傅駿青，程玲云，楊振東，于艷艷，楊穎，胡梅*

山東省食品藥品檢驗研究院，山東省特殊醫(yī)學用途配方食品質(zhì)量控制工程技術(shù)研究中心，產(chǎn)業(yè)技術(shù)基礎(chǔ)公共服務(wù)平臺（濟南 250101）

伏馬菌素是多氫醇和丙三羧酸組成的結(jié)構(gòu)相似的一類雙酯化合物，是由串珠鐮刀菌、輪狀鐮刀菌等在一定溫度、濕度下產(chǎn)生的一種真菌毒素[1,3]。已發(fā)現(xiàn)的伏馬菌素包括A、B、C、P這4類共11種，其中毒性最強的是伏馬菌素B1[4-5]。伏馬菌素主要污染的食物種類為玉米及其制品，玉米粉（渣）是最常見的玉米制品，也是最典型的伏馬菌素污染載體[6]。

國際癌癥研究機構(gòu)（IRAC）將伏馬菌素列為人類潛在致癌物質(zhì)（Group 2B類物質(zhì)）[7-8]，部分國家及地區(qū)組織制定玉米制品中伏馬菌素的限量要求，國際食品法典委員會（CAC）規(guī)定玉米粉和玉米面中伏馬菌素B1+B2限量為2 000 μg/kg[9]。我國正在修訂的GB 2761《食品安全國家標準 食品中真菌毒素限量》增加食品中伏馬菌素限量。

食品中伏馬菌素的標準檢測方法為GB 5009.240—2016《食品安全國家標準 食品中伏馬毒素的測定》[10]，快檢方法為KJ 202106《玉米及其碾磨加工品中伏馬毒素的快速檢測 膠體金免疫層析法》。膠體金免疫層析法作為快檢方法中最省時省力且經(jīng)濟的方法，適用于大批量樣品的初篩和現(xiàn)場檢測，具有不可替代性，已得到廣泛應(yīng)用[11-13]。但膠體金免疫層析法的準確性依賴快檢產(chǎn)品的質(zhì)量[14-15]，進行產(chǎn)品調(diào)研和適用性評價是必要的工作。

試驗調(diào)研國內(nèi)市售測定玉米粉（渣）中伏馬菌素的10種膠體金定性快速檢測產(chǎn)品，分析一般性指標的差異。選取3種主流品牌的快檢產(chǎn)品，以GB 5009.240—2016《食品安全國家標準 食品中伏馬毒素的測定》[10]為參比方法，分析3種品牌快檢產(chǎn)品的適用性。選擇1種品牌對30批次玉米粉（渣）盲樣進行應(yīng)用測定，以考察快檢產(chǎn)品的實際應(yīng)用性，為玉米粉（渣）中伏馬菌素的快速篩查工作提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

有證標準物質(zhì)：伏馬菌素B1（CAS號116355-83-0）、伏馬菌素B2（CAS號116355-84-1）、伏馬菌素B3（CAS號136379-59-4），質(zhì)量濃度均為50 μg/mL。

樣品基質(zhì)：為保證樣品代表性，購買產(chǎn)自主要玉米產(chǎn)區(qū)山東、四川、河北、河南、廣東、遼寧、陜西的玉米粉（渣）作為盲樣。

伏馬菌素快速檢測產(chǎn)品購自10個國內(nèi)品牌，為避免評價結(jié)果對快檢品牌的影響，10個快檢品牌分別標記為北京A、武漢B、北京C、北京D、廣東E、深圳F、上海G、江蘇H、廣東I、山東J。

其他試劑均為分析純，符合快檢試劑盒使用要求。

1.2 儀器與設(shè)備

UPLC/TQD液相色譜-質(zhì)譜儀（美國沃特世公司）；MS204S電子天平（梅特勒-托利多公司）；3-18KS冷凍高速離心機（德國希格瑪公司）；IKAMS3basic渦旋混合器（德國IKA公司）；恒溫水浴振蕩器（金壇市醫(yī)療儀器廠）。

