陳尹心，常子豪，胡倩，劉宇琦，高曄，黃雅，雒曉衛(wèi)，王樹楷，周立鵬，王保錦，王朝慧，崔藝彤，劉越，張?zhí)m珍（北京中醫(yī)藥大學(xué) 中藥學(xué)院，北京 102488）

腫瘤相關(guān)巨噬細胞（TAMs）是腫瘤微環(huán)境中最豐富的免疫細胞。一般來說，在不同生理病理因素刺激下，巨噬細胞可分化成兩種極化狀態(tài)，即經(jīng)典活化的M1型和替代活化的M2型。其中，M1型參與促炎反應(yīng)的同時也發(fā)揮抗腫瘤活性，而M2型則參與抗炎反應(yīng)，并能通過腫瘤免疫抑制等作用促進腫瘤發(fā)展。調(diào)控M2型巨噬細胞向M1型極化能夠增強腫瘤免疫反應(yīng)、抑制腫瘤生長、轉(zhuǎn)移和腫瘤血管生成[1]。因此，調(diào)控腫瘤相關(guān)巨噬細胞極化已經(jīng)成為一種多機制、多功能的高效免疫治療策略。

余甘子為大戟科葉下珠屬植物余甘子PhyllanthusemblicaL.的干燥成熟果實，具有清熱涼血、消食健胃、生津止咳之功效[2]。現(xiàn)代研究表明，余甘子主要含有酚酸類、鞣質(zhì)類成分。課題組前期研究發(fā)現(xiàn)余甘子鞣質(zhì)在體外能誘導(dǎo)人肝癌細胞BEL-7402早期凋亡和G2/M期阻滯[3]，通過調(diào)節(jié)MAPK通路，降低MPPs的表達，誘導(dǎo)腫瘤細胞凋亡[4]。臨床研究表明余甘子鞣質(zhì)具有潛在的免疫調(diào)節(jié)作用[5]。但其是否具有重塑免疫抑制微環(huán)境抑制腫瘤生長的作用以及其物質(zhì)基礎(chǔ)和作用機制尚不清楚。因此，本研究以M2型巨噬細胞為對象篩選抑制M2型巨噬細胞極化調(diào)節(jié)腫瘤微環(huán)境的余甘子活性部位，并結(jié)合UPLC-Q-Exactive-MS/MS技術(shù)和網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)分析其物質(zhì)基礎(chǔ)和作用機制。

1 材料

1.1 儀器

超高效液相色譜儀和Q-Exactive 高分辨質(zhì)譜儀、CO2細胞培養(yǎng)箱、超低溫冰箱（Thermo Scientific 公司）；十萬分之一分析天平（Sartorius公司）；KQ-500DE超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）；超凈工作臺（北京半導(dǎo)體設(shè)備一廠）；DT5-6A 型臺式離心機（北京時代北利離心機有限公司）；PCR 擴增儀（德國 Eppendorf 公司）；QuantStudio 6 Flex 實時熒光定量 PCR 儀（CFX 96，Biorad 公司）。

1.2 試藥

乙腈、甲酸（質(zhì)譜純，Thermo Fisher 公司）；蒸餾水[屈臣氏集團（香港）有限公司]；MCI小孔吸附樹脂（日本三菱化學(xué)公司）；胎牛血清、DMEM培養(yǎng)基（Biological Industries公司）；RNA提取試劑盒、逆轉(zhuǎn)錄試劑盒以及 SYBR qPCR Master Mix（南京諾唯贊生物科技股份有限公司）；重組小鼠白細胞介素-4（IL-4）、重組小鼠白細胞介素-13（IL-13）（PeproTech公司）；余甘子鞣質(zhì)部位（江西青峰藥業(yè)有限公司）。

1.3 細胞

小鼠 RAW264.7 單核巨噬細胞（北京協(xié)和細胞庫）凍存于北京中醫(yī)藥大學(xué)中藥學(xué)院細胞平臺。細胞復(fù)蘇后在含有10%胎牛血清的DMEM培養(yǎng)基中，于37℃，5%CO2的恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

