[13]。臨床上黃連解毒湯常用于AD、接觸性皮炎等皮膚病的治療，療效確切[14-16]。但黃連解毒湯是否能有效改善AD 導(dǎo)致的瘙癢癥狀仍缺乏直接證據(jù)。故本研究擬通過(guò)構(gòu)建AD小鼠模型，探討黃連解毒湯改善AD小鼠瘙癢癥狀的作用及機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 動(dòng)物36 只6～8 周齡雌性Balb/c 小鼠，SPF 級(jí)，體質(zhì)量（15±2）g，購(gòu)自斯貝福（北京）生物技術(shù)有限公司，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào)：SCXK（京）2019-0010。動(dòng)物飼養(yǎng)于天津中醫(yī)藥大學(xué)動(dòng)物中心SPF 環(huán)境，室內(nèi)溫度25 ℃，絕對(duì)濕度為73%，保持12 h 晝夜交替。本實(shí)驗(yàn)經(jīng)天津中醫(yī)藥大學(xué)動(dòng)物中心倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，動(dòng)物倫理審批號(hào)：TCM-LAEC2022098

1.2 藥物及試劑黃連解毒湯顆粒（黃連9 g、黃芩6 g、黃柏6 g、炒梔子9 g），購(gòu)自天津中醫(yī)藥大學(xué)附屬保康醫(yī)院，批號(hào)：22032100171；每0.09 g 顆粒約相當(dāng)于1 g生藥。地塞米松（Dexamethasone，DXMS），購(gòu)自美國(guó)Sigma 公司，批號(hào)：C11951421；1-氯-2，4-二硝基苯（DNCB），購(gòu)自梯希愛(ài)（上海）化成工業(yè)發(fā)展有限公司，批號(hào)：WT6CA-RR；丙酮，購(gòu)自天津市風(fēng)帆化學(xué)試劑科技有限公司；橄欖油，購(gòu)自上海阿拉丁生化科技股份有限公司，批號(hào)：K1809057；異氟烷，購(gòu)自深圳瑞沃德生命科技有限公司，批號(hào)：21080701；脫毛膏，購(gòu)自利潔時(shí)家化（中國(guó)）有限公司；總RNA 提取試劑盒，購(gòu)自美國(guó)Promega 公司，批號(hào)：0000532549；一步法除基因組cDNA第一鏈合成預(yù)混試劑（批號(hào)：W0208）、SuperReal 熒光定量預(yù)混試劑增強(qiáng)版（SYBR Green，批號(hào)：W0026），購(gòu)自天根生化科技（北京）有限公司；TSLP、IL-31、IL-13、組胺H4受體（HRH4）、GAPDH引物，均由生工生物工程（上海）有限公司合成。

1.3 主要儀器JB-P5 型包埋機(jī)，武漢俊杰電子有限公司；RM2016型病理切片機(jī)，上海萊卡儀器有限公司；EVOS M7000型全自動(dòng)活細(xì)胞熒光成像系統(tǒng)，賽默飛世爾科技（中國(guó)）有限公司；Scientz-48L 冷凍型高通量組織研磨器，寧波新芝生物科技股份有限公司；Bio-Rad T100型梯度PCR 儀、C1000 Touch 型熱循環(huán)儀，伯樂(lè)（上海）有限公司。

1.4 模型復(fù)制、分組及給藥將36只6～8周齡的雌性Balb/c 小鼠隨機(jī)分為正常組、模型組、地塞米松組（陽(yáng)性對(duì)照，2.5 mg·kg-1）及黃連解毒湯低、中、高劑量組（0.4、0.8、1.6 g·kg-1），每組6只。

實(shí)驗(yàn)流程見(jiàn)圖1。實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前（第0 天），使用剃毛器剃除小鼠背部毛發(fā)，將脫毛膏涂抹于小鼠背部，停留3 min，徹底除去小鼠背部毛發(fā)。然后使用DNCB 溶液［將DNCB 溶于丙酮-橄欖油（3∶1）溶液］復(fù)制AD 小鼠模型。實(shí)驗(yàn)開(kāi)始后，第1、2、3 天將200 μL 1% DNCB 溶液均勻涂抹于造模組（除正常組外的其他各組）小鼠的背部進(jìn)行致敏；從第14 天開(kāi)始，每3 d 將200 μL 1.5% DNCB 溶液涂抹于造模組小鼠背部進(jìn)行激發(fā)，共進(jìn)行5次；正常組小鼠致敏與激發(fā)均使用等體積的丙酮-橄欖油溶液涂抹。

