吳 儀,黃莉莉,謝果珍,譚周進(jìn)

(湖南中醫(yī)藥大學(xué) 1.中醫(yī)學(xué)院; 2.藥學(xué)院,湖南 長沙 410208)

糖苷水解酶是指參與糖苷類化合物水解反應(yīng)的一類酶,可特異性水解糖苷類化合物及碳水化合物的糖苷鍵,協(xié)助營養(yǎng)物質(zhì)或藥物的代謝和利用[1]。β-D-葡萄糖苷酶(β-D-glucosidase,EC 3.2.1.21)和β-D-葡萄糖醛酸酶(β-D-glucuronidase,EC 3.2.1.31)是重要的糖苷水解酶,與食物和藥物的代謝及腸道疾病相關(guān)[2]。由宿主基因表達(dá)的糖苷水解酶數(shù)量有限,而腸道菌群能產(chǎn)生數(shù)量龐大的糖苷水解酶。長期大量使用抗菌藥物會(huì)破壞腸道菌群穩(wěn)態(tài),改變腸道菌群分泌糖苷水解酶的數(shù)量及活性,造成營養(yǎng)物質(zhì)代謝不充分,從而引起腹瀉[3]。而腹瀉的同時(shí)會(huì)排出大量的腸道常居菌,使腸道菌群失衡,腹瀉加重。由此可見,腸道菌群紊亂與腹瀉可互為因果,恢復(fù)腸道菌群穩(wěn)態(tài)是治療抗生素相關(guān)性腹瀉(AAD)的重要靶點(diǎn)。

七味白術(shù)散具有健脾益氣、和胃生津的功效,主治脾虛泄瀉。臨床上常用于治療多種原因所致的腹瀉,對(duì)抗AAD亦有顯著療效。研究[4]表明,七味白術(shù)散能通過扶植如酵母菌(Saccharomyces)、乳酸菌(Lactobacillius)、雙歧桿菌(Bifidobacterium)等腸道有益菌的生長,抑制艱難梭菌(Clostridiumdifficile)等致病菌,以及大腸埃希菌(Escherichiacoli)等條件致病菌的生長,上調(diào)蔗糖酶、纖維素酶、乳糖酶和淀粉酶等消化酶活性,降低木聚糖酶和蛋白酶的活性,恢復(fù)腸道菌群穩(wěn)態(tài)從而治療腹瀉。中醫(yī)方劑在臨床上多數(shù)以湯劑給藥,湯劑中主要為極性較大的糖苷類成分,進(jìn)入體內(nèi)在糖苷水解酶的作用下生成極性較小的單糖、次級(jí)苷或苷元。其中次級(jí)苷及苷元可被機(jī)體吸收利用而發(fā)揮其藥理作用[5]。此外,AAD與機(jī)體能量代謝、氧化應(yīng)激及炎癥反應(yīng)均存在一定程度的關(guān)聯(lián)。因此,本研究將能量代謝功能相關(guān)指標(biāo)琥珀酸脫氫酶(SDH)和乳酸脫氫酶(LDH),氧化應(yīng)激功能相關(guān)指標(biāo)丙二醛(MDA),以及炎癥相關(guān)指標(biāo)白細(xì)胞介素-17(IL-17)和脂多糖(LPS)納入研究,探究糖苷水解酶的活性變化,為明確AAD發(fā)生發(fā)展的過程及藥物療效發(fā)揮的機(jī)制提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.2 主要藥物及試劑盒 頭孢拉定膠囊(批號(hào)H13020787,石藥集團(tuán)歐意藥業(yè)有限公司)、硫酸慶大霉素注射液(批號(hào):5150307,山東魯抗辰欣藥業(yè)有限公司)、對(duì)硝基苯基β-D-葡萄糖苷(p-NPG,上海麥克林生化科技有限公司)、對(duì)硝基苯酚(PNP,上海麥克林生化科技有限公司)、β-葡萄糖醛酸酚酞(美國Sigma公司)、酚酞(國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司)。炒白術(shù)(湖南,批號(hào):20201014)、木香(云南,批號(hào):20201011)、人參(東北,批號(hào):20200610)、廣藿香(廣東,批號(hào):20200816)、葛根(湖南,批號(hào):20201020)、茯苓(湖南,批號(hào):20201109)、甘草(內(nèi)蒙古,批號(hào):20200610)均購于湖南中醫(yī)藥大學(xué)附屬第一醫(yī)院。LDH酶聯(lián)免疫酶吸附試驗(yàn)(ELISA)試劑盒(批號(hào):JM-11330M1,江蘇晶美生物科技有限公司)、SDH ELISA試劑盒(批號(hào):JM-11331M1,江蘇晶美生物科技有限公司)、LPS ELISA試劑盒(批號(hào):JM-02914M1,江蘇晶美生物科技有限公司)、IL-17 ELISA試劑盒(批號(hào):JM-02453M1,江蘇晶美生物科技有限公司)、MDA TBA微板法檢測(cè)試劑盒(批號(hào):LDA2101,北京雷根生物技術(shù)有限公司)。

