■ 羅 陽 任云華 隋雁南 羊 慧 張菊華 戴雨潔 閆俊書 周維仁*

（1.泰興瑞泰化工有限公司，江蘇泰州 225453；2.江蘇省農(nóng)業(yè)科學(xué)院畜牧研究所，江蘇南京210014）

陳化糧通常是指儲存期在3年以上，發(fā)生陳化、變質(zhì)及儲存品質(zhì)顯著下降，不宜直接作為口糧的糧食，包括玉米、稻谷、小麥等[1]。陳化糧只能通過拍賣的方式定向銷售給飼料加工及釀造企業(yè)。由于陳化糧價格低廉，在飼料行業(yè)中經(jīng)常使用陳化糧部分替代新鮮糧食以降低飼料成本。但陳化糧由于儲存期過長，儲存方式不當(dāng)，其營養(yǎng)成分通常會發(fā)生變化，脂質(zhì)也會出現(xiàn)不同程度的氧化酸敗[2]。飼喂陳化糧會引起動物機(jī)體氧化應(yīng)激反應(yīng)；破壞日糧的適口性，降低動物采食量；影響飼料營養(yǎng)物質(zhì)的消化吸收，降低動物生產(chǎn)性能；嚴(yán)重時甚至危害動物的身體健康[3-4]。因此，緩解陳化糧對動物造成的不良反應(yīng)成為養(yǎng)殖業(yè)亟須解決的問題。目前，生產(chǎn)實(shí)踐中主要通過在飼料中添加一定劑量的抗氧化劑來延緩或預(yù)防油脂的氧化酸敗。抗氧化劑按來源可以分為合成抗氧化劑和天然抗氧化劑兩種[5-6]。乙氧基喹啉（EQ）是可以用來清除過氧化脂質(zhì)自由基的一種化學(xué)合成抗氧化劑[7]。而茶多酚和維生素E 作為天然抗氧化劑可以通過清除自由基，抑制脂質(zhì)的過氧化反應(yīng)，從而提高機(jī)體抗氧化能力，避免氧化應(yīng)激對動物機(jī)體造成的損傷，在機(jī)體內(nèi)起到抗氧化的作用[8-9]。但由于天然抗氧化劑價格較高，在實(shí)際生產(chǎn)過程中不會將其直接作為飼料抗氧化劑進(jìn)行使用。

目前，關(guān)于抗氧化劑能否緩解陳化糧對動物帶來的負(fù)面影響的相關(guān)報道較少，且更鮮有合成抗氧化劑與天然抗氧化劑配合使用以緩解陳化糧負(fù)面影響的相關(guān)試驗(yàn)。因此，本試驗(yàn)將利用新型復(fù)合抗氧化劑，通過測定肉鴨生長性能和抗氧化性能指標(biāo)，探討利用合成抗氧化劑與天然抗氧化劑配合使用以緩解陳化糧對肉鴨產(chǎn)生的氧化應(yīng)激反應(yīng)的影響，以期為合理利用陳化糧奠定科學(xué)的理論基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

本試驗(yàn)所用新型復(fù)合抗氧化劑產(chǎn)品主要由乙氧基喹啉、維生素E、茶多酚、白炭黑和沸石粉組成，由某化工有限公司提供，具體成分及有效含量見表1。

表1 新型復(fù)合抗氧化劑成分及有效含量

1.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì)與飼養(yǎng)管理

試驗(yàn)選取體重相近（70 g 左右）、身體健康的1 日齡雄性櫻桃谷肉鴨400 只，隨機(jī)分為兩組，分別為對照組和試驗(yàn)組，每組4 個重復(fù)，每個重復(fù)50 只肉鴨，對照組飼喂由陳化糧組成的基礎(chǔ)飼糧，試驗(yàn)組在飼喂基礎(chǔ)飼糧的基礎(chǔ)上，額外添加500 mg/kg 的新型復(fù)合抗氧化劑。試驗(yàn)于安徽全椒未來飼料有限責(zé)任公司進(jìn)行，試驗(yàn)期為40 d。試驗(yàn)鴨均采用舍內(nèi)平養(yǎng)，試驗(yàn)開始前對鴨舍進(jìn)行嚴(yán)格消毒，試驗(yàn)期間肉鴨按照常規(guī)方法養(yǎng)殖，自由采食和自由飲水，基礎(chǔ)飼糧組成及營養(yǎng)水平見表2。

