韓榮嘉,彭祖焜,劉建華,苑 麗,梁夢(mèng)菊,潘玉善,賀丹丹,吳 華

河南農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院,河南鄭州 450046)

近年來(lái)世界各地動(dòng)物源致病菌耐藥現(xiàn)象十分嚴(yán)重,有關(guān)寵物源病原菌的耐藥性報(bào)道亦越來(lái)越多。致病性耐藥菌株的出現(xiàn)不僅增加了貓臨床病原菌感染的治療難度,而且極易導(dǎo)致寵物與寵物主之間多重耐藥菌的橫向傳播,造成新的公共衛(wèi)生安全問(wèn)題。了解本地區(qū)貓?jiān)床≡玖虻臄y帶情況及其對(duì)常用抗生素及抗菌藥的耐藥情況對(duì)于制定合理的臨床抗菌治療方案,減緩人醫(yī)、獸醫(yī)致病性耐藥菌株的橫向傳播具有重要意義。

研究表明,對(duì)寵物健康造成主要威脅的是致病性強(qiáng)且耐多種藥物的病原菌,主要有耐甲氧西林金黃色葡萄球菌(MRSA)和中間型葡萄球菌(MRSP),產(chǎn)超廣譜β-內(nèi)酰胺酶(ESBL)大腸桿菌、其他腸道菌群,比如產(chǎn)碳青霉烯酶的大腸桿菌、肺炎克雷伯菌、銅綠假單胞菌、糞腸球菌[1]和沙門(mén)氏菌[2]。陳霞等[3]發(fā)現(xiàn)從北京市伴侶動(dòng)物中分離的腸球菌多重耐藥情況嚴(yán)重,郭菲等[4]研究發(fā)現(xiàn)烏魯木齊市寵物源大腸桿菌和沙門(mén)氏菌對(duì)所檢抗生素的耐藥率在90%以上,可見(jiàn)寵物源病原菌的耐藥現(xiàn)象非常普遍。筆者在2021年7—8月收集寵物貓?jiān)词米?對(duì)其進(jìn)行分離鑒定、致病性及耐藥性、耐藥表型分析,旨在了解寵物臨床病原菌的致病性、耐藥性,以防止致病性菌株感染人類(lèi)以及多重耐藥菌株的橫向傳播。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1樣品來(lái)源。試驗(yàn)樣品于2021年7—8月在河南農(nóng)業(yè)大學(xué)教學(xué)動(dòng)物醫(yī)院和派德寵物醫(yī)院采集,采集住院貓鼻拭子、咽拭子和肛拭子共62份。

1.1.2主要試劑、藥品及儀器。主要試劑:TaqMix酶、BM2000 DNA Marker、50×TAE、1× TE緩沖液、瓊脂糖、熒光染料溴化乙錠;麥康凱瓊脂、LB瓊脂、Baird-Parker培養(yǎng)基、腸球菌瓊脂、BHI瓊脂、SS瓊脂、MH(B)肉湯、LB肉湯。主要藥品:頭孢噻呋(ceftiofur,CEF)、頭孢喹肟(cefquinoxime,CFQ)、多西環(huán)素(doxycycline,DOX)、替加環(huán)素(tigecycline,TGC)、氟苯尼考(florfenicol,FFC)、慶大霉素(gentamicin,GEN)、阿米卡星(amikacin,AMK)、泰樂(lè)菌素(tylosin,TYL)、阿奇霉素(azithromycin,AZM)、替米考星(tilmicosin,TIL)、恩諾沙星(enrofloxacin,ENR)、氧氟沙星(ofloxacin,OFX)、黏菌素(colistin,COL)。以上試劑均購(gòu)自天馳生物公司;藥品一部分購(gòu)自天馳生物公司,一部分來(lái)自筆者所在實(shí)驗(yàn)室。主要儀器:超凈工作臺(tái)(型號(hào)SW-CJ-2FD,購(gòu)自蘇州安泰技術(shù)有限公司)、恒溫生化培養(yǎng)箱(型號(hào)ZQTY-70V,購(gòu)自賽默飛世爾科技有限公司)、電子分析天平(型號(hào)AB204-N,購(gòu)自北京銳志漢興科技有限公司)、紫外/可見(jiàn)分光光度計(jì)(型號(hào)UV1800PC,購(gòu)自上海元析儀器有限公司)、離心機(jī)(型號(hào)5418YQ313640,購(gòu)自德國(guó)Eppendorf公司)、PCR儀(型號(hào)ETC811,蘇州東盛興業(yè)科學(xué)儀器有限公司)、全自動(dòng)凝膠成像分析系統(tǒng)(型號(hào)Genius3,英國(guó)Syngene公司)。

