梁秋楊，白新鵬,*，李國(guó)勝，常會(huì)敏，朱恒偉，橋振栓，黃桂花

1. 海南大學(xué)食品科學(xué)與工程學(xué)院/熱帶多糖資源利用教育部工程研究中心，海南海口 570228；2. ?？谥仓厣镔Y源研究所有限公司，海南海口 570000；3. 海南北緯十八度食品科學(xué)有限公司，海南東方 572633

火龍果（Hylocereus undatus）屬仙人掌科多年生攀援植物，是一種營(yíng)養(yǎng)豐富的熱帶經(jīng)濟(jì)水果，在我國(guó)臺(tái)灣、廣西、廣東、海南以及福建等省（區(qū)）有較大規(guī)模種植面積[1]?；瘕埞o生長(zhǎng)茂盛，為了保證果實(shí)品質(zhì)，需要不斷修剪枝條，加上果實(shí)采摘后產(chǎn)生的大量根莖，這些果莖如果僅作為廢棄物處理，不但提高了火龍果生產(chǎn)加工成本，還導(dǎo)致環(huán)境污染[2]。因此，為提升火龍果的經(jīng)濟(jì)附加值，減少資源浪費(fèi)，對(duì)火龍果莖進(jìn)行開發(fā)利用具有重要意義。

火龍果莖多糖（pitaya stem polysaccharide,PSP）作為天然活性多糖的一種，是火龍果莖的重要活性成分之一，具有抗氧化、調(diào)節(jié)腸道等生物功能，能夠提高機(jī)體免疫力[3]。目前火龍果莖多糖的研究方向較多集中于提取、純化以及抗氧化活性檢測(cè)。李國(guó)勝等[4]比較了3種多糖提取方法，其中亞臨界水提取得率為20.53%，遠(yuǎn)高于熱水提取和超聲輔助提取的得率，這一結(jié)果和馬若影[5]用亞臨界與微波輔助和超聲微波協(xié)同提取比較得出的結(jié)論相似，說(shuō)明亞臨界水提取要比其他提取方法更高效；王超雪[6]利用超濾膜截留[7]和分子篩凝膠柱層析[8]純化得到不同分子量的多糖成分，這些多糖組分濃度變化對(duì)其抗氧化活性影響較大。此外，有研究指出，利用火龍果莖多糖的生物活性應(yīng)用于美容護(hù)膚上開發(fā)出的產(chǎn)品，具有一定的獨(dú)特效果。唐雅園等[9]在制備護(hù)手霜時(shí)發(fā)現(xiàn)，添加火龍果莖多糖的護(hù)手霜，其DPPH自由基清除能力隨著添加量的提高而顯著增強(qiáng)，與未添加樣品相比，護(hù)手霜的保濕率提高了20%以上，且添加多糖不會(huì)改變護(hù)手霜的穩(wěn)定性，這是由多糖流變學(xué)性質(zhì)所決定的。

除以上研究外，對(duì)于火龍果莖多糖在機(jī)體免疫調(diào)節(jié)方面的研究尚未報(bào)道。植物多糖具有顯著的免疫活性，能促使機(jī)體免疫器官正常生長(zhǎng)，提升淋巴細(xì)胞增殖能力，通過(guò)調(diào)節(jié)紅細(xì)胞免疫，影響蛋白質(zhì)和抗體產(chǎn)生，從而影響機(jī)體免疫信息[10-12]。據(jù)研究表明，孫加燕等[13]研究發(fā)現(xiàn)瑪咖多糖濃度在0.1~10.0 mg/L范圍內(nèi)能促進(jìn)大鼠上皮細(xì)胞增殖，在10.0 mg/L濃度時(shí)能促進(jìn)上皮細(xì)胞遷移，這一結(jié)果和CHEN等[14]研究得出的瑪咖多糖具備調(diào)節(jié)機(jī)體免疫功能的觀點(diǎn)基本一致。YIN等[15]從海藻中提取的多糖具有調(diào)節(jié)機(jī)體腸道菌群和免疫應(yīng)答等活性功能，劉紅萍等[16]研究發(fā)現(xiàn)，高劑量白芷多糖處理可增強(qiáng)免疫低下小鼠的先天免疫功能，也可以促進(jìn)小鼠脾淋巴細(xì)胞增殖。

