邱肖依，王冬梅，李佳寬，許 晴，王夢穎，管卓龍，盧躍鵬，涂鳳琴

（武漢食品化妝品檢驗(yàn)所，國家市場監(jiān)管重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室（食用油質(zhì)量與安全），湖北 武漢 430040）

硝基咪唑類藥物是一類含有5 位硝基取代咪唑雜環(huán)結(jié)構(gòu)的化合物。甲硝唑（metronidazole，MNZ）、洛硝噠唑（ronidazole，RNZ）、地美硝唑（dimetridazole，DMZ）和異丙硝唑（ipronidazole，IPZ）是常見的硝基咪唑類藥物，羥基甲硝唑（metronidazole-OH，MNZOH）、羥基異丙硝唑（ipronidazole-O H，IPZOH）和羥甲基甲硝咪唑（1-methyl-2-hydroxymethyl-5-nitroimidazole，HMMNI）分別是MNZ、IPZ、DMZ和RNZ的代謝物。硝基咪唑類藥物被廣泛用于治療畜禽的滴蟲病、厭氧菌感染等疾病[1]，有不法商家將其添加到飼料中可提高飼料的轉(zhuǎn)化率，增加動(dòng)物的體質(zhì)量。由于MNZ、RNZ、DMZ等含有硝基雜環(huán)的化合物具有潛在致癌、致畸作用[2]，歐盟理事會將其列入A類禁用藥物，不得在任何食品中檢出[3-4]，2002年我國農(nóng)業(yè)部第193號公告和國家藥品監(jiān)督管理局第227號公告中規(guī)定，甲硝唑、地美硝唑及其鹽、酯及制劑不允許以促進(jìn)動(dòng)物生長為目的在所有食品動(dòng)物中使用。GB 31650—2019《食品中獸藥最大殘留限量》[5]明確規(guī)定地美硝唑、甲硝唑允許作治療作用，但是不得在動(dòng)物食品中檢出。2019年我國農(nóng)業(yè)農(nóng)村部第250號公告明確規(guī)定食品動(dòng)物中禁止使用洛硝達(dá)唑和替硝唑。雞蛋是我國居民日常膳食中極為重要的營養(yǎng)食物，其質(zhì)量安全事關(guān)人民群眾身體健康。在日常監(jiān)督抽檢工作中發(fā)現(xiàn)，蛋雞的養(yǎng)殖過程存在使用硝基咪唑類藥物的情況，雞蛋中檢出硝基咪唑類藥物的現(xiàn)象時(shí)有發(fā)生，因此有必要開發(fā)硝基咪唑類藥物的快速檢測方法，進(jìn)一步提高雞蛋質(zhì)量安全風(fēng)險(xiǎn)監(jiān)測水平。

目前報(bào)道的檢測硝基咪唑類藥物的測定方法主要有液相色譜法[6-10]、氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法[11]、液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法[2-3,12-19]。對比3 種檢測方式，液相色譜法存在靈敏性不高、無法準(zhǔn)確定性的缺點(diǎn)；氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法前處理過程通常需要衍生化，且RNZ和HMMNI衍生產(chǎn)物相同，氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法無法對兩者區(qū)分；液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法由于其靈敏度高、選擇性好、無需衍生化，在復(fù)雜基質(zhì)樣品硝基咪唑類藥物的分析檢測中應(yīng)用最為廣泛。我國現(xiàn)行有效的動(dòng)物性食品中硝基咪唑類藥物的檢測標(biāo)準(zhǔn)主要包括GB 31658.23—2022《動(dòng)物性食品中硝基咪唑類藥物殘留量的測定 液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法》[20]和GB/T 21318—2007《動(dòng)物源食品中硝基咪唑殘留量檢驗(yàn)方法》[21]，前者規(guī)定了對豬牛羊和雞的肌肉和肝腎中MNZ、MNZOH、DMZ和HMMNI殘留量進(jìn)行測定，后者的適用范圍包括豬雞牛的肌肉和肝腎、魚肉、奶粉和蜂蜜，兩者的測定范圍均不包含雞蛋。雞蛋中硝基咪唑類藥物的檢測方法主要參照SN/T 2624—2010《動(dòng)物源性食品中多種堿性藥物殘留量的檢測方法》[22]，而該方法凈化過程使用兩個(gè)固相萃取柱，前處理操作較繁瑣。當(dāng)前，大部分文獻(xiàn)采用固相萃取法對提取液進(jìn)行富集和凈化[6-9,12,15-16,23-24]。張麗媛等[15]建立液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測定雞肉及雞蛋樣品中3 種硝基咪唑類藥物，PCX固相萃取柱凈化，定量限為5 μg/kg。Xia Xi等[23]采用SCX小柱對樣品進(jìn)行富集凈化，結(jié)合超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測定豬腎中硝基咪唑類藥物及其代謝物。馬東杰等[24]對比了PCX、MCX、SCX三種陽離子固相萃取柱對硝基咪唑類化合物的凈化效果，發(fā)現(xiàn)DMZ的平均回收率在50%左右，IPZ的平均回收率小于10%，使用HLB凈化IPZ的平均回收率也不到10%，使用PRiME HLB固相萃取柱MNZ、RNZ、IPZ、DMZ的平均回收率均達(dá)到70%以上。固相萃取柱的使用通常需活化、上樣、淋洗、洗脫，過程耗時(shí)，凈化過程中目標(biāo)物流失、洗脫不完全等原因都會對實(shí)驗(yàn)的回收率產(chǎn)生不利影響，且使用成本高。近年來，QuEChERS作為一種快速、簡單、廉價(jià)、高效、安全的前處理技術(shù)，在動(dòng)物性食品獸藥殘留檢測中應(yīng)用較為廣泛[10,14,25-26,29-31]。