2 方法與結(jié)果

2.1 余甘子鞣質(zhì)不同洗脫部位對RAW264.7細胞活性的影響

2.1.1 樣品的制備 取余甘子鞣質(zhì)部位（鞣質(zhì)含量58%），加去離子水使溶解，經(jīng)MCI小孔樹脂柱色譜吸附，依次用不同濃度的甲醇（20%、30%、40%、50%、100%）梯度洗脫，每步洗脫至洗脫液近無色時更換為下一洗脫梯度。合并相同洗脫液，低溫濃縮，干燥成粉。

2.1.2 CCK-8法檢測細胞增殖 將RAW264.7細胞鋪于96孔板中，用不同濃度的不同余甘子鞣質(zhì)洗脫部位（5、10、20、40、80、160、320 μg·mL-1）100 μL培養(yǎng)24 h后，加入CCK-8試劑，檢測各孔吸光度值（OD值），計算細胞存活率：細胞存活率（%）＝（實驗組OD值-空白組OD值）/（對照組OD值-空白組OD值）×100%。結(jié)果見圖1，當藥物質(zhì)量濃度≤40 μg·mL-1，對RAW264.7細胞存活率均在85%以上，無明顯抑制作用，說明質(zhì)量濃度≤40 μg·mL-1時對巨噬細胞無明顯細胞毒作用。因此，本研究選取40 μg·mL-1的濃度用于后續(xù)對不同洗脫部位篩選的研究。

圖1 不同質(zhì)量濃度的余甘子鞣質(zhì)對巨噬細胞活性的影響（n＝3）Fig 1 Effect of different concentration of tannins in Phyllanthus emblica L.on the proliferation of RAW264.7 cells（n＝3）

2.1.3 qPCR實驗檢測M2巨噬細胞中Arg-1、CD206、TNF-αmRNA表達 將RAW264.7細胞接種于12孔板中，不進行M2型誘導(dǎo)的為空白組（ctrl組）、用IL-4和IL-13誘導(dǎo)而不給藥干預(yù)的為M2組，用IL-4和IL-13誘導(dǎo)后余甘子鞣質(zhì)不同洗脫部位干預(yù)24 h為給藥組，收集細胞，提取RNA，逆轉(zhuǎn)錄cDNA，進行qPCR檢測。設(shè)計合成Arg1、CD206、TNF-α基因引物，以Hprt1為內(nèi)參，設(shè)置反應(yīng)程序，目標基因的表達水平用2-ΔΔCt比較法進行評估，結(jié)果見圖2。模型組RAW264.7細胞表達更高水平的Arg-1和CD206（P＜0.05，P＜0.0001），表明IL-4和IL-13作用后成功誘導(dǎo)巨噬細胞向M2型極化。各個洗脫部位對M2型標志基因的mRNA表達均有一定的抑制作用。除100%甲醇洗脫部位外，不同的洗脫部位對Arg-1的表達均有抑制作用，其中20%甲醇洗脫部位具有極顯著的抑制作用（P＜0.001）。同樣的，20%甲醇洗脫部位顯著降低CD206mRNA的表達，升高TNF-αmRNA的表達（P＜0.001），其調(diào)控巨噬細胞極化的活性明顯強于其他洗脫部位，是余甘子鞣質(zhì)調(diào)控巨噬細胞極化的主要活性部位（EFP）。因此，接下來對20%甲醇洗脫部位所含化學(xué)成分進行進一步研究。

圖2 余甘子鞣質(zhì)不同洗脫部位對M2巨噬細胞極化的影響（n＝3）Fig 2 Effect of different elution parts of tannins in Phyllanthus emblica L.on the polarization of M2 macrophages（n＝3）

2.1.4 統(tǒng)計學(xué)方法 結(jié)果采用Graphpad prism 8.4.3軟件進行統(tǒng)計分析，各組間的比較采用單因素方差分析，所有數(shù)據(jù)以平均值±標準差（±s）表示，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2.2 UPLC-Q-Exactive-MS/MS分析條件

2.2.1 色譜條件 色譜柱：ACE Excel 3 C18-PFP（150 mm×4.6 mm，3 μm）；流動相：0.1%甲酸（A）-乙腈（B），梯度洗脫（0～3 min，6%～12%B；3～18 min，12%～20% B；18～28 min，20%～30%B；28～30 min，30%B；30～34 min，30%～95%B）；流速：0.5 mL·min-1；進樣量：5 μL；柱溫：30℃。