圖1 1-氯-2，4-二硝基苯（DNCB）誘導(dǎo)特應(yīng)性皮炎小鼠的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)與藥物干預(yù)流程Figure 1 Experimental design and treatment schedule of 1-chloro-2，4-dinitrobenzene（DNCB）-induced atopic dermatitis mice

激發(fā)與藥物干預(yù)同時(shí)進(jìn)行，各組按照設(shè)定劑量對(duì)小鼠進(jìn)行灌胃給藥，每日1次，連續(xù)14 d。根據(jù)《藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)方法》[19]設(shè)定給藥劑量，黃連解毒湯顆粒低、中、高劑量（0.4、0.8、1.6 g·kg-1）分別相當(dāng)于約4.55、9.10、18.20 mg·kg-1生藥劑量。正常組、模型組小鼠灌胃生理鹽水，各組灌胃體積為10 mL·kg-1。

1.5 皮損嚴(yán)重程度評(píng)分實(shí)驗(yàn)終點(diǎn)前（第28 天），記錄所有小鼠造模部位的皮損圖片，參照特應(yīng)性皮炎評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)（Scoring atopic dermatitis，SCORAD）[20]，根據(jù)小鼠皮膚紅斑、滲出或結(jié)痂、干燥或脫屑、表皮脫落以及苔蘚化的嚴(yán)重程度進(jìn)行賦分：0 分為未出現(xiàn)，1分為輕度，2分為中度，3分為重度。

1.6 抓撓次數(shù)測(cè)定第28 天，將每只小鼠單獨(dú)放置于安靜環(huán)境中，適應(yīng)10 min 后，記錄20 min 內(nèi)每只小鼠后肢抓撓身體任意部位的次數(shù)。

1.7 HE 染色法觀察皮損組織病理形態(tài)變化實(shí)驗(yàn)終點(diǎn)處死小鼠，取小鼠背部皮損部位皮膚組織，用4%多聚甲醛溶液固定；石蠟包埋、切片；將切片經(jīng)二甲苯脫蠟、梯度乙醇脫水后，進(jìn)行常規(guī)HE染色；切片經(jīng)梯度乙醇脫水、二甲苯透明后，中性樹(shù)脂封片；采用全自動(dòng)活細(xì)胞熒光成像系統(tǒng)進(jìn)行全切片拍攝，并使用CaseViewer軟件采集分析皮損組織染色切片的炎癥浸潤(rùn)及表皮增厚情況。

1.8 甲苯胺藍(lán)染色法觀察皮損組織肥大細(xì)胞浸潤(rùn)情況取小鼠背部皮損部位皮膚組織，用4%多聚甲醛溶液固定；石蠟包埋、切片；經(jīng)二甲苯脫蠟、梯度乙醇脫水后，將切片浸入甲苯胺藍(lán)染液2～5 min；水洗，0.1%冰醋酸稍分化，自來(lái)水洗終止反應(yīng)，顯微鏡下控制分化程度；將切片置于烤箱烘干后，用二甲苯透明10 min，中性樹(shù)膠封片；在顯微鏡下用全自動(dòng)活細(xì)胞熒光成像系統(tǒng)進(jìn)行全切片拍攝，并使用CaseViewer軟件采集分析皮損組織染色切片中肥大細(xì)胞浸潤(rùn)情況。

