桂 菲,楚金申△,潘 京,薛國輝,梅寒穎

(九江市第一人民醫(yī)院：1.檢驗(yàn)科;2.風(fēng)濕免疫科,江西 九江 332001)

類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎(RA)是一種常見的慢性多因素自身免疫性炎癥疾病。其特點(diǎn)為持續(xù)性滑膜炎癥、全身性炎癥和自身抗體異常表達(dá)。RA發(fā)病率為0.5%～1.0%,并以每年5/10 000的速度遞增。持續(xù)發(fā)作的RA極易導(dǎo)致關(guān)節(jié)和肌腱損傷,以及心血管疾病和其他并發(fā)癥,嚴(yán)重者甚至導(dǎo)致殘疾和死亡,嚴(yán)重影響患者的生活質(zhì)量,為患者帶來極大的痛苦,因此,早期診治顯得尤為關(guān)鍵[1-2]。但至今其病因尚不清晰。目前,研究較為成熟的白細(xì)胞介素-12(IL-12)、IL-23、IL-27、IL-35家族細(xì)胞因子在多種自身免疫性疾病中均起著重要作用,同時,還可作為包括RA在內(nèi)的多種自身免疫性疾病的治療靶點(diǎn)[3-4]。IL-39作為IL-12家族新成員,由B淋巴細(xì)胞分泌。已有研究表明,IL-39參與介導(dǎo)了動物體內(nèi)多種炎癥反應(yīng),是一種重要的促炎性細(xì)胞因子[5]。目前,IL-39在RA患者中的表達(dá)變化的研究較少見。本研究通過檢測RA患者血清IL-39水平,探討了IL-39在RA患者中的變化及與疾病活動度的關(guān)系,以期為臨床診療RA提供新的參考依據(jù)。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2019年1月至2021年8月本院風(fēng)濕免疫科收治的RA患者46例(RA組),其中男28例,女18例;平均年齡(53.53±12.71)歲;符合2010年美國風(fēng)濕病學(xué)會和歐洲抗風(fēng)濕病聯(lián)盟更新的分類標(biāo)準(zhǔn),排除其他自身免疫性疾病、腫瘤、嚴(yán)重心血管疾病患者。依據(jù)疾病活動度評分28(DAS28)分為活動期(19例)和穩(wěn)定期(27例,DAS28≥2.6分)。DAS28是評估RA患者疾病活動度的常用方法,臨床常用的為基于腫脹關(guān)節(jié)數(shù)、壓痛關(guān)節(jié)數(shù)、紅細(xì)胞沉降率(ESR)或C 反應(yīng)蛋白(CRP)值計(jì)算得出的DAS28-3,是對患者疾病活動度的整體評價,得分越高表示疾病活動度越高。另選取同期健康體檢者30例作為對照組,其中男18例,女12例;平均年齡(51.48±11.87)歲。2組研究對象性別、年齡等一般資料比較,差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),具有可比性。本研究經(jīng)本院倫理委員會審批通過。

1.2方法

1.2.1血液標(biāo)本采集及處理 采集2組研究對象空腹靜脈血,其中干燥管2管,枸櫞酸鈉ESR試驗(yàn)管1管。干燥管中的一管給予3 500 r/min離心10 min分離血清,并于-80 ℃冰箱保存,采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)測定血清IL-39水平。人IL-39酶聯(lián)免疫試劑盒購自廣東恒遠(yuǎn)生物公司,所有步驟嚴(yán)格按試劑盒操作說明書執(zhí)行。干燥管中的另一管用于檢測CRP、類風(fēng)濕因子(RF)和抗環(huán)瓜氨酸抗體(CCP),枸櫞酸鈉ESR試驗(yàn)管用于測定ESR。CRP、RF采用美國貝克曼特定蛋白分析儀IMMAGE800原裝配套檢測系統(tǒng)進(jìn)行測定,CCP采用深圳亞輝龍iflash3000化學(xué)發(fā)光免疫分析儀原裝配套檢測系統(tǒng)測定。

1.2.2觀察指標(biāo) 觀察2組研究對象血清IL-39變化和炎癥指標(biāo)(包括RF、CCP、CRP、ESR等)。

2 結(jié) 果

2.12組研究對象血清IL-39、炎癥指標(biāo)比較 與對照組比較,RA組患者IL-39、RF、CCP、CRP、ESR均明顯增高,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表1。

表1 2組研究對象血清IL-39、炎癥指標(biāo)比較

2.2不同分期患者血清IL-39水平比較 活動期患者血清IL-39水平[(41.00±6.77)pg/mL]明顯高于穩(wěn)定期[(24.84±5.15)pg/mL],差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=7.158,P<0.001)。