2.2.2 質(zhì)譜條件 配有熱噴霧離子源（HESI），負離子模式檢測，離子源參數(shù)設(shè)置如下：毛細管和輔助氣體加熱器溫度分別為300和350℃；噴霧電壓為3.2 kV；鞘氣（N2）流量為35 arb，輔助氣體（N2）流量為15 arb。歸一化碰撞能量（NCE）為±35 V。在Full-MS/dd-MS2條件下，掃描范圍為m/z100～1500。采用 Xcalibur 3.0 軟件進行數(shù)據(jù)分析。

2.2.3 20%甲醇洗脫部位化學(xué)成分分析 采用上述分析條件，對20%甲醇洗脫部位的化學(xué)成分進行定性分析。在負離子模式下20%甲醇洗脫部位總離子流圖如圖3所示。通過參考相關(guān)文獻[6-14]、對比保留時間、精確質(zhì)譜信息等，對EFP的化學(xué)成分進行確認，鑒定出 29個可能的化學(xué)成分，包括7個酚酸類、12個簡單沒食子酰類、9個鞣花鞣質(zhì)類、1個其他類。UPLC-Q-Exactive-MS/MS 數(shù)據(jù)見表1。

表1 EFP化學(xué)成分結(jié)構(gòu)鑒定Tab 1 Structure identification of chemical components in EFP

圖3 負離子模式下20% 洗脫部位的總離子流圖Fig 3 Total ion flow chromatogram of 20% methanol eluted part in negative ion mode

2.2.4 化合物分析

① 酚酸類：共鑒定出7個酚酸類化合物成分。酚酸類化合物是一類含酚環(huán)的有機酸，含有較多的酚羥基和羧基，其質(zhì)譜裂解特點是容易失去H2O、CO2和CO等基團?；衔?的保留時間是7.30 min，準分子離子峰為m/z169.0142 [M-H]-，分子式為C7H6O5。經(jīng)碰撞解離，失去一個CO2產(chǎn)生碎片m/z125.0254 [M-H-CO2]-，結(jié)合文獻[7]推測為沒食子酸；化合物29的保留時間為24.49 min，準分子離子峰為m/z300.9993 [M-H]-，分子式為C14H6O8。經(jīng)碰撞產(chǎn)生二級碎片m/z283.9963 [M-HOH]-；或失去一個CO2產(chǎn)生碎片m/z257.0081[M-H-CO2]-，再失去一個CO產(chǎn)生229.0145 [M-HCO2-CO]-，再失去CO產(chǎn)生201.0200 [M-H-CO2-2CO]-，結(jié)合文獻[7]推測該化合物為鞣花酸。

② 簡單沒食子酰類：共鑒定出12個簡單沒食子酸酰類化合物成分。簡單沒食子酸酰類化合物主要為沒食子酸衍生物，較易脫去沒食子?；?galloyl）?；衔?4、20的保留時間分別為9.42 min、11.95 min，準分子離子峰分別為m/z483.0782 [M-H]-、m/z483.0780 [M-H]-，擬合分子式均為C20H20O14，兩者為同分異構(gòu)體，裂解方式相同。以化合物20為例，該化合物經(jīng)碰撞失去一個沒食子?；?，得到m/z331.0677 [M-HGal]-，再失去一個H2O得到m/z313.0566 [M-HGal-H2O]-，失去一個中性碎片C4H8O4得到m/z211.0252[M-H-Gal-C4H8O4]-，或失去一分子葡萄糖得到m/z169.0149 [M-H-Gal-Glu]-，再失去一個CO2得到m/z125.0251 [M-H-Gal-Glu-CO2]-，結(jié)合文獻[8]推測該化合物為二沒食子酰葡萄糖苷digalloylglucose。

③ 鞣花鞣質(zhì)類：共鑒定出9個鞣花鞣質(zhì)類成分。鞣花鞣質(zhì)是一類含六羥基聯(lián)苯二酸或與其有生源關(guān)系的酚羧酸與多元醇縮合形成的酯，較易失去六羥基二苯甲?；℉HDP）基團、沒食子酰基，水解后可生成鞣花酸。余甘子中主要含有的與HHDP有生源關(guān)系的酚羧酸?；饕窃X子?；–he）。化合物 27 的保留時間為16.61 min，準分子離子峰為m/z633.0743 [M-H]-，擬合分子式為 C27H22O18，脫去一個沒食子酸，得到m/z463.0520，該碎片再丟失一分子葡萄糖（glu），得到m/z300.9993 [M-HGal-Glu]-，繼續(xù)失去CO2得到m/z257.0089 [M-HGal-H2O-Glu-CO2]-，再脫去CO得到m/z229.0154[M-H-Gal-H2O-Glu-CO2-CO]-，沒食子酸自母離子脫去產(chǎn)生特征碎片離子m/z169.0150 [gallic acid]-，結(jié)合文獻[14]推測其為柯里拉京。