本研究經(jīng)過實(shí)驗(yàn)對比，采用十八烷基鍵合硅膠（C18）作為凈化吸附劑，基于改良的QuEChERS技術(shù)結(jié)合同位素稀釋-超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜，建立了一種同時(shí)測定雞蛋中硝基咪唑類藥物及其代謝物殘留的分析方法。該方法操作簡便、定量結(jié)果準(zhǔn)確、靈敏度高，使用弗帕斯檢測實(shí)驗(yàn)室能力驗(yàn)證（food analysis performance assessment scheme，F(xiàn)APAS）對樣品進(jìn)行驗(yàn)證，具有良好的準(zhǔn)確度和精密度，適用于大批量樣品的快速測定。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

硝基咪唑類化合物及內(nèi)標(biāo)（100 mg/L）（MNZ、RNZ、DMZ、IPZ、MNZOH、HMMNI、IPZOH、RNZ-D3、DMZ-D3、IPZ-D3、MNZOH-D2、HMMNI-D3、IPZOH-D3）北京曼哈格生物科技有限公司；乙腈（色譜純）德國Merck公司；甲酸（色譜純）上海阿拉丁生化科技股份有限公司；Oasis PRiME HLB固相萃取小柱（200 mg/6 mL）美國Waters公司；CNWBOND HC-C18SPE填料（40～63 μm）上海安譜科學(xué)儀器有限公司；水為Milli-Q系統(tǒng)制備的超純水（18.2 MΩ·cm）。

2022年FAPAS雞蛋中硝基咪唑類藥物的測定能力驗(yàn)證樣品（產(chǎn)品編號FCVD13-EGG2）由英國食品與環(huán)境研究院提供。

1.2 儀器與設(shè)備

Q-TRAP 6500質(zhì)譜儀（配電噴霧電離Turbo V離子源）美國AB SCIEX公司；LC 30A液相色譜儀日本Shimadzu公司；Allegra X-15R離心機(jī) 美國Beckman公司；Vortex-Genie 2渦旋振蕩儀 美國SCND公司；PM5-2000TL超聲波清洗器 普律瑪儀器公司；N-EVAP水浴氮吹儀 美國OA公司；ME204電子天平 瑞士梅特勒-托利多公司。

1.3 方法

1.3.1 色譜條件

色譜柱：Agilent Eclipse Plus C18柱（150 mm×2.1 mm，1.8 μm）；柱溫：40 ℃；進(jìn)樣量：2 μL，流動(dòng)相：A為0.1%（體積分?jǐn)?shù)）甲酸溶液，B為乙腈；流速：0.3 mL/min；梯度洗脫程序：0～1.0 min，90.0% A、10.0% B；1.0～3.0 min，90.0%～40.0% A、10.0%～60.0% B；3.0～3.5 min，40.0%～10.0% A、60.0%～90.0% B；3.50～6.01min，10.0% A、90.0% B；6.01～ 6.02 min，10.0%～90.0% A、90.0%～10.0% B；6.02～9.00 min，90.0% A、10.0% B。

