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        血清miR-152、miR-153和miR-203 在宮頸上皮內(nèi)病變中的表達(dá)及臨床意義

        2023-10-26 05:23:28胡引男祝茹吳秀秀國萍
        分子診斷與治療雜志 2023年9期
        關(guān)鍵詞:子宮頸癌上皮宮頸癌

        胡引男 祝茹 吳秀秀 國萍

        子宮頸癌(cervical cancer,CC)是全球女性最常見的癌癥之一,高危型人乳頭瘤病毒(human papillomavirus,HPV)感染是其主要發(fā)病原因[1]。根據(jù)組織學(xué)表型,子宮頸癌可分為浸潤性鱗狀細(xì)胞癌、腺癌和其他少見類型[2]。鱗狀細(xì)胞癌主要起源于宮頸上皮內(nèi)病變(cervical intraepithelial neoplasia,CIN),CIN 是指宮頸上皮細(xì)胞的異常增生和變性,分為低度鱗狀上皮內(nèi)病變(Low-grade squamous intraepithelial lesion,LSIL)和高度鱗狀上皮內(nèi)病變(High-grade squamous intraepithelial lesion,HSIL)[3-4]。宮頸上皮內(nèi)病變是子宮頸癌的前期病變,如果不及時治療,可能會發(fā)展成CC。因此,有必要發(fā)現(xiàn)新的生物標(biāo)記物,以便及早發(fā)現(xiàn)高級別CIN。

        微小RNA(microRNA,miRNA)是由約22 個核苷酸組成的小的內(nèi)源性單鏈RNA,異常表達(dá)的miRNA 在腫瘤發(fā)生和發(fā)展中扮演著重要的角色[5]。miR-152、miR-153和miR-203在多種腫瘤中具有重要的調(diào)控功能[6-7]。本研究將通過分析宮頸上皮內(nèi)病變患者miR-152、miR-153和miR-203表達(dá)情況,以期為臨床宮頸上皮內(nèi)病變的診治提供新思路,現(xiàn)報道如下。

        1 資料與方法

        1.1 研究對象

        選取2019 年12 月至2020 年12 月安慶市立醫(yī)院收治的宮頸上皮內(nèi)病變患者80 例。根據(jù)宮頸上皮內(nèi)病變級別[8]分為LSIL 組(n=48)和HSIL 組(n=32)。納入標(biāo)準(zhǔn):患者符合CIN 的診斷標(biāo)準(zhǔn)[9];患者年齡在18~75 歲之間;患者在本院接受宮頸活檢或?qū)m頸錐形切除以獲得宮頸組織樣本,并采集其宮頸病變組織。排除標(biāo)準(zhǔn):臨床資料不全者;合并嚴(yán)重心、肝、腎相關(guān)疾病者;精神疾病或腦血管疾病患者;合并腫瘤患者。另選取同期因子宮肌瘤入院、宮頸篩查正常病例50 例作為對照組。本研究經(jīng)本院倫理委員會批準(zhǔn),所有研究對象均簽署知情同意書并自愿參與研究。

        1.2 資料收集及實驗室檢測

        1.2.1 基本資料

        收集患者性別、年齡、BMI、吸煙史等基本資料。

        1.2.2 血清

        CEA、CA199 和CA125 水平的測定采用ELISA(試劑盒購自上海信裕生物科技有限公司)測定血清CEA、CA199 和CA125 水平,使用酶標(biāo) 儀在450 nm 處讀取樣品。

        1.3 血清miR-152、miR-153和miR-203 水平檢測

        所有入組患者在入組72 h 內(nèi)抽取靜脈血5 mL,3 000 r/min(離心半徑為10 cm)離心20 min 分離血清,使用TRIzol RNA 試劑盒(購自賽默飛世爾科技有限公司)提取總RNA,紫外分光光度計(上海美譜達(dá)公司)檢測總RNA 濃度及純度。取2 μg 總RNA 使用反轉(zhuǎn)錄試劑盒(賽默飛世爾科技有限公司)進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)。取反轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物進(jìn)行PCR擴(kuò)增。PCR 反應(yīng)體系為10 μL體系,包括SYBR Premix Ex Taq 5 μL、正向引物0.3 μL、反向引物0.3 μL、cDNA 1 μL、雙蒸水3.4 μL。用2^(-ΔΔCt)法計算各組基因的相對表達(dá)量。miR-152、miR-153和miR-203分子熒光PCR 引物序列見表1。

