◎ 張敬鍇，張 琪，趙英妮，陳 爍

（廣東億超生物科技有限公司，廣東 汕頭 515000）

輔酶Q10是一種醌環(huán)類化合物，又稱泛醌10，是生物體內(nèi)廣泛存在的脂溶性醌類化合物[1]，在人體呼吸鏈中質(zhì)子移位及電子傳遞中起重要作用，可作為細(xì)胞代謝和細(xì)胞呼吸激活劑。同時，輔酶Q10是重要的抗氧化劑和非特異性免疫增強(qiáng)劑[2]，具有抗心肌缺血、抗心衰、抗心律失常、提高人體免疫力、增強(qiáng)抗氧化、延緩衰老和增強(qiáng)人體活力等功能[3-7]。根據(jù)相關(guān)的研究，輔酶Q10在堿性和光照條件下容易被破壞[8]。

2003 年，美國食品藥品監(jiān)督管理局（FDA）正式批準(zhǔn)輔酶Q10作為食品添加劑廣泛使用[9]。2021 年3 月1 日，我國實行的《保健品食品原料目錄 輔酶Q10》允許輔酶Q10添加到膳食補(bǔ)充劑中[10]。目前，添加輔酶Q10的劑型大部分是片劑或軟膠囊，我國已批準(zhǔn)171 個輔酶Q10類保健食品[11]。然而，對于輔酶Q10添加到軟糖中作為膳食補(bǔ)充劑的研究很少。因此，為檢測軟糖中輔酶Q10含量，本研究采用HPLC 法測定軟糖基質(zhì)中輔酶Q10含量。

1 試驗部分

1.1 儀器與試藥

1260 高效液相色譜儀（安捷倫）配紫外檢測器；多管式渦旋混合器；輔酶Q10對照品（中國食品藥品檢定研究院）。

1.2 色譜條件

色譜柱：C18 柱，流動相；甲醇∶無水乙醇（1 ∶1）；柱溫：35 ℃，進(jìn)樣體積：10 μL，檢測波長：275 nm，進(jìn)樣量：10 μL。

1.3 前處理方法研究

1.3.1 選擇不同的提取溶劑

輔酶Q10易溶于氯仿、苯、四氯化碳、石油醚、乙醚、丙酮、正己烷，微溶于乙醇，不溶于水、甲醇。但高比例的有機(jī)溶劑無法溶解軟糖，軟糖在檢測時，需要先用水溶解，再選用合適的溶劑進(jìn)行提取。對此，本研究分別選取石油醚、乙醚和正己烷3 種溶劑，以篩選適合的提取溶劑。

1.3.2 選擇不同的用水量溶解軟糖

分別加入5、10、15、20 mL 水，以篩選適合溶解軟糖的用水量。

1.3.3 選擇不同的溶劑提取次數(shù)

分別重復(fù)實驗提取步驟1、2、3、4 次，以篩選適合的溶劑提取次數(shù)。

1.4 前處理方法研究結(jié)果分析

1.4.1 選擇不同的提取溶劑

1.4.1.1 選擇不同的提取溶劑結(jié)果（如表1）

表1 不同的提取溶劑結(jié)果表

1.4.1.2 檢測結(jié)果分析

由表1 可見，①使用石油醚和乙醚提取檢測結(jié)果，高于使用正己烷提取的結(jié)果。其原因在于正己烷和水層的提取效率沒有石油醚、乙醚和水層的提取效率高。②石油醚和乙醚溶劑提取檢測結(jié)果基本沒有差別，但是考慮到乙醚是易制毒試劑，在日常的使用中受到嚴(yán)格的管控，而石油醚沒有此限制，所以選用石油醚作為提取溶劑。

1.4.2 選擇不同的用水量溶解軟糖

1.4.2.1 選擇不同的用水量結(jié)果（如表2）

表2 不同用水量結(jié)果表

1.4.2.2 檢測結(jié)果分析

分別用5、10、15、20 mL 水溶解軟糖后，按前處理方法處理，用10 mL 水溶解軟糖檢測結(jié)果最高。其原因在于用水量太少，導(dǎo)致軟糖溶解后的水溶液太黏稠，影響提取效果；用水量太多，使用的多管式渦旋混合器無法使溶液充分渦旋混合。因此，選用10 mL水溶解軟糖。

1.4.3 選擇不同的溶劑提取次數(shù)

1.4.3.1 不同的溶劑提取次數(shù)結(jié)果（如表3）

表3 不同的溶劑提取次數(shù)結(jié)果表

1.4.3.2 檢測結(jié)果分析

由表3 可見，重復(fù)提取步驟1、2、3 和4 次，隨著提取次數(shù)增加，檢測結(jié)果會相應(yīng)提高，提取3 次后，檢測結(jié)果基本沒有變化，所以選取溶劑提取3 次。

1.5 方法學(xué)驗證

根據(jù)前處理方法研究結(jié)果，確定前處理方法為取樣品1 g 于離心管中，加入10 mL 水，在水浴中溶解樣品，再加入石油醚15 mL，渦旋2 min，10 000 r/min 離心2 min，收集上層提取液于旋蒸瓶中，重復(fù)上述步驟共3 次，石油醚液減壓旋蒸，蒸干后定量加入無水乙醇50 mL，溶解殘渣，過濾后,即為供試品溶液。

1.5.1 檢測限、定量限與線性范圍的測定

配制輔酶Q10工作曲線，從檢測結(jié)果獲得回歸方程：y=10.65x-8.461，R2=0.999 9， 在11.187～559.367 μg/mL 濃度范圍內(nèi)，有良好線性。在樣品稱樣量為1 g、稀釋倍數(shù)為50 mL 時，輔酶Q10檢出限80 mg/kg，定量限267 mg/kg。

1.5.2 精密度與準(zhǔn)確度的測定

取輔酶Q10陰性樣品，分別加入一定量的輔酶Q10標(biāo)準(zhǔn)品溶液，使之成為理論濃度分別約為25、100、300 μg/mL 的樣品，每個濃度平行操作6 份，照1.2的色譜條件上機(jī)測定，計算各組樣品含量的RSD%，結(jié)果如表4。

表4 樣品RSD 結(jié)果表

試驗結(jié)果顯示，輔酶Q10陰性樣品3 個濃度水平加標(biāo)精密度分別為1.7%、1.7%、2.5%，3 個濃度水平準(zhǔn)確度在90.10%～104.5%之間，結(jié)果均在可接受標(biāo)準(zhǔn)范圍內(nèi)。

2 結(jié)論

本研究通過輔酶Q10含量測定的前處理方法進(jìn)行研究，開展了針對檢測限、定量限、線性、精密度和準(zhǔn)確度的實驗，檢測結(jié)果均在可接受標(biāo)準(zhǔn)范圍內(nèi)。由此可見，本研究采用的方法可以用來測定軟糖中輔酶Q10的含量。