表2 基礎(chǔ)飼糧組成及營養(yǎng)水平（風(fēng)干基礎(chǔ)）

1.3 樣品采集與指標(biāo)測定

1.3.1 生長性能指標(biāo)的測定

肉鴨在試驗(yàn)開始時（1 日齡）、第14 天和第40 天時，記錄各組的耗料量，計(jì)算平均日采食量（ADFI）。試驗(yàn)開始、第14天和第40天時，以重復(fù)為單位進(jìn)行空腹稱重，記錄下每重復(fù)鴨只數(shù)，計(jì)算平均日增重（ADG）。每組所得平均日采食量與平均日增重的比值即是每組的料重比（F/G）。

1.3.2 抗氧化指標(biāo)的測定

在試驗(yàn)第40天清晨飼喂前，每組每個重復(fù)挑選與該重復(fù)平均體重相近的肉鴨2只，頸部靜脈采血10 mL，于3 000 r/min 離心15 min 分離出血清，置于-20 ℃冰箱中保存，用于血清抗氧化指標(biāo)分析。并進(jìn)行屠宰試驗(yàn)，采集肝臟、腎臟、心臟及胸肌樣品放入冰盒冷藏，后將所有樣品轉(zhuǎn)入冰箱-20 ℃保存用于測定其抗氧化指標(biāo)。按照南京建成生物工程研究所有限公司試劑盒提供的檢測方法對血清、肝臟、腎臟、心臟及胸肌的超氧化物歧化酶（SOD）活性、谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-Px）活性、過氧化氫酶（CAT）活性、丙二醛（MDA）含量進(jìn)行檢測。

1.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析

試驗(yàn)數(shù)據(jù)采用Excel 2016 進(jìn)行初步整理，利用SPSS 22.0 統(tǒng)計(jì)軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行t檢驗(yàn)分析，試驗(yàn)結(jié)果用“平均值±標(biāo)準(zhǔn)差”表示，以P<0.05 為差異顯著，P>0.05為差異不顯著。

2 結(jié)果與分析

2.1 新型復(fù)合抗氧化劑對肉鴨生長性能的影響

由表3 可以看出，兩組間1 日齡體重和14 日齡體重?zé)o顯著差異（P>0.05），而試驗(yàn)組40日齡體重顯著高于對照組（P<0.05）；1～14日齡對照組ADG、ADFI及F/G與試驗(yàn)組相比均無顯著差異（P>0.05）；在15～40 日齡兩組間ADG 和ADFI 無顯著差異（P>0.05），但試驗(yàn)組F/G 顯著低于對照組（P<0.05）；1～40 日齡試驗(yàn)組ADG顯著高于對照組（P<0.05），且F/G 顯著低于對照組（P<0.05），而ADFI 與對照組相比差異不顯著（P>0.05）。

表3 新型復(fù)合抗氧化劑對肉鴨生長性能的影響

2.2 新型復(fù)合抗氧化劑對肉鴨血清抗氧化功能的影響

由表4 可以看出，添加新型復(fù)合抗氧化劑的試驗(yàn)組肉鴨血清SOD 活性和GSH-Px 活性均顯著高于對照組（P<0.05）；而兩組間CAT 活性和MDA 含量均無顯著差異（P>0.05）。

表4 新型復(fù)合抗氧化劑對肉鴨血清抗氧化功能的影響

2.3 新型復(fù)合抗氧化劑對肉鴨肝臟抗氧化功能的影響

由表5 可以看出，與對照組相比，試驗(yàn)組肉鴨肝臟SOD 和GSH-Px 活性均顯著升高（P<0.05）；而兩組間CAT活性與MDA含量無顯著差異（P>0.05）。

表5 新型復(fù)合抗氧化劑對肉鴨肝臟抗氧化功能的影響

2.4 新型復(fù)合抗氧化劑對肉鴨腎臟抗氧化功能的影響

由表6 可以看出，與對照組相比，試驗(yàn)組肉鴨腎臟GSH-Px 活性顯著升高（P<0.05），而MDA 含量則顯著降低（P<0.05）；兩組間CAT和SOD活性差異不顯著（P>0.05）。

