李賀,姬寒蕊,杜雅薇,吳圣賢
(1.山東中醫(yī)藥大學(xué)第一臨床醫(yī)學(xué)院,濟(jì)南 250355;2.北京中醫(yī)藥大學(xué)東直門醫(yī)院,北京 100700)
動(dòng)脈粥樣硬化(AS)是一種慢性多因素血管性疾病,是心腦血管疾病的重要病理基礎(chǔ)[1]。頸動(dòng)脈粥樣硬化與冠狀動(dòng)脈粥樣硬化分別是AS 在頸動(dòng)脈和冠狀動(dòng)脈的體現(xiàn),與缺血性腦卒中、急性冠脈綜合征的風(fēng)險(xiǎn)和嚴(yán)重程度直接相關(guān)[1-3],大幅增加了居民病死率,已成為影響居民身體健康的主要因素,消退AS 斑塊對(duì)維護(hù)居民的健康和減輕社會(huì)醫(yī)療負(fù)擔(dān)具有重要意義。高脂血癥是AS 的主要危險(xiǎn)因素,降低低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)、三酰甘油(TG)是改善AS,預(yù)防心腦血管疾病并發(fā)癥的關(guān)鍵手段[4-5]。中藥有著多靶點(diǎn)、副作用小的優(yōu)勢(shì),或能成為改善AS 的重要替代或補(bǔ)充方案。內(nèi)消軟脈湯2 號(hào)是在課題組“脈生痰核”理論[6-7]指導(dǎo)下,以化痰散結(jié)為主要治法,選用大量的化痰散結(jié)藥化裁而來(lái)的自擬方劑,內(nèi)消軟脈湯2 號(hào)在臨床上治療頸動(dòng)脈粥樣硬化及高脂血癥獲得了良好療效。前期實(shí)用性隨機(jī)對(duì)照試驗(yàn)發(fā)現(xiàn),該方可使頸動(dòng)脈橫切斑塊厚度平均下降11.48%[8],但其內(nèi)在機(jī)制尚不明確。故研究以內(nèi)消軟脈湯2 號(hào)為基礎(chǔ)治療方案,通過(guò)建立ApoE-/-小鼠的AS 模型,探究?jī)?nèi)消軟脈湯2 號(hào)對(duì)AS、高脂血癥的改善效果,并初步探究其作用機(jī)制。
1.1 動(dòng)物6 周齡雄性ApoE-/-小鼠30 只,基因背景為C57BL/6J,由北京華阜康生物科技股份有限公司提供,動(dòng)物許可證號(hào):SCXK(京)2020-0004。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物飼養(yǎng)于北京中醫(yī)藥大學(xué)東直門醫(yī)院SPF 級(jí)標(biāo)準(zhǔn)化實(shí)驗(yàn)動(dòng)物室,環(huán)境溫度為22 ℃,相對(duì)濕度45%~55%,12 h 光照與12 h 黑夜循環(huán),動(dòng)物自由進(jìn)食水。
1.2 藥劑與試劑內(nèi)消軟脈湯2 號(hào)顆粒劑組成:靈芝30 g、玄參15 g、丹參15 g、黃連9 g、浙貝母9 g、生牡蠣9 g、當(dāng)歸9 g、制乳香9 g、制沒(méi)藥9 g,本次實(shí)驗(yàn)所需顆粒劑由東直門醫(yī)院顆粒劑藥房全成分提取制作。磷酸鹽緩沖液粉末(pH 7.3,中杉金橋公司);4%多聚甲醛溶液(東都凱源有限公司);中性快干膠;油紅O 染液;蛋白酶抑制劑;二奎啉甲酸(BCA)蛋白定量試劑盒;丙烯酰胺;三羥基氨基甲烷Tris 堿;甘氨酸;1 mol/L Tris-HCl(pH 7.4)緩沖液;1.5 mol/L Tris- HCl(pH 8.8)緩沖液;1 mol/L Tris-HCl(pH 6.8)緩沖液;吐溫-20;SDS;過(guò)硫酸銨(普利萊公司);TEMED(Sigma 公司);預(yù)染蛋白Maker(普利萊公司);麗春紅染色液(普利萊公司);硝酸纖維素膜(NC 膜)(普利萊公司);封閉專用脫脂奶粉(普利萊公司);蛋白免疫印跡法(Western Blot)專用雜交袋(普利萊公司);發(fā)光液(碧云天公司);EASYBIO 易杰膜(易杰公司);GADPH 抗體(Abcam 公司);解偶聯(lián)蛋白1(UCP1)抗體(Abcam 公司);LDLR 抗體(Abcam 公司);戊巴比妥鈉(北京東都凱源生物科技有限公司)。
