彭瀟波 侯代松 王小麗 黃仲義

（1. 深圳萬和制藥有限公司 廣東深圳 518107；2. 上海市靜安區(qū)中心醫(yī)院 上海 200040）

鹽酸坦索羅辛緩釋膠囊是一種腎上腺素α1受體阻滯劑，可松弛前列腺和膀胱頸部的平滑肌，促進(jìn)膀胱排空，改善良性前列腺增生癥所致的排尿困難等癥狀[1-2]。在40歲以上的男性中，前列腺增生的發(fā)生率為15%～60%；從40 歲到79 歲，其患病率每10 年增加10%[3-4]。臨床上，鹽酸坦索羅辛緩釋膠囊還可以治療原發(fā)性早泄[5-6]、泌尿系統(tǒng)結(jié)石[7]以及預(yù)防術(shù)后尿潴留[8]。

我們采用已通過或視同通過一致性評價的鹽酸坦索羅辛緩釋膠囊進(jìn)行了釋放曲線測定和對比?？疾炝? 個廠家（1 個原研廠家，5 個仿制藥廠家）共8 批樣品在4種不同釋放介質(zhì)（pH 1.2 鹽酸溶液、pH 4.0 磷酸鹽緩沖溶液、pH 6.8 磷酸鹽緩沖溶液和水）中的釋放曲線，以評價不同廠家產(chǎn)品體外釋放行為的差異，為其質(zhì)量控制及進(jìn)一步的療效評價提供參考。

1 材料和方法

1.1 儀器

Sotax AT 7 Smart 離線全自動溶出儀（瑞士Sotax公司）；BSA224S 型電子天平（德國賽多利斯公司）；MS105 型電子天平（梅特勒托利多有限公司）；e2695 型高效液相色譜儀（美國沃特斯公司）。

1.2 試藥

鹽酸坦索羅辛對照品（批號100688-201102，中國食品藥品檢定研究院）、參比制劑[批號W4001，安斯泰來制藥（中國）有限公司]、市售產(chǎn)品1 ～4（分別為A、B、C、D 企業(yè)產(chǎn)品）、自研產(chǎn)品（批號190801、190802、190901，深圳萬和制藥有限公司）；乙腈為色譜純，其余試劑均為市售分析純。

1.3 分析方法

1.3.1 色譜條件

采用Diamonsil C18色譜柱（4.6 mm×150 mm，5 μm)；流動相為乙腈-高氯酸鹽溶液（取高氯酸8.7 mL 和氫氧化鈉3 g，加水1 900 mL 溶解，用1 mol/L 的氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH 至2.0，加水至2 000 mL）(34 ∶66)；流速1 mL/min；柱溫40 ℃；檢測波長225 nm；進(jìn)樣量100 μL。

1.3.2 溶液的配制

1）pH 1.2 鹽酸溶液 稱取氯化鈉2.0 g，量取鹽酸7 mL，加水至1 000 mL，并調(diào)pH 至1.2。

2）pH 4.0 磷酸鹽緩沖液 稱取十二水合磷酸氫二鈉6.715 g，一水合檸檬酸3.282 5 g，加水1 L 溶解，混勻，用0.025 mol/L 檸檬酸溶液調(diào)pH 至4.0。

3）pH 6.8 磷酸鹽緩沖液 稱取磷酸二氫鉀6.8 g，加水882 mL 溶解，加入0.2 mol/L 氫氧化鈉118 mL 溶液，混勻即得。

4）對照品溶液 精密稱量鹽酸坦索羅辛對照品（于105 ℃干燥2 h）25 mg，置50 mL 容量瓶中，加水-乙腈（7 ∶3）溶液溶解并稀釋成0.5 mg/mL 的溶液，搖勻，量取適量加pH 1.2 鹽酸溶液稀釋成0.4 μg/mL 的對照品溶液。

