胡永志 劉文佳 黃 靜 梁雪松 黃光偉

(柳州兩面針股份有限公司,廣西 柳州 545001)

引言

當(dāng)今社會(huì)倡導(dǎo)天然、健康,產(chǎn)品的安全性、功效性倍受人們關(guān)注?？谇蛔o(hù)理用品也是如此,正由于中草藥具有副作用小,使用安全性高的優(yōu)點(diǎn),中草藥牙膏現(xiàn)已成為市場(chǎng)消費(fèi)的主流[1]。蛇床子素又名甲氧基歐芹酚,現(xiàn)代藥理實(shí)驗(yàn)研究表明蛇床子素具有抗高血壓、抗心律失常、抗衰老、抗腫瘤、抗骨質(zhì)疏松癥、抗炎及抗變態(tài)反應(yīng)等功效[2]。將含蛇床子素提取物添加到牙膏中,可以起到一定的中藥抗炎、抑制牙菌斑的作用,有利于口腔健康[3]。為保證中藥材、中藥提取物以及牙膏質(zhì)量,對(duì)牙膏中加入的中藥有效成分建立可控檢測(cè)方法尤為重要。

1 儀器與材料

Agilent 1260 Infinity Ⅱ高效液相色譜儀系統(tǒng)(G7129A 1260Vialsampler, G7111 1260 Quat Pump VL, G7114A 1260VWD);梅特勒-托利多ML204型電子天平;天津奧特賽恩斯儀器有限公司AS3120型超聲波清洗器;LG10-2.4A離心機(jī);蛇床子素對(duì)照品,中國(guó)食品藥品檢定研究所(含量以99.5%計(jì));牙膏(規(guī)格:120g/支,柳州兩面針股份有限公司生產(chǎn));Fisher chemical色譜純乙腈;超純?nèi)ルx子水。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

在紫外分光光度計(jì)上掃描蛇床子素對(duì)照品溶液,取其最大吸收波長(zhǎng)330nm為檢測(cè)波長(zhǎng),考察了水-甲醇,水-乙腈為流動(dòng)相,根據(jù)蛇床子素的峰形和雜質(zhì)出峰情況,最后確定色譜條件如下:

色譜柱:Agilent C18(4.6×250mm,5μm);流動(dòng)相為乙腈(B)-水(A),流動(dòng)相梯度如下表1所示;流速1.0mL/min;柱溫:35℃;檢測(cè)波長(zhǎng)330nm;進(jìn)樣量:10μL。按此色譜條件下測(cè)定,提取物、牙膏色譜圖分別見(jiàn)圖1、圖2。

圖1 提取物色譜圖

圖2 牙膏色譜圖

表1 流動(dòng)相梯度

2.2 對(duì)照品溶液的制備

精密稱(chēng)取蛇床子素對(duì)照品0.01g(精確至0.0001g)至250mL容量瓶中,加甲醇溶解并稀釋至刻度,搖勻,配置成40μg/mL的對(duì)照品儲(chǔ)備液。

2.3 供試品溶液的制備

稱(chēng)取中藥提取物0.1g(精確至0.0001g)至10mL容量瓶中,加甲醇溶解并稀釋至刻度,搖勻,用0.45μm濾膜過(guò)濾,濾液為供試品溶液。

稱(chēng)取5g(精確至0.0001g)牙膏樣品于50mL容量瓶中,用甲醇定容至刻度,在轉(zhuǎn)速為800rpm的條件下,常溫?cái)嚢?0min分散膏體,將試樣裝入離心管中,以8000r/min的速度離心15min,最后離心樣品取上清液經(jīng)0.45μm濾膜過(guò)濾,備用。

2.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

分別精密量取2.2.1中蛇床子素對(duì)照品儲(chǔ)備液0.5、1.0、2.0、4.0、8.0mL置10mL容量瓶中,用甲醇稀釋至刻度,搖勻,分別制成濃度為2.0μg/mL、4.0μg/mL、8.0μg/mL、16.0μg/mL、32.0μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液系列,依前述色譜條件進(jìn)行測(cè)定。記錄色譜峰峰面積,以對(duì)照品濃度(μg/mL)為橫坐標(biāo),峰面積為縱坐標(biāo),進(jìn)行線性回歸,得出蛇床子素的回歸方程為:

Y=32.5462X-5.1665,r=0.99996

由以上回歸方程可知蛇床子素在2.0～32.0μg/mL之間呈良好線性關(guān)系。

2.5 精密度試驗(yàn)

分別取中藥提取物和牙膏樣品制備的供試品溶液,依前述色譜條件連續(xù)進(jìn)樣6次,測(cè)定蛇床子素含量,結(jié)果見(jiàn)表2。6次進(jìn)樣測(cè)得中藥提取物中蛇床子素含量平均值為0.2284%,RSD為0.52%;牙膏樣品中蛇床子素含量平均值為0.004814%,RSD為0.61%。結(jié)果表明,該方法精密度良好。

表2 精密度試驗(yàn)結(jié)果

2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn)