1.2 方法

1.2.1寵物貓?jiān)床≡姆蛛x、純化與鑒定。無(wú)菌拭子樣本通過(guò)肉湯培養(yǎng),菌液分別劃線接種于麥康凱瓊脂培養(yǎng)基、SS瓊脂培養(yǎng)基、腸球菌瓊脂培養(yǎng)基和Baird-Parker培養(yǎng)基上,過(guò)夜培養(yǎng)后挑取單菌落分離純化3代以上,直至培養(yǎng)基上呈現(xiàn)單一菌落時(shí)再進(jìn)行革蘭氏染色鏡檢及16S rRNA鑒定。

1.2.2毒力基因PCR檢測(cè)。根據(jù)參考文獻(xiàn)[5-8]選擇不同菌株目的毒力基因及引物序列(表1～4),引物由擎科生物公司合成。

表1 大腸桿菌毒力基因 PCR 引物序列

表2 腸球菌毒力基因PCR引物序列

表3 葡萄球菌毒力基因 PCR 引物序列

表4 沙門(mén)氏菌毒力基因PCR引物序列

1.2.3藥物敏感性試驗(yàn)。依據(jù)美國(guó)臨床和實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)協(xié)會(huì)(CLSI)推薦的微量肉湯稀釋法測(cè)定13種抗生素或抗菌藥的最低抑菌濃度(minimal inhibitory concentration,MIC);依據(jù)CLSI[9]、VET01S[10]推薦標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行藥物敏感性、耐藥性結(jié)果判定,頭孢喹肟(CFQ)耐藥折點(diǎn)參考文獻(xiàn)[11]。

1.2.4黏菌素耐藥基因檢測(cè)。質(zhì)粒介導(dǎo)的黏菌素耐藥基因mcr-1是引起黏菌素耐藥的主要原因之一[12]。該試驗(yàn)中3株沙門(mén)氏菌均對(duì)黏菌素耐藥。為探究其耐藥性是否因mcr-1所致,故對(duì)其進(jìn)行mcr-1檢測(cè)。依據(jù)筆者所在實(shí)驗(yàn)室設(shè)計(jì)的黏菌素耐藥基因mcr-1核苷酸序列合成引物,引物序列F為5′-CGGTCAGTCCGTTTGTTC-3′ ,R為5′-CTTGGTCGGTCTGTAGGG-3′,擴(kuò)增產(chǎn)物長(zhǎng)度為320 bp。PCR反應(yīng)體系、擴(kuò)增程序和產(chǎn)物凝膠電泳、測(cè)序同“1.2.2”。

2 結(jié)果與分析

2.1 病原菌分離鑒定結(jié)果病料樣本經(jīng)分離、純化、革蘭氏染色鏡檢,疑似有大腸桿菌、腸球菌、葡萄球菌、沙門(mén)氏菌4種細(xì)菌。經(jīng)16S rRNA 通用引物擴(kuò)增、凝膠電泳檢測(cè),產(chǎn)物送交擎科生物公司測(cè)序,測(cè)序結(jié)果進(jìn)行Blast比對(duì)(http:∥www.ncbi.nlm.nih.gov),鑒定菌株與對(duì)應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)菌株的16S rRNA序列同源性均大于99%。從62份貓拭子樣品中分離獲得大腸桿菌16株,分離率為76.19%(16/21);獲得沙門(mén)氏菌3株,分離率為14.29%(3/21);獲得腸球菌14株,分離率為66.67%(14/21);獲得葡萄球菌8株,分離率為38.10%(8/21)。

2.2 毒力基因檢測(cè)結(jié)果

2.2.1大腸桿菌毒力基因檢測(cè)。16株大腸桿菌全部檢測(cè)到目的毒力基因,主要集中在5種毒力基因OmpA、fyuA、iucD、iss和hlyF,16株(100%)攜帶OmpA基因,12株(75.00%)攜帶fyuA基因,1株(6.25%)攜帶iucD、iss和hlyF基因,所有菌株均未檢測(cè)到irp2、astA和papC基因。大腸桿菌毒力基因PCR擴(kuò)增結(jié)果如圖1所示。