1.3.2 質(zhì)譜條件

離子源：電噴霧電離（electronspray ionization，ESI）正離子模式；檢測方式：多反應(yīng)監(jiān)測（multiple reaction monitoring，MRM）模式；離子源溫度500 ℃，電噴霧電壓5 000 V；氣簾氣壓力275.79 kPa；霧化氣壓力379.21 kPa；輔助加熱氣壓力379.21 kPa；碰撞氣體Medium。其他質(zhì)譜參數(shù)見表1。

表1 硝基咪唑類藥物及代謝物質(zhì)譜采集參數(shù)Table 1 MS parameters for 5-nitroimidazoles and their metabolites

1.3.3 標(biāo)準(zhǔn)工作溶液的配制

標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備：準(zhǔn)確移取1 mL的RNZ、MNZ、IPZ、DMZ、MNZOH、HMMNI、IPZOH標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)至10 mL棕色容量瓶中，用甲醇稀釋，配制成10 mg/L的混合標(biāo)準(zhǔn)儲備液。準(zhǔn)確移取上述硝基咪唑類混合標(biāo)準(zhǔn)儲備液1 mL至100 mL棕色容量瓶中，用甲醇稀釋并定容至刻度，配制質(zhì)量濃度為100 ng/mL的硝基咪唑類混合標(biāo)準(zhǔn)中間溶液。準(zhǔn)確移取1 mL的RNZ-D3、DMZ-D3、IPZ-D3、MNZOH-D2、HMMNI-D3、IPZOH-D3標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，用甲醇溶解配制成10 mg/L的硝基咪唑類混合內(nèi)標(biāo)儲備液。準(zhǔn)確移取硝基咪唑類混合內(nèi)標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)儲備液1 mL至100 mL棕色容量瓶中，用甲醇稀釋并定容至刻度，配制質(zhì)量濃度為100 ng/mL的混合內(nèi)標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)中間溶液。

取適量硝基咪唑類混合標(biāo)準(zhǔn)中間液、硝基咪唑類混合內(nèi)標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)中間液，用體積分?jǐn)?shù)10%乙腈溶液配制成0.5～20 ng/mL、內(nèi)標(biāo)質(zhì)量濃度為5 ng/mL的工作曲線。

1.3.4 試樣制備

新鮮雞蛋洗凈后去殼，用組織勻漿機(jī)攪拌均勻，置于聚乙烯瓶中，于－20 ℃儲存。

1.3.5 提取

準(zhǔn)確稱取2.0 g（精確到0.01g）混勻后的樣品，加入100 μL 100 ng/mL的硝基咪唑類混合內(nèi)標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)中間溶液，再加入10 mL乙腈和1 g NaCl渦旋混合10 min，超聲10 min，以4 500 r/min離心5 min，上清液待凈化。

1.3.6 凈化

取5.0 mL上述提取液，加入400 mg C18，渦旋2 min，以4 500 r/min離心5 min，取全部上清液加入2mL乙腈飽和正己烷，渦旋1 min，4 500 r/min離心5 min，棄去正己烷層，于40 ℃氮吹干，加入1.0 mL 10%（體積分?jǐn)?shù)）乙腈溶液復(fù)溶，過0.22 μm有機(jī)濾膜，待測。

1.4 數(shù)據(jù)處理

采用Analyst軟件（AB SCIEX公司）對研究的硝基咪唑類藥物進(jìn)行超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜分析、數(shù)據(jù)采集和處理，采用Microsoft Excel進(jìn)行統(tǒng)計(jì)計(jì)算和圖表繪制。