1.9 RT-qPCR 法檢測(cè)皮損組織中TSLP、IL-13、HRH4、IL-31 mRNA 表達(dá)水平收集各組小鼠背部皮損組織，嚴(yán)格按照總RNA 提取試劑盒說(shuō)明書(shū)步驟操作，提取皮膚組織總RNA。使用反轉(zhuǎn)錄試劑盒將總RNA 反轉(zhuǎn)錄為cDNA，反轉(zhuǎn)錄條件：20 μL 反應(yīng)體系，42 ℃、15 min，95 ℃、3 min。使用熒光定量預(yù)混試劑進(jìn)行PCR擴(kuò)增反應(yīng)，反應(yīng)體系為25 μL，采用兩步法反應(yīng)程序：95 ℃、15 min 預(yù)變性；95 ℃、10 s 變性，60 ℃、32 s 退火/延伸，采集熒光信號(hào)，共循環(huán)40 次。反應(yīng)結(jié)束后，根據(jù)擴(kuò)增曲線及熔解曲線判斷PCR反應(yīng)特異性。結(jié)果以GAPDH為內(nèi)參，采用2-△△Ct法計(jì)算目的基因的相對(duì)表達(dá)水平，并進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。引物由生工生物工程（上海）有限公司合成，引物序列見(jiàn)表1。

表1 RT-qPCR 引物序列Table 1 RT-qPCR primer sequences

1.10 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理方法采用Graphpad Prism 8.0 統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析；計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示；多組間比較采用單因素方差分析（One-way ANOVA），兩兩比較采用LSD 檢驗(yàn)；以P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 黃連解毒湯對(duì)AD 小鼠皮損嚴(yán)重程度評(píng)分的影響結(jié)果見(jiàn)圖2。持續(xù)觀察28 d，正常組小鼠背部皮膚均無(wú)任何明顯變化。與正常組比較，模型組小鼠的背部皮膚經(jīng)DNCB激發(fā)后出現(xiàn)明顯的紅斑、苔蘚化、結(jié)痂、表皮脫落等現(xiàn)象，皮損嚴(yán)重程度評(píng)分顯著增高（P＜0.001）。與模型組比較，黃連解毒湯低、中、高劑量組小鼠背部的皮損情況得到明顯改善，苔蘚化面積明顯縮小，皮損嚴(yán)重程度評(píng)分顯著降低（P＜0.001）。結(jié)果表明，黃連解毒湯可顯著改善AD 小鼠的皮損情況。

圖2 黃連解毒湯對(duì)1-氯-2，4-二硝基苯誘導(dǎo)特應(yīng)性皮炎小鼠皮損嚴(yán)重程度評(píng)分的影響（±s，n=6）Figure 2 Effect of Huanglian Jiedu Decoction on skin lesion severity scores of atopic dermatitis mice induced by 1-chloro-2，4-dinitrobenzene（±s，n=6）

2.2 黃連解毒湯對(duì)AD 小鼠皮損組織病理形態(tài)變化的影響結(jié)果見(jiàn)圖3。正常組小鼠皮膚結(jié)構(gòu)的各層次清晰完整，未見(jiàn)增厚，無(wú)明顯炎性浸潤(rùn)。與正常組相比，模型組小鼠表皮角化過(guò)度，棘層厚度顯著增加（P＜0.001），海綿水腫，真皮層內(nèi)可見(jiàn)大量炎性細(xì)胞浸潤(rùn)。與模型組比較，黃連解毒湯中、高劑量組棘層厚度顯著降低（P＜0.001），真皮層內(nèi)炎性細(xì)胞數(shù)量顯著減少。結(jié)果表明，黃連解毒湯可顯著改善AD小鼠的皮膚病理?yè)p傷，降低炎性細(xì)胞浸潤(rùn)水平。

2.3 黃連解毒湯對(duì)AD 小鼠皮損組織肥大細(xì)胞浸水平的影響結(jié)果見(jiàn)圖4。與正常組比較，模型組小鼠皮損組織肥大細(xì)胞數(shù)量顯著升高（P＜0.001）。與模型組比較，黃連解毒湯低、中、高劑量組小鼠皮損組織肥大細(xì)胞數(shù)量顯著降低（P＜0.001），且呈劑量依賴(lài)性。結(jié)果表明，黃連解毒湯可降低AD小鼠皮損組織的肥大細(xì)胞浸潤(rùn)水平。