2.2.2腸球菌毒力基因檢測(cè)。14株腸球菌經(jīng)PCR擴(kuò)增、產(chǎn)物測(cè)序比對(duì),結(jié)果發(fā)現(xiàn)11株檢測(cè)到毒力基因,主要集中在4種毒力基因efaA、gelE、cylA和esp。其中,11株(78.57%)攜帶efaA基因,9株(64.29%)攜帶gelE基因,3株(21.43%)攜帶cylA和esp基因;所有菌株均未檢測(cè)到ace和AS基因,3株腸球菌未檢測(cè)到任何一種目的毒力基因。腸球菌毒力基因PCR擴(kuò)增結(jié)果如圖2所示。

注:a.腸球菌efaA毒力基因PCR擴(kuò)增結(jié)果;b.腸球菌gelE毒力基因PCR擴(kuò)增結(jié)果;c.腸球菌cylA毒力基因PCR擴(kuò)增結(jié)果;d.腸球菌esp毒力基因PCR擴(kuò)增結(jié)果;1～14.PCR產(chǎn)物;15.陰性對(duì)照;M.BM2000 DNA Marker。Note:a.PCR amplification results of efaA virulence gene of Enterococcus; b.PCR amplification results of gelE virulence gene of Enterococcus; c.PCR amplification results of cylA virulence gene of Enterococcus; d.PCR amplification results of esp virulence gene of Enterococcus;1-14,PCR products;15,negative control;M.BM2000 DNA Marker.圖2 腸球菌毒力基因PCR擴(kuò)增結(jié)果Fig.2 PCR amplification results of virulence genes of Enterococcus

2.2.3葡萄球菌毒力基因檢測(cè)。8株葡萄球菌經(jīng)PCR擴(kuò)增、凝膠電泳分析,均未檢測(cè)到篩選的目的毒力基因。

2.2.4沙門(mén)氏菌毒力基因檢測(cè)。3株沙門(mén)氏菌經(jīng)PCR擴(kuò)增、產(chǎn)物測(cè)序,結(jié)果顯示2株沙門(mén)氏菌檢測(cè)到毒力基因,攜帶fliC、gipA和mgtC基因,而未檢測(cè)到spoE、spvB、spvR和sseL基因;另1株沙門(mén)氏菌未檢測(cè)到目的毒力基因。沙門(mén)氏菌毒力基因PCR擴(kuò)增結(jié)果如圖3所示。

注:a.沙門(mén)氏菌fliC毒力基因PCR擴(kuò)增結(jié)果;b.沙門(mén)氏菌gipA毒力基因PCR擴(kuò)增結(jié)果;c.沙門(mén)氏菌mgtC毒力基因PCR擴(kuò)增結(jié)果;1～3,PCR產(chǎn)物;4,陰性對(duì)照;M.BM2000 DNA Marker。Note:a.PCR amplification results of fliC virulence genes of Salmonella isolates;b.PCR amplification results of gipA virulence genes of Salmonella;c.PCR amplification results of mgtC virulence genes of Salmonella;1-3,PCR products; 4,negative control; M.BM2000 DNA Marker.圖3 沙門(mén)氏菌毒力基因PCR擴(kuò)增結(jié)果Fig.3 PCR amplification results of virulence genes of Salmonella

2.3 藥物敏感性試驗(yàn)結(jié)果與耐藥性分析大腸桿菌、腸球菌、葡萄球菌對(duì)13種抗生素及抗菌藥的藥物敏感性試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表5。由表5可知,大腸桿菌對(duì)CEF、CFQ、DOX和FFC的耐藥率較高,其對(duì)CEF、CFQ和DOX的耐藥率均為43.75%(7/16),對(duì)FFC的耐藥率為62.50%(10/16),對(duì)GEN、AMK、ENR、OFX的耐藥率分別為31.25%(5/16)、18.75%(3/16)、6.25%(1/16)和6.25%(1/16),而對(duì)TGC、AZM和COL敏感。14株腸球菌對(duì)CEF、TIL的耐藥率較高,耐藥率分別為92.86%(13/14)和57.14%(8/14),對(duì)DOX、TGC、FFC、GEN、ENR、OFX的耐藥率分別為35.71%(5/14)、28.57%(4/14)、7.14%(1/14)、21.40%(3/14)、28.57%(4/14)和14.29%(2/14)。8株葡萄球菌對(duì)CEF、CFQ、DOX、GEN和AMK的耐藥率較高,耐藥率分別為87.50%(7/8)、100%(8/8)、87.50%(7/8)、100%(8/8)和100%(8/8),而對(duì)其他抗菌藥物的耐藥率介于12.50%～62.50%。