1.3 試驗方法

1.3.1 盲樣制備

玉米粉、玉米渣樣品用谷物粉碎機磨碎并過0.850 mm（20目）篩。按照不同快檢品牌（北京A、武漢B、北京C）的要求稱取樣品到相應(yīng)規(guī)格的離心管中，編號后置于0～4 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.3.2 加標

取預先經(jīng)國家標準方法測定完成的空白樣品，按照1.3.1樣品制備法制備空白樣品。由于不同品牌快檢產(chǎn)品的檢出限不同，取稱量好的空白樣品，按照0，0.5和1.0倍檢出限分別對空白樣品各加標10份。

1.3.3 評價方法

1.3.3.1 液相色譜-質(zhì)譜法測定

參比方法選擇GB 5009.240—2016《食品安全國家標準 食品中伏馬菌素的測定》（第二法 液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用法）對待測盲樣進行伏馬菌素含量測定。

檢測條件：流動相A為甲醇，流動相B為0.1%的甲酸水溶液；流速0.30 mL/min；柱溫40 ℃；進樣量10 μL。

1.3.3.2 膠體金快檢試劑盒定性測定

為評價試驗產(chǎn)品的檢測結(jié)果準確性，用于分析的盲樣由陰性樣品、陽性樣品組成。根據(jù)選定的快檢產(chǎn)品的說明書，分別對2個空白樣品進行3個濃度水平加標樣品的定性檢測，每個濃度水平10次平行試驗。

1.3.3.3 盲樣應(yīng)用驗證

采用選定的快檢產(chǎn)品對30批次盲樣進行實際應(yīng)用測定，每個盲樣平行測定2次，同時進行人員比對。

1.4 數(shù)據(jù)處理

計算試驗所用快檢產(chǎn)品的靈敏度、特異性、假陰性率、假陽性率，并對數(shù)據(jù)進行整理分析。

2 結(jié)果與討論

2.1 國內(nèi)市售伏馬菌素膠體金快檢產(chǎn)品調(diào)研情況

選擇國內(nèi)10家市售伏馬菌素膠體金定性快速檢測產(chǎn)品，分析一般性指標差異，結(jié)果見表1。從測定對象看，10家快檢產(chǎn)品測定對象均包含伏馬菌素B1，僅北京A、北京C、廣東E可測定伏馬菌素B族（B1+B2+B3）。從適用基質(zhì)看，產(chǎn)品多適用于糧食、飼料，經(jīng)與品牌方溝通，10家快檢產(chǎn)品實際均可用于測定玉米粉（渣）中的伏馬菌素。從檢測限看，檢測限范圍為200～60 000 μg/kg不等，北京A、武漢B、北京D可根據(jù)基質(zhì)的不同一定范圍內(nèi)自行調(diào)整檢測限。從產(chǎn)品完整性看，除江蘇H外，其余產(chǎn)品包裝、標簽標注完整，江蘇H包裝缺少產(chǎn)品有效期限（限用日期）；北京A等7家產(chǎn)品說明書內(nèi)容完整；武漢B等7家產(chǎn)品試劑耗材配套齊全，上海G、廣東I、山東J缺少耗材離心管。從反應(yīng)時間看，產(chǎn)品均可在10 min內(nèi)判讀結(jié)果，反應(yīng)時間最短為3 min，最長為8～10 min。從產(chǎn)品經(jīng)濟性看，產(chǎn)品單價范圍在17.5～35元不等，深圳F產(chǎn)品單價最低，但檢測限過高；北京C檢測限最低，單價最高；北京A可測定伏馬菌素B族，檢測限可調(diào)，價格適中。綜合以上調(diào)研情況，選定北京A、武漢B、北京C進行技術(shù)性指標評價，選定北京A進行盲樣應(yīng)用測定試驗。

