趙慧昂 查青青 聶姍姍

西安思源學(xué)院，陜西西安，710038

由于新型冠狀病毒具有耐低溫不耐高溫的特性，冷鏈運輸?shù)沫h(huán)境給新型冠狀病毒的大面積傳播提供了適宜條件，對低溫消毒提出更高要求。然而低溫消毒一直以來都是消毒學(xué)的一個難題，在低溫條件下，很多消毒劑的消毒效果都會有所下降[1]。早在2020年10月底，中華人民共和國國務(wù)院應(yīng)對新型冠狀病毒肺炎疫情聯(lián)防聯(lián)控機(jī)制綜合組，頒發(fā)了《關(guān)于印發(fā)冷鏈?zhǔn)称飞a(chǎn)經(jīng)營新冠病毒防控技術(shù)指南和冷鏈?zhǔn)称飞a(chǎn)經(jīng)營過程新冠病毒防控消毒技術(shù)指南的通知》。該通知中對冷鏈生產(chǎn)經(jīng)營常用消毒劑推薦使用醇類消毒劑、含氯類消毒劑、過氧化物類消毒劑和季銨鹽類消毒劑[2]。2021年2月，為了有效防控新冠肺炎疫情，中國疾病預(yù)防控制中心開展了低溫消毒技術(shù)研究，研發(fā)了-18 ℃和-40 ℃兩種采用二氯異氰尿酸鈉為有效成分的雙劑型低溫消毒劑，并制定了《兩種含氯低溫消毒劑使用指引》[3]。

醇類消毒劑由于閃點較低，不宜大面積噴灑。過氧化物類消毒劑腐蝕性較強(qiáng)，不適用于家庭低溫消毒。椰油基甜菜堿酰胺基兩性基丙酸鹽為兩性表面活性劑，具有弱陽離子性，列入食品用消毒劑原料（成分）名單（2009版）中。本文研究了以總季銨鹽含量0.4%的苯扎氯銨和雙癸基二甲基氯化銨復(fù)配物為有效成分，復(fù)配1%的椰油基甜菜堿酰胺基兩性基丙酸鹽的低溫消毒劑消毒效果。

1 試驗部分

1.1 試劑與儀器

四苯硼鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液：0.0200 mol/L，北京北方偉業(yè)計量技術(shù)研究院；冰箱：BCD-563WY/A，容聲冰箱；金黃色葡萄球菌：ATCC 6538，第5代，原軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院；大腸桿菌：8099，第5代，原軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院；D/E中和肉湯，青島海博生物；有機(jī)干擾物：牛血清蛋白（BSA），上海李計生物科技有限公司；組氨酸：99%，阿拉丁試劑；生物安全柜：BSC-1500IIB2，蘇州長留凈化科技有限公司；生化培養(yǎng)箱：LRH-250，上海一恒科學(xué)儀器有限公司；pHS-3Cb精密pH計，上海儀電科學(xué)儀器股份有限公司。

1.2 試驗方法

1.2.1 總季銨鹽含量的測定

按照GB/T 26369-2020《季銨鹽類消毒劑衛(wèi)生要求》附錄A.4四苯硼鈉滴定法[4]，測定低溫消毒液中總季銨鹽含量。

1.2.2 pH測定

按照《消毒技術(shù)規(guī)范》（2002年版）2.2.1.4中pH計法的規(guī)定測定原液。

1.2.3 低溫試驗按照《低溫消毒劑衛(wèi)生安全評價技術(shù)要求》國衛(wèi)辦監(jiān)督函〔2020〕1062號。

1.2.4 殺滅微生物試驗

（1）中和劑鑒定試驗：試驗用消毒液為（-20±1）℃低溫保存過夜（大于8 h），按照GB/T 38502-2020《消毒劑實驗室殺菌效果檢驗方法》5.4.5中和劑載體定量鑒定試驗操作程序進(jìn)行[5]。

（2）載體定量殺菌試驗：試驗用消毒液為（-20±1）℃低溫保存過夜（大于8 h），作用時間分別為15 min、30 min、45 min，試驗重復(fù)3次，按照GB/T 38502-2020《消毒劑實驗室殺菌效果檢驗方法》5.6.4載體浸泡殺菌試驗操作程序進(jìn)行[5]。