基于以上研究基礎(chǔ)，本研究以Balb/c小鼠為實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，對(duì)火龍果莖多糖樣品進(jìn)行毒性評(píng)價(jià)，探究火龍果莖多糖對(duì)體外小鼠淋巴細(xì)胞增殖效應(yīng)，及其對(duì)環(huán)磷酰胺誘導(dǎo)的免疫低下小鼠細(xì)胞免疫調(diào)節(jié)活性的影響，旨在明確火龍果莖多糖是否具有免疫調(diào)節(jié)活性，為火龍果莖多糖開發(fā)為功能產(chǎn)品提供一定參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

新鮮火龍果莖由海南省東方市北緯十八度果業(yè)有限公司提供。

實(shí)驗(yàn)動(dòng)物：Balb/c小鼠，雌性，55只，每只18~20 g。小鼠SPF環(huán)境飼養(yǎng)，正常供食供水（動(dòng)物實(shí)驗(yàn)過(guò)程獲得海南大學(xué)和海南醫(yī)學(xué)院動(dòng)物倫理委員會(huì)的批準(zhǔn)）。

RPMI-1640培養(yǎng)液：RPMI-1640（Gibco），NaHCO3；HEPES，丙酮酸鈉110，青霉素鈉，硫酸鏈霉素，2-ME，胎牛血清（FBS）10%；磷酸鹽緩沖生理鹽水（PBS）；紅細(xì)胞裂解液：NH4Cl，KHCO3，EDTA（pH 7.6）；環(huán)磷酰胺（cytoxan,CTX），江蘇盛迪醫(yī)藥有限公司；刀豆球蛋白A（concanavalin A, ConA）（Sigma）；脂多糖（lipopolysaccharide, LPS）（Sigma）；CCK-8檢測(cè)試劑盒（美侖生物）。

1.2 方法

1.2.1 體外小鼠淋巴細(xì)胞增殖效應(yīng)檢測(cè) （1）火龍果莖多糖制備與配制。多糖制備：清洗干凈的新鮮火龍果莖剖切去刺去芯，切成小塊取200 g，在2.0 MPa，120 s的條件下進(jìn)行汽爆，汽爆后使用紗布分離固體殘?jiān)?000 r/min離心15 min，除掉沉淀，通過(guò)旋蒸濃縮上清液至1/4，按4倍體積加入95%乙醇于4 ℃低溫醇沉，醇沉后6000 r/min離心10 min，取沉淀凍干，得到粗多糖PSP-1，得率為2.18%，PSP-1中總糖含量為44.64%，按馬若影[5]的多糖純化方法，利用大孔樹脂對(duì)PSP-1進(jìn)行脫色除蛋白得到純化多糖PSP-2，PSP-2在PSP-1組分中約占1/5。

多糖配制：稱取33.8 mg PSP-1加至676 μL二甲基亞砜（DMSO）中配成濃度為50 mg/mL的溶液，稱取6.9 mg PSP-2加至690 μL DMSO中配成濃度為10 mg/mL的溶液，二者均無(wú)法完全溶解，靜置有棕黃色沉淀物質(zhì)，通過(guò)渦旋和冰浴超聲助溶后可以成為混懸狀態(tài)，由于無(wú)法確定未溶物的質(zhì)量，故后續(xù)實(shí)驗(yàn)先混懸再吸取使用。在含10%胎牛血清的RPMI-1640培養(yǎng)液中將PSP-1多糖DMSO溶液配制成濃度為200 μg/mL，PSP-2多糖DMSO溶液配制成濃度為40 μg/mL，再用含10%胎牛血清的RPMI-1640培養(yǎng)液將待測(cè)樣品稀釋至所需樣品液濃度。

