徐虹云， 吳春玉， 吳林霖， 劉慶南， 王丹凝， 客蕊

（1.黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)，黑龍江哈爾濱 150040；2.黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)附屬第一醫(yī)院，黑龍江哈爾濱 150040）

順鉑是臨床使用最為廣泛的抗癌藥物，在治療肺癌、乳腺癌等實(shí)體腫瘤中具有較好療效，可通過(guò)抑制腫瘤細(xì)胞DNA 分裂過(guò)程，誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡等方式來(lái)達(dá)到治療效果[1-2]。鉑類藥物雖經(jīng)過(guò)多年研究的改進(jìn)，但腎臟毒性仍然是其最主要的不良反應(yīng)。研究[3-4]發(fā)現(xiàn)，接受順鉑藥物治療的患者急性腎損傷的比例是其他住院患者的2倍以上。在使用高劑量順鉑治療的晚期腫瘤患者中，急性腎損傷比例達(dá)到69%[5]。急性腎損傷會(huì)導(dǎo)致患者腎功能快速下降，嚴(yán)重者會(huì)發(fā)展為尿毒癥甚至造成死亡結(jié)局[6]。腎毒性嚴(yán)重阻礙了順鉑的應(yīng)用，降低了治療效率。因此，研究順鉑藥物的作用機(jī)制，提升療效、降低毒性至關(guān)重要。順鉑造成腎毒性的主要原因是順鉑藥物經(jīng)腎小管轉(zhuǎn)運(yùn)，腎臟內(nèi)藥物濃度較其他器官高，順鉑中氯離子可造成腎小管壞死[7]。有機(jī)陽(yáng)離子轉(zhuǎn)運(yùn)體2（OCT2）是分布在腎小管中的陽(yáng)離子轉(zhuǎn)運(yùn)體，與順鉑的轉(zhuǎn)運(yùn)高度相關(guān)，而存在于腫瘤細(xì)胞中的多藥耐藥相關(guān)蛋白2（MRP2）可排出順鉑藥物，造成腫瘤耐藥性[8-9]。提示這2種通路是改進(jìn)順鉑療效、降低腎毒性的關(guān)鍵。近年來(lái)，眾多研究發(fā)現(xiàn)中藥聯(lián)合順鉑具有增效減毒作用[10]。加味生脈飲由《備急千金要方》中經(jīng)典方劑生脈飲改進(jìn)而來(lái)，具有活血益氣的功效，已有研究發(fā)現(xiàn)，加味生脈飲可抑制肺部腫瘤細(xì)胞的增殖，具有抗癌功效[11]。因此，本研究基于OCT2/MRP2 信號(hào)通路探討加味生脈飲對(duì)Lewis 肺癌小鼠順鉑化療的增效減毒機(jī)制，以期拓展順鉑的臨床應(yīng)用，現(xiàn)將研究結(jié)果報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 動(dòng)物與細(xì)胞株28只6 ～8周SPF級(jí)雄性BALB/c小鼠，體質(zhì)量17 ～23 g，購(gòu)自北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司，動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào)：SCXK（京）2016-0006。此次實(shí)驗(yàn)獲得黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物管理和使用委員會(huì)審核（倫理批號(hào)：ZYY2019-01-0856）。小鼠Lewis 肺癌細(xì)胞株（LLC），購(gòu)自中國(guó)科學(xué)院細(xì)胞庫(kù)。

1. 2 藥物及制備加味生脈飲，由生曬參、麥冬、五味子、蜂房、地龍組成，各生藥飲片，由黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)附屬第一醫(yī)院中藥房提供，將生曬參、麥冬、五味子、蜂房、地龍按3∶6∶2∶2∶3的比例常規(guī)方法煎煮，藥液過(guò)濾濃縮成3 g/mL 后放置于4 ℃冰箱備用。順鉑注射液（齊魯制藥有限公司，生產(chǎn)批號(hào)：1W2A1301004B，規(guī)格：50 mg/50 mL），用生理鹽水稀釋成3 mg/kg，置于-20 ℃冰箱備用。

