張 喆，孫甜甜，馬 超，王 娟，李 靜，陳冬梅，白 亮，徐 軍，2*，陳 昶，2*

（1.河北中保綠農(nóng)作物科技有限公司，廊坊 065000；2.中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院植物保護(hù)研究所，北京 100193）

甲氨基阿維菌素苯甲酸鹽（Emamectin benzoate）（甲維鹽）是一種高效、低毒、低殘留的十六元大環(huán)內(nèi)酯類(lèi)殺蟲(chóng)劑[1]，與氯蟲(chóng)苯甲酰胺、虱螨脲、蟲(chóng)螨腈等其他常規(guī)農(nóng)藥無(wú)交互抗性[2]。目前甲維鹽在我國(guó)廣泛應(yīng)用于防治棉鈴蟲(chóng)、煙草天蛾和小菜蛾等蔬菜上的害蟲(chóng)[3]。虱螨脲（Lufenuron）屬新一代高效低毒的苯甲酰脲類(lèi)殺蟲(chóng)劑，是通過(guò)影響昆蟲(chóng)幼蟲(chóng)的脫皮過(guò)程而殺死害蟲(chóng)，主要用于防治玉米、蔬菜、棉花、果樹(shù)等鱗翅目幼蟲(chóng)[4]。

45%甲維·虱螨脲水分散粒劑是一種新型復(fù)配殺蟲(chóng)劑，兩者復(fù)配，兼具胃毒和觸殺作用。通過(guò)影響昆蟲(chóng)表皮的形成達(dá)到殺蟲(chóng)作用，還能阻礙害蟲(chóng)神經(jīng)信息傳遞，殺死害蟲(chóng)，對(duì)甘藍(lán)菜青蟲(chóng)具有良好的防治效果[5-6]。目前關(guān)于甲維鹽和虱螨脲單劑的檢測(cè)方法國(guó)內(nèi)外已有諸多報(bào)道，主要以高效液相色譜分析法為主[7-9]。但是兩者復(fù)配制劑分析方法尚未見(jiàn)報(bào)道。本研究采用反相高效液相色譜法，使用外標(biāo)法同時(shí)測(cè)定45%甲維·虱螨脲水分散粒劑中兩種有效成分的質(zhì)量分?jǐn)?shù)。該方法操作簡(jiǎn)便、快速，分離效果好，結(jié)果重現(xiàn)性好，定量準(zhǔn)確，是較為實(shí)用的分析方法。

1 材料與方法

1.1 試劑與儀器

甲醇（色譜級(jí)）、乙腈（色譜級(jí)）、氨水（色譜級(jí)），科密歐試劑有限公司；虱螨脲標(biāo)準(zhǔn)品（含量≥98%）、甲維鹽標(biāo)準(zhǔn)品（含量≥97%），沈陽(yáng)化工研究院有限公司；45%甲維·虱螨脲水分散粒劑，河北中保綠農(nóng)作物科技有限公司。

LC-20A高效液相色譜儀、Wondasil C18Column不銹鋼色譜柱（4.6 mm×250 mm，粒徑5 μm），日本島津公司；0.45 μm孔徑有機(jī)過(guò)濾器和濾膜，上海密粒膜分離技術(shù)有限公司；AL104電子天平，梅特勒-托利多儀器（上海）有限公司；KQ500DB超聲波清洗機(jī)，昆山市超聲儀器有限公司。

1.2 液相色譜分析條件

色譜柱為Wondasil C18Column不銹鋼柱（4.6 mm×250 mm，粒徑5 μm）；流動(dòng)相為甲醇∶乙腈∶水＋氨水=45∶40∶15（V/V）＋0.1%氨水，流動(dòng)相溶液經(jīng)濾膜過(guò)濾，并進(jìn)行脫氣；柱溫為40℃，流速為1.0 mL/min，檢測(cè)波長(zhǎng)為254 nm，進(jìn)樣量為5 μL。

1.3 溶液配制

分別稱(chēng)取甲維鹽標(biāo)準(zhǔn)品0.02 g（純度為97.7%，精確至0.000 02 g）和虱螨脲標(biāo)準(zhǔn)品0.16 g（純度為98.4%，精確至0.000 02 g）于100 mL容量瓶中，加入80 mL甲醇，超聲溶解5 min，待標(biāo)準(zhǔn)品完全溶解后，定容并上下顛倒搖勻，制得濃度為1.6 mg/mL的甲維鹽標(biāo)準(zhǔn)溶液，過(guò)濾后存于4℃冰箱備用。

稱(chēng)取含甲維鹽0.02 g（精確至0.000 02 g）和含虱螨脲0.16 g（精確至0.000 02 g）的45%甲維·虱螨脲WDG于100 mL容量瓶中，處理手段與標(biāo)準(zhǔn)溶液相同，制得濃度約為5 mg/mL的溶液，過(guò)濾后存于4℃冰箱備用。

1.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的繪制

稱(chēng)取一定質(zhì)量的甲維鹽和虱螨脲標(biāo)準(zhǔn)品，配制不同濃度的標(biāo)樣溶液。用1.2節(jié)色譜條件下分別進(jìn)行分析，以甲維鹽和虱螨脲的質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，計(jì)算甲維鹽和虱螨脲的線(xiàn)性回歸方程。