因PSP-2在PSP-1組分中約占1/5，故設(shè)置PSP-1體外劑量為PSP-2的5倍，則最終PSP-1的培養(yǎng)濃度為50、5、0.5、0.05、0.005、0.0005、0.000 05 μg/mL；PSP-2的培養(yǎng)濃度為10、1、0.1、0.01、0.001、0.0001、0.000 01 μg/mL。顯微鏡下觀察均未出現(xiàn)明顯不溶物顆粒。

（2）小鼠淋巴細(xì)胞的制備。脫脊椎處死5只Balb/c小鼠，無(wú)菌環(huán)境下取脾臟進(jìn)行破碎，過(guò)膜，于4 ℃，1200 r/min離心5 min，離心沉淀加入紅細(xì)胞裂解液約1 mL，混勻，靜置30 s；加入PBS，終止紅裂，離心，循環(huán)2次；洗滌2次剩余細(xì)胞，用含10%胎牛血清的RPMI-1640 培養(yǎng)液將細(xì)胞懸至5 mL，對(duì)細(xì)胞樣品進(jìn)行活細(xì)胞計(jì)數(shù)，調(diào)節(jié)細(xì)胞濃度為4×106個(gè)/mL。

（3）淋巴細(xì)胞增殖活性檢測(cè)。①對(duì)淋巴細(xì)胞毒性濃度排除。在96孔培養(yǎng)板中每孔加入100 μL各組細(xì)胞樣品懸液，50 μL培養(yǎng)液，50 μL各濃度待測(cè)多糖培養(yǎng)液，總體積200 μL。每個(gè)樣品設(shè)4個(gè)復(fù)孔，另設(shè)4孔加培養(yǎng)液作為正常對(duì)照組，2孔無(wú)細(xì)胞等體積培養(yǎng)液作為本底空白對(duì)照。細(xì)胞于含5% CO2的37 ℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48 h，培養(yǎng)結(jié)束前12 h每孔加入10 μL CCK-8溶液。測(cè)定時(shí)將標(biāo)記的細(xì)胞樣品用全波長(zhǎng)酶標(biāo)儀在450 nm處讀取OD值，以正常對(duì)照組細(xì)胞生存率為100%，空白對(duì)照組作為本底扣除，即0%，計(jì)算待測(cè)樣品組細(xì)胞生存比率。②對(duì)T、B淋巴細(xì)胞增殖活性效應(yīng)的評(píng)價(jià)。在96孔培養(yǎng)板中每孔加入100 μL各組細(xì)胞樣品懸液，50 μL有絲分裂原（ConA終濃度1 μg/mL或LPS終濃度2 μg/mL），50 μL各濃度待測(cè)多糖培養(yǎng)液，總體積200 μL。每個(gè)樣品設(shè)4個(gè)復(fù)孔，設(shè)4孔僅加有絲分裂原不加待測(cè)多糖培養(yǎng)液作為細(xì)胞增殖的陽(yáng)性對(duì)照，另設(shè)4孔不加有絲分裂原作為細(xì)胞增殖的陰性對(duì)照。細(xì)胞于含5% CO2的37 ℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48 h，培養(yǎng)結(jié)束前12 h每孔加入10 μL CCK-8溶液。測(cè)定時(shí)將標(biāo)記的細(xì)胞樣品用全波長(zhǎng)酶標(biāo)儀在450 nm處讀取OD值，以僅加有絲分裂原的陽(yáng)性對(duì)照組細(xì)胞的增殖率為100%，陰性對(duì)照組作為未增殖本底扣除，即0%，計(jì)算待測(cè)樣品組細(xì)胞增殖比率。

1.2.2 體內(nèi)小鼠細(xì)胞免疫調(diào)控活性檢測(cè) （1）實(shí)驗(yàn)小鼠分組。準(zhǔn)備50只Balb/c小鼠，其中，空白（正常）對(duì)照組10只，免疫低下模型對(duì)照組10只，火龍果莖多糖低劑量組（125 mg/kg）10只，火龍果莖多糖中劑量組（250 mg/kg）10只，火龍果莖多糖高劑量組（500 mg/kg）10只。