表1 國內(nèi)市售伏馬菌素產(chǎn)品一般性指標

2.2 快檢試劑盒的適用性評價

2023年1月，國家市場監(jiān)管總局為規(guī)范市場監(jiān)管部門、銷售食品的市場開辦者使用食品快檢的行為，發(fā)布《關(guān)于規(guī)范食品快速檢測使用的意見》[17]，對食品快速檢測操作、信息公布、結(jié)果驗證、產(chǎn)品符合性評價進行規(guī)范。其中，《食品快速檢測產(chǎn)品符合性評價程序（附件4）》明確食品快檢產(chǎn)品符合性評價技術(shù)要求。參照《食品快速檢測產(chǎn)品符合性評價程序》，評估北京A、武漢B、北京C快檢試劑盒的適用性，并進行實際應(yīng)用性測定。

2.2.1 北京A試劑盒適用性評估

北京A試劑盒的檢測限為2 000～60 000 μg/kg，可通過調(diào)整樣品處理時的稀釋比例調(diào)整檢測限至2 000 μg/kg。加標濃度為0和0.5倍檢出限時不顯色（陰性），加標濃度為1倍檢出限時顯色（陽性），分別進行10次平行試驗。計算此試劑盒的靈敏度、特異性、假陰性率和假陽性率，結(jié)果為靈敏度100%、特異性100%、假陰性率0、假陽性率0。試紙條顯色結(jié)果穩(wěn)定且準確，對玉米粉、玉米渣基質(zhì)無差異，結(jié)果見表2。達到反應(yīng)時間5 min時，試紙條顯色清晰可辨。北京A試劑盒對玉米粉（渣）中伏馬菌素測定適用性良好。

表2 北京A試劑盒測定玉米粉（渣）中伏馬菌素結(jié)果

2.2.2 武漢B試劑盒適用性評估

武漢B試劑盒的檢測限為0～6 000 μg/kg，可通過調(diào)整樣品處理時的稀釋比例調(diào)整檢測限至1 000 μg/kg。加標濃度0和0.5倍檢出限時不顯色（陰性），加標濃度1倍檢出限時顯色（陽性），分別進行10次平行試驗。計算此試劑盒的靈敏度、特異性、假陰性率和假陽性率，結(jié)果為靈敏度90%、特異性100%、假陰性率10%、假陽性率0。試紙條顯色結(jié)果準確性稍低，對玉米粉、玉米渣基質(zhì)無差異，結(jié)果見表3。出現(xiàn)假陰性結(jié)果可能導致伏馬菌素超標漏檢的情況，應(yīng)調(diào)整試紙條靈敏度。反應(yīng)時間3 min時，試紙條顯色基本清晰，但延長至4 min時顯色完全清晰，建議延長武漢B試劑盒反應(yīng)時間。武漢B試劑盒對玉米粉（渣）中伏馬菌素測定適用性較差，建議進一步改進工藝提升準確性。

表3 武漢B試劑盒測定玉米粉（渣）中伏馬菌素結(jié)果

2.2.3 北京C試劑盒適用性評估

北京C試劑盒的檢測限為200 μg/kg，加標濃度0和0.5倍檢出限時不顯色（陰性），加標濃度1倍檢出限時顯色（陽性），分別進行10次平行試驗。計算此試劑盒的靈敏度、特異性、假陰性率和假陽性率，結(jié)果為靈敏度100%、特異性90%、假陰性率0、假陽性率10%。試紙條顯色結(jié)果不穩(wěn)定，玉米渣基質(zhì)在0.5倍檢出限略不準確，結(jié)果見表4。出現(xiàn)4批次假陽性結(jié)果增加復檢工作量，影響工作效率，但不影響被檢產(chǎn)品的質(zhì)量安全。反應(yīng)時間8 min時，試紙條顯色清晰，可判讀結(jié)果。北京C試劑盒對玉米渣中伏馬菌素測定適用性較差，建議進一步調(diào)整試劑盒的特異性。