圖4 黃連解毒湯對(duì)1-氯-2，4-二硝基苯誘導(dǎo)特應(yīng)性皮炎小鼠皮損組織肥大細(xì)胞浸潤(rùn)水平的影響（甲苯胺藍(lán)染色；±s，n=6）Figure 4 Effect of Huanglian Jiedu Decoction on mast cell infiltration in skin lesions of atopic dermatitis mice induced by 1-chloro-2，4-dinitrobenzene（Toluidine blue staining；±s，n=6）

2.4 黃連解毒湯對(duì)AD 小鼠抓撓次數(shù)的影響結(jié)果見(jiàn)圖5。與正常組比較，模型組小鼠20 min內(nèi)的抓撓次數(shù)顯著增加（P＜0.01）。與模型組比較，黃連解毒湯高劑量組小鼠20 min 內(nèi)的抓撓次數(shù)顯著減少（P＜0.01）。結(jié)果表明，黃連解毒湯可緩解AD小鼠的瘙癢情況。

圖5 黃連解毒湯對(duì)1-氯-2，4-二硝基苯誘導(dǎo)特應(yīng)性皮炎小鼠20 min 內(nèi)抓撓次數(shù)的影響（±s，n=6）Figure 5 Effect of Huanglian Jiedu Decoction on the times of scratches in 20 minutes of atopic dermatitis mice induced by 1-chloro-2，4-dinitrobenzene（±s，n=6）

2.5 黃連解毒湯對(duì)AD 小鼠皮損組織中TSLP、IL-13、HRH4、IL-31 mRNA 表達(dá)水平的影響結(jié)果見(jiàn)圖6。與正常組比較，模型組小鼠皮損組織中TSLP、IL-13、HRH4、IL-31 mRNA 表達(dá)水平均明顯升高（P＜0.05，P＜0.01）。與模型組比較，黃連解毒湯低、中、高劑量組小鼠皮損組織中IL-13、HRH4、IL-31 mRNA表達(dá)水平均顯著降低（P＜0.05，P＜0.01，P＜0.001），黃連解毒湯高劑量組小鼠皮損組織中TSLP mRNA 表達(dá)水平明顯降低（P＜0.05）。

圖6 黃連解毒湯對(duì)1-氯-2，4-二硝基苯誘導(dǎo)特應(yīng)性皮炎小鼠皮損組織中TSLP、IL-13、IL-31、HRH4 mRNA 表達(dá)水平的影響（±s，n=6）Figure 6 Effects of Huanglian Jiedu Decoction on mRNA expression levels of TSLP，IL-13，IL-31 and HRH4 in skin lesions of atopic dermatitis mice induced by 1-chloro-2，4-dinitrobenzene（±s，n=6）

3 討論

中醫(yī)學(xué)將特應(yīng)性皮炎（AD）歸為“四彎風(fēng)”范疇，認(rèn)為AD發(fā)病與五臟相關(guān)，內(nèi)有濕熱為患，外有風(fēng)濕熱邪蘊(yùn)于皮膚，內(nèi)外合邪所致[3]。根據(jù)發(fā)病特點(diǎn)可將AD 分為多種證型，其中急性期AD 為“濕熱蘊(yùn)膚”型，血熱而肉濕[12]，宜用清熱解毒、燥濕類(lèi)藥物。黃連解毒湯是清熱解毒的經(jīng)典方劑，具有良好的抗炎、抗過(guò)敏作用，能有效改善AD癥狀。Chen Y等[17]通過(guò)對(duì)RAW264.7及RBL-2H3細(xì)胞進(jìn)行黃連解毒湯體外抗炎研究發(fā)現(xiàn)，其可通過(guò)減少NO、IL-1β、GM-CSF等炎癥介質(zhì)的分泌，抑制Ca2+內(nèi)流及β-己糖胺酶釋放，降低MAPKs 磷酸化水平，抑制NF-κB 的激活等途徑發(fā)揮抗炎作用。Chen Y 等[18]進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，黃連解毒湯可改善AD 小鼠的皮膚屏障功能，通過(guò)調(diào)控MAPKs 和NF-κB 信號(hào)通路，下調(diào)血清與皮損組織中IL-4、TNF-α 的表達(dá)水平，降低小鼠皮膚炎癥水平，從而改善AD小鼠的皮損癥狀。

