羅振 倪修文 屠佳燕 孫佳怡 李筱園 徐睿 高聞 李璋

輸血治療是糾正各種血液成分缺乏的主要措施。在實際臨床工作中，交叉配血環(huán)節(jié)經(jīng)常出現(xiàn)疑難配血的現(xiàn)象，若不能及時處理不僅會延誤病情甚至可能導(dǎo)致患者死亡[1,2]。為了解嘉興地區(qū)輸血前檢測過程中出現(xiàn)的各種疑難問題及意外抗體分布特點，本次研究對地區(qū)各臨床醫(yī)院送檢的疑難配血患者標本的血型血清學(xué)檢測結(jié)果進行回顧性分析，旨在探究意外抗體的分布特征，以保障臨床精準、安全、有效輸血。

1 資料與方法

1.1 研究對象 收集2018年1 月至2023年1 月期間嘉興地區(qū)各醫(yī)院送檢的交叉配血不相合的疑難配血標本970 份，其中促凝管及EDTA 抗凝管標本量各5 ml。

1.2 儀器與試劑 儀器包括：恒溫水浴箱（由上海躍進公司生產(chǎn)），KH120離心機（由長沙湘至公司生產(chǎn)），KA-2200離心機（由日本久保田公司生產(chǎn)），免疫微柱孵育器、血型血清學(xué)離心機（由美國伯樂公司生產(chǎn)）；主要試劑包括：抗球蛋白檢測卡（由美國伯樂公司生產(chǎn)），聚凝胺介質(zhì)試劑（由珠海貝索公司生產(chǎn)），ABO血型反定型試劑盒（由長春博迅生物技術(shù)有限責(zé)任公司生產(chǎn)），IgM+IgG抗-D試劑（由加拿大宜美康公司生產(chǎn)），IgM 抗-D 試劑（由英國阿爾巴公司生產(chǎn)），抗A抗B標準血清、抗體篩選細胞、國產(chǎn)譜細胞、抗IgG+C3 d、各種抗血清（由上海血液生物醫(yī)藥有限責(zé)任公司生產(chǎn)），進口譜細胞（由荷蘭三昆公司生產(chǎn)），所有試劑均在有效期內(nèi)。

1.3 方法 嚴格按照《全國臨床檢驗操作規(guī)程》操作[3]。采用玻璃試管直接離心法進行血型鑒定，采用鹽水法、抗球蛋白法、聚凝胺法進行意外抗體篩選和鑒定，必要時加做微柱凝膠法、酶法、吸收放散法以確認抗體特異性。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS 26.0 軟件對數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析，計數(shù)資料采用例數(shù)（構(gòu)成比）表示，組間差異采用χ2檢驗。設(shè)P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 疑難配血患者的抗體檢出分布情況 970 例疑難配血標本中，非特異反應(yīng)475 例，其中冷自身抗體263 例、溫自身抗體93 例、冷/溫自身抗體108 例、藥物抗體3 例、試劑抗體1 例、蛋白凝集7 例；特異性反應(yīng)495 例（包括自身抗體合并特異性意外抗體33 例），特異性意外抗體分布情況見表1。

表1 疑難配血患者特異性意外抗體分布特征

2.2 疑難配血患者特異性意外抗體產(chǎn)生的影響因素見表2

表2 疑難配血患者特異性意外抗體產(chǎn)生的影響因素

由表2 可見，性別因素與疑難配血患者特異性意外抗體產(chǎn)生無明顯相關(guān)（χ2=2.86，P＞0.05）。年齡、輸血史和科室因素與疑難配血患者特異性意外抗體產(chǎn)生明顯相關(guān)（χ2分別=42.08、31.19、44.83，P均＜0.05）。

3 討論

為保證臨床輸血安全有效，輸血前常規(guī)檢測包括ABO、RhD 血型鑒定、抗體篩查和交叉配血等[4]。但實際檢測中常常受多種因素的影響使得檢驗結(jié)果難以判斷，如患者自身因素、供血者血液因素、試劑因素、實驗條件及方法選擇等。

