孟曦，丁偉，王建美，王耀光

（1．天津市中醫(yī)藥研究院附屬醫(yī)院，天津 300120；2．天津市河?xùn)|中醫(yī)院，天津 300162；3．天津市北辰醫(yī)院，天津 300400；4．天津市中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院，天津 300193）

膜性腎病是一組以腎小球基底膜上皮細(xì)胞下免疫復(fù)合物沉積伴基底膜彌漫增厚為特征的疾病[1]。根據(jù)病因的不同，分為特發(fā)性膜性腎病（IMN）和繼發(fā)性膜性腎病。IMN 是構(gòu)成原發(fā)性腎病綜合征的常見疾病，發(fā)病高峰年齡多為40～50 歲，男女比例約為2∶1，本病起病隱匿，以高度水腫、大量蛋白尿?yàn)橹饕R床表現(xiàn)[2]。長(zhǎng)期大量蛋白尿會(huì)導(dǎo)致患者腎功能進(jìn)行性減退，甚至逐漸發(fā)展為終末期腎病。蛋白尿的形成與足細(xì)胞損傷密切相關(guān)，生理狀態(tài)下足細(xì)胞具有較高的自噬活性。研究發(fā)現(xiàn)自噬信號(hào)通路磷脂肌醇3-激酶（PI3K）/蛋白激酶B（AKT）/雷帕霉素靶蛋白（mTOR）對(duì)足細(xì)胞的損傷具有調(diào)控作用，腎小球足細(xì)胞存在較強(qiáng)的自噬活性[3]，足細(xì)胞的分化、損傷、修復(fù)過程中往往伴隨著自噬[4]，激活自噬可以減少腎小管上皮細(xì)胞凋亡，防止細(xì)胞損傷[5-6]。王耀光教授多年臨床經(jīng)驗(yàn)總結(jié)治療膜性腎病基礎(chǔ)方膜腎1 號(hào)方（生黃芪、炒白術(shù)、防風(fēng)、防己、地龍、僵蠶、訶子、芡實(shí)、澤蘭、丹參），臨床療效顯著。膜腎1 號(hào)方化裁自《金匱要略》名方防己黃芪湯，具有益氣祛風(fēng)，健脾利水之功效，主治表虛不固之風(fēng)水或風(fēng)濕證，王耀光教授根據(jù)臨床多年經(jīng)驗(yàn)在經(jīng)方基礎(chǔ)上加入活血祛瘀及收斂固澀之藥，臨床收效顯著。經(jīng)前期臨床研究表明膜腎1 號(hào)方能顯著改善膜性腎病患者臨床癥狀、體征，可明顯降低患者蛋白尿、膽固醇及三酰甘油（TG），實(shí)驗(yàn)基于此，研究膜腎1 號(hào)方對(duì)腎臟的保護(hù)作用，通過動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究明確作用機(jī)制。

1 研究材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物無特定病原體（SPF）級(jí)SD 大鼠40 只，6 周齡雄性，體質(zhì)量150～170 g（北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司），普通飼料喂養(yǎng)，自由進(jìn)食及飲水，室溫20 ℃，相對(duì)濕度45%±5%。實(shí)驗(yàn)遵循《實(shí)驗(yàn)動(dòng)物護(hù)理和使用指南》（動(dòng)物實(shí)驗(yàn)倫理批號(hào)GENINK-20220002），自然光照12 h，在同等標(biāo)準(zhǔn)環(huán)境內(nèi)適應(yīng)性飼養(yǎng)1 周后進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