2.3 網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)

2.3.1 活性成分的篩選及靶點的預(yù)測 將液質(zhì)鑒定出的化合物輸入SwissADME平臺（http：//www.swissadme.ch/），以胃腸道吸收得分為“high”，類藥性至少通過2個“Yes”進行篩選，并結(jié)合課題組前期研究[6]余甘子鞣質(zhì)入血成分獲得潛在化合物。共篩選出11種活性成分，分別為鞣花酸、沒食子酸乙酯、沒食子酸甲酯、沒食子酸、柯里拉京、1，4，6-tri-O-galloyl-glucose、3，4，6-tri-O-galloyl-glucose、mucic acid 2-O-gallate、訶子次酸、特里馬蘇I、訶子寧。在SwissTargetPrediction（http：//www.swisstargetprediction.ch/）數(shù)據(jù)庫中預(yù)測不同成分的靶點基因，篩選probability＞0的靶點，得到成分的預(yù)測靶點。從GEO數(shù)據(jù)庫（https：//www.ncbi.nlm.nih.gov/geo/）中查找并篩選差異表達基因，將巨噬細胞差異靶點基因與20%甲醇洗脫部位相關(guān)成分預(yù)測靶點進行比對，取交集作為潛在靶點基因。結(jié)果預(yù)測得94個靶點基因。從GEO數(shù)據(jù)庫中下載編號為GSE5099的人類基因芯片，通過GEO2R功能以P＜0.05且|log2FC|＞0.5為標準，篩選去重后得到巨噬細胞相關(guān)的靶點共5391個。對活性成分信息和巨噬細胞相關(guān)靶點進行分析，得到交集靶點37個，將其視為20%甲醇洗脫部位調(diào)控巨噬細胞的潛在靶點。

2.3.2 “藥物成分-潛在靶點”網(wǎng)絡(luò)的構(gòu)建 利用Cytoscape 3.7.2軟件的“Merge”工具構(gòu)建“藥物成分-潛在靶點-巨噬細胞”網(wǎng)絡(luò)（見圖4），共包括49個節(jié)點，126條邊。根據(jù)度值排序得到主要的活性成分為鞣花酸、沒食子酸甲酯、1，4，6-tri-O-galloyl-glucose、沒食子酸、沒食子酸乙酯等；這些成分作用的靶點有高角鯊烯環(huán)氧化酶（SQLE）、蛋白質(zhì)酪氨酸磷酸酶1（PTPN1）、β分泌酶1（BACE1）、蛋白質(zhì)酪氨酸磷酸酶2（PTPN2）、重組人醛糖還原酶（AKR1B1）等，揭示其或許與余甘子鞣質(zhì)調(diào)控巨噬細胞的過程密切相關(guān)。

圖4 20%甲醇洗脫部位調(diào)控巨噬細胞細胞的“藥物成分-潛在靶點”網(wǎng)絡(luò)Fig 4 Network of “component-potential target” of 20% methanol eluted part

2.3.3 蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用（PPI）網(wǎng)絡(luò)的構(gòu)建與分析 在 STRING 平臺（https：//STRING-db.org/）輸入交集靶點，限定物種為“智人”，獲得PPI 網(wǎng)絡(luò)。利用 Cytoscape 3.7.2 軟件，對 PPI 網(wǎng)絡(luò)進行可視化操作。結(jié)果見圖5，通過 Network Analyzer 插件分析其拓撲學(xué)特征，篩選關(guān)鍵靶點主要為絲氨酸/蘇氨酸激酶（AKT1）、血管內(nèi)皮生長因子A（VEGFA）、和酪氨酸專一性蛋白激酶（Src）、前列腺素過氧化物合成酶 2（PTGS2）、雌激素受體1（ESR1）、糖原合成酶激酶（GSK3B）等。