1. 3 試劑與儀器DMEM 培養(yǎng)基（上海源培生物科技公司）；胎牛血清和胰蛋白酶（Lonsera 公司）；辣根過(guò)氧化物酶（HRP）標(biāo)記山羊抗兔IgG（碧云天生物技術(shù)有限公司）；GAPDH 兔單克隆抗體，OCT2、MRP2 兔多克隆抗體（美國(guó)Abcam 公司）；肌酐（Cr）、尿素氮（BUN）測(cè)定試劑盒（武漢默沙克生物科技有限公司）。KBX41 電子顯微鏡（日本奧林巴斯公司）；ELx800 酶標(biāo)儀（美國(guó)Bio-Tek 公司）；低溫冷凍離心機(jī)（杭州億恒科技有限公司）；DYY-Ⅲ蛋白電泳儀、DYCZ-40D 轉(zhuǎn)膜儀（北京六一生物科技）；高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜（HPLC-MS/MS）由Agilent1200 系列高效液相色譜儀（美國(guó)安捷倫公司）和ABAPI4000Q型質(zhì)譜儀（美國(guó)AB公司）組成。

1. 4 Lewis 肺癌小鼠模型構(gòu)建凍存LLC 細(xì)胞于37 ℃復(fù)蘇后，置于DMEM 培養(yǎng)液（含10%胎牛血清）中，在37 ℃、5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。細(xì)胞培養(yǎng)15 ～20 代，取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞，用胰蛋白酶消化，配制成1 × 106個(gè)/mL 的細(xì)胞懸液。將0.2 mL細(xì)胞懸液接種在小鼠腋窩皮下，接種后每日觀察小鼠皮下腫瘤大小，當(dāng)腫瘤體積≥50 mm3時(shí)即為模型構(gòu)建成功[腫瘤體積（mm3）=長(zhǎng)直徑（mm）×短直徑（mm）2×0.5]。

1.5 分組與給藥將28只模型構(gòu)建成功的小鼠隨機(jī)分為4組，分別為對(duì)照組、順鉑組、聯(lián)合組、生脈飲組，每組7只。順鉑組與聯(lián)合組隔天腹腔注射一次3 mg/kg 順鉑注射液，對(duì)照組與生脈飲組同時(shí)間腹腔注射同體積生理鹽水；聯(lián)合組與生脈飲組使用灌胃方式注入455 mg/kg（根據(jù)臨床用量換算得出，成人每日用量約為0.45 g/kg）的加味生脈飲，1 次/d，對(duì)照組與順鉑組注入同體積純凈水。連續(xù)給藥14 d。

1.6 觀察指標(biāo)與方法

1. 6. 1 Lewis 肺癌小鼠體質(zhì)量、狀態(tài)及腫瘤生長(zhǎng)情況 開始給藥前及給藥結(jié)束后測(cè)定小鼠體質(zhì)量，觀察小鼠狀態(tài)；給藥期間隔天測(cè)定小鼠腫瘤體積。給藥結(jié)束后處死小鼠，剝離腫瘤組織稱質(zhì)量。

1.6.2 Lewis肺癌小鼠組織病理學(xué) 將小鼠腫瘤組織及腎臟組織切片，固定于4%的甲醛溶液中，脫水、包埋、制片，進(jìn)行HE 染色，并在顯微鏡下觀察拍照。

1. 6. 3 Lewis 肺癌小鼠血清BUN、Cr 濃度 給藥結(jié)束后取小鼠血液，5424R型高速冷凍離心機(jī)離心得血清，使用Cr 測(cè)定試劑盒（微板法）、BUN 測(cè)定試劑盒（脲酶法）按照說(shuō)明書指導(dǎo)，使用ELx800 酶標(biāo)儀測(cè)定血清BUN、Cr濃度。

1.6.4 Lewis肺癌小鼠OCT2、MRP2蛋白表達(dá)

1. 6. 4. 1 免疫組織化學(xué)（IHC）分析 小鼠腫瘤組織及腎臟組織常規(guī)固定制片后進(jìn)行IHC 染色，腫瘤組織切片使用MRP2（1∶500）抗體孵育、腎臟組織用OCT2（1∶200）抗體孵育，SP 法顯色，顯色后應(yīng)用顯微鏡觀察拍照。