1.3 主要儀器 紫外分光光度計(jì)(Nano-drop 2000/2000C,美國Thermo Scientific公司)、立式壓力蒸汽滅菌器(SQ510C,重慶雅馬拓科技有限公司)、電熱恒溫干燥箱(202-2AB,天津市泰斯特儀器有限公司)、渦旋混合器(VORTEX-5,Kylin-bell公司)、三用恒溫水箱(HA-600,金壇市神科儀器廠)、多功能酶標(biāo)儀(SPAPK公司)。

1.4 七味白術(shù)散湯劑制備 按照《中華人民共和國藥典》(2010版)稱取七味白術(shù)散全方飲片,冷水浸泡30 min,全火煎煮至沸騰后文火繼續(xù)煎煮30 min,煎煮2次,將2次藥液混合濃縮至生藥濃度為0.34 g/mL,4℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.5 動(dòng)物模型制備及分組給藥 25只小鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)3 d后,隨機(jī)分成正常組和模型組,正常組10只,模型組15只。按課題組建立的方法制備AAD模型[6]:采用頭孢拉定膠囊聯(lián)合硫酸慶大霉素注射液配制成濃度為62.5 g/L的抗生素混合液,模型組小鼠按23.33 mL/kg的劑量灌胃,0.35 mL/(只·次),2次/d,連續(xù)5 d。正常組小鼠給予等體積的無菌水,當(dāng)模型小鼠出現(xiàn)便次增多、糞便稀濕、肛周不潔等癥狀時(shí),提示造模成功。造模成功后取正常組及模型組各5只,隨后將模型組剩余小鼠隨機(jī)分為自愈組和治療組(每組各5只)。治療組參考文獻(xiàn)[7-8]進(jìn)行七味白術(shù)散湯劑灌胃治療,根據(jù)臨床等效劑量按0.16 g/(kg·d)進(jìn)行灌胃,0.35 mL/(只·次),2次/d,連續(xù)3 d,正常組和自愈組小鼠給予等體積的無菌水。

1.6 粗酶液制備[7]分別于造模5 d及治療3 d后將小鼠脫頸處死。無菌采集各組小鼠的小腸內(nèi)容物(SC)、小腸黏膜(SM)、結(jié)腸內(nèi)容物(CC)和結(jié)腸黏膜(CM),分裝于無菌離心管中,加入適量無菌水低速勻漿后,3 000 r/min離心15 min,上清液即為粗酶液。

1.7 小鼠肝臟組織勻漿MDA含量的檢測(cè) 剪取適量肝組織至無菌EP管中,加入適量磷酸鹽緩沖液(PBS)勻漿后1 600 r/min離心15 min,取上清液。按照試劑盒說明書要求,采用TBA法檢測(cè)肝組織勻漿中MDA的含量。

1.8 小鼠血清活性物質(zhì)的檢測(cè) 眼球取血,制備血清,按照試劑盒說明書要求加樣、溫育、洗板、終止反應(yīng),在一定波長下上機(jī)檢測(cè)各孔OD值,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,使用ELISA法檢測(cè)小鼠血清LDH、SDH、IL-17和LPS的含量。

⑤加強(qiáng)信息化建設(shè)。利用3S、網(wǎng)絡(luò)技術(shù)，建設(shè)北京市水土保持核心業(yè)務(wù)管理系統(tǒng)，以小流域?yàn)閱卧?，?shí)現(xiàn)市、區(qū)兩級(jí)預(yù)防監(jiān)督、監(jiān)測(cè)等業(yè)務(wù)網(wǎng)絡(luò)化管理，實(shí)現(xiàn)水土保持建設(shè)和管理從定性到定量、從平面到空間、從靜態(tài)到動(dòng)態(tài)、從粗放到精細(xì)的轉(zhuǎn)變，提高了水土保持的精細(xì)化管理水平。

