施陳燕，柳國(guó)斌，孫 茹，張治軍，滕 磊，蔡蔚然，董雪林，袁 波，鞠 晗，張 弢

1.上海中醫(yī)藥大學(xué)附屬曙光醫(yī)院耳鼻喉科（上海 201203）；2.上海中醫(yī)藥大學(xué)附屬曙光醫(yī)院血管外科（上海 201203）

全球慢性鼻竇炎（chronic rhinosinusitis，CRS）的患病率呈逐年上升趨勢(shì)。歐洲CRS總患病率為10.9%，美國(guó)患病率約11.9%［1-2］。我國(guó)CRS 總患病率約8%，近1.07 億人患有CRS［3］，目前已成為我國(guó)一個(gè)重要的社會(huì)衛(wèi)生問(wèn)題。CRS 臨床表現(xiàn)為鼻塞、流涕、頭痛或嗅覺(jué)減退，且反復(fù)發(fā)作，嚴(yán)重影響患者的生活質(zhì)量［4］。目前已有許多關(guān)于CRS 病因的研究，但其發(fā)病機(jī)制尚不明確，仍處于探索階段。治療包括以足量抗生素及糖皮質(zhì)激素為主的保守治療，以及功能性鼻內(nèi)鏡手術(shù)，但存在總體治療療效不佳、難以抉擇手術(shù)時(shí)機(jī)、術(shù)后復(fù)發(fā)率高等幾大難題。中醫(yī)藥潛在的療效及作用機(jī)制研究可能成為尋求CRS新靶點(diǎn)及新治療方式的突破點(diǎn)。

長(zhǎng)鏈非編碼RNA（lncRNA）是一類(lèi)長(zhǎng)于200 核苷酸不編碼蛋白質(zhì)的RNA 分子，廣泛涉及各種疾病的發(fā)生發(fā)展。近年來(lái)發(fā)現(xiàn)lncRNA 在炎癥疾病中特異性表達(dá)，通過(guò)多種機(jī)制調(diào)控炎癥信號(hào)通路或炎癥因子，發(fā)揮促炎或抗炎作用［5］。研究［6-7］表明，lncRNA 在鼻腔炎癥疾病中扮演著重要角色，但具體機(jī)制尚不明確。lncRNA小核仁RNA 宿主基因16（lncRNA SNHG16）被發(fā)現(xiàn)在CRS 中可促進(jìn)黏蛋白5AC（MUC5AC）的表達(dá)增多［8］。表皮生長(zhǎng)因子受體（EGFR）作為經(jīng)典的炎癥信號(hào)通路，對(duì)MUC5AC 的分泌起調(diào)節(jié)作用［9］，但與lncRNA SNHG16的關(guān)系尚未見(jiàn)報(bào)道。辛前甘桔湯是海派名醫(yī)張贊臣治療CRS “通竅排膿法”的經(jīng)驗(yàn)方，能明顯改善患者鼻塞、流涕等臨床癥狀［10］。本研究擬通過(guò)觀察辛前甘桔湯對(duì)CRS 小鼠lncRNA SNHG16/EGFR 信號(hào)通路及MUC5AC的影響，探索辛前甘桔湯改善CRS 黏液高分泌的作用機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 動(dòng)物 C57BL/6小鼠36只，雄性，體質(zhì)量20～22 g，SPF 級(jí)，購(gòu)自上海斯萊克實(shí)驗(yàn)動(dòng)物公司，飼養(yǎng)于上海中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心。動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào)：SCXK（滬）2017-0005。動(dòng)物使用許可證號(hào)：SCXK（滬）2020-0009。動(dòng)物飼養(yǎng)環(huán)境保持晝夜節(jié)律交替，自由飲水及進(jìn)食，溫度為20～24 ℃，濕度為50%～70%。本實(shí)驗(yàn)方案經(jīng)上海中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物倫理委員會(huì)批準(zhǔn)（倫理批準(zhǔn)號(hào)：PZSHUTCM211227022）。

1.1.2 藥物及試劑 辛前甘桔湯方組成：辛夷6 g，防風(fēng)6 g，前胡9 g，天花粉9 g，薏苡仁12 g，桔梗4.5 g，生甘草3 g。藥材均購(gòu)自上海中醫(yī)藥大學(xué)附屬曙光醫(yī)院中藥房。所有中藥材水煎2次，合并濃縮成含生藥1 g/mL的藥液，離心取上清后濾過(guò)除菌，冰箱4 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>

