呂 暢,周利明

(華北理工大學 生命科學學院,河北 唐山 063210)

胃癌是世界上最重要的癌癥之一,根據全球癌癥統(tǒng)計數(shù)據顯示,截至2020年胃癌在全球范圍發(fā)病率排名第五,死亡率排名第三[1]。胃癌的發(fā)生是由多因素影響的復雜過程,其詳細的發(fā)病機制仍在探索,目前越來越多的研究發(fā)現(xiàn)宿主遺傳易感性如易感基因的單核苷酸多態(tài)性可能在胃癌發(fā)生中起重要作用[2-3]。

腫瘤壞死因子α (tumor necrosis factor-α, TNF-α)是一種多功能促炎細胞因子,參與分化、凋亡、脂質代謝等生物學過程,在慢性炎癥和惡性疾病的發(fā)生發(fā)展中具有重要作用。TNF-α基因啟動子區(qū)域-308位點的多態(tài)性目前研究較為廣泛,該位點在啟動子區(qū)可能發(fā)生G-A轉換,這種單核苷酸多態(tài)性變化可能影響基因的轉錄水平,進而影響疾病的發(fā)病機制。近些年研究發(fā)現(xiàn)TNF-α-308位點多態(tài)性與炎癥性腸病 (Inflammatory Bowel Disease, IBD)、肝癌、結直腸癌等多種疾病有關[4-6]。

TNF-α-308G/A單核苷酸多態(tài)性和胃癌易感的相關性探索在國內外已經有許多試驗,研究樣本來源于不同種族、基因分型方法不同等原因使得結果存在爭議,小樣本的研究不足以提供充分的證據確定TNF-α-308單核苷酸多態(tài)性與增加胃癌發(fā)病風險的相關性。近年來,相關研究仍在更新發(fā)表,本文綜合國內外符合條件的研究進行meta分析,按照胃癌發(fā)病地區(qū),基因分型方法進行相關亞組分析,評估TNF-α-308位點多態(tài)性與胃癌之間的關聯(lián),為胃癌的發(fā)生發(fā)展,治療與預防提供依據。

1 資料與方法

1.1文獻檢索 計算機檢索Pubmed,Web of Science,Embase,Cochrane library,萬方數(shù)據和中國知網數(shù)據庫,收集有關TNF-α-308位點多態(tài)性與胃癌易感性的文章,檢索時間為各數(shù)據庫建庫到2022年6月1日。采用主題詞與自由詞相結合的方式,中文檢索:腫瘤壞死因子,TNF-α-308,胃癌,單核苷酸多態(tài)性;英文檢索術語為:(Tumor Necrosis Factor-alpha OR TNF-alpha OR TNF-α)和(Stomach Neoplasms OR gastric cancer OR stomach cancer OR gastric carcinoma)和(Polymorphisms, Genetic OR gene polymorphism OR polymorphisms OR variant OR mutation)。

1.2納入與排除標準 納入的研究符合以下標準:描述TNF-α-308基因多態(tài)性與胃癌相關性的研究;研究類型是病例-對照研究;有詳細的基因型數(shù)據。排除的標準如下:重復數(shù)據;病人確診為胃癌;信息不足導致數(shù)據提取不完整的研究;會議,書信,綜述型研究。

1.3數(shù)據提取和質量評價 由2名研究者按照如上標準篩選文獻,獨立提取資料,進行交叉核對。若存在爭議,通過討論的方式達成一致。資料提取內容包括:第一作者、發(fā)表時間、地區(qū)、基因分型方法、病例組和對照組基因型、基因分布及頻數(shù)。采用紐卡斯爾-渥太華量表(Newcastle-Ottawa Scale, NOS)評價納入研究的質量,評分范圍為0～9分,分數(shù)越高,納入的研究質量越好。

1.4統(tǒng)計學方法 用STATA 16.0進行統(tǒng)計分析。合并的OR(odds ratio,OR)值以及95%CI(Confidence Interval,CI)用于衡量TNF-α-308基因多態(tài)性與胃癌的相關性與關聯(lián)強度,通過Z檢驗確定合并OR值的顯著性,P<0.05表示TNF-α-308基因多態(tài)性與胃癌易感性顯著相關。Q檢驗和I2統(tǒng)計評估研究間的異質性,P<0.1或I2>50%,各項研究存在較大異質性,采用隨機效應模型合并總體結果;反之采用固定效應模型。對照組的哈迪-溫伯格平衡定律(Hardy-Weinberg equilibrium, HWE)通過χ2檢驗判斷。以等位、顯性、隱性、純合、雜合5種不同的遺傳模型評估TNF-α-308基因多態(tài)性與胃癌易感的相關性,并按照地區(qū)和基因型檢測方式進行亞組分析;依次剔除單個研究進行敏感性分析;Egger檢驗對發(fā)表偏倚進行評估。