1.9 對(duì)硝基苯酚標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制 分別往7支試管中加入1 mmol/L對(duì)硝基苯酚標(biāo)準(zhǔn)液0、1、2、3、4、5、6 mL,用蒸餾水定容至10 mL,每支試管中分別加入1 mL 1 mol/L碳酸鈉溶液,顯色5 min,以第1管為空白,400 nm處測(cè)吸光值(A)。以對(duì)硝基苯酚的濃度為橫坐標(biāo),OD400吸光值為縱坐標(biāo),獲得對(duì)硝基苯酚-光密度標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為Y=0.168 8X+0.004 3,R2=0.999 9。

1.10β-D-葡萄糖苷酶活性檢測(cè)[9-10]取0.1 mL待測(cè)樣品酶液、0.9 mL 0.2 mol/L Na2HPO4-0.1 mol/L檸檬酸緩沖液(pH 4.5)和1 mL 5 mmol/L對(duì)硝基苯基β-D-葡萄糖苷溶液分別于50℃恒溫水浴10 min后混合均勻,置于50℃水浴鍋中繼續(xù)反應(yīng)10 min,立即加入1 mL 1 mol/L的碳酸鈉溶液顯色,搖勻后400 nm處測(cè)其A值。以高溫滅活的粗酶液為空白對(duì)照。每克腸道內(nèi)容物/黏膜在50℃,10 min水解對(duì)硝基苯基β-D-葡萄糖苷產(chǎn)生1 μmoL的對(duì)硝基苯酚定義為一個(gè)酶活力單位(U/g)。

1.11 酚酞標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制 取6支試管分別加入20 μg/mL的酚酞儲(chǔ)備液0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 mL,用醋酸緩沖液定容至1 mL,分別加入3 mL堿性甘氨酸溶液顯色,靜置10 min,以第1管為空白在560 nm處測(cè)A值。以酚酞濃度為橫坐標(biāo),OD560吸光值為縱坐標(biāo),獲得酚酞光密度標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為Y=0.083 8X+0.001 1,R2=0.999 8。

1.12β-D-葡萄糖醛酸酶活性檢測(cè)[11]測(cè)定管中加入0.1 mL待測(cè)樣品酶液,0.8 mL pH 5.0醋酸緩沖液,0.01 mol/Lβ-葡萄糖醛酸酚酞基質(zhì)液0.1 mL,混合均勻,37℃水浴24 h,立即加入3 mL pH 10.4的甘氨酸-氫氧化鈉緩沖液終止反應(yīng),540 nm處測(cè)A值;另取測(cè)定管加入0.1 mL滅活粗酶液,pH 5.0醋酸緩沖液0.8 mL,混合均勻,37℃水浴24 h,立即加入3 mL pH 10.4的甘氨酸-氫氧化鈉緩沖液作為空白對(duì)照。每克腸道內(nèi)容物/黏膜在37℃、水浴24 h水解β-葡萄糖醛酸酚酞產(chǎn)生1 μg酚酞定義為一個(gè)酶活力單位(U/g)。

2 結(jié)果

2.1 小鼠形態(tài)及行為學(xué)變化 造模前,各組小鼠均正常攝食飲水,行動(dòng)靈活,被毛平整,糞便呈黑褐色,干燥成形?；旌峡股卦炷：?模型組小鼠出現(xiàn)精神萎靡,毛發(fā)光澤度降低,便次數(shù)增多,糞便稀釋成水樣,肛周不潔等癥狀。七味白術(shù)散治療3 d后,小鼠腹瀉癥狀明顯緩解,精神狀態(tài)明顯好轉(zhuǎn),糞便色黃質(zhì)軟成形,毛發(fā)平整度和光澤度增加,肛周干凈。

2.2 七味白術(shù)散對(duì)AAD小鼠腸道氧化應(yīng)激功能的影響 自愈組小鼠MDA水平較正常組升高,七味白術(shù)散干預(yù)后MDA值下降,但三組MDA水平較比較,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見圖1。