羧甲司坦口服溶液，白云山湯陰東泰藥業(yè)有限責(zé)任公司（批號(hào)：12200218513）。金黃色葡萄球菌ATCC25923，由上海市疾病預(yù)防控制中心提供。

總RNA 抽提試劑（TRIzol），美國(guó)Invitrogen 公司（批號(hào)：15596018）；三氯甲烷，上海試劑一廠（批號(hào)：2006-06-08）；異丙醇，國(guó)藥集團(tuán)藥業(yè)股份有限公司（批號(hào)：AR80109218）；乙醇，國(guó)藥集團(tuán)藥業(yè)股份有限公司（批號(hào)：AR10009218）；焦碳酸二乙酯（DEPC）水，上海司鼎生物科技有限公司（批號(hào)：SD01005）；反轉(zhuǎn)錄試劑盒（RT reagent Kit）、熒光定量qPCR 試劑盒（TB Green qPCR），日本Takara 株式會(huì)社（批號(hào)：RR047A、RR420A）；瓊脂糖（agarose），上海司鼎生物科技有限公司（批號(hào)：SD0241）；小鼠白介素-6（IL-6）酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）試劑盒、小鼠基質(zhì)金屬蛋白酶-9（MMP-9）ELISA 試劑盒、小鼠白介素-8（IL-8）ELISA 試劑盒，上海司鼎生物科技有限公司（批號(hào)：SDM0008、SDM0087、SDM0140）；兔抗MUC5AC 多克隆抗體（Rabbit Anti-MUC5AC），北京博奧森生物技術(shù)有限公司（批號(hào)：BS-7166R）；表皮生長(zhǎng)因子受體（EGFR）多克隆抗體，武漢亞科因生物技術(shù)有限公司（批號(hào)：ABP51236）。

1.1.3 主要儀器 酶標(biāo)檢測(cè)儀，瑞士Tecan 公司（型號(hào)：F50）；臺(tái)式冷凍高速離心機(jī)，德國(guó)Eppendorf 公司（型號(hào)：5810R）；漩渦混合器，海門(mén)市其林貝爾儀器制造有限公司（型號(hào)：VORTEX-5）；高通量組織研磨器，上海凈信科技有限公司（型號(hào)：Tissuelyser-48）；分光光度計(jì)，美國(guó)Thermo Fisher Scientific 公司（型號(hào)：NanoDrop 2000）；PCR 儀，美國(guó)Applied Biosystems 公司（型號(hào)：Veriti 96-Well Thermal Cycler）；qPCR 儀，瑞士Roche 公司（型號(hào)：LightCycler?480Ⅱ）；凝膠成像系統(tǒng)，上海天能科技有限公司（型號(hào)：GIS2009）。

1.2 分組與造模 將36 只小鼠隨機(jī)分為6 組，分別為正常組、模型組、羧甲司坦組和辛前甘桔湯低、中、高劑量組，每組6 只。除正常組外均行CRS 模型造模［11］，小鼠腹腔注射地西泮5 mg/kg 麻醉后，將膨脹海綿片置入小鼠左側(cè)鼻腔，金黃色葡萄球菌標(biāo)準(zhǔn)菌株懸濁液左側(cè)鼻腔內(nèi)灌注。飼養(yǎng)6 周后蘇木精-伊紅（HE）染色觀察小鼠鼻黏膜組織慢性炎癥表現(xiàn)，見(jiàn)大量炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)、杯狀細(xì)胞增生、纖毛脫落即表示CRS 小鼠模型建立成功。

1.3 干預(yù)方法 造模第43 天起灌胃給予羧甲司坦口服液（0.3 mL·kg-1·d-1）、辛前甘桔湯水煎液（0.3、0.6、1.2 g·kg-1·d-1，分別相當(dāng)于成人用量的0.5、1、2 倍），正常組與模型組小鼠灌胃質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.9%的氯化鈉溶液（0.6 g·kg-1·d-1），連續(xù)干預(yù)14 d 后，收集小鼠鼻黏膜組織，進(jìn)行液氮封存待用。

