王 錦，程昆木

（安康學(xué)院化學(xué)化工學(xué)院，陜西 安康 725000）

0 引言

黃柏為蕓香科植物黃皮樹(shù)（Phel odendron chinense Schneid）或黃檗（Phel odendron amurense Rupr）的干燥樹(shù)皮。前者習(xí)稱“川黃柏”，后者習(xí)稱“關(guān)黃柏”[1]，具有清熱燥濕、瀉火除蒸、解毒療瘡的功效。在臨床應(yīng)用中其所含的生物堿成分具有多種生物活性，如抗腫瘤、抗炎、降血糖、降血脂、抗阿爾茨海默病、抗心律失常等[2]。川黃柏主產(chǎn)于四川、貴州等地，關(guān)黃柏主產(chǎn)于遼寧、吉林等地，黃柏皮中的小檗堿、藥根堿、黃柏堿等成分在臨床中具有許多全新發(fā)展，在傳統(tǒng)應(yīng)用基礎(chǔ)上小檗堿發(fā)現(xiàn)具有抗血管性癡呆[3]、腦保護(hù)作用[4]、抗隱球菌[5]等全新藥用價(jià)值。

小檗堿起初是指從中藥黃連中分離的一種季銨生物堿，可隨著醫(yī)學(xué)研究的發(fā)展和化學(xué)研究的深入，小檗堿顯現(xiàn)出越來(lái)越多的藥用效果，被廣泛地應(yīng)用于臨床上。研究發(fā)現(xiàn)在臟器損傷[6]、心血管疾病[7]以及代謝性疾病如老年癡呆癥、糖尿病[8]及相關(guān)并發(fā)癥、炎癥[9]等疾病的保護(hù)作用及其相關(guān)機(jī)制具有較好療效。隨著需求量日益增加，市場(chǎng)對(duì)小檗堿供不應(yīng)求，使得從其他藥材中獲取小檗堿變得更具意義和緊迫。

1 材料與儀器

1.1 材料

遼寧、吉林、湖北、安康、四川廣安、貴州畢節(jié)、湖南懷化7 個(gè)產(chǎn)地的黃柏皮，均采購(gòu)于當(dāng)?shù)兀患状?、無(wú)水乙醇，天津市天力化學(xué)試劑有限公司；色譜磷酸、色譜乙腈，山東禹王和天下新材料有限公司；鹽酸小檗堿標(biāo)準(zhǔn)品，南京源植生物科技有限公司；三重蒸餾水，實(shí)驗(yàn)室自制。

1.2 儀器

FW177 型中草藥粉碎機(jī)，天津泰斯特儀器有限公司；LC-10ATvp 型高效液相色譜儀，日本島津公司；YP5002 型電子天平，北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司；KQ2200E 型超聲波清洗儀，昆山市超聲儀器有限公司；FA2014 型精密分析天平，上海良平儀器儀表有限公司；Molbiochem 520 型超純制水機(jī)，重慶摩爾水處理設(shè)備有限公司。

1.3 樣品前處理

將不同產(chǎn)地的黃柏皮在烘箱65 ℃后，粉碎，過(guò)20 目（0.8 mm）篩。

2 實(shí)驗(yàn)方法與結(jié)果

2.1 實(shí)驗(yàn)條件

2.1.1 色譜條件

用Kromasil-C18（4.6 mm×200 mm，5 mm）色譜柱，流動(dòng)相為0.1%磷酸水－乙腈（70∶30，體積比），等度洗脫；進(jìn)液量為5 μL；流速為1.0 mL/min；柱溫為30 ℃；檢測(cè)波長(zhǎng)為345 nm 時(shí)可以得到較好生物堿譜圖。

2.1.2 對(duì)照品溶液配制

精密稱取鹽酸小檗堿對(duì)照品（≥98%）10 mg，在50 mL 容量瓶中加入甲醇溶解，配置成質(zhì)量濃度為0.196 mg/mL 的標(biāo)準(zhǔn)溶液。將對(duì)照品吸取1 mL 于離心管，過(guò)0.45 μm 濾膜。

2.1.3 供試品溶液的制備

精確稱取干燥黃柏樣品粉末約0.4 g，每組樣品都保留平行樣。置于50 mL 容量瓶中，加入45 mL90%乙醇，超聲處理45 min，冷卻，90%乙醇定容至刻度，搖勻，靜置，過(guò)濾，取續(xù)濾液過(guò)0.45 μm 微孔濾膜。

2.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備

分別精確量取鹽酸小檗堿對(duì)照品溶液0.5、1.0、1.5、2.0、2.5 至5 mL 量瓶中，加95%乙醇定容，搖勻，稀釋成從高到低的濃度溶液，分別取制得的系列濃度溶液各5 μL 注入液相色譜儀，在上述色譜條件下進(jìn)行分析，記錄標(biāo)準(zhǔn)品色譜峰面積，見(jiàn)圖1。以峰面積為縱坐標(biāo)，進(jìn)樣濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，見(jiàn)表1。結(jié)果表明，鹽酸小檗堿在0.054～0.270 mg/mL 質(zhì)量濃度范圍內(nèi)，對(duì)照品色譜峰面積（Y）與濃度（X）呈良好線性，回歸方程式為y=1.109×107x+1.303×104，R2=0.999 2。

圖1 標(biāo)準(zhǔn)曲線圖

表1 對(duì)照品色譜峰面積表

2.3 精密度實(shí)驗(yàn)

精確吸取同一濃度安康地區(qū)對(duì)照品溶液5 μL，在上述色譜條件下重復(fù)進(jìn)樣5 次，鹽酸小檗堿峰面積的RSD=1.51%，表明儀器精密度良好。

2.4 重復(fù)性實(shí)驗(yàn)

稱取5 份湖北黃柏樣品粉末1 g，超聲提取法制備供試品溶液，精密吸取5 μL 各供試品溶液，在上述色譜條件下進(jìn)樣，結(jié)果可得，鹽酸小檗堿含量的RSD=1.63%。

2.5 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)

取四川地區(qū)黃柏溶液分別在0、2、6、12、18、24 h精密吸取5 μL，在上述色譜條件下進(jìn)樣，鹽酸小檗堿峰面積的RSD=1.57%，表明供試品溶液在24 h 內(nèi)穩(wěn)定。

2.6 樣品測(cè)定

7 個(gè)產(chǎn)地的黃柏物質(zhì)在“2.1.1”的條件下所得到的色譜圖，見(jiàn)圖2。

圖2 小檗堿標(biāo)準(zhǔn)物和七個(gè)地區(qū)黃柏小檗堿HPLC 譜圖

3 分析與小結(jié)

綜上所述，由上述譜圖相關(guān)信息根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算小檗堿含量平均值可得，各地區(qū)黃柏皮所含小檗堿含量分別為：吉林1.114 5 mg/g；遼寧2.778 8 mg/g；湖北4.167 6 mg/g；安康4.340 0 mg/g；四川3.943 4 mg/g；貴州4.811 8 mg/g；湖南2.618 9 mg/g。由此可知，貴州地區(qū)黃柏具有較多的小檗堿含量，其次為安康黃柏。從黃柏分類看，關(guān)黃柏中以湖北黃柏為代表有較好的含量，吉林地區(qū)的含量較少；川黃柏中較多含量以貴州地區(qū)黃柏為代表，較少含量則為湖南地區(qū)。此結(jié)論可為從以上地區(qū)的黃柏對(duì)比選擇中提供參考，以便后續(xù)對(duì)小檗堿的研究與發(fā)展。