1.6.4.2 Western Blot 蛋白分析 將小鼠腫瘤組織與腎臟組織分別用液氮研磨，與裂解液（PMSF∶RIPA=1∶100）混合均勻，并在4 ℃離心（轉(zhuǎn)速12 000 r/min，10 min，離心半徑8 cm），取上清液加入十二烷基硫酸鈉（SDS）-聚丙烯酰氨凝膠電泳（PAGE）緩沖液，煮沸后放冷。樣品經(jīng)SDS-PAGE 凝膠電泳分離蛋白組分，使用PVDF 膜轉(zhuǎn)膜，以5%脫脂奶粉封閉2 h，4 ℃孵育相應(yīng)一抗（1∶1 000）過(guò)夜，洗膜，次日室溫孵育二抗（1∶10 000）1 h，洗膜，顯影。應(yīng)用ImageJ 軟件掃描蛋白條帶進(jìn)行灰度值分析。以目的條帶與內(nèi)參GAPDH 條帶灰度值比值表示目的蛋白的相對(duì)表達(dá)量。

1.6.5 HPLC-MS/MS 法測(cè)定順鉑含量 ①待測(cè)液配制：腫瘤組織和腎臟組織分別與生理鹽水以1∶10 的比例混合研磨，離心（離心參數(shù)同“1.6.4.2”項(xiàng)）后取上清液加入2 倍甲醇，再次離心后取上清液用0.22 μm 濾膜過(guò)濾。②色譜參數(shù)：色譜柱-Agilent SB C18（150 mm × 2.1 mm × 3.5 μm）；流動(dòng)相（A：0.1%甲酸；B：乙腈）；梯度洗脫，流速0.30 mL/min。③質(zhì)譜參數(shù)：質(zhì)譜離子化模式，正離子，電噴霧離子化源；檢測(cè)方式，多反應(yīng)監(jiān)測(cè)；母離子301.2，m/，z，子離子為284.2，m/，z和88.9，m/，z；離子源溫度550 ℃。方法學(xué)驗(yàn)證符合標(biāo)準(zhǔn)。

1. 7 統(tǒng)計(jì)方法采用SPSS 21.0 統(tǒng)計(jì)軟件處理數(shù)據(jù)，計(jì)量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，多組間比較采用單因素方差分析，進(jìn)一步兩兩比較采用SNK-，q檢驗(yàn)，以，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2. 1 各組Lewis 肺癌小鼠狀態(tài)及體質(zhì)量比較對(duì)照組和順鉑組小鼠給藥14 d 后均有脫毛、攝食量減少、活動(dòng)量減少、反應(yīng)遲鈍等現(xiàn)象；生脈飲組和聯(lián)合組小鼠毛發(fā)較為光滑，攝食量略有減少，反應(yīng)較靈敏，活動(dòng)量正常，整體狀態(tài)優(yōu)于對(duì)照組和順鉑組。

干預(yù)14 d 后，各組小鼠體質(zhì)量均有下降，順鉑組下降幅度最大（P＜0.05），順鉑組體質(zhì)量變化與聯(lián)合組、生脈飲組有顯著性差異（P＜0.05），聯(lián)合組、生脈飲組體質(zhì)量變化與對(duì)照組有顯著性差異（P＜0.05）。見表1。

表1 各組Lewis肺癌小鼠體質(zhì)量變化比較Table 1 Comparison of changes in body mass among each group of Lewis lung cancer mice（±s，g）

表1 各組Lewis肺癌小鼠體質(zhì)量變化比較Table 1 Comparison of changes in body mass among each group of Lewis lung cancer mice（±s，g）