圖1 七味白術(shù)散對(duì)AAD小鼠腸道氧化應(yīng)激功能的影響

2.3 七味白術(shù)散對(duì)AAD小鼠腸道能量代謝功能的影響 自愈組小鼠血清中LDH水平較正常組升高,七味白術(shù)散干預(yù)后LDH值下降,但三組LDH水平較比較,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。與正常組相比,自愈組小鼠血清SDH活力較正常組降低(P<0.05),治療組中SDH值較自愈組升高(P<0.05),但與正常組水平比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見圖2。

注:a表示與正常組比較,P<0.05。

2.4 七味白術(shù)散對(duì)AAD小鼠血清炎性因子的影響 與正常組相比,自愈組小鼠血清中LPS含量升高(P<0.01),經(jīng)過3 d的自然恢復(fù)LPS仍未回到正常水平。七味白術(shù)散能降低LPS的水平(P<0.01)。見圖3。

注:a表示與正常組比較,P<0.01;b表示與自愈組比較,P<0.01。

2.5 抗生素造模對(duì)小鼠腸道β-D-葡萄糖苷酶活性的影響β-D-葡萄糖苷酶的總體酶活性在小鼠小腸中高于結(jié)腸,黏膜中高于內(nèi)容物?；旌峡股卦炷：?模型組小鼠SC、SM和CC中β-D-葡萄糖苷酶活性均低于正常組(均P<0.05),而CM中β-D-葡萄糖苷酶活性高于正常組(P<0.05)。見表1。

2.6 抗生素造模對(duì)小鼠腸道β-D-葡萄糖醛酸酶活性的影響 小鼠腸道β-D-葡萄糖醛酸酶的總體酶活性在結(jié)腸中高于小腸,黏膜中高于內(nèi)容物?？股卦炷＝Y(jié)束后,β-D-葡萄糖醛酸酶活性與β-D-葡萄糖苷酶活性變化趨勢(shì)一致,即模型組小鼠的SC、SM和CC中酶活性均降低(均P<0.05),CM中酶活性升高(P<0.01)。見表2。

表2 抗生素造模對(duì)小鼠腸道β-D-葡萄糖醛酸酶活性的影響(U/g)

2.7 七味白術(shù)散對(duì)AAD小鼠腸道β-D-葡萄糖苷酶活性的影響 經(jīng)過3 d的自愈期,小鼠SC和SM中β-D-葡萄糖苷酶活性均高于正常組(均P<0.05)。治療組不同腸段黏膜及內(nèi)容物的β-D-葡萄糖苷酶活性均高于正常組(SC、SM和CC均P<0.05)和自愈組(CC和CM均P<0.05)。見表3。

表3 七味白術(shù)散對(duì)AAD小鼠腸道β-D-葡萄糖苷酶活性的影響(U/g)

2.8 七味白術(shù)散對(duì)AAD小鼠腸道β-D-葡萄糖醛酸酶活性的影響 經(jīng)過3 d的自愈期,SC的酶活性升高(P<0.05),CC中的酶活性降低(P<0.01)。七味白術(shù)散治療提高了不同腸段黏膜及內(nèi)容物β-D-葡萄糖醛酸酶的活性,其中SC的酶活性高于自愈組和正常組(均P<0.01),CC中的酶活性高于自愈組(P<0.01),CM中的酶活性高于正常組(P<0.01)。見表4。

表4 七味白術(shù)散對(duì)AAD小鼠腸道β-D-葡萄糖醛酸酶活性的影響(U/g)

3 討論

人類腸道中約含有1 000～1 150種細(xì)菌,共同維持宿主消化、代謝、免疫調(diào)節(jié)、能量轉(zhuǎn)換、黏膜發(fā)育和屏障維持等功能[12]。腸道菌群作為人體的“微生物器官”,分泌數(shù)量龐大的糖苷水解酶,不同腸段中表達(dá)糖苷水解酶的微生物種類和數(shù)量存在差異。β-D-葡萄糖苷酶主要由小腸上皮絨毛膜刷狀沿及結(jié)腸的腸道菌群分泌[13],而β-D-葡萄糖醛酸酶廣泛存在于腸黏膜中[14]。腸道菌群中不同菌屬能表達(dá)不同的糖苷水解酶,β-D-葡萄糖苷酶主要由霉菌、酵母菌和乳酸菌等分泌,其中雙歧桿菌和多形擬桿菌對(duì)其有較高的表達(dá)。腸道中葡萄球菌、乳酸菌、瘤胃球菌等細(xì)菌,青霉、曲霉、酵母菌等真菌皆可分泌β-D-葡萄糖醛酸酶,其中腸道厚壁菌門內(nèi)的梭菌分泌大量的β-D-葡萄糖醛酸酶。艱難梭菌為嚴(yán)格的結(jié)腸厭氧菌,是引起菌群失調(diào)腹瀉的主要原因[15],且β-D-葡萄糖醛酸酶對(duì)大腸埃希菌具有高度的特異性[16]。因此,糖苷水解酶活性的變化與腸道菌群的改變密切相關(guān)。