1.4 檢測(cè)指標(biāo)與方法

1.4.1 鼻黏膜組織病理學(xué)改變 取適量鼻黏膜組織，通過(guò)乙醇梯度脫水、透明、浸蠟等操作后，石蠟包埋，制作切片（厚度約5 μm）。①常規(guī)脫蠟、脫水、二甲苯透明，封固后進(jìn)行蘇木精-伊紅（HE）染色；②以3%醋酸溶液浸染3 min，阿爾新藍(lán)浸染30 min，復(fù)以3%醋酸溶液浸染3 min，水洗，0.5%過(guò)碘酸溶液氧化10 min，入希夫液中浸染20 min，封固后進(jìn)行阿爾新藍(lán)-過(guò)碘酸雪夫（AB-PAS）染色。分別在光學(xué)顯微鏡下觀察各組小鼠鼻黏膜組織的病理學(xué)改變。

1.4.2 鼻黏膜組織中EGFR、MUC5AC 的表達(dá) 采用免疫組織化學(xué)法檢測(cè)鼻黏膜組織中EGFR、MUC5AC 的表達(dá)情況。取適量鼻黏膜組織，常規(guī)石蠟包埋切片，脫蠟復(fù)水，磷酸緩沖鹽溶液（PBS）緩沖液清洗，使用一抗、二抗進(jìn)行抗原修復(fù)，二氨基聯(lián)苯胺（DAB）顯色常規(guī)脫水、透明、封片后鏡下觀察。400 倍光鏡下隨機(jī)觀察6 個(gè)視野，采用ImagePro Plus6.0（IPP 6.0）專(zhuān)業(yè)圖像采集及分析系統(tǒng)計(jì)算圖像積分光密度（IOD）值。

1.4.3 鼻黏膜組織中IL-6、IL-8、MMP-9 的水平 采用

ELISA 檢測(cè)鼻黏膜組織IL-6、IL-8、MMP-9 的水平。取各組小鼠鼻黏膜組織適量，加入放射免疫沉淀（RIPA）裂解液后充分研磨組織，研磨后的組織懸液放置在4 ℃離心機(jī)中離心20 min（13 000 r/min），取上層澄清液。按照ELISA 試劑盒說(shuō)明書(shū)測(cè)定鼻黏膜組織上層澄清液IL-6、IL-8、MMP-9含量。

1.4.4 鼻黏膜組織中l(wèi)ncRNA SNHG16、EGFR、MUC5ACmRNA 的表達(dá) 取各組小鼠鼻黏膜置于研缽中，加入TRIzol 裂解液提取總RNA，再逆轉(zhuǎn)錄合成cDNA，以β-肌動(dòng)蛋白基因（β-actin）為內(nèi)參進(jìn)行熒光定量PCR 擴(kuò)增以檢測(cè)各組小鼠鼻黏膜組織中l(wèi)ncRNA SNHG16、EGFR、MUC5ACmRNA 的表達(dá)水平。擴(kuò)增引物序列見(jiàn)表1。反應(yīng)條件：95 ℃預(yù)變性15 min；95 ℃變性5 s，60 ℃退火30 s，72 ℃ 延伸30 s，40 個(gè)循環(huán)。利用2-ΔΔCt法計(jì)算相對(duì)表達(dá)量。

表1 引物序列

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 所有數(shù)據(jù)采用SPSS 19.0 統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行分析處理。計(jì)量資料均以表示，多組數(shù)據(jù)間比較用單因素方差分析，組間兩兩比較采用LSD-t檢驗(yàn)。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 對(duì)鼻黏膜組織病理學(xué)的影響 HE和AB-PAS染色結(jié)果顯示，正常組小鼠鼻黏膜上皮完整，纖毛完整，杯狀細(xì)胞少見(jiàn)。模型組鼻黏膜上皮結(jié)構(gòu)紊亂，纖毛脫落及粘連明顯，杯狀細(xì)胞增生，伴有大量炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)。與模型組比較，辛前甘桔湯不同劑量組的小鼠鼻黏膜炎癥程度明顯減輕，纖毛少量粘連，杯狀細(xì)胞增生較模型組減輕；羧甲司坦組鼻黏膜上皮纖毛局部粘連，杯狀細(xì)胞增生減輕。見(jiàn)圖1。

