何偉華，譚偉軍，郭贊美

（清遠市動物疫病預防控制中心，廣東 清遠 511500）

為掌握清遠市水生動物疫病流行動態(tài)，做好病情風險預警和預防控制工作，從源頭上預防控制水生動物疫病的暴發(fā)，2022年，筆者所在團隊開展了全市重大水生動物疫病監(jiān)測，現(xiàn)將監(jiān)測情況介紹如下，供廣大養(yǎng)殖戶參考。

一、樣品采集情況

本次共監(jiān)測8種重大水生動物疫病，分別是草魚出血病(GCRVⅡ)、鯉浮腫病病毒(CEV)、錦鯉皰疹病毒病(KHV)、傳染性脾腎壞死病(ISKNV)、大口黑鱸虹彩病毒(LMBV)、彈狀病毒病(SCRV)、羅非魚湖病毒(TILV)、鯽造血器官壞死病(CYHV-2)。全市共采樣監(jiān)測GCRVⅡ樣品23個、CEV 樣品29個、KHV 樣 品29個、ISKNV 樣品39個、LMBV 樣品39個、SCRV 病樣品39個、TILV 樣品4個、CYHV-2 樣品1個。采集時間2022年3—9月，共采集203個樣品，其中苗種樣品101個、成魚樣品102個(表1)。

表1 2022年清遠市重大水生動物疫病監(jiān)測匯總個

采樣地點分布在清遠市清城區(qū)、清新縣、英德市、佛岡縣、連山縣、連南縣6個縣(市、區(qū))，抽樣覆蓋大部分高密度養(yǎng)殖區(qū)域和水產苗種繁育場。監(jiān)測品種有草魚、鱖魚、大口黑鱸、鯉魚、錦鯉、羅非魚、鯽魚。

二、檢測材料與方法

1.檢測材料

樣品：按照《水生動物產地檢疫采樣技術規(guī)范》(SC/T 7103—2008)標準進行樣品采集，共采集203個魚組織(腦、肝、脾、腎)樣品。

試劑及設備：核酸提取試劑盒(維伯鑫)，核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法)(雙螺旋)，ABI7500熒光定量PCR儀。

2.檢測方法

樣品處理：樣品送達實驗室后加入PBS后進行研磨均質待用，剩余樣品作為備份于-20℃保存。

DNA/RNA 提?。菏褂弥紻NA/RNA 核酸提取試劑盒提取。

擴增反應：使用核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法)，加入5 微升模板，設置兩個對照。反應體系25微升，反應條件：熒光基團選擇FAM，淬滅基團選擇MGB，去污染50℃、5分鐘、1個循環(huán)；預變性95℃、5分鐘、1個循環(huán)；擴增95℃、15 秒、60℃、30秒，45個循環(huán)，收集熒光。

結果判斷：檢測通道Ct值≤35，且曲線有明顯指數(shù)增長的判斷為陽性；檢測通道35＜Ct 值≤38，且曲線有明顯指數(shù)增長的判斷為陽性，否則陰性；檢測通道Ct值＞38或無Ct值為陰性。

三、監(jiān)測結果

203個樣品中，陽性樣品18個，陽性檢出率8.87%，詳見表2、表3、表4，陽性樣品時間分布見圖1，CEV、KHV、LMBV、TiLV、CyHV-2樣品均未檢出陽性。

圖1 陽性樣品時間分布

表2 2022年清遠市重大水生動物疫病監(jiān)測結果匯總

表3 2022年清遠市重大水生動物疫病監(jiān)測結果匯總(成魚)

表4 2022年清遠市重大水生動物疫病監(jiān)測結果匯總(魚苗)

四、結果分析與討論

采集的203個樣品中陽性樣品18個，均為攜帶病毒未發(fā)病。整體來看，在4—8月的高溫期病毒較為流行，均檢測出GCRVⅡ陽性樣品，該病毒可進行水平傳播、垂直傳播，苗種陽性檢出率達到50%。ISKNV、SCRV 陽性樣品檢出時間分別集中在6月和7月(圖1)，成魚檢出率最高，主要原因可能是鱖魚養(yǎng)殖期間長期投喂活飼料魚，而飼料魚魚體被該病毒感染風險極高。

為有效預防病毒性疫病的暴發(fā)，首先，在魚苗繁育季節(jié)，養(yǎng)殖戶要確保親本無病毒感染，以防在春季繁殖的幼苗成為病毒攜帶者，發(fā)現(xiàn)陽性的親魚及時進行處理，切斷病毒垂直傳播途徑。其次，在苗種投放方面，養(yǎng)殖戶要盡量選擇檢疫合格的苗種，合理設置養(yǎng)殖密度。最后，在養(yǎng)殖管理方面，要加強水源管理和生產設施設備工具的消毒，對繁殖用的親魚和魚卵、引進的魚苗用聚維酮碘溶液浸泡消毒。有條件的養(yǎng)殖戶可以使用疫苗進行免疫預防，并在養(yǎng)殖過程中適當投喂多糖等免疫增強劑，提高魚體免疫力。