1.3 實(shí)驗(yàn)儀器動(dòng)物恒溫飼養(yǎng)箱(北京福意聯(lián)公司);制冰機(jī)(型號(hào):MV600,Scotsman 公司);多功能酶標(biāo)儀(BIO-RAD 公司);光學(xué)顯微鏡(Olympus BX60,Olympus 公司);-20 ℃冰箱(德國(guó)Siemens 公司);精密電子稱(JA1003N,上海精密科學(xué)儀器有限公司);電泳槽及電泳儀(北京六一儀器廠);塑料薄膜封口機(jī)(SF-200/250 型,溫州市興業(yè)機(jī)械設(shè)備有限公司);低溫離心機(jī)[5424/5424R(FA-45-24-11,Eppendorf 公司]。
1.4 模型制備、分組和干預(yù)30 只ApoE-/-小鼠常溫適應(yīng)性飼養(yǎng)1 周后,隨機(jī)將小鼠平均分為3 組,每組10 只,分別為對(duì)照組、內(nèi)消軟脈湯2 號(hào)低劑量組、高劑量組。每組均給予高脂飲食(配方:21%脂肪+0.15%膽固醇,購(gòu)買于北京華阜康生物科技股份有限公司)喂養(yǎng)16 周,以建立AS 模型[9]。各組在造模之初分別給予蒸餾水灌胃、內(nèi)消軟脈湯2 號(hào)低劑量[2.1 g/(kg·d)]灌胃、內(nèi)消軟脈湯2 號(hào)高劑量[4.2 g/(kg·d)]灌胃,以蒸餾水灌胃組作為對(duì)照,干預(yù)16 周后取材,取材前禁食水12 h。干預(yù)期間各組小鼠繼續(xù)接受高脂飲食(HFD)喂養(yǎng)。鑒于環(huán)境溫度對(duì)脂解作用有明顯影響,本研究將采用環(huán)境動(dòng)物飼養(yǎng)箱,全程控制并恒定飼養(yǎng)溫度。
實(shí)驗(yàn)中所有動(dòng)物飼養(yǎng)條件以及動(dòng)物實(shí)驗(yàn)操作均嚴(yán)格遵守北京中醫(yī)藥大學(xué)東直門醫(yī)院重點(diǎn)學(xué)科實(shí)驗(yàn)室動(dòng)物實(shí)驗(yàn)倫理委員會(huì)制定的制度規(guī)定。
1.5 觀察指標(biāo)及方法
1.5.1 主動(dòng)脈AS 斑塊采用油紅O 染色及改良Movat 五色套染的方法進(jìn)行觀察。小鼠在處死前保持空腹8 h。使用生理鹽水配制好6.7 mg/mL 的戊巴比妥鈉,以0.01 mL/g 小鼠體重的劑量進(jìn)行腹腔注射,待麻醉成功后進(jìn)行手術(shù)處理,自心臟開(kāi)始,小心地將主動(dòng)脈于脊柱進(jìn)行剝離,將小鼠主動(dòng)脈與心臟一起取下,放于4%的多聚甲醛固定液中加以固定。根據(jù)油紅O 染液試劑盒說(shuō)明書(shū)步驟進(jìn)行整根動(dòng)脈染色。在主動(dòng)脈根部切下大約5 mm 的長(zhǎng)度并將其與心臟組織分離并置于石蠟組織的包埋盒中,通過(guò)自動(dòng)脫水石蠟組織制作儀、石蠟切片器進(jìn)行血管的石蠟切片制備,后按照改良Movat 五色套染的試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行染色。
1.5.2 血脂4 項(xiàng)采用摘眼球取血法采集小鼠血液,室溫靜置1 h,4 ℃、3 000 r/min 離心10 min,離心半徑8.4 cm,收集上層血清。每只小鼠取200~300 μL 血清,采用生化法檢測(cè)TG、LDL-C、HDL-C及總膽固醇(TC)。
1.5.3 肝臟脂肪變性程度采用油紅O 染色的方法進(jìn)行觀察。取小鼠新鮮肝臟置于軟塑瓶蓋中,并添加適當(dāng)?shù)腛CT 包埋劑,之后再把小盒慢慢地放入液態(tài)氮里,當(dāng)組織結(jié)冰成小塊狀,將已結(jié)冰的組織置入恒冷箱切片機(jī)中進(jìn)行冷凍切片制備。按照油紅O 染液試劑盒說(shuō)明書(shū)步驟進(jìn)行染色。