注：①，P＜0.05，與對(duì)照組比較；②，P＜0.05，與順鉑組比較；③，P＜0.05，與同組給藥第0天比較

體質(zhì)量變化1.45±0.47 2.38±1.23 0.20±0.65①②0.48±0.97①②8.952＜0.001組別對(duì)照組順鉑組聯(lián)合組生脈飲組，F(xiàn)值，P值鼠數(shù)/只7 7 7 7體質(zhì)量給藥后第0天20.96±1.39 20.15±1.15 19.86±1.31 20.68±1.27 1.059 0.385給藥后第14天19.50±1.30 17.76±1.13①③19.66±1.48①20.20±1.15②4.810 0.009

2.2 各組Lewis肺癌小鼠腫瘤生長(zhǎng)情況比較

2.2.1 腫瘤體積變化 隨干預(yù)天數(shù)增加，結(jié)果顯示：生脈飲組和對(duì)照組腫瘤體積不斷增加；順鉑組腫瘤體積先下降后增加，至干預(yù)結(jié)束時(shí)腫瘤體積小于生脈飲組和對(duì)照組（P＜0.05）；聯(lián)合組腫瘤體積呈下降趨勢(shì)，干預(yù)結(jié)束時(shí)腫瘤體積顯著小于生脈飲組、對(duì)照組和順鉑組（P＜0.05）。見圖1。

圖1 各組Lewis肺癌小鼠腫瘤體積變化比較（±s）Figure 1 Comparison of changes in tumour volume among each group of Lewis lung cancer mice（±s）

2.2.2 腫瘤質(zhì)量 至干預(yù)結(jié)束時(shí)，順鉑組、聯(lián)合組腫瘤質(zhì)量顯著小于生脈飲組和對(duì)照組（P＜0.001），聯(lián)合組腫瘤質(zhì)量顯著小于順鉑組（P＜0.001）。見圖2。

圖2 各組Lewis肺癌小鼠腫瘤質(zhì)量比較（±s）Figure 2 Comparison of tumour mass among each group of Lewis lung cancer mice（±s）

2.3 各組Lewis肺癌小鼠組織病理學(xué)變化比較

2.3.1 腫瘤組織病理學(xué)變化 對(duì)照組、生脈飲組腫瘤細(xì)胞結(jié)構(gòu)清晰，細(xì)胞形態(tài)正常；順鉑組、聯(lián)合組可見腫瘤細(xì)胞壞死，腫瘤細(xì)胞邊緣模糊，聯(lián)合組腫瘤細(xì)胞壞死面積更大。見圖3。

圖3 各組Lewis肺癌小鼠腫瘤組織病理學(xué)變化比較（HE染色，×400）Figure 3 Comparison of histopathological changes in tumors among each group of Lewis lung cancer mice（HE staining，×400）

2.3.2 腎組織病理學(xué)變化 生脈飲組、對(duì)照組腎組織細(xì)胞形態(tài)正常；聯(lián)合組腎組織細(xì)胞損傷較輕，無(wú)明顯病變；順鉑組腎組織明顯病變，腎小管上皮細(xì)胞邊緣模糊。見圖4。

圖4 各組Lewis肺癌小鼠腎組織病理學(xué)變化比較（HE染色，×400）Figure 4 Comparison of histopathological changes in renal tissues among each group of Lewis lung cancer mice（HE staining，×400）

2.4 各組Lewis肺癌小鼠血清BUN、Cr濃度比較順鉑組小鼠BUN、Cr 水平顯著高于其他3 組（P＜0.05），聯(lián)合組、生脈飲組、對(duì)照組組間BUN、Cr水平無(wú)顯著性差異（P＞0.05），見表2。

表2 各組Lewis肺癌小鼠血清BUN、Cr濃度比較Table 2 Comparison of serum BUN and Cr concentrations among each group of Lewis lung cancer mice（±s，μmol·L-1）

表2 各組Lewis肺癌小鼠血清BUN、Cr濃度比較Table 2 Comparison of serum BUN and Cr concentrations among each group of Lewis lung cancer mice（±s，μmol·L-1）

注：①，P＜0.05，與順鉑組比較

組別對(duì)照組順鉑組聯(lián)合組生脈飲組，F(xiàn)值，P值Cr 35.47±5.41①57.28±6.15 37.34±5.29①31.65±5.93①28.359＜0.001鼠數(shù)/只7777 BUN 2.41±0.53①3.94±0.97 2.36±0.72①2.45±0.61①7.895＜0.001