2 結 果

2.1文獻檢索結果與基本特征 依照擬定的檢索策略和納入與剔除文獻標準,41篇符合條件的全文研究被納入分析[7-47],見圖1。

圖1 Meta分析文獻收集流程圖

41項研究共計7528例病例和10924例對照。種族按照地理位置分為亞洲,美洲,歐洲和非洲,其中亞洲地區(qū)涉及15項針對中國人的研究?；蚍中筒捎肦FLP、Taqman等其他方法;HWE檢驗結果顯示,10項對照組基因型偏離了HWE[8, 11, 14, 30, 32, 34, 42- 43, 45, 47];NOS質量評價結果顯示,41篇文獻偏倚風險評分均大于或者等于6。納入研究的基本特征和偏倚風險評價結果見表1。

2.2Meta分析結果 所有的遺傳模型下異質性均較大,采用隨機效應模型。Meta分析結果顯示等位,雜合,顯性模型TNF-α-308基因多態(tài)性與胃癌易感風險增加顯著相關(A vs G,OR=1.21, 95%CI:1.01～1.44; AG vs GG,OR=1.26, 95%CI: 1.07～1.49; AA+AG vs GG,OR=1.22, 95%CI: 1.00～1.47)。純合,隱性模型的差異均無統(tǒng)計學意義(AA vs GG,OR=1.23, 95%CI: 0.84～1.80; AA vs GG+AG,OR=1.21, 95%CI:0.90～1.63)。剔除10項不符合HWE平衡的研究后,結果無顯著變化。提取中國人的數(shù)據后發(fā)現(xiàn)雜合,顯性模型下該位點多態(tài)性與增加中國胃癌風險顯著相關(AG+AA vs GG,OR=1.33, 95%CI: 1.08～1.64; AG vs GG,OR=1.39, 95%CI: 1.04～1.87)。

相關研究中,以幽門螺旋桿菌陰性感染胃癌患者的基因分型數(shù)據為對照組,數(shù)據完整的研究有5篇,試驗組共計391例,對照組116例。結果顯示TNF-α-308基因多態(tài)性與增加幽門螺旋桿菌感染胃癌易感性無關(A vs G,OR=1.10, 95%CI: 0.78～1.56; AA vs GG,OR=1.10, 95%CI: 0.46～2.63; AG vs GG,OR=1.14, 95%CI: 0.70～1.86; AA+AG vs GG,OR=1.14, 95%CI: 0.71～1.83; AA vs GG+AG,OR=0.99, 95%CI: 0.46～2.12)。

2.3亞組分析結果 按照種族劃分亞組,異質性檢驗結果顯示研究間存在異質性,均采用隨機效應模型。結果顯示,在亞洲人群中,等位、雜合和顯性模型TNF-α-308基因多態(tài)性與增加胃癌風險顯著相關亞洲地區(qū)等位模型(A vs G,OR=1.29, 95%CI: 1.04～1.61; AG vs GG,OR=1.35, 95%CI:1.06～1.71; AA+AG vs GG,OR=1.36, 95%CI:1.07～1.73)。歐美洲地區(qū)在任何遺傳模型下,均未發(fā)現(xiàn)TNF-α-308基因多態(tài)性與胃癌易感性的關聯(lián)(A vs G,OR=1.15, 95%CI: 0.95～1.40;A vs G,OR=1.00, 95%CI: 0.51～1.96),而非洲地區(qū)結果與之截然相反(A vs G,OR=4.40, 95%CI: 1.96～9.9),見圖2～6。

圖2 基于不同地區(qū)對TNF-α-308多態(tài)性與胃癌易感性的森林圖(等位模型,A vs G) 注:點表示各項研究的OR值;橫線表示95%CI;底部菱形表示合并后的OR值和95%CI

圖3 基于不同地區(qū)對TNF-α-308多態(tài)性與胃癌易感性的森林圖(雜合模型,AG vs GG)

圖4 基于不同地區(qū)對TNF-α-308多態(tài)性與胃癌易感性的森林圖(顯性模型,AA+AG vs GG)

圖5 基于不同地區(qū)對TNF-α-308多態(tài)性與胃癌易感性的森林圖(純合模型,AA vs GG)

圖6 基于不同地區(qū)對TNF-α-308多態(tài)性與胃癌易感性的森林圖(隱性模型,AA vs AG+GG)

按照不同的基因分型方法劃分亞組,18項研究采用RFLP的基因分型方式,8項研究采用Taqman分型,另外還采用了DSASP、ARMSPCR、直接測序、芯片檢測等方法,相關研究偏少,將其歸為其他組,共計15項。結果顯示,用Taqman的基因分型方法的研究之間均不存在異質性,所有遺傳模型中,TNF-α-308基因多態(tài)性與增加胃癌患病風險有關(A vs G,OR=1.35, 95%CI:1.19～1.53; AA vs GG,OR=2.05, 95%CI: 1.35～3.10; AG vs GG,OR=1.29, 95%CI: 1.12～1.49; AA+AG vs GG,OR=1.34, 95%CI: 1.17～1.54; AA vs AG+GG,OR=1.35, 95%CI: 1.19～1.53)。RFLP和其他基因分型的研究亞組中異質性較大,采用隨機效應模型,等位和純合模型RFLP分型方式TNF-α-308基因多態(tài)性與增加胃癌風險存在顯著相關性(A vs G,OR=1.36, 95%CI: 1.02～1.83; AA vs GG,OR=1.72, 95%CI:1.08～2.75),其他模型和分型方式均顯示不相關。