1.5.4 肩胛脂肪組織活化情況采用蘇木素-伊紅(HE)染色的方法進(jìn)行觀察。將小鼠肩胛脂肪組織取出,置于石蠟組織的包埋盒中,通過(guò)自動(dòng)脫水石蠟組織制作儀、石蠟切片器進(jìn)行血管的石蠟切片制備,進(jìn)行HE 染色。
1.5.5 組織病理學(xué)圖片采集通過(guò)對(duì)各樣品的病理染色,得到了血管斑塊區(qū)域的切片、肝臟切片、脂肪組織切片等。采用高倍顯微鏡對(duì)切片進(jìn)行拍照,在每張切片上觀察到多個(gè)區(qū)域后,確定最接近平均水平的區(qū)域進(jìn)行拍照并保存圖像,各個(gè)圖像的全部參數(shù)都經(jīng)過(guò)均一化處理。
1.5.6 肩胛脂肪組織UCP1 及肝臟低密度脂蛋白受體(LDLR)的表達(dá)采用Western Blot 法檢測(cè)小鼠肩胛脂肪組織UCP1 及LDLR 的表達(dá)。將組織蛋白裂解液加入各組小鼠的肝臟及肩胛脂肪組織中,快速研磨,置冰上20 min,然后置于4 ℃低溫離心機(jī)中、12 000 r/min 離心10 min,離心半徑8.4 cm,取上清,采用BCA 法測(cè)定組織蛋白含量后加上樣緩沖液,置于沸水中煮5 min;分別取40 μg 蛋白量的組織總蛋白樣品上樣,80 V 濃縮膠電泳,100 V 分離膠電泳;采用半干電轉(zhuǎn)移儀進(jìn)行蛋白質(zhì)的電轉(zhuǎn)移,恒流30 mA,90 min,5%TBS-T 脫脂奶粉封閉1 h,用UCP1 和LDLR 一抗稀釋后孵育過(guò)夜(UCP1 抗體稀釋倍數(shù):1∶500;LDLR 抗體稀釋倍數(shù):1∶500),二抗稀釋后孵育1 h(稀釋倍數(shù):1∶5 000),洗膜后加入ECL 混合液中5 min 溫育,置于X 光片盒中;將已曝光的膠片放入顯影液中顯影,直至出現(xiàn)清晰影像,再將膠片放入定影液中定影,清水沖洗,晾干保存,掃描。采用Image-Pro Plus 6.0 軟件對(duì)掃描圖像的目的條帶進(jìn)行灰度分析。
1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法應(yīng)用SPSS 24.0 統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件系統(tǒng)對(duì)相關(guān)數(shù)據(jù)進(jìn)行錄入并進(jìn)行分析。計(jì)量資料采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示,多組間比較采用單因素方差分析,組間兩兩比較采用LSD-t 檢驗(yàn)。P<0.05 表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
2.1 內(nèi)消軟脈湯2 號(hào)對(duì)ApoE-/-小鼠AS 的影響為探究?jī)?nèi)消軟脈湯2 號(hào)是否可以改善ApoE-/-小鼠的AS,本研究通過(guò)油紅O 染色的方法對(duì)小鼠整個(gè)主動(dòng)脈進(jìn)行觀察,同時(shí)通過(guò)改良Movat 五色套染的方法對(duì)小鼠主動(dòng)脈根部進(jìn)行觀察。結(jié)果表明,與高脂飲食+蒸餾水對(duì)照組(HFD 組)比較,內(nèi)消軟脈湯2 號(hào)低劑量組及高劑量組小鼠整個(gè)主動(dòng)脈斑塊改善,見(jiàn)圖1、圖2、圖3。
圖1 各組小鼠主動(dòng)脈的油紅O 染色結(jié)果Fig.1 Oil Red O staining results of mouse aorta in each group
圖2 各組小鼠的主動(dòng)脈HE 染色(×50)Fig.2 HE staining of the aorta in each group of mice(×50)
圖3 各組小鼠的主動(dòng)脈改良Movat 五色套染(×50)Fig.3 Modified Movat five color staining of the aorta in each group of mice(×50)