（2）實(shí)驗(yàn)小鼠模型。小鼠隨機(jī)分為5組，每組10只，提前1周經(jīng)胃給予小鼠多糖，以注射等體積生理鹽水為空白對(duì)照組，其余組在第1、4、7天腹腔注射環(huán)磷酰胺75 mg/kg。

（3）多糖樣品的配制與干預(yù)。用純水溶解火龍果莖多糖受試樣品，配制成所需干預(yù)濃度如下，分別對(duì)應(yīng)樣品干預(yù)的低（125 mg/kg）、中（250 mg/kg）、高濃度（500 mg/kg）。低劑量組：125 mg/kg×0.1 kg/mL= 12.5 mg/mL；中劑量組：250 mg/kg×0.1 kg/mL= 25 mg/mL；高劑量組：500 mg/kg×0.1 kg/mL= 50 mg/mL。

CTX造模前，各濃度組干預(yù)1周，每組每天灌胃0.1 mL/10 g。第1次CTX發(fā)作后，繼續(xù)干預(yù)10 d，第10天處死各組實(shí)驗(yàn)小鼠，評(píng)估干預(yù)效果。期間，空白對(duì)照組和模型對(duì)照組按相同方法灌胃純水。

（4）體重觀測(cè)。自實(shí)驗(yàn)小鼠分組開始，每天監(jiān)測(cè)每只實(shí)驗(yàn)小鼠的體重變化，并記錄。

（5）脾指數(shù)。在多糖干預(yù)終點(diǎn)，脫脊椎處死小鼠，無(wú)菌取脾臟，并對(duì)臟器質(zhì)量稱重，計(jì)算每只小鼠的脾指數(shù)。脾指數(shù)=脾臟質(zhì)量/體重，單位為mg/g。

（6）全脾免疫細(xì)胞計(jì)數(shù)。在多糖樣品的干預(yù)終點(diǎn)，參照1.2.1-（2），計(jì)算每只小鼠的全脾免疫細(xì)胞的總數(shù)。

（7）T、B淋巴細(xì)胞增殖能力檢測(cè)。將細(xì)胞樣品的細(xì)胞濃度調(diào)至4×106個(gè)/mL。每個(gè)樣品設(shè)12個(gè)復(fù)孔，另設(shè)12孔不加有絲分裂原作為細(xì)胞增殖的空白對(duì)照。參照1.2.1-（3）檢測(cè)T、B淋巴細(xì)胞在火龍果莖多糖作用后的淋巴細(xì)胞增殖比率。

（8）血細(xì)胞計(jì)數(shù)。在體內(nèi)實(shí)驗(yàn)終點(diǎn)，取各組小鼠全血，檸檬酸鈉抗凝處理。經(jīng)適當(dāng)稀釋后，用血細(xì)胞分析儀檢測(cè)全血中白細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、中間細(xì)胞、粒細(xì)胞、紅細(xì)胞以及血小板等成分的數(shù)量。以每升血液中的血細(xì)胞數(shù)量表示。

1.3 數(shù)據(jù)處理

所有實(shí)驗(yàn)結(jié)果均以均值±SD表示，數(shù)據(jù)均符合正態(tài)分布，采用單因素方差分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 體外小鼠淋巴細(xì)胞增殖效應(yīng)

2.1.1 對(duì)淋巴細(xì)胞毒性濃度排除 脾臟淋巴細(xì)胞在無(wú)誘導(dǎo)條件下無(wú)增殖能力，可在無(wú)誘導(dǎo)培養(yǎng)條件下通過(guò)活細(xì)胞檢測(cè)評(píng)價(jià)火龍果莖多糖是否對(duì)淋巴細(xì)胞具有毒性效應(yīng)，或者可能的毒性濃度范圍。結(jié)果如圖1，火龍果莖多糖樣品在測(cè)試濃度范圍內(nèi)對(duì)活細(xì)胞均未表現(xiàn)出明顯的細(xì)胞毒性效應(yīng)，即在該濃度范圍內(nèi)火龍果莖多糖對(duì)脾臟淋巴細(xì)胞存活率均無(wú)抑制作用。PSP-1在0.5 μg/mL條件下具有一定增殖促進(jìn)作用，但其他濃度條件下細(xì)胞存活率的變化不明顯；PSP-2在濃度范圍內(nèi)均呈明顯的促進(jìn)增殖作用，并具有濃度依賴關(guān)系。這說(shuō)明火龍果莖多糖，尤其是PSP-2可能具有誘導(dǎo)淋巴細(xì)胞增殖的效應(yīng)。