分別取中藥提取物和牙膏樣品制備的供試品溶液,依前述的色譜條件在0、0.5、1.5、2.0、4.0、6.0、8.0、24.0h分別進(jìn)樣,測(cè)定蛇床子素含量,結(jié)果見(jiàn)表3。結(jié)果表明,在24小時(shí)內(nèi)供試品溶液穩(wěn)定性良好,中藥提取物中蛇床子素含量平均值為0.2276%,RSD為0.35%;牙膏樣品中蛇床子素含量平均值為0.004830%,RSD為0.26%。

表3 穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果

2.7 重現(xiàn)性試驗(yàn)

分別取同一瓶中藥提取物、同一支牙膏樣品,平行稱(chēng)取樣品6份,依照2.3分別制備供試品溶液,進(jìn)樣測(cè)定,結(jié)果見(jiàn)表4。計(jì)算得中藥提取物中蛇床子素含量平均值為0.2258%,RSD為0.51%;牙膏樣品中蛇床子素含量平均值為0.004853%,RSD為0.41%。表明分析方法重現(xiàn)性良好。

表4 重現(xiàn)性試驗(yàn)結(jié)果

2.8 回收率試驗(yàn)

精密稱(chēng)取已知含量的中藥提取物6份行樣,分別精密加入不同量的蛇床子素對(duì)照品,攪勻,依照2.3制成供試品溶液,按上述方法進(jìn)行測(cè)定,計(jì)算加標(biāo)回收率,結(jié)果見(jiàn)表5。其平均回收率為99.95%;

表5 中藥提取物回收率試驗(yàn)結(jié)果

精密稱(chēng)取已知含量的牙膏樣品6份行樣,分別精密加入不同量的蛇床子素對(duì)照品,攪勻,依照2.3制成供試品溶液,按上述方法進(jìn)行測(cè)定,計(jì)算加標(biāo)回收率,結(jié)果見(jiàn)表6。其平均回收率為100.64%;

表6 牙膏樣品回收率試驗(yàn)結(jié)果

以上結(jié)果表明本方法準(zhǔn)確可靠。

2.9 樣品測(cè)定

分別取中藥提取物、牙膏樣品6批,依照2.3分別制備供試品溶液,進(jìn)樣測(cè)定蛇床子素含量,每批檢測(cè)三次,計(jì)算其平均值,結(jié)果分別見(jiàn)表7、表8。

表7 中藥提取物中蛇床子素含量測(cè)定結(jié)果

表8 牙膏樣品中蛇床子素含量測(cè)定結(jié)果

2.10 樣品穩(wěn)定性試驗(yàn)

提取物置于室溫下,牙膏樣品分別置于室溫與45℃烘箱中,在0、1、2、3、6、9、12個(gè)月時(shí),依照2.3制成供試品溶液,按上述方法進(jìn)樣測(cè)定蛇床子素含量,結(jié)果分別見(jiàn)表9、表10。

表9 提取物中蛇床子素含量

表10 牙膏樣品中蛇床子素含量

結(jié)果顯示,常溫下提取物中蛇床子素含量在一年考察期內(nèi)沒(méi)有較大幅度減少,下降為2.71%,說(shuō)明蛇床子素在提取物中能穩(wěn)定存在,提取物質(zhì)量有保證;常溫與45℃條件下,一年考察期內(nèi)牙膏樣品中蛇床子素含量略有下降,其中常溫下蛇床子素含量下降了0.95%,45℃條件下蛇床子素含量下降1.65%。綜上所述,在提取物及牙膏樣品中蛇床子素能穩(wěn)定存在,在提取物及牙膏有效期內(nèi)均能保持良好的功效。

3 討論

在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中先后采用Diamonsil C18色譜柱(250mm×4.6mm,5μm)、Agilent C18(4.6×250mm,5μm)、Kromasil C18色譜柱(250mm×4.6mm,5μm)分離蛇床子素,經(jīng)反復(fù)實(shí)驗(yàn),最終確定用Agilent C18作色譜柱,流動(dòng)相為乙腈(B)-水(A),梯度洗脫:0～10min,60%～80%B;流速1.0mL/min;柱溫:35℃;檢測(cè)波長(zhǎng)330nm;進(jìn)樣量:10μL。在此條件下蛇床子素色譜峰形較理想。本方法測(cè)定提取物及牙膏中蛇床子素含量,樣品處理方法簡(jiǎn)便,流動(dòng)相組成簡(jiǎn)單,結(jié)果可靠,為含蛇床子素提取物及牙膏建立相應(yīng)的質(zhì)量控制方法提供可靠依據(jù)。在功效型中草藥牙膏開(kāi)發(fā)中,起到有效技術(shù)指導(dǎo)作用,更好優(yōu)化產(chǎn)品研發(fā)。在產(chǎn)品推廣上市中,有效減少產(chǎn)品推廣上市風(fēng)險(xiǎn),并能為消費(fèi)者提供值得信賴(lài)的數(shù)據(jù)支持。