表5 大腸桿菌、腸球菌和葡萄球菌對(duì)13種抗菌藥物的耐藥率

3株沙門(mén)氏菌對(duì)11種抗生素及抗菌藥的藥物敏感性試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表6。對(duì)于β-內(nèi)酰胺抗生素CEF,2株沙門(mén)氏菌表現(xiàn)敏感、1株沙門(mén)氏菌表現(xiàn)耐藥;對(duì)于CFQ,2株沙門(mén)氏菌耐藥,1株沙門(mén)氏菌表現(xiàn)敏感。CFQ作為動(dòng)物專(zhuān)用β-內(nèi)酰胺類(lèi)抗生素,被批準(zhǔn)用于臨床的時(shí)間不長(zhǎng),在寵物臨床出現(xiàn)耐藥性屬于該地區(qū)首次報(bào)告,其耐藥機(jī)制與原因值得進(jìn)一步研究。對(duì)于四環(huán)素類(lèi)抗生素DOX,3株寵物貓?jiān)瓷抽T(mén)氏菌均表現(xiàn)耐藥,這與食品源動(dòng)物臨床上DOX的耐藥性報(bào)告結(jié)果[13-14]類(lèi)似。這是由于獸醫(yī)臨床長(zhǎng)期使用DOX作為廣譜抗生素用于抗感染治療所致。對(duì)于新型四環(huán)素類(lèi)藥物TGC,2株沙門(mén)氏菌表現(xiàn)敏感,另1株表現(xiàn)耐藥。宿主貓并未使用TGC治療,這可能是由于TGC耐藥機(jī)制水平傳播所致,其具體原因有待深入探討與研究。3株沙門(mén)氏菌對(duì)于獸醫(yī)專(zhuān)用酰胺醇類(lèi)抗生素FFC的耐藥性,2株耐藥、1株中介,且2株沙門(mén)氏菌呈高水平耐藥(MIC值≥256 μg/mL,高于折點(diǎn)MIC值16倍),這與FFC長(zhǎng)期應(yīng)用于獸醫(yī)臨床有關(guān)。對(duì)于氨基糖苷類(lèi)抗生素AMK,1株沙門(mén)氏菌敏感、1株沙門(mén)氏菌耐藥、1株沙門(mén)氏菌中介;對(duì)于GEN, 3株沙門(mén)氏菌均表現(xiàn)耐藥。對(duì)于寵物貓?jiān)瓷抽T(mén)氏菌,GEN主要用于檢測(cè)高水平耐藥,不用于臨床抗菌活性評(píng)價(jià)[9]。該研究中GEN對(duì)3株貓?jiān)瓷抽T(mén)氏菌的MIC值均大于等于64 μg/mL,表現(xiàn)出對(duì)氨基糖苷類(lèi)抗生素的高水平耐藥性(MIC>32 μg/mL)。對(duì)于大環(huán)內(nèi)酰類(lèi)抗生素AZM,2株沙門(mén)氏菌敏感、1株沙門(mén)氏菌耐藥;對(duì)氟喹諾酮類(lèi)ENR、OFX均表現(xiàn)為2株中介、1株耐藥。對(duì)于多肽類(lèi)抗生素COL,3株沙門(mén)氏菌全部表現(xiàn)耐藥(MIC≥32 μg/mL)。

表6 沙門(mén)氏菌藥敏試驗(yàn)結(jié)果

2.4 黏菌素mcr-1耐藥基因檢測(cè)結(jié)果對(duì)3株沙門(mén)氏菌的耐藥基因檢測(cè)結(jié)果如圖4所示。2株沙門(mén)氏菌S18和S21含有mcr-1耐藥基因;另外1株沙門(mén)氏菌S45對(duì)COL耐藥,但未檢測(cè)到mcr-1基因,懷疑有其他耐藥機(jī)制導(dǎo)致其對(duì)COL耐藥,其耐藥機(jī)制需要深入研究。