1.1.2 主要儀器與材料脫水機(jī)[武漢俊杰公司（JT-12J）]；包埋機(jī)[武漢俊杰公司（JB-L8）]；電子天秤（永康市艾瑞貿(mào)易有限公司）；血生化儀（日本日立公司）；陽(yáng)離子化牛血清白蛋白（C-BSA，美國(guó)Sigma-Aldrich 公司，貨號(hào)：H2519-100UN）；檸檬酸抗原修復(fù)液（北京索萊寶科技有限公司，貨號(hào)：C1034-100 mL）；PI3K 一抗（兔源，英國(guó)Abcam 公司，貨號(hào)：ab302958）；磷酸化磷酸肌醇3 激酶（p-PI3K）一抗（兔源，中國(guó)Bioss 公司，貨號(hào)：bs-5570R）；蛋白激酶B（AKT）一抗（兔源，美國(guó)CST 公司，貨號(hào)：#9272）；磷酸化AKT蛋白（p-Akt）一抗（兔源，美國(guó)CST 公司，貨號(hào)：#4060）；雷帕霉素靶蛋白（mTOR）一抗（兔源，美國(guó)CST 公司，貨號(hào)：#2972）；磷酸化雷帕霉素靶蛋白（p-mTOR）一抗（英國(guó)Abcam 公司兔源，美國(guó)CST 公司，貨號(hào)：#5536）；蛋白輕鏈3（LC3）一抗（兔源，美國(guó)CST 公司，貨號(hào)：#4108 英國(guó)Abcam 公司）；磷酸甘油脫氫酶（GAPDH）一抗（小鼠源，中國(guó)優(yōu)抗，貨號(hào)：UM4002）；免疫球蛋白G（IgG，Alexa Fluor?488）抗體（兔源，英國(guó)Abcam 公司，貨號(hào)：ab133470）；羊抗兔抗體和酶標(biāo)二抗（IgG-HRP，羊源，中國(guó)Bioss 公司，貨號(hào)：bs-0295G-HRP）；羊抗小鼠IgG-HRP 二抗（羊源，中國(guó)Bioss 公司，貨號(hào)：bs-0296G-HRP）；冷凍包埋劑（OCT，德國(guó)萊卡公司）。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 動(dòng)物模型制備SD 大鼠40 只，適應(yīng)性喂養(yǎng)1 周后，用尿蛋白試紙測(cè)定每只大鼠的尿蛋白為陰性后，按照隨機(jī)原則，選取7 只大鼠做為對(duì)照組，33 只進(jìn)行造模，大鼠模型方法參照Border 法[7]。制備陽(yáng)離子化牛血清白蛋白（C-BSA）溶液及C-BSA 凍干粉劑。將2 g/L C-BSA 與等量弗氏不完全佐劑混勻，在腋下、腹股溝選取多點(diǎn)皮下注射0．1 mL 進(jìn)行預(yù)免疫，隔日1 次，共計(jì)3 次。正式免疫將2 g/L C-BSA與等體積的磷酸鹽緩沖液（PBS）混勻后于大鼠尾靜脈注射，每次0．5 mL，每周3 次，連續(xù)4 周。測(cè)定大鼠的尿苷三磷酸（UTP）水平，以UTP≥20 mg 作為模型制備成功標(biāo)準(zhǔn)[8]。

1.2.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組及干預(yù)造模成功后，將造模組分為模型組5 只，膜腎1 號(hào)方高劑量組（簡(jiǎn)稱高劑量組）7 只、膜腎1 號(hào)方中劑量組（簡(jiǎn)稱中劑量組）7 只、膜腎1 號(hào)方低劑量組（簡(jiǎn)稱低劑量組）7 只，鹽酸貝那普利組7 只。將膜腎1 號(hào)方湯劑（生黃芪30 g，丹參30 g，炒白術(shù)15 g，防風(fēng)15 g，防己20 g，地龍15 g，僵蠶15 g，訶子15 g，芡實(shí)30 g，澤蘭30 g，購(gòu)自天津市中醫(yī)藥研究院附屬醫(yī)院中藥房）旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮。按高、中、低濃度稀釋。使用生理鹽水將鹽酸貝那普利片制備含生藥濃度的藥液。根據(jù)“人和動(dòng)物間體表面積折算的等效劑量比率”換算，將3 個(gè)濃度的中藥以及鹽酸貝那普利灌胃，每日2 次，對(duì)照組灌服同體積生理鹽水，灌胃14 d。留取大鼠24 h 尿液，4 ℃冰箱保存。大鼠禁食水12 h 后取血，以離心半徑200 px，離心速度維持在3 500～4 000 r/min，將大鼠全血樣本離心10 min，離心分離出血清，4 ℃冰箱保存?zhèn)溆?；分離大鼠腎臟，快速轉(zhuǎn)移到-80 ℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.3 血液生化指標(biāo)檢測(cè)及尿蛋白定量檢測(cè)測(cè)定血液生化指標(biāo)24 h 尿蛋白（PRO），白蛋白（ALB），白球比（A/G），TG，總膽固醇（CHO），高密度脂蛋白（HDL）和低密度脂蛋白（LDL），實(shí)驗(yàn)步驟按照試劑盒說明書進(jìn)行。