2.2 內(nèi)消軟脈湯2 號(hào)對(duì)ApoE-/-小鼠血脂4 項(xiàng)的影響為探究?jī)?nèi)消軟脈湯2 號(hào)是否可以改善ApoE-/-小鼠的高脂血癥,研究通過(guò)生化法對(duì)小鼠血中LDL-C、TC、TG、HDL-C 的水平進(jìn)行檢測(cè)。與HFD組相比,內(nèi)消軟脈湯2 號(hào)低劑量組的血清LDL 下降31.61%(P<0.05)、TC 下降23.9%(P<0.05),差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,見(jiàn)圖4。綜合來(lái)看,內(nèi)消軟脈湯2 號(hào)具有降低LDL-C 及TC 的功效。
圖4 各組小鼠的血脂4 項(xiàng)水平(±s,n=10)Fig.4 Four levels of blood lipids in each group of mice(±s,n=10)
2.3 內(nèi)消軟脈湯2 號(hào)對(duì)ApoE-/-小鼠肝脂肪變性的影響為探究?jī)?nèi)消軟脈湯2 號(hào)是否可以改善ApoE-/-小鼠的肝脂肪變性,研究通過(guò)油紅O 染色觀察小鼠肝臟。結(jié)果表明,與對(duì)照組比較,內(nèi)消軟脈湯2 號(hào)低劑量組及高劑量組小鼠肝臟脂滴明顯減少,提示內(nèi)消軟脈湯2 號(hào)具有改善小鼠肝脂肪變性的功效,見(jiàn)圖5。
圖5 各組小鼠的肝臟油紅O 染色(×200)Fig.5 Liver oil red O staining of mice in each group(×200)
2.4 內(nèi)消軟脈湯2 號(hào)對(duì)ApoE-/-小鼠脂肪組織的影響為探究?jī)?nèi)消軟脈湯2 號(hào)是否可以激活A(yù)poE-/-小鼠的肩胛脂肪組織,研究通過(guò)HE 染色觀察小鼠肩胛處的脂肪組織。結(jié)果表明,HFD 組小鼠的脂肪細(xì)胞表現(xiàn)較為飽滿、體積較大、單房結(jié)構(gòu)脂滴染色較淺。與之形成對(duì)比的是,低劑量組及高劑量組脂肪細(xì)胞體積較小、多房室結(jié)構(gòu)脂泡分隔增多,HE 染色變深,細(xì)胞核著色增多,其中以低劑量組改變最為明顯。提示服用內(nèi)消軟脈湯2 號(hào)后,小鼠肩胛脂肪組織可被活化,見(jiàn)圖6。
圖6 各組小鼠的肩胛脂肪組織HE 染色(×200)Fig.6 HE staining of scapular adipose tissue in each group of mice(×200)
2.5 內(nèi)消軟脈湯2 號(hào)對(duì)ApoE-/-小鼠肩胛脂肪組織UCP1 表達(dá)的影響由于脂肪組織活化是脂肪分解的重要途徑,UCP1 表達(dá)的升高是體內(nèi)棕色脂肪組織活化的重要標(biāo)志,研究通過(guò)Western blot 的方法探究?jī)?nèi)消軟脈湯2 號(hào)對(duì)肩胛棕色脂肪組織表達(dá)的影響。結(jié)果表明,與HFD 組比較,內(nèi)消軟脈湯2 號(hào)低劑量及高劑量組肩胛脂肪組織UCP1 的表達(dá)水平顯升高(P<0.05),其中高劑量組升高(P<0.01)最為顯著,差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,見(jiàn)圖7。
圖7 內(nèi)消軟脈湯2 號(hào)對(duì)肩胛脂肪組織UCP1 表達(dá)的影響(±s,n=3)Fig.7 Effect of Neixiao Ruanmai Decoction No.2 on the expression of UCP1 in scapular adipose tissue(±s,n=3)
