蔡靖波，任琦，袁銘銘，許妍

（江西省藥品檢驗(yàn)檢測研究院，國家藥品監(jiān)督管理局中成藥質(zhì)量評價(jià)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，江西省藥品與醫(yī)療器械質(zhì)量工程技術(shù)研究中心，江西南昌，330029）

0 引言

消炎鎮(zhèn)痛膏收載于《衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)》中藥成方制劑第八冊，由顛茄流浸膏、薄荷腦等七味藥組成，具有活血化瘀、祛風(fēng)除濕、抗炎消腫、快速止痛的功效。消炎鎮(zhèn)痛膏臨床應(yīng)用于神經(jīng)痛、風(fēng)濕痛、肩痛、扭傷、關(guān)節(jié)痛、肌肉疼痛等［1，2］。方中顛茄流浸膏解痙止痛；麝香草腦芳香開竅，有解毒散結(jié)作用［3］。由于具有良好的臨床療效和廣泛的臨床應(yīng)用，故而顛茄流浸膏需求量日益增加。但是，顛茄流浸膏和顛茄浸膏現(xiàn)行法定標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)控項(xiàng)目少，且顛茄浸膏無文號管理，大部分由非藥品生產(chǎn)企業(yè)生產(chǎn)，其原料來源、工藝參數(shù)等均存在不可控性［4］。而消炎鎮(zhèn)痛膏現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)未對其特征性成分加以控制，難以有效控制產(chǎn)品質(zhì)量［5］，且目前未見有關(guān)消炎鎮(zhèn)痛膏中顛茄流浸膏質(zhì)量控制方面的報(bào)道。為了有效地控制產(chǎn)品質(zhì)量，保證其安全性和有效性，本實(shí)驗(yàn)采用高效液相色譜法建立了消炎鎮(zhèn)痛膏中的顛茄流浸膏中特征性成分東莨菪內(nèi)酯的鑒別［6-12］，為科學(xué)評價(jià)及有效控制消炎鎮(zhèn)痛膏中顛茄流浸膏的真實(shí)投料提供可靠方法。

1 儀器與試樣

1.1 儀器

Agilent 1260系列（全自動）高效液相色譜儀，Chemstation化學(xué)工作站，DAD檢測器（美國安捷倫公司）；Sartorius BSA 124S-CW電子天平（德國賽多利斯公司）；Sartorius BT 25S電子天平（德國賽多利斯公司）。

1.2 試藥與樣品

試藥：東莨菪內(nèi)酯對照品（以92.4%計(jì)）中國食品藥品檢定研究院提供，批號：111869-201001；甲醇為色譜純、水為Milli-Q制備的純化水；冰醋酸為分析純；其他試劑均為分析純。

樣品：消炎鎮(zhèn)痛膏，具體樣品信息見表1。

表1 樣品信息

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑（Intersil ODSSP色譜柱，柱長為25cm，內(nèi)徑為4.6mm，粒徑為5μm）；以乙腈為流動相A，以0.4%磷酸溶液為流動相B，按表2的規(guī)定進(jìn)行梯度洗脫；檢測波長為344nm；柱溫為25℃；流速為每分鐘1.0ml。理論板數(shù)按東莨菪內(nèi)酯峰計(jì)算應(yīng)不低于3000。

表2 流動相梯度洗脫表

2.2 溶液配制

對照品溶液的制備：取適量東莨菪內(nèi)酯對照品，精密稱定，加甲醇制成每1ml含6μg的溶液，即得。

供試品溶液的制備：取本品280cm2，除去蓋襯，剪成小塊，置500ml圓底燒瓶中，加50%甲醇150ml，加熱回流1小時(shí)，取50%甲醇液，蒸干，加甲醇使溶解，轉(zhuǎn)移至5ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，取續(xù)濾液，即得。