表6 新型復(fù)合抗氧化劑對肉鴨腎臟抗氧化功能的影響

2.5 新型復(fù)合抗氧化劑對肉鴨心臟抗氧化功能的影響

由表7 可以看出，試驗(yàn)組肉鴨心臟CAT 活性和SOD 活性均顯著高于對照組（P<0.05），而MDA 含量則顯著低于對照組（P<0.05）；兩組間GSH-Px 活性差異不顯著（P>0.05）。

表7 新型復(fù)合抗氧化劑對肉鴨心臟抗氧化功能的影響

2.6 新型復(fù)合抗氧化劑對肉鴨胸肌抗氧化功能的影響

由表8 可以看出，與對照組相比，試驗(yàn)組肉鴨胸肌MDA 含量顯著降低（P<0.05）；而兩組間CAT、SOD和GSH-Px活性差異不顯著（P>0.05）。

表8 新型復(fù)合抗氧化劑對肉鴨胸肌抗氧化功能的影響

3 討論

3.1 新型復(fù)合抗氧化劑對肉鴨生長性能的影響

脂肪酸值是衡量糧食儲藏品質(zhì)，判斷糧食新陳的一項(xiàng)重要指標(biāo)。一般情況下，隨著儲存時間的延長，糧食籽粒內(nèi)部脂肪會發(fā)生氧化反應(yīng)，使得脂肪酸值升高。本試驗(yàn)選用了兩種糧食，組成為85%糙米+15%小麥（脂肪酸值125.42 mg KOH/100 g）和組成為85%稻谷+15%小麥（脂肪酸值84.23 mg KOH/100 g），均屬于陳化重度不宜存。研究發(fā)現(xiàn)，陳化糧由于其營養(yǎng)成分的變化，且存在大量的過氧化物，飼喂陳化糧可能會降低動物的生長性能[10-12]。李樺等[13]在肉雞日糧中添加茶多酚，發(fā)現(xiàn)可顯著提高肉雞ADG 并顯著降低料肉比，改善熱應(yīng)激對肉雞生長性能造成的不良影響。張相倫[14]將維生素E 添加至含有氧化大豆蛋白及2%加熱油脂的肉雞日糧中發(fā)現(xiàn)，維生素E 可顯著提高肉雞ADG，但對ADFI 和料肉比無顯著影響。Lu 等[15]在含有3%氧化大豆油脂+3%不飽和脂肪酸的肉雞日糧中添加由乙氧基喹啉和沒食子酸丙酯組成的抗氧化劑及維生素E 發(fā)現(xiàn)，與對照組相比，試驗(yàn)組ADG 和ADFI 均未出現(xiàn)顯著變化，但顯著降低了料重比，一定程度上改善了動物的生產(chǎn)性能。在本試驗(yàn)中，整個試驗(yàn)周期內(nèi)，添加新型復(fù)合抗氧化劑的試驗(yàn)組與未添加任何抗氧化劑的對照組相比ADG 和ADFI 均無顯著差異，但在15～40 日齡時，試驗(yàn)組料重比顯著低于對照組，這與Lu 等[15]的試驗(yàn)結(jié)果基本一致。說明合成抗氧化劑與天然抗氧化劑配合使用可以在一定程度上改善動物的生長性能，但由于抗氧化劑種類和添加劑量的不同以及受到動物所處狀態(tài)的影響，部分指標(biāo)結(jié)果可能會出現(xiàn)一定的差異。