2.6 內(nèi)消軟脈湯2 號(hào)對(duì)ApoE-/-小鼠肝臟LDLR 表達(dá)的影響內(nèi)消軟脈湯2 號(hào)具有降低LDL-C 的效果,由于肝臟中LDLR 是促進(jìn)體內(nèi)LDL-C 代謝的關(guān)鍵蛋白,是LDL-C 內(nèi)源性清除的關(guān)鍵途徑,故本研究通過(guò)Western Blot 的方法探究?jī)?nèi)消軟脈湯2 號(hào)對(duì)肝臟LDLR 表達(dá)的影響。結(jié)果表明,與HFD 組比較,內(nèi)消軟脈湯2 號(hào)低劑量及高劑量組肝臟LDLR 的表達(dá)水平均升高(P<0.05),其中低劑量組升高顯著(P<0.01),差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,見(jiàn)圖8。
圖8 內(nèi)消軟脈湯2 號(hào)對(duì)肝臟LDLR 表達(dá)的影響(±s,n=3)Fig.8 Effect of Neixiao Ruanmai Decoction No.2 on the expression of LDLR in the liver(±s,n=3)
AS 是一種由慢性炎癥引發(fā)的動(dòng)脈壁脂肪病變,已成為老年人的關(guān)鍵死亡原因之一[10]。脂質(zhì)代謝紊亂與AS 的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān),是AS 主要的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。當(dāng)血脂水平過(guò)高時(shí),可導(dǎo)致動(dòng)脈內(nèi)皮損傷及脂質(zhì)分子大量沉積,這些脂質(zhì)分子會(huì)受到多種炎癥細(xì)胞的浸潤(rùn)和吞噬,進(jìn)而轉(zhuǎn)化為泡沫細(xì)胞并引發(fā)一系列炎癥和氧化反應(yīng),導(dǎo)致AS 的發(fā)生[11]。大量研究表明[12],血漿膽固醇水平的升高與AS 的發(fā)生率及病死率呈正相關(guān)。目前他汀類等降脂藥物雖已廣泛應(yīng)用,但中國(guó)高脂血癥發(fā)病率仍然較高?!吨袊?guó)居民營(yíng)養(yǎng)與慢性病狀況報(bào)告(2020 年)》[13]顯示,中國(guó)18 歲及以上居民高脂血癥總體患病率高達(dá)35.6%,造成了嚴(yán)重的疾病負(fù)擔(dān)。中醫(yī)藥是一個(gè)偉大的寶庫(kù),進(jìn)一步挖掘治療高脂血癥及AS 的中醫(yī)方劑從而改善高脂血癥、減少心腦血管疾病的發(fā)生,既是深入貫徹《“健康中國(guó)2030”規(guī)劃綱要》的重要一環(huán),也是高脂血癥領(lǐng)域的重點(diǎn)研究方向,對(duì)維護(hù)人類健康具有重要意義。
在中醫(yī)中,AS 為“痰核”結(jié)于血脈所致。津液與血液皆由水谷所化,運(yùn)行于脈中,津液壅滯則血運(yùn)亦不通暢,痰為津液壅滯,故“痰核”一旦形成,易影響血液運(yùn)行而又夾雜瘀血等病理產(chǎn)物,最終形成斑塊[4-5]。高脂血癥作為AS 的基礎(chǔ),屬于“痰濕”“脂膏”的范疇,為本虛標(biāo)實(shí)之證,肝、脾、腎三臟功能失調(diào)是導(dǎo)致血脂異常的內(nèi)因。飲食不節(jié)、嗜食肥甘厚味、情志失調(diào)、過(guò)逸少勞、先天不足等原因可造成臟腑功能失調(diào),肝、脾、腎三臟功能失常,導(dǎo)致水谷不能正常運(yùn)化、津液代謝失常,進(jìn)而形成濕濁、痰濕等病理產(chǎn)物,即血脂代謝紊亂[14]。故在AS 及高脂血癥的治療上,總以化痰為主,兼顧扶正。