2.3 方法學(xué)考察

2.3.1 檢測波長的選擇

因東莨菪內(nèi)酯在344nm處有最大吸收，故試驗(yàn)采用344nm作為檢測波長。

2.3.2 流動相的選擇

以乙腈為流動相A，以0.4%磷酸溶液為流動相B，按表2的規(guī)定進(jìn)行梯度洗脫為佳。

2.3.3 專屬性實(shí)驗(yàn)

取缺顛茄流浸膏的陰性對照樣品，按2.2項(xiàng)下方法制成供試品溶液，結(jié)果表明陰性對照樣品對本法無干擾，結(jié)果見圖1～4。

圖1 東莨菪內(nèi)酯對照品HPLC色譜圖

圖2 消炎鎮(zhèn)痛膏供試品HPLC色譜圖（檢出東莨菪內(nèi)酯）

圖3 供試品色譜圖（未檢出東莨菪內(nèi)酯）

圖4 缺顛茄流浸膏的陰性對照樣品HPLC色譜圖

2.3.4 不同品牌的色譜柱耐用性考察

取同一供試品溶液按2.2項(xiàng)方法制成供試品溶液，比較不同品牌的色譜柱，考察本方法的耐用性。

按2.1項(xiàng)所述色譜流動相，取供試品溶液采用Agilent 1260 Infinity Ⅱ高效液相色譜儀分別使用Intersil ODS-SP色譜柱（250mm×4.6mm，5μm）、CAPCELL PAK C18色譜柱（250mm×4.6mm，5μm）、Waters Sunfire C18色譜柱（250mm×4.6mm，5μm）進(jìn)行分析，記錄色譜圖。結(jié)果顯示三個(gè)品牌的色譜柱分離效果均較好，因此本課題組選用了Intersil ODS-SP（250mm×4.6mm，5μm）色譜柱進(jìn)行消炎鎮(zhèn)痛膏指紋圖譜研究。

2.3.5 空白溶劑試驗(yàn)

取甲醇，采用2.1項(xiàng)下色譜條件，進(jìn)樣10μl，記錄色譜圖。結(jié)果顯示空白溶劑在色譜圖中未出現(xiàn)與供試品溶液相應(yīng)的色譜峰。

2.3.6 檢出限

精密稱取東莨菪內(nèi)酯對照品16.06mg，置于25ml量瓶中，加甲醇使之溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對照品儲備液。精密量取上述對照品儲備液1ml，置于100ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，作為對照品溶液。精密量取上述對照品溶液1ml，置于100ml量瓶中，加陰性對照溶液稀釋至刻度，即得東莨菪內(nèi)酯檢出限溶液。按2.1項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣10μl，記錄色譜圖，采用信噪比法計(jì)算出能被可靠地檢出的被測物質(zhì)最低的濃度。

檢出限為對照品濃度×對照品進(jìn)樣量×稀釋倍數(shù)/供試品進(jìn)樣量/取樣量×1000×100=0.02μg/100cm2。

2.4 樣品測定及結(jié)果

取本品5個(gè)生產(chǎn)廠家共10批消炎鎮(zhèn)痛膏進(jìn)行測定，結(jié)果C企業(yè)2批次均未檢出東莨菪內(nèi)酯。

3 討論

本文通過高效液相色譜法鑒別消炎鎮(zhèn)痛膏中的顛茄流浸膏的特征性成分東莨菪內(nèi)酯。采用高效液相色譜法測定C企業(yè)2批次樣品未檢出東莨菪內(nèi)酯，推測該企業(yè)在生產(chǎn)過程中可能未投顛茄流浸膏，用阿托品替代投料，存在嚴(yán)重藥品質(zhì)量風(fēng)險(xiǎn)。生產(chǎn)企業(yè)應(yīng)嚴(yán)格執(zhí)行國家藥品標(biāo)準(zhǔn)和相應(yīng)的GMP管理規(guī)定，加強(qiáng)藥品生產(chǎn)與質(zhì)量管理，保證藥品質(zhì)量安全有效。同時(shí)監(jiān)管部門應(yīng)加強(qiáng)對中成藥制劑的監(jiān)管力度。