本研究發(fā)現(xiàn)小鼠腸道β-D-葡萄糖苷酶的酶活性在小腸中高于結(jié)腸,而β-D-葡萄糖醛酸酶的酶活性在結(jié)腸中高于小腸,兩種酶在腸黏膜中的酶活性均高于腸內(nèi)容物,與相關(guān)研究[13-14]結(jié)果一致。課題組前期對(duì)頭孢拉定聯(lián)合硫酸慶大霉素造模AAD小鼠發(fā)現(xiàn),腸內(nèi)容物菌群變化主要表現(xiàn)為厚壁菌門及擬桿菌門數(shù)量急劇減少,以腸球菌和梭狀芽孢桿菌的數(shù)量升高尤為顯著,與黏膜中的菌群變化較為一致[7]。此外,課題組前期對(duì)腸內(nèi)容物可培養(yǎng)微生物菌落研究[8]結(jié)果顯示,抗生素還會(huì)導(dǎo)致大腸埃希菌數(shù)和乳酸菌的菌落數(shù)急劇減少。本研究中,抗生素造模后小鼠腸道β-D-葡萄糖苷酶活性在小腸、結(jié)腸內(nèi)容物及小腸黏膜中均降低,此與抗生素導(dǎo)致對(duì)其表達(dá)的乳酸菌受到抑制有關(guān)。由于β-D-葡萄糖醛酸酶對(duì)大腸埃希菌具有高度的特異性,可推測(cè)本研究中抗生素造模后小鼠腸道β-D-葡萄糖醛酶活性在SC、CC及SM中明顯降低,可能與抗生素導(dǎo)致大腸埃希菌數(shù)量顯著減少有關(guān)?？股卦炷：笮∈驝M中兩種酶活性顯著升高,可能是由于梭菌大量繁殖并移位至CM所致。腹瀉是以消化系統(tǒng)紊亂為主要表現(xiàn)的代謝性疾病,小腸是消化吸收的主要部位,抗生素造模后β-D-葡萄糖苷酶和β-D-葡萄糖醛酸酶活性在小腸中均顯著降低,說明抗生素降低了小鼠的代謝能力,導(dǎo)致食物代謝受阻,是引發(fā)腹瀉的原因之一。

現(xiàn)代藥理研究表明,七味白術(shù)散能提高腸道消化酶活性,緩解腸道炎癥,促進(jìn)腸道受損黏膜恢復(fù)[17],在治療AAD上療效顯著。七味白術(shù)散含有豐富黃酮苷和皂苷,其中人參和甘草被證實(shí)是七味白術(shù)散的抑菌成分,對(duì)大腸埃希菌、銅綠假單胞菌及腸道酵母菌均有明顯的抑菌效果[18]。β-D-葡萄糖苷酶和β-D-葡萄糖醛酸酶均能將人參皂苷轉(zhuǎn)化為藥理作用更強(qiáng)的稀有人參皂苷或苷元,β-D-葡萄糖醛酸酶能將甘草的主要藥性成分甘草酸(GL)C3位的兩個(gè)葡萄糖醛酸基和外端一個(gè)葡萄糖醛酸基脫去,分別生成抗炎和抗過敏等藥理活性更優(yōu)的甘草次酸(GA)和單葡萄糖醛酸甘草次酸(GAMG)[19]。由此可見,七味白術(shù)散藥效的發(fā)揮與糖苷水解酶活性有關(guān)。在整個(gè)試驗(yàn)過程中,結(jié)腸中的糖苷水解酶活性較小腸穩(wěn)定,黏膜中的酶活性較內(nèi)容物穩(wěn)定,此與結(jié)腸比小腸的微生物豐度和多樣性更高有關(guān)[20];與腸內(nèi)容物相比,黏膜具有結(jié)構(gòu)完整、免疫健康、菌群定植相對(duì)穩(wěn)定、受外界因素影響較小等諸多優(yōu)點(diǎn)[21]。綜上所述,兩種糖苷水解酶活性的變化與腸道菌群的改變密切相關(guān),七味白術(shù)散能在調(diào)節(jié)腸道菌群的基礎(chǔ)上提高AAD小鼠不同腸段黏膜及內(nèi)容物的糖苷水解酶的活性,促進(jìn)食物和藥物的代謝吸收,從而治療腹瀉。