1.2.4 組織病理學(xué)觀察大鼠腎臟藥物干預(yù)后，將大鼠禁食12 h，按0．3 mL/100 g 劑量予腹腔注射10%水合氯醛以麻醉，確認(rèn)麻醉起效后將大鼠固定于鼠板，剃除腹部皮毛，迅速剖開腹腔，尋找到腎臟，并分離出腎臟，置于生理鹽水中洗去血液。標(biāo)記各組腎臟組織，部分置于10%多聚甲醛中固定。剩余部分剪成若干等分，裝入2 mL 凍存管中于-80 ℃凍存，以備后續(xù)實(shí)驗(yàn)。腎臟組織進(jìn)行蘇木精-伊紅（HE）染色、免疫熒光染色。

1.2.5 蛋白免疫印跡法（Western Blot）實(shí)驗(yàn)提取總蛋白，將蛋白提取物從-80 ℃冰箱取出，置于冰上解凍，采用二奎啉甲酸（BCA）蛋白質(zhì)定量試劑盒，測(cè)定蛋白質(zhì)濃度，離心后準(zhǔn)備上樣，進(jìn)行電泳、轉(zhuǎn)膜。按照增強(qiáng)型化學(xué)發(fā)光試劑（ECL）顯色試劑盒說明書要求，配制適量ECL 工作液，瀝干PVDF 膜上的洗膜液，將配制好的ECL 工作液，均勻滴在膜上，室溫孵育5 min，然后吸去多余顯色液，采用全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光圖像分析系統(tǒng)成像，使用灰度值軟件分析結(jié)果。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法運(yùn)用SPSS 24.0 軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)量資料進(jìn)行正態(tài)性檢驗(yàn)，用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，多組計(jì)量資料組間比較采用單因素方差分析，組間兩兩比較采用LSD-t 檢驗(yàn)。P＜0.05 表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 膜腎1 號(hào)方對(duì)大鼠PRO、ALB 等生化指標(biāo)的影響各組大鼠PRO，ALB，A/G 組間比較：與對(duì)照組相比，模型組大鼠的PRO 等生化指標(biāo)出現(xiàn)異常。藥物干預(yù)后，鹽酸貝那普利組和膜腎1 號(hào)方低、中、高劑量組PRO 開始下降且低于模型組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。同時(shí)與對(duì)照組相比，模型組中大鼠PRO、ALB、A/G 表達(dá)顯著下降，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。與模型組相比，鹽酸貝那普利組和高劑量組的PRO 定量表達(dá)下降明顯，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。見表1。

表1 各組大鼠PRO、ALB 和A/G 的表達(dá)（±s）Tab.1 Expression of PRO，ALB and A/G of rats in each group（±s）

表1 各組大鼠PRO、ALB 和A/G 的表達(dá)（±s）Tab.1 Expression of PRO，ALB and A/G of rats in each group（±s）

注：與對(duì)照組相比，*P＜0.05；與模型組相比，#P<0.05，**P＜0.01。

組別對(duì)照組模型組低劑量組中劑量組高劑量組鹽酸貝那普利組動(dòng)物數(shù)7 5 7 7 7 7 PRO（mg/d）ALB（g/L）A/G 15.10±1.1237.14±4.78 1.58±0.34 49.18±1.23*27.34±3.61* 1.14±0.42*40.73±0.92#40.62±2.12 1.53±0.31 29.81±0.88#36.93±1.98 1.63±0.33 19.52±1.35**# 35.32±1.78 1.61±0.28 19.34±1.11**# 35.04±2.12 1.60±0.28

2.2 膜腎1 號(hào)方對(duì)大鼠血脂代謝功能生化指標(biāo)的影響與對(duì)照組相比，模型組大鼠出現(xiàn)血脂代謝異常，TG、CHO 和LDL 表達(dá)升高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。藥物干預(yù)后，鹽酸貝那普利組和高劑量組的TG、CHO、LDL 表達(dá)下降且低于模型組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見表2。

表2 各組大鼠血脂代謝指標(biāo)的表達(dá)（±s）Tab 2 Expression of blood lipid metabolism indicators of rats in each group（±s） mmol/L

表2 各組大鼠血脂代謝指標(biāo)的表達(dá)（±s）Tab 2 Expression of blood lipid metabolism indicators of rats in each group（±s） mmol/L