AD 是一種慢性炎癥性皮膚病，劇烈瘙癢是其典型特征之一，以伴有紅斑所致瘙癢最為常見(jiàn)，其次有癢覺(jué)敏感和癢覺(jué)異常，也可表現(xiàn)為夜間瘙癢伴睡眠障礙。劇烈瘙癢導(dǎo)致患者不斷抓撓瘙癢部位，持續(xù)的抓撓將會(huì)進(jìn)一步導(dǎo)致表皮角質(zhì)細(xì)胞損傷，促進(jìn)炎性警報(bào)素的釋放，直接或間接激活Th2 免疫細(xì)胞，進(jìn)而導(dǎo)致角質(zhì)細(xì)胞和免疫細(xì)胞釋放大量引起瘙癢的細(xì)胞因子。當(dāng)這些引起瘙癢的細(xì)胞因子與癢覺(jué)神經(jīng)元結(jié)合，從而誘導(dǎo)患者進(jìn)一步抓撓的欲望，造成AD患者“瘙癢-搔抓”的惡性循環(huán)，從而誘發(fā)或加重AD炎癥[21]。本研究結(jié)果顯示，給予AD小鼠連續(xù)灌胃黃連解毒湯14 d，抓撓次數(shù)顯著減少，表皮炎性細(xì)胞及肥大細(xì)胞浸潤(rùn)明顯減少，棘層厚度明顯降低。結(jié)果提示，黃連解毒湯可通過(guò)緩解瘙癢，修復(fù)小鼠皮膚損傷，改善表皮屏障功能障礙，從而發(fā)揮改善AD的作用。

AD 瘙癢發(fā)生機(jī)制復(fù)雜，涉及遺傳性或獲得性皮膚屏障功能障礙、免疫調(diào)節(jié)異常、神經(jīng)敏化或可塑性改變等[22]。組胺是最早發(fā)現(xiàn)的致癢介質(zhì)之一，與組胺受體結(jié)合后可引發(fā)瘙癢。有研究[23]表明，與正常組小鼠相比，AD 小鼠的搔抓次數(shù)及血清組胺水平均顯著升高。組胺H4受體（HRH4）廣泛存在于AD患者肥大細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞等炎癥細(xì)胞及角質(zhì)形成細(xì)胞（Keratinocytes，KC）表面[24]。組胺H4被釋放后，可與神經(jīng)纖維上的HRH4結(jié)合，激活瘙癢相關(guān)的離子通道即瞬時(shí)受體電位（Transient receptor potential，TRP）家族中的TRPA1，從而誘發(fā)瘙癢[25]。

急性期AD 以Th2 型免疫反應(yīng)為主，慢性期以Th1 型免疫反應(yīng)為主[26]。在AD 急性期，Th2 細(xì)胞亢進(jìn)，IL-4、IL-5、IL-13 等Th2 型細(xì)胞因子分泌增多，其中IL-4 與IL-13 在AD 發(fā)病中具有重要作用。IL-4 與IL-13 可促進(jìn)B 細(xì)胞活化，產(chǎn)生大量IgE，進(jìn)而導(dǎo)致肥大細(xì)胞活化脫顆粒，釋放組胺、5-羥色胺、白三烯、前列腺素等炎癥介質(zhì)，引發(fā)瘙癢，加重AD 癥狀[27]。此外，IL-4、IL-13 與KC 上的受體結(jié)合后，可下調(diào)絲聚蛋白（Filaggrin，F(xiàn)LG）、兜甲蛋白表達(dá)，從而導(dǎo)致表皮屏障功能障礙[28]；并且可誘導(dǎo)KC 分泌胸腺基質(zhì)淋巴細(xì)胞生成素（TSLP）、IL-33 等炎癥因子，進(jìn)而促進(jìn)IL-31等瘙癢介質(zhì)的產(chǎn)生[29]。