        表1 miR-152、miR-153和miR-203 擴(kuò)增引物序列Table 1 Amplified primer sequences for miR-152、miR-153 and miR-203

        1.4 統(tǒng)計學(xué)分析

        使用SPSS 21.0 統(tǒng)計學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析處理。符合正態(tài)分布的計量資料采用()表示,采用獨立樣本t檢驗;計數(shù)資料以n(%)表示,采用χ2檢驗;將單因素分析中有統(tǒng)計學(xué)意義的納入多因素分析,多因素分析采用Logistic 回歸模型,診斷價值分析采用受試者工作特征曲線(ROC)進(jìn)行評價,以P<0.05 為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

        2 結(jié)果

        2.1 兩組臨床資料比較

        兩組年齡、BMI、吸煙史、CEA、CA199、CA125 比較,差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。見表2。

        表2 兩組臨床資料比較[(),n(%)]Table 2 Comparison of clinical data between two groups[(),n(%)]

        表2 兩組臨床資料比較[(),n(%)]Table 2 Comparison of clinical data between two groups[(),n(%)]

        2.2 兩組血清miR-152、miR-153和miR-203 水平比較

        CIN 組血清miR-152、miR-153和miR-203水平顯著低于對照組,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。見表3。

        表3 兩組血清miR-152、miR-153和miR-203水平比較()Table 3 Comparison of serum levels of miR-152,miR-153 and miR-203 between the two groups()

        表3 兩組血清miR-152、miR-153和miR-203水平比較()Table 3 Comparison of serum levels of miR-152,miR-153 and miR-203 between the two groups()

        2.3 多因素Logistic 回歸分析CIN 的影響因素

        將單因素分析中具有統(tǒng)計學(xué)意義的變量作為自變量,以是否CIN 作為因變量(是=1,否=0)進(jìn)行多因素Logistic 回歸分析,結(jié)果顯示miR-152(OR=0.271)、miR-153(OR=0.201)和miR-203(OR=0.164)是CIN 的影響因素(P<0.05)。見表4。

        表4 多因素Logistic 回歸分析CIN 的影響因素Table 4 Multivariate Logistic regression analysis of the influencing factors of cervical intraepithelial lesions

        2.4 miR-152、miR-153和miR-203 對CIN 的診斷價值

        miR-152、miR-153和miR-203診斷CIN 的ROC曲線下面積分別為0.825、0.755 和0.792,miR-152、miR-153和miR-203的特異性/敏感性分別為80.55%/78.65%、72.12%/71.90%和76.93%/78.13%。見表5、圖1。

        圖1 ROC 曲線Figure 1 ROC curve

        表5 miR-152、miR-153和miR-203 對CIN 的診斷價值分析Table 5 Analysis of the diagnostic value of miR-152,miR-153 and miR-203 in cervical intraepithelial lesions

        2.5 不同CIN 級別患者血清miR-152、miR-153和miR-203 水平比較

        LSIL 組患者血清miR-152、miR-153和miR-203水平顯著高于HSIL 組,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。見表6。

        表6 不同CIN 級別患者血清miR-152、miR-153和miR-203 水平比較()Table 6 Changes of serum miR-152,miR-153 and miR-203 levels in patients with different CIN grades()

        表6 不同CIN 級別患者血清miR-152、miR-153和miR-203 水平比較()Table 6 Changes of serum miR-152,miR-153 and miR-203 levels in patients with different CIN grades()

        3 討論

        子宮頸癌是全球女性第三大常見癌癥,子宮頸癌的發(fā)展是一個多步驟的過程,通常經(jīng)歷正常宮頸上皮細(xì)胞(正常細(xì)胞)、子宮頸上皮細(xì)胞的早期變化、宮頸上皮內(nèi)病變,最后發(fā)展為子宮頸癌。宮頸癌前病變通常是可以治愈的,在早期發(fā)現(xiàn)宮頸病變有助于改善臨床結(jié)果,從而降低子宮頸癌患者的死亡率。通過尋找宮頸上皮內(nèi)病變的診斷標(biāo)志物,可以提高對該病變的早期檢測和診斷的準(zhǔn)確性和敏感性。