內(nèi)消軟脈湯2 號(hào)以“脈生痰核”理論為指導(dǎo),以化痰散結(jié)為主要治法,在臨床上運(yùn)用其治療頸動(dòng)脈斑塊獲得了良好療效,顯示出逆轉(zhuǎn)頸動(dòng)脈斑塊的潛力。全方以靈芝為君藥,可健脾化痰,助脾胃運(yùn)化,以絕生痰之源,是本方中改善AS 和脂代謝紊亂的關(guān)鍵藥物。大量研究證明,靈芝可安全有效地改善脂代謝紊亂、肥胖、胰島素抵抗等代謝紊亂性疾病,進(jìn)而達(dá)到抑制AS 發(fā)展的作用[15-21]。痰濁之邪日久易化熱生毒,故輔黃連、玄參以清熱解毒。此外,方中牡蠣、貝母化痰散結(jié),乳香、沒(méi)藥、丹參、當(dāng)歸活血化瘀,起到消退病理產(chǎn)物以調(diào)節(jié)氣機(jī)、改善AS 的作用。整體來(lái)看,內(nèi)消軟脈湯2 號(hào)配伍有序、寒溫并用、加減靈活,用于治療AS 與高脂血癥,確有其效。前期臨床試驗(yàn)與本次實(shí)驗(yàn)結(jié)果均表明,內(nèi)消軟脈湯2 號(hào)可以減輕AS 斑塊的發(fā)展,實(shí)驗(yàn)組小鼠的LDL-C和TC 水平降低。由此可見(jiàn),內(nèi)消軟脈湯2 號(hào)降低血脂水平是其改善AS 的重要原因。由于內(nèi)消軟脈湯2 號(hào)可改善AS 并降低血脂,故可為他汀類藥物不耐受及他汀抵抗的AS 斑塊患者提供較好的備選方案,也為配合他汀類藥物產(chǎn)生更好的臨床療效提供了可能。
根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果,內(nèi)消軟脈湯2 號(hào)灌胃后,小鼠肩胛區(qū)脂肪組織的活化程度及UCP1 的表達(dá)均增加,同時(shí)肝臟LDLR 的表達(dá)增加。研究表明,UCP1是介導(dǎo)棕色脂肪組織活化產(chǎn)熱的關(guān)鍵蛋白[22-23]。當(dāng)脂肪組織活化時(shí),細(xì)胞質(zhì)中脂滴包被蛋白1 的磷酸化得到激活,在脂肪組織內(nèi)三酰甘油脂肪酶(ATGL)等酶的介導(dǎo)下使TG 分解為甘油及脂肪酸[23-24],UCP1被激活[24-25]后可介導(dǎo)線粒體內(nèi)膜形成質(zhì)子通道,使得氧化與磷酸化解偶聯(lián),最終不產(chǎn)生ATP 而由熱能直接釋放[26],同時(shí)還可增加膽固醇逆向轉(zhuǎn)運(yùn)的效率及機(jī)體對(duì)膽固醇的利用等,以減少TC、TG 等脂類物質(zhì)的儲(chǔ)存。由于脂肪組織活化產(chǎn)熱嚴(yán)格依賴于UCP1 的激活[22],是控制肥胖的重要靶點(diǎn),故推測(cè)內(nèi)消軟脈湯2 號(hào)使脂肪組織活化與UCP1 密切相關(guān)。激活UCP1 依賴性脂肪組織活化可能是藥物改善AS 及脂代謝紊亂的潛在機(jī)制。LDLR 是體內(nèi)LDL-C代謝調(diào)控的關(guān)鍵調(diào)節(jié)因子,可通過(guò)內(nèi)吞作用將LDL清除,在膽固醇從血漿到細(xì)胞質(zhì)的轉(zhuǎn)運(yùn)和清除中起到重要作用。LDLR 的功能不全或LDLR 基因突變將導(dǎo)致高膽固醇血癥的發(fā)生,并明顯加速AS 的發(fā)展[27]。故增加LDLR 的表達(dá)及功能是抑制高膽固醇血癥及AS 的重要手段。根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果,內(nèi)消軟脈湯2 號(hào)可使小鼠肝臟中LDLR 表達(dá)顯著增加,提示內(nèi)消軟脈湯2 號(hào)改善小鼠AS、降低LDL-C 與LDLR 相關(guān),鑒于LDLR 對(duì)LDL-C 代謝的重要作用,我們推測(cè)內(nèi)消軟脈湯2 號(hào)通過(guò)增加LDLR 的表達(dá),進(jìn)而促進(jìn)其對(duì)LDL 的代謝,以達(dá)到降低膽固醇并改善動(dòng)脈粥樣硬化的作用。故LDLR 表達(dá)升高亦是內(nèi)消軟脈湯2 號(hào)改善高脂血癥并抑制AS 的潛在機(jī)制之一。
綜上所述,AS 與高脂血癥皆因痰邪而起,內(nèi)消軟脈湯2 號(hào)可通過(guò)化痰散結(jié)來(lái)清除痰邪這一宿根,其內(nèi)在機(jī)制可能與激活UCP1 及LDLR 有關(guān),若能深入挖掘方中的有效成分,進(jìn)一步提高其療效,對(duì)未來(lái)高脂血癥及AS 的防治、開(kāi)拓中醫(yī)藥治療心腦血管疾病的新思路具有重要意義。