2.2 對(duì)鼻黏膜組織中EGFR、MUC5AC 表達(dá)的影響

免疫組織化學(xué)結(jié)果顯示，與正常組比較，模型組EGFR 及MUC5AC表達(dá)升高。與模型組比較，辛前甘桔湯低、中、高劑量組鼻黏膜組織EGFR、MUC5AC 的表達(dá)降低，其中辛前甘桔湯高劑量組EGFR 及MUC5AC的表達(dá)最低。見(jiàn)圖2、圖3。與正常組比較，模型組IOD 值升高（P＜0.05）；與模型組比較，辛前甘桔湯各劑量組IOD值降低（P＜0.05），辛前甘桔湯高劑量組IOD值最低。辛前甘桔湯各劑量組間EGFR 的IOD 值差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），辛前甘桔湯高劑量組較辛前甘桔湯低劑量組MUC5AC的IOD值降低（P＜0.05）；與羧甲司坦組比較，辛前甘桔湯高劑量組MUC5AC的IOD值降低（P＜0.05）。見(jiàn)表2。

圖2 各組鼻黏膜組織表皮生長(zhǎng)因子受體（EGFR）表達(dá)情況（免疫組織化學(xué)染色，×400）

圖3 各組鼻黏膜組織黏蛋白5AC（MUC5AC）表達(dá)情況（免疫組織化學(xué)染色，×400）

表2 各組鼻黏膜組織EGFR、MUC5AC光密度比較（n=6，±s）

表2 各組鼻黏膜組織EGFR、MUC5AC光密度比較（n=6，±s）

注：EGFR為表皮生長(zhǎng)因子受體，MUC5AC為黏蛋白5AC。與正常組比較，*P＜0.05；與模型組比較，#P＜0.05；與羧甲司坦組比較，△P＜0.05；與辛前甘桔湯高劑量組比較，▲P＜0.05。

MUC5AC 24.66±7.69 98.44±23.09*69.32±12.96*#▲48.22±16.52#29.09±3.81#△78.22±19.39*組別正常組模型組辛前甘桔湯低劑量組辛前甘桔湯中劑量組辛前甘桔湯高劑量組羧甲司坦組EGFR 14.65±3.55 164.08±33.06*94.21±15.31*#75.26±20.29*#60.99±11.79*#76.71±10.21*#

2.3 對(duì)鼻黏膜IL-6、IL-8、MMP-9 表達(dá)的影響 與正常組比較，模型組IL-6、IL-8、MMP-9含量明顯升高（P＜0.05）。與模型組比較，辛前甘桔湯低、中、高各劑量組IL-6 含量降低（P＜0.05），辛前甘桔湯中、高劑量組MMP-9、IL-8含量降低（P＜0.05）；羧甲司坦組IL-6含量降低（P＜0.05），IL-8、MMP-9含量差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。與羧甲司坦組比較，辛前甘桔湯低劑量組IL-6 含量差異有統(tǒng)計(jì)意義（P＜0.05）。辛前甘桔湯各劑量組間MMP-9、IL-8含量差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），辛前甘桔湯高劑量組IL-6 含量較辛前甘桔湯低劑量組降低（P＜0.05）。見(jiàn)表3。

表3 各組鼻黏膜組織MMP-9、IL-8、IL-6含量比較（n=6，±s，ng·L-1）

表3 各組鼻黏膜組織MMP-9、IL-8、IL-6含量比較（n=6，±s，ng·L-1）

注：MMP-9為基質(zhì)金屬蛋白酶-9，IL-8為白介素-8，IL-6為白介素-6。與正常組比較，*P＜0.05；與模型組比較，#P＜0.05；與羧甲司坦組比較，△P＜0.05；與辛前甘桔湯高劑量組比較，▲P＜0.05。

IL-6 60.72±8.45 160.83±16.17*94.95±5.24*#△▲89.94±4.84*#71.17±6.42#78.94±16.69*#組別正常組模型組辛前甘桔湯低劑量組辛前甘桔湯中劑量組辛前甘桔湯高劑量組羧甲司坦組MMP-9 653.47±149.80 2 677.52±377.42*1 811.38±250.81*1 629.74±321.43*#1 542.91±238.82#1 729.06±284.08*IL-8 310.85±42.54 434.91±56.39*387.28±15.15*375.50±42.23*#347.48±27.72#371.28±69.47*