圖1 火龍果莖多糖對(duì)淋巴細(xì)胞的毒性效應(yīng)Fig. 1 Toxic effects of pitaya stem polysaccharides on lymphocytes

2.1.2 對(duì)T淋巴細(xì)胞增殖活性的影響 檢測(cè)淋巴細(xì)胞增殖能力是評(píng)價(jià)免疫功能最重要的指標(biāo)，有絲分裂原ConA主要誘導(dǎo)T淋巴細(xì)胞增殖。結(jié)果如圖2，在有絲分裂原ConA（1 μg/mL）誘導(dǎo)的條件下，火龍果莖多糖在無(wú)毒性濃度范圍內(nèi)對(duì)T淋巴細(xì)胞均表現(xiàn)出顯著的增殖促進(jìn)效應(yīng)，并呈現(xiàn)一定的濃度依賴關(guān)系，PSP-1和PSP-2多糖濃度分別為50、10 μg/mL時(shí)的增殖效果最好，PSP-1為PSP-2的5倍濃度的條件下，增殖促進(jìn)作用與PSP-2相當(dāng)。這說(shuō)明純化后的火龍果莖多糖PSP-2可能是PSP-1促進(jìn)免疫功能的主要效應(yīng)成分。

圖2 火龍果莖多糖對(duì)T淋巴細(xì)胞增殖效應(yīng)的影響Fig. 2 Effects of pitaya stem polysaccharides on the proliferative effect of T lymphocytes

2.1.3 對(duì)B淋巴細(xì)胞增殖活性的影響 有絲分裂原LPS主要誘導(dǎo)B淋巴細(xì)胞增殖。結(jié)果如圖3，在有絲分裂原LPS（2 μg/mL）誘導(dǎo)的條件下，火龍果莖多糖在無(wú)毒性濃度范圍內(nèi)，PSP-1與PSP-2均未對(duì)B淋巴細(xì)胞表現(xiàn)出增殖促進(jìn)效應(yīng)。結(jié)合在無(wú)誘導(dǎo)條件下和ConA誘導(dǎo)條件下火龍果莖多糖對(duì)淋巴細(xì)胞的效應(yīng)，可見火龍果莖多糖促進(jìn)淋巴細(xì)胞增殖主要作用于T淋巴細(xì)胞增殖，且表現(xiàn)出非有絲分裂原誘導(dǎo)依賴的特征，而PSP-2可能為其中的主要效應(yīng)成分。

2.2 體內(nèi)小鼠細(xì)胞免疫調(diào)控活性

2.2.1 體重觀測(cè) 結(jié)果如圖4，在為期10 d的體重觀測(cè)期內(nèi)，各組實(shí)驗(yàn)小鼠在各體重監(jiān)測(cè)點(diǎn)中均未表現(xiàn)出組間差異，體重基本維持在18~20 g之間。這說(shuō)明環(huán)磷酰胺與火龍果莖多糖對(duì)實(shí)驗(yàn)小鼠體重均無(wú)明顯影響。

圖4 小鼠體重監(jiān)測(cè)結(jié)果Fig. 4 Mouse weight monitoring results

2.2.2 脾指數(shù) 結(jié)果如圖5，經(jīng)環(huán)磷酰胺所致的免疫低下小鼠脾指數(shù)與正常小鼠相比，其脾指數(shù)降低幅度較大，表明環(huán)磷酰胺建?？捎糜诙嗵堑拿庖咝?yīng)評(píng)價(jià)。火龍果莖多糖模型CK、低劑量組和中劑量組的脾指數(shù)比高劑量組略低，但三組均與空白CK呈極顯著差異。