2. 5 各組Lewis 肺癌小鼠OCT2、MRP2 蛋白表達(dá)比較

2. 5. 1 腎組織OCT2 表達(dá)情況 IHC 染色結(jié)果顯示，順鉑組、聯(lián)合組及生脈飲組OCT2 表達(dá)水平較對(duì)照組顯著升高（P＜0.05），聯(lián)合組與生脈飲組OCT2 表達(dá)水平較順鉑組顯著降低（P＜0.05）。見圖5 ～圖6。

圖5 各組Lewis肺癌小鼠腎組織OCT2免疫組織化學(xué)（IHC）染色結(jié)果（×400）Figure 5 OCT2 immunohistochemical（IHC）staining results of kidney tissues in each group of Lewis lung cancer mice（×400）

圖6 各組Lewis肺癌小鼠腎組織OCT2 免疫組織化學(xué)（IHC）陽(yáng)性面積率比較（±s）Figure 6 Comparison of OCT2 immunohistochemistry（IHC）positive area rate of kidney tissues among each group of Lewis lung cancer mice（±s）

Western Blot檢測(cè)結(jié)果顯示，順鉑組OCT2表達(dá)水平較對(duì)照組顯著升高（P＜0.001），聯(lián)合組與生脈飲組OCT2 表達(dá)水平較順鉑組顯著降低（P＜0.01）。見圖7 ～圖8。

圖7 各組Lewis肺癌小鼠腎組織OCT2的Western Blot條帶圖Figure 7 Western Blot strip chart of renal tissue OCT2 in each group of Lewis lung cancer mice

圖8 各組Lewis肺癌小鼠腎組織OCT2相對(duì)蛋白表達(dá)量比較（±s）Figure 8 Comparison of relative protein expression of OCT2 in kidney tissues among each group of Lewis lung cancer mice（±s）

2. 5. 2 腫瘤組織MRP2 表達(dá)情況 IHC 染色結(jié)果顯示，順鉑組MRP2表達(dá)水平較對(duì)照組顯著升高（P＜0.05），聯(lián)合組與生脈飲組MRP2 表達(dá)水平較順鉑組顯著降低（P＜0.05）。見圖9 ～圖10。

圖9 各組Lewis肺癌小鼠腫瘤組織MRP2免疫組織化學(xué)（IHC）染色結(jié)果（×400）Figure 9 MRP2 immunohistochemical（IHC）staining results of tumour tissues in each group of Lewis lung cancer mice（×400）

圖10 各組Lewis肺癌小鼠腫瘤組織MRP2免疫組織化學(xué)（IHC）陽(yáng)性面積率比較（±s）Figure 10 Comparison of OCT2 immunohistochemistry（IHC）postive area rate of tumour tissues among each group of Lewis lung cancer mice（±s）

Western Blot 檢測(cè)結(jié)果顯示，順鉑組MRP2 表達(dá)水平較對(duì)照組顯著升高（P＜0.001），聯(lián)合組與生脈飲組MRP2 表達(dá)水平較順鉑組顯著降低（P＜0.001）。見圖11 ～圖12。

圖11 各組Lewis肺癌小鼠腫瘤組織MRP2的Western Blot條帶圖Figure 11 Western Blot strip chart of tumour tissue MRP2 in each group of Lewis lung cancer mice

圖12 各組Lewis肺癌小鼠腫瘤組織MRP2相對(duì)蛋白表達(dá)量比較（±s）Figure 12 Comparison of relative protein expression of MRP2 in tumour tissues among each group of Lewis lung cancer mice（±s）

2. 6 各組Lewis 肺癌小鼠腫瘤組織和腎臟組織中順鉑含量比較聯(lián)合組腫瘤組織中順鉑含量顯著高于順鉑組（P＜0.01），聯(lián)合組腎臟組織中順鉑含量顯著低于順鉑組（P＜0.001），見圖13 ～圖14。