注：與對(duì)照組相比，*P<0.05；與模型組相比，#P＜0.05。

組別對(duì)照組模型組低劑量組中劑量組高劑量組鹽酸貝那普利組動(dòng)物數(shù)7 5 7 7 7 7 CHOTGLDL 3.61±0.720.86±0.180.47±0.13 4.89±0.93* 1.11±0.21* 0.71±0.02*4.40±0.321.03±0.12* 0.52±0.11 3.92±0.580.99±0.080.45±0.15 3.55±0.95# 0..97±0.07# 0.47±0.14#3.52±0.21# 0.96±0.05# 0.49±0.13#

2.3 膜腎1 號(hào)方對(duì)大鼠組織病理學(xué)的影響對(duì)照組：腎組織整體結(jié)構(gòu)及基底膜未見異常，可見腎小球及腎小管，組織內(nèi)未見明顯的炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，未見嗜復(fù)紅蛋白及IgG 沉積；模型組：腎小球毛細(xì)血管叢充血，系膜增生，基底膜出現(xiàn)增厚，部分腎小管細(xì)胞明顯空泡化、部分管腔擴(kuò)張內(nèi)含淡然無結(jié)構(gòu)物形成透明管型，組織內(nèi)可見炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，可見嗜復(fù)紅蛋白及IgG 沉積，足細(xì)胞融合。經(jīng)膜腎1 號(hào)方和鹽酸貝那普利干預(yù)后，大鼠腎臟病理學(xué)改變均有所減輕。見圖1。

圖1 光鏡下腎臟組織HE 染色（×100）Fig.1 HE staining of renal tissue under light microscope (×100)

2.4 膜腎1 號(hào)方對(duì)大鼠腎組織IgG 沉積的影響各組大鼠的IgG 沉積比較：與對(duì)照組相比，模型組大鼠出現(xiàn)IgG 沉積明顯，IgG 熒光表達(dá)升高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。藥物干預(yù)后鹽酸貝那普利組和膜腎1 號(hào)方大鼠組IgG 熒光表達(dá)下降且低于模型組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見圖2。

圖2 熒光顯微鏡下腎臟組織IgG 免疫熒光染色（×200）Fig.2 IgG immunofluorescence staining of renal tissue under fluorescence microscope (×200)

2.5 膜腎1 號(hào)方對(duì)大鼠腎組織中自噬信號(hào)通路的影響各組大鼠腎臟組織中自噬及PI3K-AKT 信號(hào)通路相關(guān)蛋白表達(dá)：與對(duì)照組相比，模型組大鼠PI3K-AKT 信號(hào)通路相關(guān)蛋白p-PI3K，p-Akt，pmTOR 蛋白表達(dá)顯著增加，自噬相關(guān)蛋白LC3 表達(dá)降低；藥物干預(yù)后，鹽酸貝那普利組和膜腎1 號(hào)方組PI3K-AKT 信號(hào)通路相關(guān)蛋白p-PI3K，p-Akt，pmTOR 蛋白表達(dá)降低，自噬相關(guān)蛋白LC3 表達(dá)升高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見圖3 和4。

圖3 Western blotting 檢測(cè)大鼠腎臟組織中自噬信號(hào)通路及PI3K-AKT 信號(hào)通路重要蛋白Fig.3 Western blotting detection of important proteins in autophagy signaling pathway and PI3K-AKT signaling pathway in rat kidney tissue

圖4 大鼠腎臟組織中自噬信號(hào)通路及PI3K-AKT 蛋白的相對(duì)表達(dá)量Fig.4 Autophagy signaling pathway and relative expression of PI3K-AKT protein in rat kidney tissue