圖5 小鼠脾指數(shù)Fig. 5 Mouse spleen weight index

2.2.3 全脾免疫細(xì)胞計(jì)數(shù) 對(duì)裂解后的全脾細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)，結(jié)果如圖6，與正常組（空白CK）相比，模型CK、低劑量和中劑量的細(xì)胞數(shù)顯著降低，而高劑量處理的全脾細(xì)胞數(shù)比這三組明顯提升，且具有顯著性差異。這表明經(jīng)胃給予火龍果莖多糖的模型小鼠具有一定的恢復(fù)或增強(qiáng)免疫的效應(yīng)。

圖6 小鼠脾臟免疫細(xì)胞計(jì)數(shù)Fig. 6 Mouse spleen immune cell counts

2.2.4 對(duì)T、B淋巴細(xì)胞增殖能力評(píng)價(jià) 小鼠體內(nèi)淋巴細(xì)胞增殖結(jié)果如圖7，火龍果莖多糖在體內(nèi)促進(jìn)淋巴細(xì)胞增殖效應(yīng)評(píng)價(jià)中，出現(xiàn)了跟體外增殖實(shí)驗(yàn)一樣的結(jié)果。結(jié)果表明，經(jīng)ConA誘導(dǎo)的各模型處理組T淋巴細(xì)胞增殖能力明顯減弱，由LPS誘導(dǎo)的各模型處理組B淋巴細(xì)胞也出現(xiàn)相同結(jié)果，但經(jīng)胃給與火龍果莖多糖的小鼠T淋巴細(xì)胞增殖能力與模型CK組相比有明顯的促進(jìn)效應(yīng)，但給予相同劑量多糖的小鼠B淋巴細(xì)胞無(wú)明顯效應(yīng)。這種結(jié)果的一致性進(jìn)一步說(shuō)明，T淋巴細(xì)胞可能是火龍果莖多糖促進(jìn)機(jī)體免疫的主要靶細(xì)胞。

圖7 小鼠淋巴細(xì)胞增殖率Fig. 7 Mouse lymphocyte proliferation rate

2.2.5 血細(xì)胞計(jì)數(shù) 結(jié)果如圖8，環(huán)磷酰胺誘導(dǎo)的免疫低下小鼠模型其外周血細(xì)胞比例并未發(fā)生有規(guī)律的改變，這可能是由于環(huán)磷酰胺對(duì)骨髓抑制與造血代償效應(yīng)的相互作用造成的。其中，雖然外周淋巴細(xì)胞可能由于造血代償導(dǎo)致模型處理組淋巴細(xì)胞的比例增加，而火龍果莖多糖高劑量處理組能夠進(jìn)一步提高其細(xì)胞比例，這與全脾免疫細(xì)胞數(shù)增加的研究結(jié)果一致，這也從另一方面表明火龍果莖多糖，特別是高劑量具有一定的免疫增強(qiáng)效應(yīng)。

圖8 小鼠血細(xì)胞計(jì)數(shù)Fig. 8 Mouse blood cell count

3 討論

生物體通過(guò)在漫長(zhǎng)的種系發(fā)展過(guò)程和進(jìn)化歷程中產(chǎn)生的適應(yīng)型免疫應(yīng)答來(lái)保證體內(nèi)環(huán)境的相對(duì)平衡，這種防御機(jī)制中主要利用T、B淋巴細(xì)胞產(chǎn)生的不同抗體來(lái)實(shí)現(xiàn)免疫作用，而脾臟作為人體最主要的免疫器官，可以產(chǎn)生大量淋巴細(xì)胞來(lái)實(shí)現(xiàn)免疫作用，而免疫細(xì)胞的活躍度以及免疫器官的發(fā)育也能夠反映機(jī)體免疫程度，細(xì)胞繁殖能力以及脾臟指數(shù)越高，則表示人體免疫力也越高[17-18]。