2 結(jié)果與分析

2.1 儀器條件優(yōu)化

2.1.1 質(zhì)譜參數(shù)優(yōu)化

使用流動(dòng)注射泵以恒流方式進(jìn)樣，分別將質(zhì)量濃度為100 ng/mL的7 種硝基咪唑類化合物的標(biāo)準(zhǔn)溶液，以及氘代內(nèi)標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)溶液依次注入到離子源中，在ESI正離子模式下進(jìn)行母離子全掃描，得到最優(yōu)的各待測目標(biāo)物的分子離子峰。以確定的分子離子峰為母離子進(jìn)行二級質(zhì)譜碎片離子掃描，獲得碎片離子信息，得到二級質(zhì)譜圖，選取豐度較高子離子。根據(jù)前面選出的母、子離子，組建MRM離子對，優(yōu)化碰撞能量與去簇電壓并確定定量離子及定性離子。優(yōu)化后相關(guān)參數(shù)見1.3.2節(jié)。選出的離子對數(shù)量符合EC/657指令中使用質(zhì)譜法確證的4 個(gè)識別位點(diǎn)的要求。

2.1.2 色譜條件優(yōu)化

目前報(bào)道的關(guān)于測定硝基咪唑類藥物的文獻(xiàn)[23-29]和標(biāo)準(zhǔn)[20-21]，分析柱均使用反相色譜柱，增加色譜柱長能更有效地提高樣品基質(zhì)中目標(biāo)分析物和共流出物的分離度并降低基質(zhì)效應(yīng)（matrix effect，ME）影響[27]，因此本方法采用選用柱長150 mm的C18色譜柱進(jìn)行分析。實(shí)驗(yàn)選用Waters XBridge C18（2.1 mm×150 mm，5 μm）和Agilent EclipsePlus C18（2.1 mm×150 mm，1.8 μm）兩種色譜柱進(jìn)行考察。結(jié)果表明超微填料（粒徑≤2 μm）Agilent EclipsePlus C18色譜柱可以獲得更好的分離效果，色譜峰峰形尖銳對稱。流動(dòng)相采用有機(jī)相＋水相改善出峰情況，有機(jī)相比較乙腈和甲醇，兩者都可獲得較好的色譜峰形和信號響應(yīng)，使用乙腈目標(biāo)物能更好地實(shí)現(xiàn)基線分離，且可減少溶劑效應(yīng)的干擾；在正離子掃描模式下，水相中甲酸的加入能夠增加目標(biāo)物響應(yīng)，改善目標(biāo)物的峰形，進(jìn)一步比較0.1%的甲酸溶液和5 mmol/L乙酸銨溶液（含0.1%甲酸），結(jié)果表明乙酸銨加入后部分色譜峰響應(yīng)降低。因此實(shí)驗(yàn)使用Agilent EclipsePlus C18色譜柱作為分析柱，選擇0.1%的甲酸溶液-乙腈作為系統(tǒng)流動(dòng)相。不同粒徑填料的色譜柱及不同流動(dòng)相對7 種硝基咪唑類化合物影響見圖1。

圖1 7 種硝基咪唑類化合物的總離子流圖Fig.1 Total ion current chromatograms of seven NMZs

2.2 提取溶劑的優(yōu)化

在7 種硝基咪唑類化合物均未檢出的空白雞蛋樣品中加入5 μg/kg硝基咪唑類化合物混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，分別以乙腈、1%甲酸-乙腈、甲醇、乙酸乙酯有機(jī)溶劑作為提取液，對比7 種硝基咪唑類化合物的提取效果。結(jié)果表明：甲醇和乙酸乙酯的鹽析效果較差，不利于分層，且甲醇提取液雜質(zhì)較多，后續(xù)凈化復(fù)雜，使用1%甲酸-乙腈和乙腈提取時(shí)，回收率無明顯差異，乙腈具有沉淀蛋白等作用，提取液顏色較淺且各目標(biāo)物回收率均滿足實(shí)驗(yàn)要求，綜合考慮，選擇乙腈作為提取液。不同提取溶劑對硝基咪唑類化合物回收率的影響見圖2。

圖2 不同提取溶劑對硝基咪唑類化合物回收率的影響Fig.2 Effects of different extraction solvents on the recoveries of NMZs

2.3 凈化方式的優(yōu)化

近年來，新型凈化固相萃取小柱Prime HLB和QuEChERS作為快速高效的前處理技術(shù)，在動(dòng)物性食品藥物殘留檢測中應(yīng)用較為廣泛[10,14,24-26,28-31]。實(shí)驗(yàn)對比Prime HLB和C18對硝基咪唑類藥物的凈化處理效果，結(jié)果表明，Prime HLB和C18的平均回收率沒有明顯差異，不同凈化材料對目標(biāo)物回收率的影響如圖3所示。Prime HLB采用親水親脂平衡填料，使用通過策略進(jìn)行固相萃取凈化，可獲得相對較好的回收率，C18對于除去非極性雜質(zhì)有較好的效果，部分化合物的回收率較采用Prime HLB稍低。但是雞蛋基質(zhì)復(fù)雜，采用Prime HLB凈化后部分化合物（HMMNI和IPZOH）目標(biāo)峰附近仍有干擾峰，影響定量結(jié)果準(zhǔn)確性，所以選擇C18為前處理凈化方式。經(jīng)過兩種凈化材料處理后HMMNI和IPZOH提取離子流圖見圖4。