3 討論

IMN 是原發(fā)性腎小球疾病中常見的病理類型之一，在各種腎臟病的病理類型中位于第2 或第3的位置，日本有研究顯示膜性腎病占原發(fā)性腎病綜合征的36.8%，IMN 在膜性腎病中所占比例約為77.9%[9]。本病發(fā)病機(jī)制比較復(fù)雜，一般由于免疫復(fù)合物的沉積激活補(bǔ)體系統(tǒng)，形成膜攻擊復(fù)合物C5b-9 進(jìn)而刺激足細(xì)胞釋放炎癥介質(zhì)，導(dǎo)致足細(xì)胞損傷，引起一系列病理生理改變[10]。膜性腎病的主要治療原則為控制疾病發(fā)展，減少蛋白尿，延緩腎功能減退，控制并發(fā)癥。除一般治療外，主要采取激素聯(lián)合免疫抑制劑、細(xì)胞毒類藥物為主，但容易出現(xiàn)白細(xì)胞降低、增加感染風(fēng)險(xiǎn)等免疫功能抑制和體重增加等激素相關(guān)不良反應(yīng)，近年中醫(yī)藥對(duì)膜性腎病蛋白尿的治療優(yōu)勢(shì)日益凸顯。

膜性腎病的主要癥狀之一蛋白尿的形成與足細(xì)胞損傷密切相關(guān)，生理狀態(tài)下足細(xì)胞具有較高的自噬活性。研究發(fā)現(xiàn)自噬信號(hào)通路PI3K/Akt/mTOR對(duì)足細(xì)胞的損傷具有調(diào)控作用，自噬是一種高度保守的降解機(jī)制，廣泛存在于真核細(xì)胞生物，可清除、降解和回收利用受損細(xì)胞器，對(duì)維持細(xì)胞內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定發(fā)揮重要的作用[11-12]。自噬可由多種信號(hào)通路調(diào)節(jié)，主要包括PI3K/Akt/mTOR、單磷酸腺苷活化蛋白激酶（AMPK）、核轉(zhuǎn)錄因子-κB（NF-KB）、c-jun Nterminal kinase 氨基末端激酶（JNK）通路等[13-14]。酪氨酸激酶受體被細(xì)胞外和胞內(nèi)因子活化進(jìn)而激活PI3K，與酪氨酸激酶偶聯(lián)并結(jié)合配體，催化磷酸肌醇二磷酸（PIP2）生成磷酸肌醇三磷酸（PIP3），PIP3與磷脂酰肌醇依賴性激酶1（PDK-1）共同激活蛋白絲/蘇氨酸激酶（Akt），活化后的p-Akt 激活mTOR，活化后的mTOR 可通過激活其下游相關(guān)因子，進(jìn)而促進(jìn)細(xì)胞蛋白質(zhì)的合成、增殖以及生長(zhǎng)，加速細(xì)胞的代謝，抑制細(xì)胞的自噬，雷帕霉素靶蛋白1（mTOR1）在自噬的負(fù)調(diào)控中發(fā)揮重要的作用[6，15-16]。LC3 是自噬路徑中的中心蛋白[17]，分為Ⅰ型和Ⅱ型，LC3-Ⅱ位于自噬體膜表面，參與自噬體形成，其表達(dá)的強(qiáng)度與自噬泡數(shù)量的多少成正相關(guān)，通常作為自噬的分子標(biāo)志[18]。LC3 的表達(dá)強(qiáng)度體現(xiàn)自噬泡的數(shù)量，LC3表達(dá)升高提示自噬增強(qiáng)，PI3K/Akt/mTOR 信號(hào)通路相關(guān)蛋白P-PI3K，P-Akt 表達(dá)減低可減低對(duì)自噬的抑制，自噬對(duì)神經(jīng)細(xì)胞、足細(xì)胞等細(xì)胞的生長(zhǎng)發(fā)育具有重要作用，足細(xì)胞的分化、損傷、修復(fù)過程中往往伴隨著自噬，激活自噬可以減少腎小管上皮細(xì)胞凋亡，防止細(xì)胞損傷[5-6]。膜性腎病的發(fā)生發(fā)展與足細(xì)胞的損傷密切相關(guān)，足細(xì)胞的損傷可造成蛋白尿增加，蛋白尿是膜性腎病的主要臨床表現(xiàn)之一，近些年mTOR 及相關(guān)信號(hào)通路在腫瘤相關(guān)疾病的機(jī)制研究較為明確，隨著研究不斷深入，除腫瘤外的其他疾病如代謝性疾病糖尿病、心腦血管疾病、自身免疫性疾病等疾病的發(fā)生發(fā)展也與mTOR 及相關(guān)信號(hào)通路的參與相關(guān)[19]。有體外研究發(fā)現(xiàn)[20]mTOR 抑制劑可通過激活足細(xì)胞自噬，發(fā)揮對(duì)特發(fā)性膜性腎病的治療作用。故本研究從自噬的角度進(jìn)一步研究膜腎1 號(hào)方的作用機(jī)制，研究顯示，與對(duì)照組相比，模型組大鼠PI3K-Akt 信號(hào)通路相關(guān)蛋白P-PI3K，P-Akt，P-mTOR 蛋白表達(dá)顯著增加，自噬相關(guān)蛋白LC3 表達(dá)降低；藥物干預(yù)后，鹽酸貝那普利組和膜腎1 號(hào)方組PI3K-Akt 信號(hào)通路相關(guān)蛋白P-PI3K，PAkt，P-mTOR 蛋白表達(dá)降低，自噬相關(guān)蛋白LC3 表達(dá)升高，提示膜腎1 號(hào)方可以降低PI3K-Akt 信號(hào)通路的激活，提高自噬相關(guān)蛋白水平，自噬的激活可減少足細(xì)胞的損傷，發(fā)揮足細(xì)胞保護(hù)作用，從而起到減少蛋白尿、保護(hù)腎臟的作用。