2.3血清IL-39水平與疾病活動度的相關(guān)性 血清IL-39水平與DAS28明顯相關(guān)(r=0.675 7,P<0.05)。見圖1。

圖1 血清IL-39水平與疾病活動度的相關(guān)性

3 討 論

RA是一種病因不明的多因子、慢性炎癥過程相關(guān)的全身自身免疫性疾病,可損傷關(guān)節(jié)和關(guān)節(jié)外器官,包括心臟、腎臟、肺、消化系統(tǒng)、眼睛、皮膚和神經(jīng)系統(tǒng)。RA發(fā)病機(jī)制復(fù)雜,與體內(nèi)多種免疫細(xì)胞及細(xì)胞因子均相關(guān),但其病理生理機(jī)制尚未完全闡明[6-7]。且易與其他類型關(guān)節(jié)炎混淆,如骨關(guān)節(jié)炎、假性關(guān)節(jié)炎、細(xì)菌和病毒感染引起的炎癥性關(guān)節(jié)炎等。RA的活動度評價目前主要依賴基于機(jī)體臨床癥狀的DAS28,存在較大的主觀性。雖然近年來將炎癥指標(biāo)ESR、CRP等血清標(biāo)志物引入了活動度評分中,但這兩項(xiàng)指標(biāo)對RA并無特異性,且易受感染等因素的影響[8]。因此,找尋其他更適合評價AS疾病活動度的血清標(biāo)志物顯得尤為重要。

眾所周知,炎癥介質(zhì)在驅(qū)動滑膜細(xì)胞活動中起著關(guān)鍵作用,進(jìn)而導(dǎo)致關(guān)節(jié)炎癥和關(guān)節(jié)破壞。越來越多的證據(jù)表明,腫瘤壞死因子α、IL-6、IL-12等多種促炎性細(xì)胞因子水平在RA患者的血清和滑膜液中明顯增高。IL-12家族細(xì)胞因子是一組獨(dú)特的異二聚體細(xì)胞因子,包括IL-12、IL-23、IL-27,以及IL-35和最近的IL-39。IL-12家族參與體內(nèi)多種炎癥反應(yīng),在多種自身免疫性疾病中均起著重要作用。目前,研究較為成熟的IL-12家族細(xì)胞因子有IL-12、IL-23、IL-27和IL-35。其中IL-12、IL-23和IL-27主要由激活的抗原提呈細(xì)胞如樹突狀細(xì)胞和巨噬細(xì)胞產(chǎn)生。IL-12是該家族最早發(fā)現(xiàn)的炎性細(xì)胞因子,主要通過促進(jìn)輔助性T淋巴細(xì)胞1分泌γ干擾素激活巨噬細(xì)胞發(fā)揮抗細(xì)胞內(nèi)病原體感染及抗腫瘤作用;IL-23在維持輔助性T淋巴細(xì)胞17增殖分化并促進(jìn)其分泌IL-17參與慢性炎癥及自身免疫性疾病進(jìn)程中均發(fā)揮著重要作用;IL-27可誘導(dǎo)調(diào)節(jié)性T淋巴細(xì)胞分泌IL-10,具有促炎及抗炎雙重作用[9]。IL-35作為一種新型免疫抑制細(xì)胞因子,主要由叉頭狀螺旋轉(zhuǎn)錄因子3+的調(diào)節(jié)性T淋巴細(xì)胞產(chǎn)生。也有研究表明,某些調(diào)節(jié)性B淋巴細(xì)胞可產(chǎn)生IL-35,發(fā)揮負(fù)向免疫調(diào)節(jié)作用,誘導(dǎo)免疫耐受[10]。有研究發(fā)現(xiàn),IL-12家族成員(IL-12、IL-23、IL-27和IL-35)在多種自身免疫性疾病中均起著重要作用,還可作為多種自身免疫性疾病的治療靶點(diǎn)。如優(yōu)特克單抗作為一種針對IL-12/IL-23p40的治療藥物,已被批準(zhǔn)用于治療銀屑病和銀屑病關(guān)節(jié)炎。另外,至少有10種針對IL-12、IL-23或IL-23相關(guān)信號通路的治療藥物正在17種人類免疫介導(dǎo)的疾病中接受臨床檢查。IL-27、IL-35也均為具有免疫抑制活性的細(xì)胞因子,對免疫反應(yīng)具有驚人的不同影響,也可利用其可行的治療靶點(diǎn)治療人類炎癥性疾病。因此,針對IL-12家族成員的藥物研究是治療多種自身免疫性疾病的有效方法。