圖5 交集靶點PPI網(wǎng)絡(luò)Fig 5 PPI network of potential targets

2.3.4 靶點功能富集分析與網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建 通過Sangerbox平臺（http：//sangerbox.com/）對交集靶點進行GO富集分析和KEGG通路富集分析，并對排名前 20 的通路進行結(jié)果可視化。

對37個交集靶點進行 GO 功能富集分析（P＜0.05），共獲得 2438個 GO 條目，包括生物過程（BP）條目 2096個、細胞組成（CC）條目 146個、分子功能（MF）條目 196個，對排名前 10 的各類GO條目進行可視化處理，結(jié)果見圖6A。BP主要涉及對有機物的反應(yīng)、對含氧化合物的反應(yīng)、對化學(xué)刺激的細胞反應(yīng)等；CC主要涉及囊泡、膜筏、膜微區(qū)等；MF主要涉及一氧化氮合酶活性、酶結(jié)合、激酶結(jié)合等。

圖6 GO富集分析條形圖（A）和KEGG富集分析氣泡圖（B）Fig 6 GO enrichment analysis（A）and KEGG pathways enrichment analysis（B）of potential targets

KEGG富集相關(guān)通路76條（P＜0.05），對排名前20的通路進行可視化展示（見圖6B），包括EGFR酪氨酸激酶抑制劑耐藥信號通路、缺氧誘導(dǎo)因子1信號通路、癌癥信號通路、PI3K-Akt信號通路、NF-kappaB信號通路等。

3 討論

精氨酸酶-1（Arg-1）和甘露糖受體（CD206）是M2巨噬細胞的識別標志物。Arg-1與iNOS競爭L-精氨酸作為底物，生成膠原蛋白前體L-鳥氨酸，形成促進腫瘤生長的纖維化微環(huán)境[15]。此外，Arg-1通過代謝L-精氨酸直接影響CD8+T細胞[16]，CD206可通過抑制CD45磷酸酶活性損害CD8+T細胞的細胞毒性[17]，導(dǎo)致腫瘤細胞免疫逃逸。因此，本研究利用M2型RAW264.7細胞模型篩選出余甘子鞣質(zhì)20%甲醇洗脫部位，發(fā)現(xiàn)其能夠顯著抑制M2型巨噬細胞識別標志物Arg-1、CD206的表達，同時促進M1型標志物TNF-α，提升其抗腫瘤免疫活性。

利用UPLC-MS分析20%甲醇洗脫部位定性鑒別出29個化學(xué)成分，主要為酚酸類化合物和鞣質(zhì)類化合物。進一步根據(jù)課題組前期研究[6]和SwissADME平臺獲得11個活性成分進行網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)分析?！八幬锍煞?潛在靶點”網(wǎng)絡(luò)圖中度值靠前的成分分別有沒食子酸、柯里拉京、鞣花酸、沒食子酸甲酯、沒食子酸乙酯等。毛赫新等[18]發(fā)現(xiàn)沒食子酸能夠降低M1型巨噬細胞陽性表達率，抑制iNOS和IL-1βmRNA表達水平，抑制IFN-γ/LPS誘導(dǎo)的小鼠腹腔巨噬細胞向M1型的極化。柯里拉京可以通過抑制IL-13Ralpha1信號通路抑制M2巨噬細胞極化[19]。此外，鞣花酸通過ERK1/2/RSK信號通路抑制腫瘤細胞功能[20]，沒食子酸甲酯、沒食子酸乙酯能夠通過抑制腫瘤細胞中Akt和ERK1/2活性、ERK1/2/RSK信號通路來發(fā)揮抗腫瘤作用[21-22]，但對于這些成分的研究主要集中在對腫瘤細胞的直接作用，對其抗腫瘤免疫的作用卻鮮有報道。

通過KEGG富集分析可推斷，20%甲醇洗脫部位調(diào)控巨噬細胞的信號通路主要與炎癥反應(yīng)、免疫反應(yīng)相關(guān)，例如PI3K/Akt信號通路、HIF-1信號通路、NF-κB信號通路等。