        本研究發(fā)現(xiàn),子宮頸癌患者miR-152、miR-153和miR-203的表達(dá)低于對照組,蘇紅娥等[10]研究發(fā)現(xiàn),血清miR-153表達(dá)水平在子宮頸癌患者中明顯下調(diào),血清miR-153低表達(dá)與宮頸癌患者的臨床分期、分化程度、浸潤深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及脈管浸潤有關(guān)。Wang等[11]研究發(fā)現(xiàn),miR-152和miR-203在子宮頸癌患者中表達(dá)下調(diào)。以上研究結(jié)果均與本研究一致。進(jìn)一步多因素Logistic回歸分析結(jié)果顯示,miR-152(OR=0.271)、miR-153(OR=0.201)和miR-203(OR=0.164)是宮頸上皮內(nèi)病變的影響因素。提示miR-152、miR-153和miR-203的下調(diào)可能與宮頸上皮內(nèi)病變的發(fā)展和進(jìn)展相關(guān),這些miRNA 的降低可能導(dǎo)致細(xì)胞增殖、分化和凋亡等異常的生物學(xué)過程,進(jìn)而促進(jìn)宮頸上皮細(xì)胞向惡性轉(zhuǎn)化。這些結(jié)果進(jìn)一步支持了miR-152、miR-153 和miR-203 在CIN 發(fā)展中的潛在作用,并強(qiáng)調(diào)了它們作為潛在生物標(biāo)志物的重要性。

        在本研究中,miR-152、miR-153和miR-203診斷CIN 的ROC 曲線下面積分別為0.825、0.755和0.792,miR-152、miR-153和miR-203的特異性/敏感性分別為80.55%/78.65%、72.12%/71.90%和76.93%/78.13%,這表明miR-152、miR-153和miR-203都具有較高的診斷學(xué)的價值。王媛媛等[12]研究發(fā)現(xiàn),沉默lncRNA XIST、加入miR-153模擬物能明顯降低宮頸癌細(xì)胞的侵襲、遷移及增殖,抑制增殖蛋白CDK4、Cyclin D1 及侵襲蛋白MMP-9、MMP-2的表達(dá),降低EMT 相關(guān)基因SNAI1及相關(guān)蛋白N-cadherin、Vimentin、IL-6、SNAI1 的表達(dá),促進(jìn)E-cadherin 升高,說明沉默lncRNA XIST 靶向上調(diào)miR-153,可以抑制子宮頸癌細(xì)胞的遷移、侵襲以及上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化(epithelial-to-mesenchymal transition,EMT)。付建等[13]研究發(fā)現(xiàn),宮頸癌組患者miR-152的表達(dá)水平低于癌前病變組,癌前病變組患者miR-152的表達(dá)水平低于宮頸炎組,miR-152在子宮頸癌診斷中具有較高的準(zhǔn)確率,是宮頸癌和宮頸疾病早期診斷和篩查的主要標(biāo)志物和重要手段。陳青青等[14]研究發(fā)現(xiàn),miR-152在宮頸癌細(xì)胞株SiHa 中低表達(dá),上調(diào)其表達(dá)可下調(diào)DNA 甲基化轉(zhuǎn)移酶1(DNA methyltransferase 1,DNMT1)表達(dá),抑制癌細(xì)胞的增殖,降低癌細(xì)胞的侵襲轉(zhuǎn)移能力。李亞芹等[15]研究發(fā)現(xiàn),過表達(dá)miR-203可降低SiHa 細(xì)胞的增殖率和遷移率,升高細(xì)胞凋亡率;相反,低表達(dá)miR-203可升高SiHa 細(xì)胞的增殖率和遷移率,降低細(xì)胞凋亡率,說明miR-203在子宮頸癌中可能具有調(diào)節(jié)細(xì)胞增殖、遷移和凋亡的重要功能,miR-203在子宮頸癌的診斷和治療中可能具有潛在的應(yīng)用價值。本文進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn),LSIL 組患者血清miR-152、miR-153和miR-203水平顯著高于HSIL 組,說明miR-152、miR-153和miR-203可以作為LSIL 患者和HSIL 患者之間的區(qū)分指標(biāo)。

        綜上所述,血清miR-152、miR-153和miR-203在宮頸上皮內(nèi)病變患者中呈異常表達(dá),三者或可作為診斷宮頸上皮內(nèi)病變的指標(biāo)。

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