表4 北京C試劑盒測定玉米粉（渣）中伏馬菌素結(jié)果

2.3 盲樣中伏馬菌素定值與應(yīng)用性測定

2.3.1 液相色譜-質(zhì)譜法測定

依據(jù)GB 5009.240—2016《食品安全國家標準 食品中伏馬菌素的測定》第二法液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用法，對30批次待測盲樣進行伏馬菌素含量定值測定，結(jié)果見表5。從污染水平看，25批次盲樣檢出伏馬菌素，檢出率為83.33，5批次未檢出（＜40 μg/kg）伏馬菌素。盲樣檢測平均值為998.13 μg/kg，接近歐盟限量（1 000 μg/kg）。最大值為11 635.26 μg/kg，超國際食品法典委員會（CAC）限量（2 000 μg/kg）近5倍，為產(chǎn)自陜西的玉米粉。以CAC限量計，共發(fā)現(xiàn)4批次盲樣超限量，分別來自山東（2批次）、陜西（1批次）、遼寧（1批次）。從基質(zhì)差異看，共7批次盲樣的檢測結(jié)果超過歐盟限量，包括6批次玉米粉和1批次玉米渣。共5批次盲樣未檢出伏馬菌素，包括4批次玉米渣和1批次玉米粉，顯示玉米粉比玉米渣更容易受到伏馬菌素污染。

表5 不同方法測定盲樣中伏馬菌素結(jié)果

2.3.2 盲樣應(yīng)用測定

選擇北京A試劑盒對30批次待測盲樣進行伏馬菌素定性測定，每個盲樣平行測定2次，同時進行人員比對，結(jié)果見表5。樣品中伏馬菌素含量大于2 000 μg/kg時快檢試紙條顯陽性，小于2 000 μg/kg時快檢試紙條顯陰性，試劑盒盲樣測定結(jié)果與參比方法結(jié)果一致，平行測定結(jié)果一致，人員比對結(jié)果一致。北京A試劑盒對盲樣測定應(yīng)用性良好，結(jié)果有效。

3 結(jié)論

通過調(diào)研國內(nèi)市場伏馬菌素快檢產(chǎn)品，發(fā)現(xiàn)多種快檢產(chǎn)品存在問題。快檢產(chǎn)品可以測定的玉米粉（渣）中伏馬菌素種類單一，所有產(chǎn)品均可測定伏馬菌素B1，僅少數(shù)產(chǎn)品可測定伏馬菌素B族；由于我國暫無食品中伏馬菌素限量要求，快檢產(chǎn)品檢測限差別大，需要根據(jù)基質(zhì)選擇檢測限合適的產(chǎn)品；部分產(chǎn)品存在基本信息標示不全或耗材不充分的情況。

從試劑盒評價結(jié)果看：玉米粉或玉米渣基質(zhì)差異對快檢試劑盒測定無影響，北京A試劑盒顯色結(jié)果穩(wěn)定且準確性高；武漢B試劑盒假陰性率為10%，可能漏檢超檢測限樣品；北京C試劑盒假陽性率為10%，增加了復檢工作量，但不影響被檢產(chǎn)品的質(zhì)量安全。從盲樣測定結(jié)果看，玉米粉（渣）中伏馬菌素檢出率為83.33%，污染較為普遍；超CAC限量的盲樣占比13.33%，伏馬菌素污染風險較高；玉米粉比玉米渣更容易受到伏馬菌素污染。

總之，可采用膠體金快檢方法對玉米及其制品中伏馬菌素進行初篩和日常監(jiān)控，但應(yīng)謹慎選擇合適的快檢產(chǎn)品。機構(gòu)或企業(yè)可參照《關(guān)于規(guī)范食品快速檢測使用的意見》對快檢產(chǎn)品進行初步評價，以保證數(shù)據(jù)準確性。