PI3K/Akt信號通路上匯集多種胞內(nèi)和胞外信號，可以調(diào)節(jié)巨噬細胞的遷移、增殖、自噬、極化、代謝功能和炎癥反應(yīng)[23]。PI3K由調(diào)節(jié)亞基p85和催化亞基p110組成，能夠誘發(fā)其底物磷酸化為3，4，5-三磷酸磷脂酰肌醇（PIP3）。Akt是PI3K/Akt通路中調(diào)節(jié)巨噬細胞功能的最重要的效應(yīng)分子，Akt2 能促使巨噬細胞向 M1 型極化[24]；敲除Akt2使miR-155水平降低，C/EBPβ（M2極化的調(diào)節(jié)因子）表達增加[25]。此外，Akt2缺陷的巨噬細胞能夠上調(diào)miR-164a導(dǎo)致TLR4信號通路的負調(diào)控，促進M2型極化[23]。研究表明，可以通過調(diào)節(jié)PI3K-p110蛋白表達，Akt磷酸化水平，調(diào)節(jié)巨噬細胞極化的作用，從而干預(yù)腫瘤微環(huán)境發(fā)揮抗腫瘤作用[26]。mTOR是PI3K/Akt的下游信號，在協(xié)調(diào)代謝和炎癥信號來調(diào)節(jié)巨噬細胞表型方面也發(fā)揮作用[27]。

HIF-1信號通路是生物處于低氧狀態(tài)下的應(yīng)激信號通路，它由氧調(diào)節(jié)的α亞基和組成型表達的β亞基組成的異源二聚體。根據(jù)α亞基的不同，又分為 3種亞型，分別是 HIF-1α、HIF-2α和 HIF-3α，其中HIF-1α是介導(dǎo)缺氧信號的轉(zhuǎn)導(dǎo)中樞[28-29]。當PI3K/Akt信號通路的激活后，Akt磷酸化，能夠增強HIF-1α的活性，抑制其蛋白酶體降解[30]。HIF-α亞基可在巨噬細胞中被差異激活，Th1細胞因子能夠通過誘導(dǎo)HIF-1α調(diào)控巨噬細胞向M1型極化，相反，Th2細胞因子通過誘導(dǎo)HIF-2α調(diào)控M2型極化[31]，也有研究表明，通過作用于HIF-1α和HIF-1β的共有靶點IL-1β能夠影響巨噬細胞M1型極化和炎癥反應(yīng)[32]。此外，HIF-1通路與細胞的代謝，尤其是糖酵解水平有關(guān)。LDHA、GLUT1、PDK1等均為HIF-1α的作用靶點。HIF-1α激活會增加巨噬細胞的遷移活性并影響巨噬細胞的代謝功能，巨噬細胞的代謝改變與其表型和功能密切相關(guān)[28，33]。研究表明，經(jīng)泛素-蛋白酶體途徑促進HIF-1α蛋白降解，抑制糖酵解通路，能夠影響M1型巨噬細胞極化，抑制結(jié)腸炎發(fā)生[34]；抑制M2巨噬細胞線粒體氧化磷酸化，能夠抑制M2巨噬細胞極化，增強抗腫瘤效能[35]。

NF-κB信號通路是PI3K/Akt信號通路的下游通路之一，是調(diào)節(jié)炎癥因子產(chǎn)生的重要通路。IκB激酶被激活后，誘導(dǎo)NF-κB抑制蛋白磷酸化并降解，激活NF-κB，暴露出核定位序列，與細胞核內(nèi)特定位點結(jié)合，啟動多種靶基因的轉(zhuǎn)錄，產(chǎn)生并釋放細胞因子[36]。脂多糖（LPS）誘導(dǎo)的巨噬細胞M1極化依賴于NF-kBp65的激活[37]。姚靜靜[38]提出通過NF-κB信號通路誘導(dǎo)M2巨噬細胞清道夫受體MSR1、CD36和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激GRP78的表達，能夠影響巨噬細胞的極化。

本實驗基于M2巨噬細胞模型篩選的有效部位可能通過調(diào)控TAMs的免疫抑制活性在抗腫瘤治療中發(fā)揮作用?；?LC-MS 結(jié)合網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)探討了20%甲醇洗脫部位調(diào)控巨噬細胞極化的物質(zhì)基礎(chǔ)及分子機制，其分子機制可能是與PI3K/Akt信號通路、HIF-1信號通路、NF-κB信號通路有關(guān)。本研究為后續(xù)深入驗證余甘子鞣質(zhì)調(diào)控巨噬細胞的作用機制奠定基礎(chǔ)。