圖13 2組Lewis肺癌小鼠腫瘤組織中順鉑含量比較（±s）Figure 13 Comparison of cisplatin content in tumor tissues between the two groups of Lewis lung cancer mice（±s）

圖14 2組Lewis肺癌小鼠腎臟組織中順鉑含量比較（±s）Figure 14 Comparison of cisplatin content in kidney tissues between the two groups of Lewis lung cancer mice（±s）

3 討論

大量研究發(fā)現(xiàn)，中西醫(yī)結(jié)合治療腫瘤療效確切，可降低西藥帶來(lái)的毒副作用。因此，中西醫(yī)結(jié)合逐漸成為抗癌治療的主要方式。肺癌患者經(jīng)化療后，機(jī)體受到損害，出現(xiàn)骨髓抑制、肝腎毒素堆積等情況，在中醫(yī)理念中為陰傷證候，因此需要補(bǔ)陰益腎，滋養(yǎng)氣血[12]。加味生脈飲方中：生曬參大補(bǔ)元?dú)猓畸湺?、五味子滋陰補(bǔ)氣、清熱潤(rùn)肺；相比原方增加蜂房、地龍2味藥物。中醫(yī)認(rèn)為蟲類藥物在治療“癌毒”方面具有獨(dú)特的優(yōu)勢(shì)，癌毒與濕、瘀等相互作用，形成腫瘤，且久病入絡(luò)，蟲類藥物為血肉有情之品，具備走竄之性，活血通絡(luò)的性質(zhì)優(yōu)于草本和礦物藥，且癌癥為消耗性疾病，化療進(jìn)一步消耗患者元?dú)?，二者可同時(shí)補(bǔ)虛扶弱，增益正氣，減輕化療毒性[13]。已有研究[14]證明，生脈飲可增加化療藥物的抗腫瘤作用，并降低化療造成的毒性反應(yīng)?，F(xiàn)代藥理學(xué)研究[15-18]也證明，加味生脈飲藥材中皂苷等成分可抑制腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)轉(zhuǎn)移，蜂房中黃酮類、萜類、甾類化學(xué)物質(zhì)具有增強(qiáng)免疫力的作用，而地龍中多肽類組分對(duì)腎臟損害具有改善作用，具有較高的潛力。因此，本研究中構(gòu)建了Lewis 肺癌小鼠模型，考察加味生脈飲與順鉑聯(lián)用的干預(yù)作用，闡明加味生脈飲對(duì)肺癌順鉑化療的增效減毒機(jī)制。

鉑類藥物是抗癌藥物的主流，但涉及信號(hào)通路眾多，缺少選擇性易造成腫瘤細(xì)胞的耐藥性和腎臟毒性，因此構(gòu)建低毒、高效的治療方案仍是研究熱點(diǎn)[19]。趙星雨等[20]研究表明，生脈飲聯(lián)合順鉑能抑制腫瘤生長(zhǎng)，延長(zhǎng)機(jī)體存活時(shí)間。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，給予加味生脈飲小鼠精神狀態(tài)、生理活動(dòng)優(yōu)于未給予加味生脈飲小鼠，這可能與加味生脈飲能夠改善機(jī)體營(yíng)養(yǎng)狀況[21]有關(guān)。Lewis 肺癌小鼠至給藥結(jié)束后，對(duì)照組腫瘤體積、質(zhì)量與生脈飲組無(wú)顯著性差異，說(shuō)明單用加味生脈飲無(wú)法取得理想的抗癌療效，而聯(lián)合用藥組腫瘤體積、質(zhì)量顯著低于順鉑組，說(shuō)明順鉑與加味生脈飲聯(lián)用可以增進(jìn)療效，腫瘤組織病理學(xué)結(jié)果也證明了這一點(diǎn)。腎臟病理學(xué)結(jié)果證明，順鉑治療加用加味生脈飲可有效減少順鉑對(duì)腎臟組織的損害。以上結(jié)果說(shuō)明，二者聯(lián)用比單用順鉑有增效減毒的作用。