1.5 計(jì)算

試樣中有效成分甲維鹽和虱螨脲的質(zhì)量分?jǐn)?shù)w1（%）按式（1）進(jìn)行計(jì)算：

式中：A1為標(biāo)樣溶液中甲維鹽（或虱螨脲）峰面積的平均值，mAU·min；A2為試樣溶液中有效成分甲維鹽（或虱螨脲）檢測(cè)峰面積的平均值，mAU·min；m1為甲維鹽（或虱螨脲）標(biāo)準(zhǔn)品的質(zhì)量，g；m2為試樣的質(zhì)量，g；w為甲維鹽（或虱螨脲）標(biāo)準(zhǔn)品的質(zhì)量分?jǐn)?shù)，%。

分別稱(chēng)取5份含0.02 g甲維鹽或0.04 g虱螨脲試樣于100 mL容量瓶中定容，再分別加入甲維鹽標(biāo)準(zhǔn)品（約0.02 g）或虱螨脲標(biāo)準(zhǔn)品（約0.04 g），對(duì)其有效成分含量進(jìn)行測(cè)定，按式（2）計(jì)算回收率。

2 結(jié)果與分析

2.1 檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇

分別對(duì)甲維鹽和虱螨脲標(biāo)樣溶液在190～300 nm范圍內(nèi)進(jìn)行全波長(zhǎng)掃描，獲得了二者的紫外吸收光譜（圖1）。在254 nm處，甲維鹽和虱螨脲的吸光度較高，且雜質(zhì)影響較小。因此，本方法選擇254 nm作為檢測(cè)波長(zhǎng)。

圖1 甲維鹽和虱螨脲紫外全波長(zhǎng)掃描圖

2.2 流動(dòng)相的選擇

在45%甲維·虱螨脲水分散粒劑有效成分質(zhì)量分?jǐn)?shù)檢測(cè)中，通過(guò)不斷的調(diào)整流動(dòng)相中甲醇、乙腈和水以及氨水的比例，觀(guān)察不同流動(dòng)相組分對(duì)應(yīng)的峰型變化和保留時(shí)間，依次進(jìn)行篩選。最終檢測(cè)結(jié)果表明，當(dāng)甲醇∶乙腈∶水＋氨水=45∶40∶15＋0.1%（V/V）時(shí)，分離效果最佳，色譜峰峰形尖銳，此條件下，虱螨脲的保留時(shí)間為6.5 min，甲維鹽B1b的保留時(shí)間為13.6 min，甲維鹽B1a的保留時(shí)間為16.4 min，出峰時(shí)間短滿(mǎn)足分析要求[10]（見(jiàn)圖2、圖3）。

圖2 甲維鹽和虱螨脲標(biāo)樣液相色譜圖

圖3 45%甲維·虱螨脲水分散粒劑的液相色譜圖

2.3 分析方法的線(xiàn)性關(guān)系

甲維鹽的質(zhì)量濃度在0.2～2.0 mg/mL范圍內(nèi)，與其相應(yīng)的峰面積呈良好的線(xiàn)性關(guān)系，線(xiàn)性方程為y=0.353x-0.650，R2=0.996 0；虱螨脲的質(zhì)量濃度在0.2～2.0 mg/mL范圍內(nèi)，與其相應(yīng)的峰面積呈良好的線(xiàn)性關(guān)系，線(xiàn)性方程為y=1.061x+9.566，R2=0.998 0。

2.4 分析方法的精密度

在1.2節(jié)所述色譜條件下，對(duì)45%甲維·虱螨脲水分散粒劑試樣重復(fù)進(jìn)行5次獨(dú)立測(cè)試，分析方法的精密度由表1可知，樣品中甲維鹽的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.82%，虱螨脲的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.45%，分別小于NY/T 2887—2016《農(nóng)藥產(chǎn)品質(zhì)量分析方法確認(rèn)指南》中規(guī)定的有效成分相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD[11]，即2(1-0.5logC)×0.67，其中C為樣品中有效成分含量。以上結(jié)果均符合該規(guī)定的要求，說(shuō)明該分析方法的精密度良好。

表1 方法精密度測(cè)定結(jié)果（n=5）

2.5 分析方法的準(zhǔn)確度

回收率計(jì)算結(jié)果見(jiàn)表2。甲維鹽和虱螨脲的平均回收率分別為98.67%和100.16%，均可以滿(mǎn)足分析方法[11]的要求，說(shuō)明該分析方法準(zhǔn)確度良好。

表2 分析方法的回收率測(cè)定結(jié)果（n=5）

3 結(jié)論

本文建立了能夠同時(shí)對(duì)45%甲維·虱螨脲水分散粒劑的有效成分甲維鹽和虱螨脲進(jìn)行檢測(cè)的高效液相色譜分析方法，并對(duì)此方法進(jìn)行了合理的驗(yàn)證。結(jié)果表明，甲維鹽和虱螨脲在該方法下分離效果較好，精密度和準(zhǔn)確度較高，線(xiàn)性關(guān)系良好，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為0.82%和0.45%，回收率均達(dá)到了98%以上，本方法準(zhǔn)確度較高，擺脫了當(dāng)前使用兩種方法分別測(cè)定的復(fù)雜步驟，因此該方法在含有甲維鹽和虱螨脲的復(fù)配產(chǎn)品的質(zhì)量控制中具有很強(qiáng)的可行性和實(shí)際應(yīng)用價(jià)值。