注:1～3.PCR產(chǎn)物;4.陽(yáng)性對(duì)照;5.陰性對(duì)照;M.BM2000 DNA Marker。Note:1-3.PCR products;4.Positive control;5.Negative control;M.BM2000 DNA Marker.圖4 沙門(mén)氏菌mcr-1基因PCR擴(kuò)增結(jié)果Fig.4 PCR amplification results of mcr-1 genes of Salmonella

3 討論

3.1 菌株分離與鑒定Li等[15]研究表明,大腸桿菌屬、葡萄球菌屬、鏈球菌屬、假單孢菌屬和腸球菌屬均是貓?bào)w內(nèi)易分離得到的主要病原菌。該試驗(yàn)選擇性地分離了大腸桿菌、葡萄球菌、腸球菌、沙門(mén)氏菌,大腸桿菌和腸球菌的分離率均較高,高于佟盼盼等[16](66.3%)和郭澤宇等[17](35.5%)的報(bào)道。該研究中葡萄球菌的檢出率(38.10%)與Li等[15]的檢出率(30%)相差不大。4種貓?jiān)床≡猩抽T(mén)氏菌的檢出率最低(14.29%),可能受所采集寵物貓的健康狀況、樣本數(shù)量以及地區(qū)不同的影響。但是,該試驗(yàn)中沙門(mén)氏菌的檢出率明顯高于其他地區(qū)檢測(cè)結(jié)果,如Wei等[18]報(bào)道貓?jiān)瓷抽T(mén)菌的檢出率為1.77%;Aeh等[19]調(diào)查發(fā)現(xiàn)289份貓糞便樣品中沙門(mén)氏菌的檢出率僅1.9%。Elnageh等[20]調(diào)查發(fā)現(xiàn)利比亞貓?jiān)瓷抽T(mén)氏菌的分離率為23%(24/103),其中大多數(shù)為健康貓。以上結(jié)果表明全世界范圍內(nèi)不同地區(qū)的報(bào)道有所差異,也反映了沙門(mén)氏菌在伴侶動(dòng)物貓群體中的高定殖狀態(tài)。

肺炎克雷伯菌也屬于人、獸易共同感染的主要病原菌,極易造成寵物主人感染且通過(guò)寵物犬、貓等橫向傳播。該試驗(yàn)嘗試分離貓?jiān)捶窝卓死撞?但因?qū)櫸镓垜?yīng)激比較強(qiáng),試驗(yàn)采集的咽拭子和鼻拭子樣品數(shù)量較少,而肺炎克雷伯菌多存在于呼吸道及黏膜上,因此未成功分離到肺炎克雷伯菌。

3.2 毒力基因攜帶情況大腸桿菌主要致病性毒力基因有負(fù)責(zé)編碼穩(wěn)定細(xì)胞外膜結(jié)構(gòu)的外膜蛋白毒力基因OmpA、血清蛋白編碼毒力基因iss、影響外膜囊泡活性的毒力基因hlyF[5]、編碼鐵耶爾森菌素?cái)z取受體的毒力基因fyuA、負(fù)責(zé)需氧桿菌鐵載體合成的毒力基因iucD、參與鐵載體耶爾森菌素生物合成的毒力基因irp2等[21]。該研究中所有大腸桿菌均檢測(cè)到OmpA基因;fyuA基因的檢出率也較高(75.00%),高于成都地區(qū)犬源大腸桿菌的檢出率(17.31%)[22]。該研究中僅少數(shù)大腸桿菌菌株攜帶iucD以及iss、hlyF基因。彭嚴(yán)嚴(yán)等[5]報(bào)道安徽滁州地區(qū)9株鵝源致病性大腸桿菌OmpA、iss、hlyF、iucD基因陽(yáng)性率分別為100%、100%、100%和88.9%,其中OmpA的檢出率與該試驗(yàn)結(jié)果相同,iss、hlyF、iucD的檢出率要遠(yuǎn)高于該試驗(yàn)結(jié)果(6.25%),說(shuō)明iss、hlyF、iucD的檢出率與致病性有著很強(qiáng)的關(guān)聯(lián)性。Dec等[23]研究結(jié)果顯示寵物源爬行動(dòng)物大腸桿菌astA的檢出率為3.13%(1/32),與該試驗(yàn)astA的檢出結(jié)果(0)相近,這可能與物種差異有關(guān)。張海龍等[24]對(duì)河北部分地區(qū)致病性大腸桿菌中也未檢出黏附素毒力基因papC,與該試驗(yàn)結(jié)果相一致。