保障輸血安全的基礎(chǔ)是受血者免受同種異體免疫對紅細胞抗原的不良反應(yīng)，因此排除自身和非免疫因素影響，檢出特異性意外抗體尤為重要[5]。本研究共檢出非特異反應(yīng)475 例，包括非免疫因素11 例和自身抗體464 例。非免疫因素：檢出試劑抗體1 例，患者血清與試劑篩選細胞呈廣譜性反應(yīng)，篩選細胞洗滌后再次反應(yīng)，凝集均消失；檢出藥物抗體3 例，分別為抗-CD38 抗體2 例、抗-CD47 抗體1 例，排除抗-CD38 抗體干擾可選用二硫蘇糖醇或2-巰基乙醇破壞紅細胞表面的CD38 分子，阻斷抗-CD38抗體的結(jié)合[6]。排除抗-CD47抗體干擾可選擇紅細胞吸收法（易漏檢其他意外抗體）或血小板吸收法[7]（易漏檢HLA抗體）；蛋白凝集7 例，均為多發(fā)性骨髓瘤患者，因異常球蛋白增生導(dǎo)致紅細胞產(chǎn)生緡錢狀假凝集。排除緡錢狀假凝集干擾可用生理鹽水置換的方法，即試管法加入血清和紅細胞離心后，將多余血清用等量生理鹽水進行置換，假凝集即可消散，而特異性反應(yīng)引起的真凝集不受影響[8,9]。自身抗體：檢出冷自身抗體263 例、溫自身抗體93 例、冷溫自身抗體混合型108 例，自身抗產(chǎn)生原因有很多種，可與免疫性疾病、惡性腫瘤、感染以及藥物有關(guān)。自身抗體陽性患者血清可與自身紅細胞、供血者紅細胞和試劑紅細胞凝集，可導(dǎo)致血型鑒定困難、交叉配血不合。排除了自身抗體的干擾，可選用患者紅細胞反復(fù)吸收血清自身抗體，亦可選用2-巰基乙醇裂解IgM 型冷自身抗體，再進行抗體檢測。排除自身抗體對輸血前檢測的影響，確定無特異性意外抗體之后，再進行交叉配血，選擇最小不相容（即反應(yīng)最弱）的血液輸注[10,11]。

本研究疑難配血案例中共檢出特異性意外抗體475 例，發(fā)生率為51.03%，主要涉及Rh、MNS、ABO、Lewis、P1PK、Kidd、Diego、Duffy 等8 個血型系統(tǒng)，Rh 系統(tǒng)相關(guān)抗體比例最高，為70.51%。由此可見Rh系統(tǒng)的單特異性抗體、多重抗體是導(dǎo)致疑難配血主要因素[12]，Rh系統(tǒng)單特異性頻率從高到低依次為：抗-E、抗-c、抗-e、抗-D、抗-C。目前臨床輸血常規(guī)檢測RhD 抗原，而未對患者做Rh 分型抗原檢測，患者輸血時抗原不合導(dǎo)致反復(fù)刺激使得免疫產(chǎn)生抗體的機會增多。為解決這一問題，本中心與臨床輸血機構(gòu)正在開展獻血者及患者Rh 分型抗原檢測，進行Rh分型抗原同型配合輸注，以此減少Rh系統(tǒng)產(chǎn)生意外抗體的概率，促進精準化輸血治療。Rh系統(tǒng)具有較強的免疫原性，對于已經(jīng)產(chǎn)生Rh抗體患者，特別是妊娠患者，應(yīng)定期監(jiān)測抗體效價，必要時可選擇免疫球蛋白注射治療，以防止新生兒溶血病的發(fā)生[13]。其他特異性抗體檢出率較多為MNS 系統(tǒng)和Lewis 系統(tǒng)，相關(guān)抗體比例分別為20.40%和3.84%，兩種抗體性質(zhì)大多為IgM 類，通常情況下37 ℃時凝集反應(yīng)減弱或消失，但也有在37 ℃有活性、新生兒溶血病的報道[14，15]。特異性抗體檢出率較少的為P1PK系統(tǒng)、Kidd系統(tǒng)、Diego系統(tǒng)、Duffy系統(tǒng)和Hh 系統(tǒng)，其中產(chǎn)生的抗-Dib、抗-Tja、抗-Fya、抗-H屬于抗高頻抗原抗體，此類抗體一旦產(chǎn)生會造成臨床鑒定困難、輸血困難，可選擇自體輸血或稀有血型庫匹配輸血[16]。需要指出的是，抗-Tja、抗-Dib、抗-H 所對應(yīng)的P1PK 系統(tǒng)、Diego 系統(tǒng)和Hh 系統(tǒng)的分子生物學(xué)檢測在浙江省血液中心輸血研究所的幫助下完成。ABO 血型系統(tǒng)特異性抗體檢出率為4.44%，患者均為亞型個體，血清中伴有IgM 型意外抗體，產(chǎn)生抗-A1 意外抗體12 例（A亞、A亞B 個體），產(chǎn)生抗-B意外抗體12 例（B亞、AB亞個體）[17]。

為了研究不同患者意外抗體陽性檢出率有無差異，本次研究對年齡、性別、輸血史和科室進行分層，結(jié)果顯示，不同性別患者意外抗體陽性檢出率無明顯差異（P＞0.05），提示性別與之無明顯關(guān)系。年齡高于66 歲時意外抗體陽性率明顯降低（P＜0.05），推測其可能原因與免疫機制有關(guān)，部分意外抗體會隨時間的推移效價降低或消失[18]。有輸血史患者意外抗體陽性率比無輸血史患者高（P＜0.05），分析其原因為輸注異型抗原概率增加，免疫刺激后產(chǎn)生意外抗體。婦產(chǎn)科意外抗體陽性率明顯增高（P＜0.05），分析原因為婦產(chǎn)科患者接受免疫剌激概率增加，如受妊娠、流產(chǎn)和分娩等免疫剌激，使機體產(chǎn)生相應(yīng)的免疫應(yīng)答，從而產(chǎn)生意外抗體的概率增加。故臨床更應(yīng)重視有年齡低于66 歲、有輸血史的患者和婦產(chǎn)科患者，其輸血前宜進行意外抗體篩查。