王擁軍 韓文娟 沈榮杰 蒲宏長

在國外，核酸檢測技術(shù)在單采血漿行業(yè)的應(yīng)用[1]，有效縮短了病毒檢測“窗口期”，極大程度降低了病原體經(jīng)血液制品傳播的風(fēng)險(xiǎn)[2,3]。近些年，我國的血液制品生產(chǎn)工藝和檢測水平也有了極大提高，國家明確要求血液制品生產(chǎn)企業(yè)依法開展核酸檢測試點(diǎn)工作。但由于我國單采血漿站普遍存在規(guī)模小、設(shè)備差、人力資源緊張等現(xiàn)象，核酸檢測技術(shù)一直沒有在單采血漿行業(yè)得到很好的應(yīng)用。同時(shí)，檢測模式設(shè)置的合理性也直接關(guān)系到檢測工作量、時(shí)間和成本效益，如何做到檢測效能和檢測成本間的平衡越來越引起各檢測單位的重視?，F(xiàn)將浙江省單采血漿站核酸集中化檢測的成果報(bào)道如下，以期為同行提供參考。

1 資料與方法

1.1 研究對象 選擇浙江省磐安單采血漿站、青田單采血漿站、文成單采血漿站、龍游單采血漿站2020年1 月1日至2022年10 月31日期間的獻(xiàn)血漿者。在采集血漿的過程中留取2 份樣本，一份2 ml用于血清學(xué)檢測，一份3 ml用于核酸集中化檢測。

1.2 檢測方法 血清學(xué)檢測包括乙肝表面抗原（hepatitis B surface antigen，HBsAg）、丙型肝炎病毒抗體（anti-hepatitis C virus，anti-HCV）、人類免疫缺陷病毒抗體（auti-human immunodeficiency virus，anti-HIV）和梅毒特異性抗體，采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）法檢測。由4家單采血漿站實(shí)驗(yàn)室各自開展。各單采血漿站血清學(xué)檢測無反應(yīng)性的樣本，統(tǒng)一送至浙江省設(shè)立在溫州海康生物制品有限公司的核酸集中化檢測實(shí)驗(yàn)室，核酸集中化檢測實(shí)驗(yàn)室按照試劑說明書，采用RT-PCR法進(jìn)行HIV/HCV/HBV核酸檢測。

1.3 結(jié)果判定 血清學(xué)檢測反應(yīng)性的標(biāo)本進(jìn)行雙孔復(fù)試，若1孔為反應(yīng)性則判為陽性。核酸先行48 個(gè)標(biāo)本混樣分項(xiàng)檢測，若混檢無反應(yīng)性，判定結(jié)果為陰性；若48 人份混檢有反應(yīng)性，進(jìn)行8 人份混樣檢測，若8 人份混檢有反應(yīng)性的，進(jìn)行單檢，單檢有反應(yīng)性的判定為核酸檢測陽性，48 人份混樣或8人份混樣檢反應(yīng)性單檢無反應(yīng)性的，判定為陰性。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 22.0 進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)。設(shè)P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 核酸集中化檢測模式的實(shí)踐情況 2020 年1 月1日至2022年10 月31日期間，浙江省4家單采血漿站開展核酸集中化檢測的標(biāo)本均通過公路運(yùn)輸，標(biāo)本保存、檢測等相關(guān)情況見表1。

表1 核酸集中化檢測模式實(shí)踐情況

2.2 血清學(xué)檢測結(jié)果 浙江省4 家單采血漿站共檢測血清學(xué)標(biāo)本382 103 人份，檢出不合格844 人份，不合格率約0.22%。結(jié)果見表2。

表2 血清學(xué)檢測不合格情況

2.3 核酸檢測結(jié)果 核酸檢測標(biāo)本381 259 人份，共檢出ELISA 陰性核酸陽性樣本142 人份，陽性率約0.37‰，其中HBV-DNA 陽性141 人份，HCVRNA 陽性1 人份。與血清學(xué)檢測不合格率0.22%相比，核酸檢測陽性率明顯偏低（χ2=498.89，P＜0.05）。

3 討論

提供原料血漿的單采血漿站是保證血液制品質(zhì)量的源頭和重要環(huán)節(jié)。據(jù)報(bào)道，歐美等發(fā)達(dá)國家自上世紀(jì)90 年代初即按照血漿蛋白治療協(xié)會的要求，成立血漿檢測中心，采取ELISA和病毒核酸檢測方法同時(shí)對原料血漿進(jìn)行輸血傳染性疾病標(biāo)志物篩查。為此，國家衛(wèi)生健康委員會于2016年要求血液制品生產(chǎn)企業(yè)應(yīng)當(dāng)在單采血漿站開展核酸檢測試點(diǎn)工作，探索建立單采血漿站核酸檢測工作流程、質(zhì)量管理和控制體系。為此，自2020 年1 月開始，單采血漿站48 人份混樣核酸集中化檢測模式[4]建立，浙江省全域開展了單采血漿核酸集中化檢測，結(jié)果顯示浙江省的4 家單采血漿站集中到生物制品公司每周進(jìn)行一次核酸集中化檢測切實(shí)可行。

本次血清學(xué)檢測結(jié)果顯示，共檢測血清學(xué)標(biāo)本382 103 人份，檢出不合格844 人份，不合格率約0.22%，遠(yuǎn)低于西安等地報(bào)道的血站的不合格率2.36%[5]，其中HBsAg 不合格占59.60%，抗-HCV 不合格占2.73%，梅毒不合格占35.07%，抗-HIV 不合格占2.60%；從核酸檢測結(jié)果看，發(fā)現(xiàn)了ELISA陰性核酸陽性142 人份，單陽性率約0.37‰，與血站的陽性率基本一致[6～8]。核酸單陽性中，141 人份HBV -DNA陽性，1 人份HCV-RNA陽性，提示僅采用血清學(xué)方法檢測病毒標(biāo)志物對血液制品安全存在一定隱患，尤其對于我國的HBV 高流行區(qū)域來說，開展單采血漿的核酸檢測能夠有效縮短獻(xiàn)漿者輸血傳播疾病的風(fēng)險(xiǎn)。

浙江省目前共有4家單采血漿站，規(guī)模都較小，每天僅有300～400 人份標(biāo)本，實(shí)驗(yàn)室技術(shù)人員不足，若全面實(shí)施核酸檢測，每個(gè)單采血漿站均需新建核酸實(shí)驗(yàn)室、配備技術(shù)人員和檢測儀器，無疑會增加成本，導(dǎo)致這些規(guī)模較小的血漿站無法承擔(dān)。相對而言，生物制品有限公司技術(shù)力量雄厚，設(shè)備齊全，交通方便，具備設(shè)立核酸集中化檢測的條件。因此，在信息系統(tǒng)互聯(lián)互通和標(biāo)本正確保存的前提下，整合優(yōu)勢資源建立全省統(tǒng)一的單采血漿核酸集中化檢測模式，對省域內(nèi)的所有單采血漿進(jìn)行48人份混樣核酸集中化檢測，既提高了檢測效率，節(jié)約檢測成本，又提升了核酸檢測規(guī)范化、系統(tǒng)化、同質(zhì)化水平，利于質(zhì)量控制，保證檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性；另一方面，單采血漿站48 人份混樣核酸檢測與血站8 人份或6 人份混樣檢測相比，雖然節(jié)約了成本，但檢測限必然會有一定的下降，如條件允許，核酸檢測應(yīng)逐步向單人份單項(xiàng)目檢測模式過度，以最大程度降低輸血?dú)堄囡L(fēng)險(xiǎn)，保障血液制品安全。