該研究中葡萄球菌毒力基因選擇生物膜形成相關(guān)毒力基因icaA、icaD和clfA,殺白細(xì)胞素編碼基因lukS,耐熱核酸酶Nuc以及剝脫毒素expB,但均未檢出。De Almeida等[27]從患乳房炎奶牛中分離的金黃色葡萄球菌中也未檢出icaA和icaD,這2種基因的檢出可能與地區(qū)差異有關(guān)。施永超[8]從患膿皮癥犬分離的葡萄球菌中檢出expB的陽(yáng)性率為38.8%,國(guó)外有研究人員[21]認(rèn)為expB在狗的皮膚感染性疾病中扮演著重要角色。該研究中貓未患過(guò)皮膚感染性疾病。lukS在偽中間葡萄球菌中有94%的高檢出率[8],與clfA、Nuc一樣,這是因?yàn)槠咸亚蚓N是影響這3種毒力基因檢出率的重要原因。另外,樣本的分離數(shù)量、是否來(lái)自患病貓也可能是毒力基因檢出率為0的原因。關(guān)于是否存在其他毒力基因則有待進(jìn)一步深入研究,才能進(jìn)行致病性判定。

沙門(mén)氏菌毒力相關(guān)基因主要分布在毒力島與毒力質(zhì)粒上,其對(duì)菌體的致病性具有決定性作用,毒力基因通過(guò)編碼蛋白侵襲宿主產(chǎn)生致病性。該研究中沙門(mén)氏菌S18和S21檢出fliC、gipA和mgtC毒力基因,而其他毒力島基因和毒力質(zhì)?；蛭礄z測(cè)到,這可能與宿主自身、遺傳和環(huán)境因素有關(guān)。楊文文等[6]報(bào)道山東地區(qū)25株雞源致病性沙門(mén)氏菌的fliC、gipA基因陽(yáng)性率分別為36%和32%。任士飛等[28]研究發(fā)現(xiàn)鴨源沙門(mén)氏菌中mgtC毒力基因的攜帶率為100%。以上研究結(jié)果表明fliC、gipA和mgtC是沙門(mén)氏菌中較為流行的毒力基因。曹恬雪等[29]報(bào)道毒力質(zhì)?；蛑淮嬖谟谔囟ㄑ逍偷纳抽T(mén)氏菌中,比如腸炎沙門(mén)氏菌。然而,血清型是致病性的主要影響因素,毒力島、菌毛和毒素等也是沙門(mén)氏菌致病性的關(guān)鍵[30]。

3.3 耐藥性分析該研究中寵物貓?jiān)床≡鷮?duì)被檢13種抗生素或抗菌藥存在不同程度的耐藥性及多重耐藥性。多藥耐藥集中在4～8耐,耐藥譜型多樣化。16株大腸桿菌對(duì)β-內(nèi)酰胺類(lèi)抗生素CEF、CFQ,四環(huán)素類(lèi)DOX及FFC、GEN、AMK的耐藥率為18.75%～62.50%,貓?jiān)创竽c桿菌對(duì)慶大霉素的耐藥率(31.25%)低于 Rzewuska等[31]報(bào)道的犬貓?jiān)创竽c桿菌耐藥率(68.1%)。Saputra等[32]研究發(fā)現(xiàn)澳大利亞貓?jiān)创竽c桿菌對(duì)頭孢類(lèi)抗生素類(lèi)藥物的耐藥率低于10%,該研究中大腸桿菌對(duì)頭孢類(lèi)藥物的耐藥率較高(43.75%),這與該類(lèi)藥物在河南鄭州地區(qū)寵物臨床上長(zhǎng)期應(yīng)用有關(guān)。近年來(lái)已有報(bào)道發(fā)現(xiàn)犬源大腸桿菌對(duì)ENR的耐藥率達(dá)到55.9%[33],該研究中OFX和ENR的耐藥率較低(均為6.25%),表明該地區(qū)貓?jiān)创竽c桿菌對(duì)此類(lèi)藥物出現(xiàn)耐藥性,但耐藥性并未普遍發(fā)生,臨床抗感染治療時(shí)仍可推薦使用。值得注意的是,該研究未發(fā)現(xiàn)貓?jiān)创竽c桿菌對(duì)TGC、AZM和COL具有耐藥性,可推薦使用AZM,但TGC作為抗感染及抗多重耐藥菌的新型抗生素,應(yīng)盡量避免選用此類(lèi)藥物而優(yōu)先選用耐藥率較低的其他常規(guī)抗生素或抗菌藥;因?yàn)镃OL具有較強(qiáng)的腎毒性,雖然其對(duì)貓?jiān)床≡哂休^強(qiáng)的敏感性,但不建議體內(nèi)用作抗感染治療藥物,可作為外用或局部使用抗感染藥物。