1.3.3 線性范圍

1）pH 1.2 鹽酸線性溶液 精密量取對照品溶液0.2、0.4、0.8、1.2、1.6、2.0 mL，分別用pH 1.2 的鹽酸溶液稀釋至25 mL，搖勻，進(jìn)樣分析。以濃度(x)為橫坐標(biāo)，以峰面積(y)為縱坐標(biāo)作線性回歸處理，線性方程為y=228 544.28x-781.67，r=1.000（n=6）。

2）其他3 種釋放介質(zhì)線性溶液 精密移取對照品溶液1.0、2.0、2.0、3.0、2.0 mL，分別置于250、100、50、50、25 mL 容量瓶中，分別用pH 6.8 磷酸鹽緩沖液、pH 4.0 磷酸鹽緩沖液以及水3 種釋放介質(zhì)稀釋定容至刻度，進(jìn)樣分析。以濃度(x)為橫坐標(biāo)，以峰面積(y)為縱坐標(biāo)，作線性回歸，得回歸方程。在pH 6.8 磷酸鹽緩沖液中y=207.81x+0.216 3，r=0.999 9（n=5）；在pH 4.0 磷酸鹽緩沖液中y=214.933 3 x+0.231 8，r=1.000 0（n=5）；在水中y=200.733 9 x+0.528 5，r=0.999 1（n=5）。

1.3.4 累計釋放量測定方法

根據(jù)《普通口服固體制劑溶出曲線測定與比較指導(dǎo)原則》[9]及前期在各介質(zhì)中的釋放量檢測結(jié)果，確定了樣品在各介質(zhì)中的溶出結(jié)束時間點(diǎn)。pH 1.2 鹽酸溶液中為2 h，pH 6.8 磷酸鹽緩沖液中為6 h，pH 4.0 磷酸鹽緩沖液和水中為24 h。

取樣品12 粒，按中國藥典2020 年版（四部）通則0931 第二法（槳法）操作，轉(zhuǎn)速50 r/ min，溫度37 ℃，溶出介質(zhì)體積900 mL，自動取樣，取樣體積為10 mL，同時，補(bǔ)充37 ℃的相應(yīng)釋放介質(zhì)10 mL。進(jìn)樣測定，記錄色譜圖。按外標(biāo)法以峰面積計算每粒的釋放量。

1.3.5 不同釋放介質(zhì)中相似因子比較

根據(jù)國家藥品審評中心發(fā)布的《普通口服固體制劑溶出曲線測定與比較指導(dǎo)原則》[9]，溶出曲線相似性的比較，多采用非模型依賴法中的相似因子（f2）法。計算公式如下：

Rt為t 時間參比樣品平均溶出量；Tt為t 時間受試樣品平均溶出量；n為取樣時間點(diǎn)的個數(shù)。

采用f2法比較釋放曲線相似性時，一般情況下，當(dāng)兩條釋放曲線f2數(shù)值≥50 時，可認(rèn)為釋放曲線相似；f2越趨于100，釋放曲線相似性越好。

2 結(jié)果

2.1 已上市仿制藥在不同介質(zhì)中的釋放量

對目前已通過一致性評價或視同通過一致性評價的4 個廠家產(chǎn)品進(jìn)行了4 種介質(zhì)中的釋放量測定，結(jié)果顯示，各企業(yè)產(chǎn)品在pH 6.8 磷酸鹽緩沖液介質(zhì)中的釋放曲線和參比制劑相似，在其他3 種介質(zhì)中，A 企業(yè)產(chǎn)品的釋放曲線和參比制劑相似，而B、C、D 企業(yè)產(chǎn)品在某一種或者2 種介質(zhì)中的釋放曲線和參比制劑存在差異（圖1）。

