胡海燕 劉剛 李剛*

有機(jī)磷農(nóng)藥中毒是發(fā)展中國(guó)家常見(jiàn)的農(nóng)藥中毒之一，全球每年因急性有機(jī)磷農(nóng)藥中毒死亡人數(shù)約為20,000～30,000 例［1］。據(jù)報(bào)道，使用有機(jī)磷農(nóng)藥的自殺率在中國(guó)超過(guò)1/3，在全球超過(guò)1/10［2-3］。2007-2016 年江蘇省報(bào)告約30789 起農(nóng)藥中毒，其中大部分是有機(jī)磷［4］，有機(jī)磷中毒可導(dǎo)致多臟器受損，其中急性呼吸衰竭是主要死亡原因。目前臨床常見(jiàn)治療方法包括阿托品、解磷定，輔以洗胃、血液灌流等綜合治療［5-6］，但死亡率及預(yù)后效果依然不理想。有研究顯示，脂肪乳可改善急性有機(jī)磷中毒后導(dǎo)致的重要臟器損傷，但對(duì)于肺組織的治療效果存在爭(zhēng)議［7-8］。本研究通過(guò)構(gòu)建有機(jī)磷中毒大鼠模型，探討脂肪乳在急性有機(jī)磷中毒對(duì)肺損傷的治療作用。

1 材料與方法

1.1 材料 敵敵畏（DDVP，NO.20200813001，荊州），20%靜脈脂肪乳（ILE，蘇州）、阿托品（NO.1811161，上海）、解磷定（PyraloximeMethiodide，PAM，NO.19032701，開(kāi)封）和其他用于本研究的化學(xué)品。

1.2 動(dòng)物飼養(yǎng)及模型建立 Sprague-Dawley 大鼠40 只（SCXK（滬）：20170012005541，中國(guó)上海），體質(zhì)量（270±20）g，飼養(yǎng)在浙江省人民醫(yī)院動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室內(nèi)，室內(nèi)溫度維持在溫度20～25℃，相對(duì)濕度40%～70%，在動(dòng)物房飼養(yǎng)2 周后進(jìn)行試驗(yàn)。所有大鼠均注射有機(jī)磷農(nóng)藥（DDVP 7 mg/kg），染毒后，隨機(jī)將大鼠分為4組，根據(jù)不同治療分為4 組，各10 例。對(duì)照組：大鼠僅經(jīng)尾靜脈注射0.9%氯化鈉溶液（5 mL /kg）。脂肪乳組：大鼠經(jīng)尾靜脈注射20%ILE（5 mL/kg）。標(biāo)準(zhǔn)治療組：大鼠經(jīng)肌肉注射阿托品（10 mg/kg）、PAM（40 mg/kg）。脂肪乳治療組：大鼠在標(biāo)準(zhǔn)組基礎(chǔ)上增加20% ILE（5 mL/kg）。所有大鼠均腹腔內(nèi)注射麻醉劑氯胺酮50 mg/kg（Ketalar?，土耳其）和肌松劑甲苯噻嗪5 mg/kg（拜耳，德國(guó)），染毒后的所有大鼠均存活24 h后脫頸處死。該方案由浙江省人民醫(yī)院動(dòng)物保護(hù)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

1.3 標(biāo)本的處理、病理學(xué)觀察、炎性細(xì)胞因子的檢測(cè)及流式細(xì)胞術(shù) 記錄大鼠死亡時(shí)間，大鼠染毒4 h 后使眼眶下采血1 mL，用 HI-TACHI7170 全自動(dòng)生化儀測(cè)定全血乙酰膽堿（Ach）；24 h 后腹腔注射5%水合氯醛（6 mL/kg）麻醉后，取出肺臟，4%甲醛溶液中固定、修塊、脫水、浸蠟、包埋、切片、用蘇木精-伊紅（H&E）染色，電鏡下觀察肺炎性細(xì)胞浸潤(rùn)、組織水腫及紅細(xì)胞滲出情況，評(píng)價(jià)肺組織的炎癥反應(yīng)；應(yīng)用ELISA 技術(shù)檢測(cè)肺組織的IL-6、TNF-α、NF-κB 炎性細(xì)胞因子的分泌及RT-PCR 檢測(cè)炎性細(xì)胞因子 mRNA 表達(dá)。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 采用SPSS 22.0 統(tǒng)計(jì)軟件。計(jì)量資料以（±s）表示，多組比較采用單因素方差分析，兩兩比較采用LSD-t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料以%表示，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 4 組大鼠有機(jī)磷中毒前基礎(chǔ)生理指標(biāo) 見(jiàn)表1。

表1 4組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物基礎(chǔ)生理指標(biāo)（±s）

表1 4組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物基礎(chǔ)生理指標(biāo)（±s）

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2.2 死亡率及全血乙酰膽堿 大鼠有機(jī)磷中毒后死亡率為50%，給予標(biāo)準(zhǔn)治療后，大鼠死亡率降低至30%，增加脂肪乳治療后死亡率為20%（見(jiàn)圖1）；有機(jī)磷中毒4 h 后大鼠給予不同處理后血清生化顯示，對(duì)照組血清乙酰膽堿最低，標(biāo)準(zhǔn)治療組明顯下降，脂肪乳治療組乙酰膽堿最高（P＜0.05），見(jiàn)圖2。