TSLP在急、慢性AD患者皮損組織中高表達(dá)，而在非皮損組織中則不表達(dá)；KC釋放的TSLP直接作用于TRP 家族中的TRPA1 陽(yáng)性感覺(jué)神經(jīng)元子集，誘發(fā)瘙癢[30]。最近一項(xiàng)研究[31]表明，TSLP 可誘導(dǎo)KC 分泌骨膜蛋白，與感覺(jué)神經(jīng)元亞群上表達(dá)的骨膜蛋白受體結(jié)合而引起瘙癢。此外，TSLP 可誘導(dǎo)CD4+T淋巴細(xì)胞向Th2分化，促進(jìn)IL-4、IL-13、IL-31等Th2型細(xì)胞因子的產(chǎn)生，促進(jìn)炎癥反應(yīng)，并激活感覺(jué)神經(jīng)元而間接引起瘙癢[32]。

余何等[33]在觀察玉屏風(fēng)散對(duì)AD 大鼠瘙癢癥狀的干預(yù)效果時(shí)發(fā)現(xiàn)，與正常組大鼠相比，AD 大鼠的瘙癢程度及皮損組織中IL-31 的表達(dá)水平均顯著升高。IL-31 誘發(fā)瘙癢的機(jī)制也與TRP 家族密不可分，IL-31 可通過(guò)結(jié)合背根神經(jīng)節(jié)神經(jīng)元表面的IL-31R，從而激活TRPA1、TRPV1，進(jìn)而誘發(fā)瘙癢[34-35]。在TRPV1、TRPA1缺陷小鼠皮膚及鞘內(nèi)注射IL-31，其誘導(dǎo)產(chǎn)生的瘙癢明顯降低[36]。也有研究[37]認(rèn)為，IL-31 并非直接作用于神經(jīng)而誘發(fā)瘙癢，而是通過(guò)影響KC及其次級(jí)介質(zhì)來(lái)誘發(fā)延遲性瘙癢。

本研究結(jié)果顯示，經(jīng)黃連解毒湯（尤其是中、高劑量）治療后，AD小鼠皮損組織中的棘層厚度及肥大細(xì)胞數(shù)量明顯降低，與瘙癢相關(guān)的TSLP、IL-13、IL-31、HRH4 mRNA 表達(dá)顯著下調(diào)，抓撓次數(shù)顯著減少。同時(shí)，地塞米松也可顯著下調(diào)AD小鼠皮損組織中IL-13、IL-31、HRH4 mRNA表達(dá)，但并未顯著改善AD小鼠的抓撓行為，可能與地塞米松未能顯著下調(diào)AD 小鼠皮損組織中TSLP mRNA 的表達(dá)有關(guān)，類(lèi)似現(xiàn)象也出現(xiàn)在低劑量黃連解毒湯組。而高劑量組黃連解毒湯能顯著下調(diào)TSLP mRNA表達(dá)，AD小鼠抓撓行為也得到明顯改善。結(jié)果提示，TSLP在AD瘙癢發(fā)生機(jī)制中具有十分重要作用，可能通過(guò)引起“瘙癢-搔抓”循環(huán)和皮膚屏障功能降低而更早地參與AD 的進(jìn)展。因此，調(diào)節(jié)皮損組織中的TSLP 表達(dá)能有效改善AD瘙癢癥狀及皮膚屏障功能，減輕皮膚炎癥。目前，針對(duì)TSLP-OX40L-OX40 軸治療AD 的藥物GBR830已進(jìn)入臨床試驗(yàn)階段，該藥物可顯著降低AD 患者濕疹面積的嚴(yán)重程度指數(shù)，減輕表皮增生，并降低皮損組織中Th1、Th2、Th17/22相關(guān)細(xì)胞因子和趨化因子的mRNA表達(dá)[38]。

綜上所述，黃連解毒湯能夠明顯緩解AD 小鼠的瘙癢癥狀，改善皮損組織的炎性細(xì)胞及肥大細(xì)胞浸潤(rùn)，其機(jī)制可能與下調(diào)IL-13、IL-31、HRH4、TSLP mRNA 表達(dá)，進(jìn)而改善皮膚屏障功能、降低炎癥水平、抑制感覺(jué)神經(jīng)元激活有關(guān)。