2.4 對(duì)鼻黏膜lncRNA SNHG16、EGFR、MUC5AC mRNA表達(dá)的影響 與正常組比較，模型組lncRNA SNHG16、EGFR、MUC5ACmRNA 表達(dá)明顯升高（P＜0.05）。與模型組比較，辛前甘桔湯低、中、高各劑量組及羧甲司坦組lncRNA SNHG16、EGFR、MUC5ACmRNA 表達(dá)均顯著降低（P＜0.05）。與羧甲司坦組比較，辛前甘桔湯低劑量組lncRNA SNHG16、EGFR、MUC5ACmRNA 表達(dá)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），辛前甘桔湯中劑量組MUC5ACmRNA表達(dá)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），辛前甘桔湯高劑量組lncRNA SNHG16、EGFRmRNA 表達(dá)明顯降低（P＜0.05）。辛前甘桔湯各劑量組之間lncRNA SNHG16mRNA 表達(dá)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；辛前甘桔湯各劑量組之間EGFR、MUC5ACmRNA 表達(dá)差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），其表達(dá)水平隨劑量的升高而降低。見(jiàn)表4。

表4 各組鼻黏膜組織lncRNA SNHG16、EGFR、MUC5AC mRNA表達(dá)情況比較（n=6，±s，2-ΔΔCt）

表4 各組鼻黏膜組織lncRNA SNHG16、EGFR、MUC5AC mRNA表達(dá)情況比較（n=6，±s，2-ΔΔCt）

注：lncRNA SNHG16 為長(zhǎng)鏈非編碼RNA 小核仁RNA 宿主基因16，EGFR 為表皮生長(zhǎng)因子受體基因，MUC5AC 為黏蛋白5AC 基因。與正常組比較，*P＜0.05；與模型組比較，#P＜0.05；與羧甲司坦組比較，△P＜0.05；與辛前甘桔湯高劑量組比較，▲P＜0.05；與辛前甘桔湯中劑量組比較，□P＜0.05。

MUC5AC 組別lncRNA SNHG16 EGFR 3.96±0.22 29.75±3.82*24.27±0.50*#△▲□16.05±1.79*#△▲4.20±1.34#5.98±1.02*#正常組模型組辛前甘桔湯低劑量組辛前甘桔湯中劑量組辛前甘桔湯高劑量組羧甲司坦組0.99±0.06 1.93±0.14*1.50±0.43*#△1.38±0.43*#1.27±0.21*#△1.35±0.14*#1.98±0.08 4.94±0.42*3.29±0.54*#△▲□2.50±1.99*#▲1.99±0.47#△2.56±0.25*#

3 討論

CRS 可歸屬中醫(yī)學(xué)“鼻淵”范疇?！端貑?wèn)·氣厥論》載：“膽移熱于腦，則辛頞鼻淵。鼻淵者，濁涕下不止也?！北菧Y之病因病機(jī)多為“膽移熱于腦”，癥見(jiàn)鼻流濁涕，量多不止。辛前甘桔湯是已故著名中醫(yī)耳鼻喉科專(zhuān)家張贊臣先生在古方的基礎(chǔ)上結(jié)合多年臨床經(jīng)驗(yàn)總結(jié)的“通竅排膿法”自擬經(jīng)驗(yàn)方，可顯著改善患者鼻塞、流涕癥狀［10］。全方由辛夷、防風(fēng)、前胡、天花粉、薏苡仁、桔梗及生甘草組成。辛夷為君藥，入肺經(jīng)，散風(fēng)寒、通鼻竅。辛夷揮發(fā)油成分豐富，可下調(diào)炎癥損傷中白介素-1β（IL-1β）、IL-6、腫瘤壞死因子-α（TNF-α）及超氧化物歧化酶（SOD）表達(dá)，具有抗炎、抗過(guò)敏、抗氧化等作用［12］。辛夷配以防風(fēng)可祛風(fēng)解表解痙，加強(qiáng)祛風(fēng)之力。防風(fēng)中色原酮、香豆素和1-酰基甘油等有效成分還可發(fā)揮鎮(zhèn)靜鎮(zhèn)痛作用［13］。前胡與桔梗辛開(kāi)苦降，降氣化痰。前胡有效成分北美芹素可通過(guò)阻斷核因子-κB/絲裂原活化蛋白激酶（NF-κB/MAPK）信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)，并抑制NOD 樣受體熱蛋白結(jié)構(gòu)域相關(guān)蛋白3（NLRP3）啟動(dòng)和激活，從而預(yù)防炎癥［14］。桔梗可通過(guò)抑制磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B（PI3K/Akt）信號(hào)通路消除炎癥［15］。天花粉與薏苡仁共奏消腫排膿之功。現(xiàn)代藥理研究［16-17］證明，天花粉可明顯抑制巨噬細(xì)胞中一氧化氮的生成，還可分解黏蛋白稀釋痰液。薏苡仁還可發(fā)揮抗炎鎮(zhèn)痛效果［18］。甘草調(diào)和諸藥，性平溫和，從而治療CRS。