1.2.5 模擬現(xiàn)場試驗

對某冰鮮雞用冷庫（冷庫環(huán)境-20 ℃），試驗用低溫消毒液為-20 ℃低溫過夜（大于8 h），取制備好的菌片3個在無菌平皿內(nèi)，打開上蓋分別放置于冷庫三個拐角處30 min，再對現(xiàn)場進(jìn)行消毒，消毒作用30 min，試驗重復(fù)3次。

1.2.6 穩(wěn)定性試驗

將已知總季銨鹽含量的低溫消毒液放入（42±1）℃的生化培養(yǎng)箱中180 d，測量總季銨鹽含量。

2 結(jié)果與討論

2.1 總季銨鹽含量測定

分別測試3個不同批次總季銨鹽含量，結(jié)果見表1。

由表1可知，對三個不同批次低溫消毒液季銨鹽含量進(jìn)行檢測，與配方設(shè)計理論值0.4%（W/W）相符。

2.2 pH測定

見表2。

表2 pH值的測定

2.3 低溫試驗

該消毒液在-20 ℃恒溫條件下保持過夜（大于8 h），仍保持液體狀態(tài)，無析出、無結(jié)晶。符合《低溫消毒劑衛(wèi)生安全評價技術(shù)要求》國衛(wèi)辦監(jiān)督函〔2020〕1062號要求。

2.4 殺滅微生物試驗

2.4.1 中和劑鑒定

以金黃色葡萄球菌（ATCC 6538）為試驗菌，對1.0%組氨酸的D/E中和肉湯進(jìn)行鑒定。試驗分為4組，第1組為中和劑+菌片。第2組為（消毒液+中和劑）+菌片，第3組為稀釋液+菌片，第4組為稀釋液+中和劑+培養(yǎng)基對照。經(jīng)過3次重復(fù)試驗，結(jié)果見表3。

表3 中和劑鑒定試驗結(jié)果

由表3可知，3次重復(fù)試驗，每次試驗的第1組、第2組和第3組的試驗菌生長量相似，且試驗菌量在2.5×102～1.5×103CFU/片之間，組菌落數(shù)誤差率不超過15%，第4組均無菌生長。符合GB/T 38502-2020《消毒劑實驗室殺菌效果檢驗方法》中和劑鑒定評價規(guī)定。

2.4.2 殺滅效果結(jié)果

見表4。

由表4可知，3次重復(fù)試驗，在-20 ℃條件下，低溫消毒液對金黃色葡萄球菌和大腸桿菌作用15min、30 min、45 min，殺滅對數(shù)值均大于3.0，符合《消毒技術(shù)規(guī)范》（2002年版）的要求[6]。

2.5 模擬現(xiàn)場試驗

見表5。

表5 模擬現(xiàn)場試驗結(jié)果

由表5可知，在-20 ℃冷庫環(huán)境中，-20 ℃低溫保存過夜（大于8 h）的低溫消毒液作用30 min，對冷庫三個拐角處玻璃片上的金黃色葡萄球菌各次試驗殺滅對數(shù)值均大于3.00，符合《消毒技術(shù)規(guī)范》（2002年版）和《低溫消毒劑衛(wèi)生安全評價技術(shù)要求》的要求[7-8]。

2.6 穩(wěn)定性試驗結(jié)果

見表6。

表6 穩(wěn)定性試驗結(jié)果

由表6可知，低溫消毒液恒溫恒濕培養(yǎng)箱儲存180 d后，其有效成分含量相比存放前下降率均小于10%，符合GB/T 38499-2020《消毒劑穩(wěn)定性評價方法》[8]，產(chǎn)品有效期可定為3年。

3 結(jié)論

采用食品級防凍劑，以總季銨鹽含量為0.4%的苯扎氯銨和雙癸基二甲基氯化銨復(fù)配物為有效成分，復(fù)配椰油基甜菜堿酰胺基兩性基丙酸鹽的低溫消毒液，保持-20～-21 ℃不少于8 h，取出低溫觀察仍保持液體狀態(tài)、無析出、無結(jié)晶。經(jīng)測試各項技術(shù)指標(biāo)符合相關(guān)規(guī)定要求。

冷鏈運輸?shù)能噹拓浌裼薪饘俨馁|(zhì)，貨物外包裝以紙箱和金屬為主，以季銨鹽為主要有效成分的低溫消毒液的成本比含氯或過氧化物為主要成分的低溫消毒液高，但其對金屬材質(zhì)和外包裝的安全性相對也高，而且產(chǎn)品穩(wěn)定性強(qiáng)，易于貯存。