腸道菌群失調(diào)時(shí)腸黏膜通透性增加,內(nèi)毒素通過腸-肝軸進(jìn)入體循環(huán),從而誘導(dǎo)釋放一系列炎癥介質(zhì),激活體內(nèi)炎癥反應(yīng)[22]。MDA作為血清中自由基-脂質(zhì)過氧化代謝產(chǎn)物能刺激腸道液體的分泌,其水平越高,說明自由基損傷越嚴(yán)重;LPS高濃度時(shí)可以穿過腸道黏膜屏障進(jìn)入血液循環(huán),與免疫細(xì)胞CD14表面的Toll樣受體結(jié)合而激活免疫細(xì)胞,可誘導(dǎo)全身性炎癥,即內(nèi)毒素血癥[23];低濃度的LPS與IL-17還可協(xié)同促進(jìn)IL-8的表達(dá)[24];機(jī)體炎性因子升高時(shí)可進(jìn)一步誘導(dǎo)免疫應(yīng)答,通過抑制腸道鈉和鉀-ATP酶的活性,進(jìn)而抑制水、鈉吸收[25],同時(shí)增加腸黏膜通透性,促進(jìn)腸壁液體的滲出,這些過程均可引發(fā)或加重腹瀉[26]。LDH是機(jī)體細(xì)胞質(zhì)氧化還原酶,同時(shí)也是機(jī)體組織損傷和炎癥反應(yīng)的標(biāo)志[27]。Zhang等[28]研究發(fā)現(xiàn),LPS能使斷奶仔豬和大鼠血清中LDH含量增加。本試驗(yàn)中模型組小鼠LDH水平高于正常組,與上述研究一致,說明混合抗生素處理引起小鼠炎癥損傷,導(dǎo)致LDH升高。本研究中抗生素造模后小鼠MDA、LPS和IL-17均升高,而七味白術(shù)散的干預(yù)能使其下降,其中對(duì)LPS的影響尤為顯著,目前越來越多的證據(jù)表明,腸道菌群失調(diào)引起的內(nèi)毒素血癥是代謝性疾病發(fā)生的一個(gè)重要因素[29]。由此可推斷,抗生素導(dǎo)致機(jī)體的氧化應(yīng)激和黏膜細(xì)胞損傷,觸發(fā)小鼠機(jī)體的炎癥反應(yīng),可能與大腸埃希菌分泌的LPS及其誘導(dǎo)的代謝性內(nèi)毒素血癥有關(guān),具體機(jī)制有待進(jìn)一步研究。而七味白術(shù)散能緩解腸道炎癥,促進(jìn)腸道受損黏膜恢復(fù),從而緩解腹瀉。

本研究從糖苷水解酶的活性著手,研究AAD疾病的病因,同時(shí)闡釋了七味白術(shù)散對(duì)AAD的治療機(jī)制,以及其與機(jī)體能量代謝、氧化應(yīng)激和炎癥反應(yīng)之間的關(guān)聯(lián),深入探討七味白術(shù)散治療AAD的藥效機(jī)制,為腸道糖苷水解酶參與藥物食物代謝的相關(guān)研究提供了新的思路。腸道是一個(gè)高度復(fù)雜的生態(tài)系統(tǒng),菌群之間,以及菌群與宿主之間存在著巨大的相互依賴和相互作用,菌群的豐度和多樣性的變化也會(huì)引起其表達(dá)的糖苷水解酶的活性發(fā)生變化,且酶活性易受反應(yīng)溫度、反應(yīng)時(shí)間和底物濃度等反應(yīng)條件的影響,小鼠的個(gè)體差異以及自愈能力也會(huì)造成酶活性的波動(dòng)。后續(xù)研究可借助高通量測(cè)序技術(shù)進(jìn)一步明確菌與酶的相關(guān)性,以全面反映AAD形成及七味白術(shù)散療效的腸道微生態(tài)機(jī)制。

利益沖突:所有作者均聲明不存在利益沖突。