圖1 4企業(yè)產(chǎn)品與參比制劑在不同介質(zhì)中的釋放量

2.2 自研產(chǎn)品在不同介質(zhì)中的釋放量

選取了已通過生物等效實(shí)驗(yàn)（BE）的自研商業(yè)規(guī)模的3 批產(chǎn)品（批號分別為190801、190802、190901）進(jìn)行釋放量測定，結(jié)果顯示，他們在4 種介質(zhì)中的釋放曲線與參比制劑相似（圖2）。

圖2 自研產(chǎn)品與參比制劑在不同介質(zhì)中的釋放量

2.3 不同生產(chǎn)廠家與參比制劑在不同釋放介質(zhì)中相似因子

采用f2法比較釋放曲線相似性，結(jié)果顯示，A 企業(yè)生產(chǎn)的產(chǎn)品在4 種介質(zhì)中均與參比制劑相似（f2≥50），在水中的f2剛好50。C 企業(yè)生產(chǎn)的產(chǎn)品在除水以外的3種介質(zhì)中的f2與參比制劑相似。B 和D 企業(yè)產(chǎn)品僅在2種介質(zhì)（pH 6.8 磷酸鹽緩沖液和pH 1.2 鹽酸溶液）中的f2與參比制劑相似。此外，B 和C 企業(yè)產(chǎn)品雖然在pH 1.2 鹽酸溶液中的f2顯示相似，但其2 h 累計釋放量明顯高于參比制劑（圖2）。深圳萬和制藥有限公司連續(xù)生產(chǎn)的3 批產(chǎn)品，在4 種介質(zhì)中的釋放曲線與參比制劑相似，且f2較高。不同生產(chǎn)廠家產(chǎn)品與參比制劑在不同釋放介質(zhì)中f2結(jié)果見表1。

表1 不同廠家產(chǎn)品和參比制劑在不同釋放介質(zhì)中的f2比較

3 討論

日本醫(yī)藥品醫(yī)療器械管理局（PMDA）在日本的一致性評價過程中提出了在4 種不同溶出介質(zhì)中根據(jù)溶出行為繪制溶出曲線，并計算溶出度f2，以此來評價普通口服固體制劑仿制藥與原研藥是否具有相似的生物利用度[10]。國內(nèi)有學(xué)者也認(rèn)為溶出度試驗(yàn)是評價口服固體制劑內(nèi)在質(zhì)量的一種科學(xué)手段和方法[11-13]?？捎糜谂袛嗨幤敷w內(nèi)生物利用度的高低、是否生物等效，也可以揭示各制劑工藝的差別。緩控釋制劑的釋放曲線在一定程度上能體現(xiàn)制劑在患者體內(nèi)的釋放情況以及血藥濃度，體外的釋放曲線可能和體內(nèi)的血藥濃度呈一定的相關(guān)性。有一項臨床研究報道，鹽酸坦索羅辛的治療效果可能與谷濃度而不是峰濃度或總暴露量更相關(guān)[14]。因此，鹽酸坦索羅辛緩釋膠囊釋放曲線的差異與臨床療效的相關(guān)性有待進(jìn)一步探索。

深圳萬和制藥有限公司連續(xù)生產(chǎn)的3 批產(chǎn)品，在4種介質(zhì)中的釋放曲線均與參比制劑相似，且f2較高，說明其釋藥機(jī)制與參比制劑相同。A、B、C 與D 企業(yè)生產(chǎn)的產(chǎn)品為市售的產(chǎn)品，A 企業(yè)生產(chǎn)的產(chǎn)品在4 種介質(zhì)中的釋放曲線均與參比制劑相似，說明其釋藥機(jī)制與參比制劑相同；B、C 與D 企業(yè)生產(chǎn)的產(chǎn)品在某些介質(zhì)中釋放曲線與參比制劑存在差異。這些差異可能是其釋藥機(jī)制與參比制劑存在不相同所致。

通過以上對比實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，不同廠家鹽酸坦索羅辛緩釋膠囊的釋放行為有很大差異，繼續(xù)探索釋放曲線與臨床療效的相關(guān)性極為必要。