IL-12家族細(xì)胞因子是α/β異二聚體,由一個α亞基(IL-23p19、IL-27p28、IL-12p35)和一個β鏈(IL-12p40、EBI3)組成。雖然目前IL-12家族中有4個已知的成員,但預(yù)測的組合為6個。因此,額外的配對,如IL-23p19/EBI3是可能的。已有研究通過在體外結(jié)合不同的α亞基和β鏈蛋白,從而形成一種新的穩(wěn)定的p19/ebi3異質(zhì)二聚體,并命名為IL-39,并已證明其在體內(nèi)外具有生物活性。IL-39作為IL-12家族的新成員,與IL-35共享EBI3亞基,由B淋巴細(xì)胞產(chǎn)生及分泌體外感染EB病毒的人類B淋巴母細(xì)胞系高表達(dá)EBI3蛋白。且已有研究表明,無論在體內(nèi)還是體外,激活的B淋巴細(xì)胞均能產(chǎn)生及分泌IL-39。已有研究發(fā)現(xiàn),與其他IL-12家族細(xì)胞因子比較,介導(dǎo)MRL/LPR小鼠狼瘡樣疾病的活化B淋巴細(xì)胞分泌IL-39(IL-23p19和EBI3)水平明顯升高。為進(jìn)一步研究IL-39在狼瘡樣疾病中的潛在作用,有研究從狼瘡小鼠體內(nèi)分離并篩選出GL7+細(xì)胞,并利用相應(yīng)的短夾RNA減少激活的B淋巴細(xì)胞中IL-23p19、EBI3、IL-12p35、IL-12p40蛋白表達(dá)構(gòu)建相應(yīng)的缺陷型。當(dāng)過繼轉(zhuǎn)移IL-27p28、IL-12p35、IL-12p40缺陷型GL7+B淋巴細(xì)胞后,小鼠脾臟顯著變大且伴隨蛋白尿出現(xiàn),而當(dāng)過繼轉(zhuǎn)移IL-23p19或EBI3缺陷型GL7+B淋巴細(xì)胞后,小鼠脾臟明顯變小且蛋白尿癥狀減輕。提示IL-39可能是一種重要的促炎性細(xì)胞因子,可參與介導(dǎo)動物體內(nèi)多種炎癥反應(yīng),同時,抗IL-39多克隆抗體還可改善狼瘡樣MRL/LPR小鼠自身免疫癥狀[11]。提示IL-39可作為系統(tǒng)性紅斑狼瘡潛在的治療靶點(diǎn)。

IL-39作為一種新發(fā)現(xiàn)的IL-12家族成員,已發(fā)現(xiàn)可參與介導(dǎo)動物體內(nèi)的多種炎癥反應(yīng),且與CRP、cTNT、proBNP等炎性細(xì)胞因子呈正相關(guān)。有研究表明,其他免疫細(xì)胞,如樹突狀細(xì)胞和巨噬細(xì)胞均可表達(dá)IL-39 RNA[12]。而RA的免疫功能紊亂離不開相關(guān)免疫細(xì)胞的異常。固有免疫細(xì)胞(樹突狀細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、NK細(xì)胞、粒細(xì)胞等)和適應(yīng)性免疫系統(tǒng)細(xì)胞(B、T淋巴細(xì)胞)均與RA的疾病進(jìn)展密切相關(guān),在RA的免疫耐受異常、免疫應(yīng)答調(diào)節(jié)機(jī)制中起到非常重要的作用[13]。提示IL-39或在RA患者中發(fā)揮一定的生物學(xué)效應(yīng),本研究也證實(shí)了這一點(diǎn),與對照組比較,RA患者血清IL-39水平明顯升高。此外,活動期RA患者血清IL-39水平明顯高于穩(wěn)定期,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。提示IL-39在RA發(fā)病過程中發(fā)揮了一定的作用,并有助于疾病活動度的評價,與WANG等[12]在系統(tǒng)性紅斑狼瘡中的研究結(jié)果一致。另有研究表明,IL-39水平在急性冠狀動脈綜合征患者中明顯升高,且與超敏CRP呈正相關(guān),間接表明IL-39介導(dǎo)了人體內(nèi)多種炎癥反應(yīng),或可作為一種新型的血清標(biāo)志物。

B淋巴細(xì)胞在RA的發(fā)病機(jī)制中起著多方面的作用,其可作為抗原遞呈細(xì)胞活化T淋巴細(xì)胞、參與異位淋巴組織的生成和調(diào)節(jié)機(jī)體免疫反應(yīng)。RA患者的許多細(xì)胞均可在滑膜處產(chǎn)生細(xì)胞因子,如中性粒細(xì)胞分泌腫瘤壞死因子家族B淋巴細(xì)胞活化因子,可影響B(tài)淋巴細(xì)胞的存活、聚集、機(jī)化和轉(zhuǎn)運(yùn)。同時,腫瘤壞死因子家族B淋巴細(xì)胞活化因子可促進(jìn)B淋巴細(xì)胞表達(dá)IL-39,反之,IL-39又可誘導(dǎo)中性粒細(xì)胞分化、發(fā)育。說明IL-39在RA的疾病過程中發(fā)揮著重要的促炎作用,與CRP、ESR等炎癥指標(biāo)比較,具有更高的特異性。同時,IL-39與RA的疾病活動度密切相關(guān),或可作為RA的活動度監(jiān)測指標(biāo)。

綜上所述,本研究初步證實(shí)了RA患者血清IL-39水平升高,或可作為評價RA活動度的新型血清標(biāo)志物,對RA患者具有一定的輔助診斷價值。但目前關(guān)于IL-39的研究尚處于初級階段,許多問題尚未解決。除激活B淋巴細(xì)胞外,IL-39與其他細(xì)胞的關(guān)系及相互作用機(jī)制亟待進(jìn)一步研究。同時,本研究具有一定的局限性：(1)研究對象來源較局限,研究結(jié)果可能有偏差;(2)樣本量偏少,還需長期大樣本臨床研究進(jìn)一步證實(shí)上述結(jié)論。