3.2 新型復(fù)合抗氧化劑對肉鴨抗氧化能力的影響

動物機(jī)體在正常生理狀態(tài)下產(chǎn)生的自由基由于體內(nèi)內(nèi)源抗氧化系統(tǒng)（如GSH-Px、SOD、CAT 等）和外源抗氧化系統(tǒng)（維生素E、類胡蘿卜素等）的存在常處于動態(tài)平衡狀態(tài)[16]。當(dāng)機(jī)體攝入過多外源自由基或產(chǎn)生過多的自由基而抗氧化系統(tǒng)不能抵消時就會產(chǎn)生氧化應(yīng)激，造成機(jī)體的氧化損傷，影響動物的身體健康[17]。研究發(fā)現(xiàn)，陳化糧在長時間儲存過程中，脂肪和蛋白質(zhì)易發(fā)生氧化產(chǎn)生過氧化物，誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生過量的自由基，從而破壞機(jī)體氧化還原平衡狀態(tài)，引起氧化應(yīng)激[18-19]。崔小燕[20]和劉比一等[21]研究發(fā)現(xiàn)，使用長期儲存的陳化玉米配制肉雞日糧會降低肉雞血清抗氧化性能。同時，史東輝等[22]提出在家禽日糧中外源性添加抗氧化劑是保持動物機(jī)體氧化還原平衡狀態(tài)，緩解氧化應(yīng)激對動物造成負(fù)面影響的有效手段。

SOD 和GSH-Px 均是常見的內(nèi)源性抗氧化劑，其活性的高低可間接地反映出機(jī)體對自由基的清除能力[23]。SOD 可催化機(jī)體內(nèi)自由基發(fā)生歧化反應(yīng)生成H2O2和O2，保護(hù)細(xì)胞免受自由基的損傷，而GSH-Px可特異性催化GSH 氧化，促進(jìn)H2O2分解為H2O 和O2，清除脂質(zhì)過氧化物，從而阻斷自由基對機(jī)體的進(jìn)一步損傷[24-25]。穆雅東[26]研究發(fā)現(xiàn)，在陳化糧飼糧中添加100 mg/kg 維生素E 可顯著提高蛋雞血清和肝臟SOD活性和GSH-Px活性。周嶺[27]在使用陳化玉米作為蛋雞日糧的飼糧中添加茶多酚發(fā)現(xiàn)可顯著提高血清、肝臟及卵巢SOD 活性和GSH-Px 活性，并顯著降低血清MDA 含量，緩解了陳化玉米對蛋雞抗氧化能力的負(fù)面影響。本試驗(yàn)中，在陳化糧作為基礎(chǔ)日糧的基礎(chǔ)上添加新型復(fù)合抗氧化劑的試驗(yàn)組，可顯著提高血清、肝臟SOD 活性和GSH-Px 活性，并顯著提高腎臟GSH-Px 活性及心臟SOD 活性，這與上述試驗(yàn)結(jié)果基本一致。CAT 是動物機(jī)體防御體系的關(guān)鍵酶之一，當(dāng)機(jī)體內(nèi)H2O2含量過高時，CAT能特異性地分解多余的H2O2，催化其生成H2O 和O2，從而減輕機(jī)體過氧化損傷，保護(hù)細(xì)胞膜的完整性[28]。張亞茹等[29]研究發(fā)現(xiàn)，在陳化玉米作為肉鴨能量原料的日糧中添加茶多酚、維生素E、BHT 均可顯著提高其血清總抗氧化能力和CAT 活性，對肉鴨抗氧化功能有不同程度的改善作用。而本試驗(yàn)中，添加新型復(fù)合抗氧化劑試驗(yàn)組與對照組相比，血清CAT 活性無顯著差異，但可顯著提高肉雞心臟CAT 活性。MDA 是脂質(zhì)過氧化反應(yīng)的分解產(chǎn)物之一，能與含氨基化合物如蛋白質(zhì)、核酸等發(fā)生交聯(lián)，使之喪失功能，其含量可作為機(jī)體脂質(zhì)過氧化程度的檢測指標(biāo)，間接反映出機(jī)體細(xì)胞氧化損傷程度[30]。Wang[31]發(fā)現(xiàn)肉雞日糧中添加茶多酚和維生素E可顯著降低血清MDA 含量。本試驗(yàn)中，試驗(yàn)組與對照組相比，對血清中MDA 含量無顯著影響，但可顯著降低肉鴨腎臟、心臟及胸肌MDA含量。

4 結(jié)論

本試驗(yàn)結(jié)果表明，在以陳化糧組成的基礎(chǔ)飼糧中添加500 mg/kg 的新型復(fù)合抗氧化劑可以在一定程度上改善肉鴨的生長性能并緩解陳化糧對其抗氧化性能的不良影響。