本研究結(jié)果顯示，順鉑組腎臟組織中OCT2 高度表達(dá)，腫瘤組織中MRP2高度表達(dá)。藥物進(jìn)入機(jī)體需要跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)，而大部分藥物轉(zhuǎn)運(yùn)需要靠轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白介導(dǎo)，腎臟作為主要的排泄與維持機(jī)體平衡的器官，具有多種藥物轉(zhuǎn)運(yùn)體[22]。有機(jī)陽(yáng)離子轉(zhuǎn)運(yùn)體（OCTs）是腎臟中最重要的藥物轉(zhuǎn)運(yùn)體之一，物質(zhì)將通過(guò)OCTs 進(jìn)入腎臟組織。OCT2 是OCTs 體系在腎臟中最主要的轉(zhuǎn)運(yùn)體，主要位于腎臟近端小管處，多種藥物主要通過(guò)OCT2 輸入腎小管細(xì)胞[23]。順鉑主要通過(guò)OCT2 轉(zhuǎn)運(yùn)入腎臟，因此順鉑與腎臟的高親和力可能與OCT2 通路高度相關(guān)，OCT2 的高表達(dá)使順鉑來(lái)不及排出，在腎臟內(nèi)高度蓄積引起急性腎損傷[24]。既往研究[25]表明，當(dāng)抑制OCT2 通路時(shí)，腎臟藥物轉(zhuǎn)運(yùn)能力下降，順鉑的腎毒性降低。抑制腎臟組織中OCT2 通路，可降低順鉑的腎毒性，達(dá)到減毒的效果[26]。本研究中，聯(lián)合組中OCT2 蛋白表達(dá)相比順鉑組被明顯抑制，說(shuō)明加味生脈飲可通過(guò)抑制OCT2 通路，降低腎臟對(duì)順鉑的攝取，從而減少順鉑對(duì)腎臟的損傷。此外，聯(lián)用加味生脈飲后的小鼠血清BUN、Cr 濃度相比順鉑組明顯降低，也證明加味生脈飲可保護(hù)腎臟功能。MRP2 屬于ATP 結(jié)合盒轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白，主要介導(dǎo)底物排出細(xì)胞。MRP2 在腫瘤組織中大量存在，可消耗ATP 水解的能量將進(jìn)入腫瘤細(xì)胞的藥物轉(zhuǎn)運(yùn)至體外，研究[27-28]表明，MRP2 底物主要為鉑類、長(zhǎng)春新堿類藥物，可以促成腫瘤細(xì)胞對(duì)多種抗癌藥物的耐藥性。且抗癌藥物的大劑量、長(zhǎng)時(shí)間運(yùn)用會(huì)誘導(dǎo)MRP2的高表達(dá)，造成藥物生物利用度降低[29]。本研究結(jié)果顯示，順鉑組MRP2 表達(dá)量相比對(duì)照組顯著增加，說(shuō)明給予順鉑治療后，腫瘤細(xì)胞中MRP2 表達(dá)增加，耐藥性提高。聯(lián)合組MRP2表達(dá)量相比順鉑組明顯降低，說(shuō)明加味生脈飲也可抑制MRP2表達(dá)量，這可能是聯(lián)合組抗腫瘤療效更佳的原因。本研究中，聯(lián)合組腫瘤組織中順鉑含量明顯高于順鉑組，聯(lián)合組腎臟組織中順鉑含量明顯低于順鉑組，說(shuō)明加味生脈飲可能通過(guò)選擇性影響OCT2 和MRP2 通路，增加了腫瘤組織的順鉑濃度，減少了腎臟組織的順鉑濃度，從而達(dá)到減毒增效的作用。

綜上所述，加味生脈飲與順鉑聯(lián)用可改善肺癌治療效果，OCT2/MRP2 信號(hào)通路在順鉑腎臟毒性與耐藥性中起重要的調(diào)控作用，加味生脈飲可能抑制腎臟中OCT2 與腫瘤細(xì)胞中MRP2 的蛋白表達(dá)，從而降低順鉑治療的腎臟毒性，提高順鉑的抗腫瘤效果。本研究為加味生脈飲臨床輔助治療肺癌提供了理論依據(jù)，但具體機(jī)制仍待進(jìn)一步深入研究。