圖3 兩種凈化方式的凈化效率對比Fig.3 Effect of purification methods on the recoveries of NMZs

圖4 HMMNI和IPZOH提取離子流圖Fig.4 Extracted ion chromatograms of HMMN and IPZOH

實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步考察C18不同用量（50、200、400、600 mg）對目標(biāo)化合物的影響。結(jié)果表明C18用量600 mg時(shí)DMZ和IPZ峰面積相對50 mg C18增加17.8%和31.8%，C18用量400 mg HMMNI峰面積相對50 mg C18增加了6.18%，MNZ、RNZ、MNZOH和IPZOH的峰面積有下降趨勢，對比添加量50 mg和400 mg峰面積相對偏差為3.01%、3.70%、4.86%和6.39%，差異不明顯，硝基咪唑類化合物的峰面積與C18用量關(guān)系見圖5。使用400 mg C18填料對部分目標(biāo)物存在吸附作用，但是吸附作用不明顯，但是凈化后HMMNI絕對響應(yīng)峰面積增加，DMZ和IPZ絕對響應(yīng)峰面積增加明顯，綜上分析，使用400 mg C18作為合適的吸附劑用量。

圖5 C18吸附劑用量對硝基咪唑類化合物峰面積的影響Fig.5 Effects of the amount of C18 sorbents on the peak areas of NMZs

2.4 方法評價(jià)

2.4.1 線性范圍、檢出限（limit of detection，LOD）和定量限（limit of quantification，LOQ）將標(biāo)準(zhǔn)及內(nèi)標(biāo)混合系列工作液分別注入液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀中，測定相應(yīng)的峰面積，以標(biāo)準(zhǔn)系列工作液中硝基咪唑化合物的質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，以硝基咪唑化合物與其內(nèi)標(biāo)的峰面積的比值為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。結(jié)果表明，硝基咪唑化合物在0.5～20.0 ng/mL范圍內(nèi)線性相關(guān)系數(shù)（r）均大于0.999，呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系（表2）。以信噪比為3確定方法LOD，以信噪比為10確定方法LOQ，得出雞蛋基質(zhì)中硝基咪唑及其代謝物的LOD在0.1～0.25 μg/kg之間，LOQ在0.3～1.0 μg/kg之間，方法的LOD均低于標(biāo)準(zhǔn)方法SN/T 2624—2010的檢測低限（1 μg/kg），方法靈敏度較高。

表2 硝基咪唑類化合物線性方程、相關(guān)系數(shù)、LOD和LOQTable 2 Linear equations,correlation coefficients,LODs,LOQs of NMZs

2.4.2 回收率與精密度

對空白樣品進(jìn)行低、中、高3 個(gè)水平的添加回收實(shí)驗(yàn)，硝基咪唑類化合物添加量分別為0.5、1.0、5.0 μg/kg，每個(gè)添加水平進(jìn)行6 次平行實(shí)驗(yàn)，以考察方法的回收率和精密度。結(jié)果表明（表3），雞蛋中7 種硝基咪唑類的回收率為96.5%～112.7%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（relative standard deviation，RSD）為0.82%～8.14%。符合標(biāo)準(zhǔn)GB/T 27404—2008《實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制規(guī)范 食品理化檢測》[32]規(guī)定的回收率和精密度的要求。

表3 硝基咪唑類化合物的加標(biāo)回收率和精密度Table 3 Recoveries and precision RSDs of NMZs from spiked samples