多糖是火龍果莖的重要活性物質(zhì)，作為一種來(lái)源安全、天然的植物多糖，具備多種生理功能，具有較高的開發(fā)利用價(jià)值。目前關(guān)于火龍果莖多糖免疫功能的研究尚未報(bào)道，但發(fā)現(xiàn)多種植物多糖均具有顯著的免疫活性，如茶葉多糖[19]在處理免疫低下小鼠后能顯著提高小鼠脾臟和胸腺指數(shù)，也可降低脾細(xì)胞腫瘤壞死因子-α和白細(xì)胞介素-6的含量。巖藻多糖[20]可以通過(guò)增加免疫球蛋白和細(xì)胞因子的分泌，減少炎癥因子的產(chǎn)生，從而提高免疫低下小鼠的免疫功能，并能有效緩解環(huán)磷酰胺造成的免疫器官損傷。荔枝多糖[21]可誘導(dǎo)脾臟細(xì)胞增殖、平衡脾臟淋巴細(xì)胞亞群比例、提高胸腺和脾臟指數(shù)等系統(tǒng)免疫應(yīng)答。白術(shù)多糖[22]同樣對(duì)淋巴細(xì)胞、脾臟細(xì)胞的增殖具有顯著的提升效果。因此，本研究將火龍果莖多糖應(yīng)用于免疫低下小鼠模型對(duì)其體內(nèi)免疫調(diào)節(jié)活性進(jìn)行研究，旨在明確火龍果莖多糖是否具有免疫調(diào)節(jié)功能，為火龍果莖多糖的功能性利用提供依據(jù)。

研究結(jié)果顯示：①火龍果莖多糖PSP-1和PSP-2對(duì)原代脾臟淋巴細(xì)胞均無(wú)毒性效應(yīng)。②火龍果莖多糖PSP-2在沒(méi)有有絲分裂原誘導(dǎo)的條件下，其檢測(cè)濃度范圍均具有誘導(dǎo)淋巴細(xì)胞的增殖效應(yīng)，且在0.01~10 μg/ml濃度范圍內(nèi)具有明顯的量效關(guān)系。③有絲分裂原誘導(dǎo)的淋巴細(xì)胞增殖結(jié)果表明，火龍果莖多糖在LPS誘導(dǎo)條件下無(wú)顯著的促進(jìn)增殖效應(yīng)，而能促進(jìn)ConA誘導(dǎo)的淋巴細(xì)胞增殖，并具備一定的濃度依賴關(guān)系，說(shuō)明火龍果莖多糖的主要效應(yīng)細(xì)胞為T淋巴細(xì)胞。并且在PSP-1與5倍濃度PSP-2的效應(yīng)比較中，2種多糖表現(xiàn)出相近的效應(yīng)與量效關(guān)系，說(shuō)明PSP-2可能是主要促進(jìn)T淋巴細(xì)胞增殖的活性組成部分。④通過(guò)環(huán)磷酰胺誘導(dǎo)的免疫低下小鼠模型評(píng)價(jià)火龍果莖多糖對(duì)增進(jìn)免疫功能的可能效應(yīng)。結(jié)果表明，火龍果莖多糖能一定程度緩解環(huán)磷酰胺對(duì)脾臟免疫細(xì)胞數(shù)量的抑制作用，對(duì)全脾免疫細(xì)胞數(shù)量與脾指數(shù)的效應(yīng)一致，且高劑量的作用更為顯著。

綜上所述，火龍果莖多糖在小鼠體內(nèi)外的實(shí)驗(yàn)中均表現(xiàn)出對(duì)ConA誘導(dǎo)的T淋巴細(xì)胞增殖反應(yīng)的特異性促進(jìn)作用，說(shuō)明T淋巴細(xì)胞可能是火龍果莖多糖促進(jìn)免疫作用的主要效應(yīng)細(xì)胞。而相對(duì)細(xì)胞數(shù)量與細(xì)胞增殖能力的效應(yīng)，高劑量對(duì)脾指數(shù)的提升效果不顯著，表明火龍果莖多糖促進(jìn)免疫主要是通過(guò)增加淋巴細(xì)胞的功能實(shí)現(xiàn)的。