該研究中14株腸球菌也表現(xiàn)出不同程度的耐藥性,CEF的耐藥率達(dá)到92.86%,這與腸球菌對(duì)β-內(nèi)酰胺類(lèi)藥物的固有耐藥性有關(guān)[34]。我國(guó)18個(gè)省份豬源腸球菌已對(duì)TGC產(chǎn)生耐藥性[35],該研究中貓?jiān)茨c球菌對(duì)TGC已經(jīng)表現(xiàn)出較高的耐藥性,分析認(rèn)為這是人醫(yī)臨床的橫向傳播所致。該研究中腸球菌對(duì)ENR的耐藥率(28.57%)高于宋超慧等[36]報(bào)道的耐藥率(12.5%),該研究中腸球菌對(duì)FFC的耐藥率(7.14%)與銀川地區(qū)犬源腸球菌的耐藥率(8%)[37]相差不大,因此臨床治療因腸球菌引起的感染性疾病可考慮選用FFC。

該研究中8株寵物貓?jiān)雌咸亚蚓鷮?duì)被檢13種抗菌藥物的耐藥情況嚴(yán)重,其對(duì)CEF的耐藥率為87.50%,高于軒慧勇等[38]報(bào)道的寵物犬源葡萄球菌耐藥率;該研究中葡萄球菌對(duì)FFC(25.00%)和ENR(25.00%)的耐藥率明顯低于軒慧勇等[38]報(bào)道結(jié)果(82.9%、64%),表明該耐藥性具有地區(qū)差異性,疑似與該地區(qū)貓臨床用藥習(xí)慣有關(guān)。該研究中葡萄球菌對(duì)TYL的耐藥率(62.50%)高于明楊等[39]報(bào)道結(jié)果(43.75%)。該試驗(yàn)分離的葡萄球菌多來(lái)自健康貓,且近期未使用抗生素用于抗感染治療,可能是寵物貓和主人與其他動(dòng)物和環(huán)境接觸從而導(dǎo)致耐藥菌的橫向傳播所致。

該研究中3株沙門(mén)氏菌的耐藥性和多重耐藥性也較為明顯,分別達(dá)到7耐、4耐和8耐。對(duì)抗革蘭氏陰性菌“最后一道防線”的COL也出現(xiàn)耐藥性,且檢測(cè)到mcr-1耐藥基因,而COL因?yàn)榫哂休^強(qiáng)的腎毒性而較少在寵物臨床上應(yīng)用,其耐藥性可能是由于食品源動(dòng)物橫向傳播所致。TGC因?yàn)楦邉┝肯戮哂心I毒性而不能在人醫(yī)臨床應(yīng)用,但因其廣譜抑菌特性在多重耐藥菌株感染治療中發(fā)揮著重要作用[40]。該研究中沙門(mén)氏菌S45不僅對(duì)COL耐藥,而且對(duì)TGC耐藥,這是該地區(qū)寵物貓臨床上首次報(bào)道,其耐藥原因及傳播機(jī)制值得進(jìn)一步研究。

4 結(jié)論

該研究對(duì)貓?jiān)?種主要病原菌的分離鑒定、毒力基因檢測(cè)及藥物敏感性試驗(yàn)結(jié)果豐富了鄭州地區(qū)貓?jiān)粗饕≡牧餍胁W(xué)資料和耐藥性分析報(bào)告,獲得的臨床菌株除葡萄球菌外均不同程度攜帶多種毒力基因,耐藥性突出且存在多重耐藥現(xiàn)象,其對(duì)四環(huán)素類(lèi)新型藥物TGC和多粘菌素類(lèi)COL的耐藥機(jī)制疑是水平傳播所致,值得引起警惕。