2.4敏感性分析與發(fā)表偏倚 敏感性分析結果顯示,依次排除每項研究后合并OR值沒有實質性改變,表明meta分析的穩(wěn)定性和可靠性比較強。Egger檢驗沒有顯示任何發(fā)表偏倚的統(tǒng)計證據(A vs G,P=0.280, 95%CI: -3.05～0.91; AA vs GG,P=0.420, 95%CI: -1.721～0.738; AG vs GG,P=0.082, 95%CI: -2.27～0.24; AA+AG vs GG,P=0.147, 95%CI: -2.86～0.44; AA vs AG+GG,P=0.82, 95%CI: -1.13～0.90)。見圖7。

圖7 TNF-α-308多態(tài)性與胃癌易感性的敏感性分析 a:等位模型,A vs G; b:純合模型,AA vs GG; c:雜合模型,AG vs GG; d: 顯性模型,AA+AG vs GG; e: 隱性模型,AA vs AG+GG 注:圓圈表示剔除該項研究后的合并OR值;橫線表示置信區(qū)間的上下邊界

3 討 論

胃癌的發(fā)生是環(huán)境因素和基因相互作用等多因素參與的復雜過程。近些年分子發(fā)病機制相關研究的不斷開展使得癌癥發(fā)生機制以及易感性與個體遺傳變異之間關系逐步清晰。TNF-α作為在惡性疾病發(fā)生發(fā)展中的促炎因子,相關研究越來越多,其中308G/A是TNF-α啟動子區(qū)最常研究的單核苷酸多態(tài)性位點。研究表明TNF-α-308G/A位點多態(tài)性與提高TNF-α表達水平,TNF-α的血漿濃度,炎癥程度,C反應蛋白水平(C-reactive protein, CRP)等因素有關,進而增加IBD、肝癌、結直腸癌的易感風險[4-6]。然而,對于胃癌,最新發(fā)表的2項研究結果均說明TNF-α-308位點多態(tài)性會增加胃癌易感風險[45-46],而Nezamzadeh等[47]認為在伊朗地區(qū)二者無關,先前發(fā)表的meta分析結果尚具爭議[48-49]。本次meta分析綜合相關病例對照研究,探究TNF-α-308位點多態(tài)性與胃癌以及幽門螺旋桿菌感染胃癌易感性之間的關聯(lián)。

分析結果顯示,等位,顯性和雜合模型下TNF-α-308基因多態(tài)性與胃癌風險增加顯著相關。當對胃癌發(fā)病地區(qū)進行亞組分析時,僅在亞洲地區(qū)等位,顯性和雜合模型的結果均表明TNF-α-308基因多態(tài)性與胃癌風險增加相關;相同的結論體現(xiàn)在中國人的15項研究中,且該結果與在中國進行的較大樣本的實驗研究[35]和Du等[42]meta分析的結果一致,但與部分學者結論相反[32-33, 41],本次分析的結果說明,在中國人中A基因攜帶者比G基因攜帶者胃癌發(fā)病風險增加30%～40%。歐洲和美洲地區(qū)均未體現(xiàn)二者的相關性,然而非洲地區(qū)僅有1項研究,其亞組分析結果顯示TNF-α-308基因多態(tài)性顯著增加胃癌發(fā)病風險,后續(xù)需要納入更多該地區(qū)的數(shù)據進一步分析。不同地區(qū)結果存在差異,有幾種可能的原因:樣本量存在偏差,非洲地區(qū)和歐洲地區(qū)納入的研究量較小;不同地區(qū)飲食和環(huán)境,胃腸道疾病與癌癥的發(fā)病率不同。對基因分型方法進行分層分析,Taqman方法進行基因分型時,TNF-α-308基因多態(tài)性與胃癌風險增加顯著相關,與Yang等[48]的結果一致,不同方法的基因分型可能會影響病例對照試驗胃癌的相關數(shù)據,結果顯示該位點多態(tài)性與感染幽門螺旋桿菌胃癌的易感不相關。

本研究存在一些局限性,對胃癌發(fā)病地區(qū)的亞組分析中非洲地區(qū)樣本不足,幽門螺旋桿菌感染的胃癌的樣本規(guī)模太小,以及考慮到一些負面結果難以被發(fā)表使得樣本收集困難等因素,均難以得出科學可靠的結論;研究僅對308G/A位點多態(tài)性進行分析,另外與還應綜合考慮胃癌分期,患者性別,年齡以及基因與基因,基因與表型,基因與環(huán)境等其他宿主遺傳因素對胃癌發(fā)病的影響。

綜上,亞洲地區(qū)TNF-α-308基因型多態(tài)性與增加胃癌的易感性存在一定的關聯(lián)。由于目前納入的研究存在局限,未來需要更大規(guī)模的嚴謹?shù)目茖W研究進一步證實,為胃癌的早期診斷與防治提供依據。