lncRNA 在人類(lèi)疾病發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮重要的生物學(xué)功能，如染色質(zhì)修飾、轉(zhuǎn)錄、轉(zhuǎn)錄后調(diào)節(jié)和核運(yùn)輸［19-20］。lncRNA SNHG16位于染色體17q25.1 處，首次在侵襲性神經(jīng)母細(xì)胞瘤中發(fā)現(xiàn)［21］，隨后發(fā)現(xiàn)與多種癌癥相關(guān)，且與預(yù)后關(guān)系密切［22-23］。近年來(lái)研究表明，lncRNA SNHG16在炎癥疾病中亦表達(dá)異常。lncRNA SNHG16可促進(jìn)脂多糖誘導(dǎo)的炎癥反應(yīng)［24］，還可通過(guò)參與PI3K/Akt 信號(hào)通路及轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β（TGF-β）信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)介導(dǎo)炎癥反應(yīng)［25-26］。在一項(xiàng)非小細(xì)胞肺癌的研究［27］中發(fā)現(xiàn)MUC5AC 受lncRNA SNHG16的調(diào)控，在促進(jìn)細(xì)胞增殖、遷移方面發(fā)揮積極作用。袁薇［8］通過(guò)體外原代鼻黏膜上皮細(xì)胞培養(yǎng)，證實(shí)lncRNA SNHG16可促進(jìn)MUC5AC 的表達(dá)增多。MUC5AC 是鼻腔鼻竇黏膜分泌的主要黏蛋白之一，是黏液的主要組成成分。CRS中高表達(dá)黏蛋白MUC5AC 和黏蛋白5B（MUC5B），從而引起黏液高分泌，是導(dǎo)致患者鼻腔黏液積蓄及流涕的主要病理機(jī)制［28］。

EGFR 在鼻黏膜杯狀細(xì)胞、上皮細(xì)胞和基底細(xì)胞中均有表達(dá)［29］。EGFR 與表皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子（EGF）、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-α（TGF-α）等配體結(jié)合后，與自身或家族成員形成二聚體導(dǎo)致磷酸化，激活下游MAPK 信號(hào)通路［30］、PI3K/Akt 信號(hào)通路［31］、酪氨酸蛋白激酶/信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)因子和轉(zhuǎn)錄激活因子3（JAK/STAT3）信號(hào)通路［32］，激活NFκB 轉(zhuǎn)錄因子或者SP1 轉(zhuǎn)錄因子，促進(jìn)IL-8、IL-6 等炎癥因子釋放及MUC5AC、MUC5B 的表達(dá)［33］，激活MMP-9的活性并增加其表達(dá)［34］。MMP-9是組織重塑的關(guān)鍵因素，而組織重塑是鼻息肉形成的主要原因［35-36］。

本研究結(jié)果顯示，模型組小鼠鼻黏膜組織炎癥通路相關(guān)因子IL-8、IL-6、MMP-9 及EGFR 顯著升高。辛前甘桔湯干預(yù)后，各項(xiàng)指標(biāo)明顯改善，且呈現(xiàn)濃度依賴(lài)，其中以高劑量組改善最顯著，提示辛前甘桔湯可明顯改善鼻黏膜炎癥反應(yīng)。模型組鼻黏膜杯狀細(xì)胞增生明顯，MUC5AC表達(dá)升高，而辛前甘桔湯各劑量組均可有效減輕黏液高分泌。lncRNA SNHG16在模型組中高表達(dá)，辛前甘桔湯各劑量組可抑制lncRNA SNHG16表達(dá)，提示辛前甘桔湯可能通過(guò)抑制lncRNA SNHG16表達(dá)、影響EGFR 炎癥通路及黏蛋白MUC5AC 表達(dá)而對(duì)CRS發(fā)揮治療作用。

綜上，辛前甘桔湯能降低lncRNA SNHG16、EGFR、MUC5ACmRNA 表達(dá)，降低EGFR、MUC5AC 蛋白表達(dá)，減少I(mǎi)L-6、IL-8、MMP-9 表達(dá)，進(jìn)而改善鼻黏膜病理改變。