自噬可通過清除、降解和回收受損的細(xì)胞器來發(fā)揮維持細(xì)胞內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定狀態(tài)的作用，此過程可以認(rèn)為是中醫(yī)陰陽(yáng)消長(zhǎng)、正邪相搏以達(dá)到陰陽(yáng)動(dòng)態(tài)平衡，正如《黃帝內(nèi)經(jīng)》所云：“陰平陽(yáng)秘，精神乃至?！蹦ば阅I病歸屬于中醫(yī)“水腫”“尿濁”“腰痛”等范疇。蛋白在中醫(yī)被認(rèn)為是人體的精微物質(zhì)，《素問·六節(jié)藏象論》曰：“腎者主蜇，封藏之本，精之處也?！笨梢娋⑽镔|(zhì)主要依賴腎臟固攝與封藏，若腎臟封藏固攝功能異常，則發(fā)生精微物質(zhì)下泄，出現(xiàn)蛋白尿。本病病機(jī)為本虛標(biāo)實(shí)，以脾腎虧虛為本，以痰濕、濁毒、瘀血等為標(biāo)實(shí)之證，隨著中醫(yī)藥對(duì)膜性腎病治療的深入研究，中醫(yī)藥可通過保護(hù)足細(xì)胞、減輕腎纖維化、保護(hù)基底膜等多種途徑保護(hù)腎臟。王耀光教授總結(jié)膜性腎病的基本病機(jī)為本虛標(biāo)實(shí)，脾虛不能運(yùn)化水液，腎臟虧損，不能固攝，腎失封藏，精關(guān)不固，則精微物質(zhì)下泄，出現(xiàn)蛋白尿，針對(duì)本病的病因病機(jī)提出以補(bǔ)脾益腎，固本培元為主要治法，佐以活血祛瘀以治標(biāo)，選用《金匱要略》防己黃芪湯加減化裁為膜腎1 號(hào)方（生黃芪、炒白術(shù)、防風(fēng)、防己、地龍、僵蠶、訶子、芡實(shí)、澤蘭、丹參）為王耀光教授多年臨床經(jīng)驗(yàn)總結(jié)治療膜性腎病基礎(chǔ)方，臨床療效顯著，方中生黃芪性甘溫為君藥，益氣健脾、補(bǔ)氣活血、利水消腫，炒白術(shù)健脾燥濕，助黃芪利水消腫，防風(fēng)、防己祛風(fēng)勝濕，地龍活血通經(jīng)，祛瘀通絡(luò)，丹參、澤蘭加強(qiáng)活血祛瘀、利水消腫，訶子、芡實(shí)收斂固澀，增強(qiáng)培本固原。現(xiàn)代藥理學(xué)研究顯示黃芪甲苷可改善腎小球基底膜增厚、系膜基質(zhì)增殖等病理?yè)p傷，減少大鼠蛋白尿[21]。

綜上所述，結(jié)果表明膜腎1 號(hào)方治療膜性腎病與調(diào)控自噬信號(hào)通路PI3K/Akt/mTOR 的表達(dá)有關(guān)，可通過調(diào)節(jié)自噬信號(hào)通路發(fā)揮足細(xì)胞的保護(hù)作用，本研究為膜腎1 號(hào)方在臨床上治療蛋白尿，延緩膜性腎病發(fā)展提供可靠的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。