2.4.3 ME的評價(jià)

方法按照（ME=基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)曲線斜率/溶劑標(biāo)準(zhǔn)曲線斜率）評價(jià)ME。當(dāng)ME小于0.85時(shí)，存在基質(zhì)抑制效應(yīng)；當(dāng)ME為0.85～1.15時(shí)，ME不明顯；當(dāng)ME大于1.15時(shí)，存在基質(zhì)增強(qiáng)效應(yīng)[33]。準(zhǔn)確稱取2.0 g樣品，加入10 mL乙腈和1 g NaCl旋渦混合10 min，超聲 10 min，以4 500 r/min離心5 min，取5.0 mL上清液，凈化處理后加入7 種硝基咪唑類化合物和內(nèi)標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)溶液，配制成0.5～20 ng/mL基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)工作溶液。分別作基質(zhì)和溶劑的外標(biāo)和內(nèi)標(biāo)曲線，內(nèi)標(biāo)質(zhì)量濃度為5 ng/mL。結(jié)果表明，除HMMNI（MEex=0.774）和RNZ（MEex=0.814）存在抑制效應(yīng)外，其他幾種硝基咪唑類化合物經(jīng)過本法凈化后各基質(zhì)溶液中ME不明顯。方法通過內(nèi)標(biāo)法進(jìn)行矯正后，7 種硝基咪唑類化合物的ME不明顯，因此本法采用溶劑標(biāo)準(zhǔn)曲線和內(nèi)標(biāo)法測定7 種硝基咪唑類化合物含量，ME評價(jià)如表4所示。

表4 硝基咪唑類化合物的ME評價(jià)Table 4 Matrix effects of MNZs

2.4.4 方法比對與實(shí)際樣品分析

采用建立的同位素稀釋-超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法對FAPAS考核樣品（編號02477）雞蛋中的硝基咪唑類化合物進(jìn)行測定，與標(biāo)準(zhǔn)方法SN/T 2624—2010結(jié)果進(jìn)行比對?？己藰哟郎y目標(biāo)物為本方法測定的7 種硝基咪唑類化合物，DMZ靶值為5.15 μg/kg，HMMNI 靶值為11.0 μg/kg，MNZ靶值為7.81 μg/kg，MNZOH靶值為5.17 μg/kg，RNZ、IPZ和IPZOH未檢出，z值表示測定值與真值之間的偏離程度，|z|≤2則結(jié)果滿意。未檢出目標(biāo)物采用加標(biāo)回收的方式進(jìn)行評價(jià)（加標(biāo)量5.0 μg/kg）。兩種方法對DMZ、HMMNI、MNZ、MNZOH、RNZ、IPZOH的測定結(jié)果（表5）比較接近，相對偏差分別為2.28%、3.36%、2.83%、6.82%、0.20%、9.90%。能力驗(yàn)證結(jié)果表明，本方法對雞蛋中4 種硝基咪唑類化合物的測定結(jié)果均在|z|≤2的置信區(qū)間。RNZ、IPZ、IPZOH采用本方法測定的加標(biāo)回收率分別為101%、106%和102%，SN/T 2624—2010的加標(biāo)回收率分別為101%、76.6%和92.2%。綜上，采用本方法對雞蛋中7 種硝基咪唑類化合物測定結(jié)果滿意。

表5 雞蛋中硝基咪唑類化合物的不同分析方法比對Table 5 Comparison of different analytic methods for detection of MNZs in eggs

應(yīng)用建立的同位素稀釋-超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法對購自超市和農(nóng)產(chǎn)品批發(fā)市場的38 批次雞蛋樣品中7 種硝基咪唑類化合物進(jìn)行測定。38 批次樣品中，檢出1 批次MNZ陽性樣品，甲硝唑含量為320 μg/kg，超過限量1.0 μg/kg，其他樣品均未檢出7 種硝基咪唑類化合物，說明在國家明令禁止的情況下，仍存在不法分子違規(guī)使用硝基咪唑類藥物的情況。

3 結(jié)論

本實(shí)驗(yàn)建立了同位素稀釋-超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法同時(shí)測定雞蛋中7 種硝基咪唑類藥物的方法。方法LOD為0.1～0.25 μg/kg，LOQ為0.3～1.0 μg/kg，結(jié)果準(zhǔn)確度高，前處理操作簡便，具有快速、高效、易推廣的優(yōu)點(diǎn)，適用于大批量雞蛋中硝基咪唑類藥物的快速篩查、定性定量檢測，對于雞蛋中硝基咪唑類藥物殘留情況的監(jiān)測具有重要的應(yīng)用價(jià)值。