圖1 大鼠有機(jī)磷中毒的生存時(shí)間（h）

圖2 各組大鼠乙酰膽堿的變化

2.3 肺病理學(xué)改變 有機(jī)磷中毒大鼠分別給予不同治療后，肺組織病理顯示，對(duì)照組：肺泡間隔變寬，同時(shí)伴有組織明顯充血水腫，炎性細(xì)胞浸潤(rùn)明顯，紅細(xì)胞滲出。脂肪乳組：炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，血管周圍疏松水腫、紅細(xì)胞滲出。標(biāo)準(zhǔn)治療組；肺泡間隔明顯改善，組織充血及炎性細(xì)胞浸潤(rùn)明顯改善；脂肪乳治療組：肺泡間隔略增寬，可見(jiàn)少量炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)及紅細(xì)胞滲出。見(jiàn)圖3。

圖3 有機(jī)磷中毒后大鼠24 h肺組織病理（HE ×100）

2.4 炎性細(xì)胞因子表達(dá) 有機(jī)磷中毒后，對(duì)照組血清炎性細(xì)胞因子IL-6、TNF-α、NF-κB 明顯升高，脂肪乳組炎性細(xì)胞因子略下降，標(biāo)準(zhǔn)治療組炎性細(xì)胞明顯下較大，脂肪乳治療組下降明顯（P＜0.05），見(jiàn)表2。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，對(duì)照組肺組織炎性細(xì)胞因子mRNA 炎性細(xì)胞因子IL-6、TNF-α、NF-κB 與炎性細(xì)胞因子保持一致，見(jiàn)圖4。

圖4 各組大鼠炎性細(xì)胞因子（A.IL-6、B.TNF-α、C.NF-κB）mRNA在肺組織的表達(dá)

表2 4組大鼠炎性細(xì)胞因子比較

3 討論

當(dāng)有機(jī)磷中毒發(fā)生時(shí)，發(fā)病急、病情進(jìn)展迅速、病情兇險(xiǎn)，具有較高的致殘率、致死率，且主要損傷肺組織，出現(xiàn)呼吸衰竭，危及生命［9］。目前關(guān)于有機(jī)磷中毒導(dǎo)致急性肺損傷的機(jī)制：（1）有機(jī)磷與乙酰膽堿酯酶結(jié)合，乙酰膽堿酯酶失活，乙酰膽堿大量堆積而出現(xiàn)膽堿能神經(jīng)持續(xù)興奮，呼吸道分泌物增加、支氣管平滑肌收縮，從而呼吸阻力明顯增大、通氣功能受限；（2）肺泡內(nèi)及組織間隙的分泌物增多，彌散功能障礙［10-13］。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)顯示：當(dāng)大鼠有機(jī)磷中毒后氣道嚴(yán)重狹窄、呼吸阻力增加，血氧飽和度下降，肺泡灌洗液中的炎性細(xì)胞聚集明顯，肺組織炎性細(xì)胞因子TNF-α、 IL 及IFN-γ明顯升高［14］。

脂肪乳是臨床實(shí)踐中常用藥物之一，由大豆油，蛋磷脂和甘油組成，濃度可分為10%、20%和30%［15］。20%脂肪乳主要用作圍術(shù)期、慢性消化道疾病等不能正常經(jīng)胃腸道吸收營(yíng)養(yǎng)患者的能量補(bǔ)劑［16］。文獻(xiàn)報(bào)道，脂肪乳能夠改善細(xì)胞能量代謝、抑制炎癥反應(yīng)、促進(jìn)毒物排泄等，對(duì)急性藥物中毒有較好的療效［17-18］。由于有機(jī)磷屬于難逆性抗膽堿酯酶藥，在體內(nèi)大量累積后可出現(xiàn)中毒癥狀，與單獨(dú)使用阿托品、解磷定標(biāo)準(zhǔn)治療相比，增加靜脈給予脂肪乳，可明顯改善癥狀［19-20］；聯(lián)合脂肪乳治療后有機(jī)磷中毒大鼠肝臟，胰腺損傷明顯減少［8］，證實(shí)脂肪乳聯(lián)合標(biāo)準(zhǔn)治療對(duì)有機(jī)磷中毒具有保護(hù)作用，但對(duì)于肺的治療作用報(bào)道較少，尚未形成共識(shí)。

在本研究中，有機(jī)磷中毒后大鼠死亡率明顯增加，乙酰膽堿明顯下降，炎性細(xì)胞因子IL-6、TNF-α、NF-KB 及其mRNA 明顯升高，肺組織病理結(jié)構(gòu)破壞；當(dāng)給予阿托品及解磷定標(biāo)準(zhǔn)治療后，乙酰膽堿上升、炎性細(xì)胞因子下降，肺組織炎細(xì)胞浸潤(rùn)，組織間充血；但標(biāo)準(zhǔn)治療基礎(chǔ)上增加脂肪乳后，肺病理情況明顯改善，炎性細(xì)胞因子明顯下降，證實(shí)脂肪乳在阿托品、解磷定的標(biāo)準(zhǔn)治療基礎(chǔ)上聯(lián)合應(yīng)用，可以減輕有機(jī)磷中毒的癥狀，加快乙酰膽堿酯酶恢復(fù)，減輕急性有機(jī)磷中毒肺臟的損傷。

綜上所述，脂肪乳在急性有機(jī)磷中毒過(guò)程中對(duì)肺具有輔助治療作用，一旦發(fā)生有機(jī)磷中毒后，應(yīng)盡早在標(biāo)準(zhǔn)治療基礎(chǔ)上加用脂肪乳，改善肺功能，降低死亡率及改善預(yù)后。