蔡欣 劉坤 張輝 楊瑞芳 冉德園 王愛玲

(濱州醫(yī)學(xué)院煙臺(tái)附屬醫(yī)院醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)科,山東 煙臺(tái) 264100)

每年有超過60萬人死于結(jié)腸癌,該病是世界上最常見的癌癥類型之一,特點(diǎn)為預(yù)后較差,生存率低,嚴(yán)重威脅人類的生命健康〔1〕。臨床發(fā)病率呈上升趨勢,目前我國在惡性腫瘤中排名第四,與高蛋白飲食相關(guān)。與許多其他類型的癌癥一樣,結(jié)腸癌的發(fā)展是一個(gè)多階段的過程,涉及遺傳和表觀遺傳變化的積累〔2〕。鋅指E-盒結(jié)合同源異形盒(ZEB)1-反義鏈(AS)1在腫瘤發(fā)生和發(fā)展過程中起重要作用〔3〕。鉑類藥物是目前最有效的抗癌藥物之一,廣泛應(yīng)用于各種實(shí)體瘤的治療,但鉑類藥物的廣泛應(yīng)用會(huì)導(dǎo)致腫瘤對鉑類化療的耐藥。有研究表明ZEB1-AS1可能會(huì)對鉑類化療的療效產(chǎn)生影響〔4〕。本研究旨在分析結(jié)腸癌中ZEB1-AS1的表達(dá)及其與鉑類化療藥物敏感性及預(yù)后的關(guān)系。

1 材料與方法

1.1一般資料 選取2016年1月至2018年1月濱州醫(yī)學(xué)院煙臺(tái)附屬醫(yī)院腫瘤科收治的結(jié)腸癌患者120例為研究組,男76例,女44例;年齡55～85歲,平均(69.09±4.78)歲;根據(jù)美國國立綜合癌癥網(wǎng)絡(luò)(NCCN)TNM分期標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行臨床分期〔5〕:Ⅲ期59例,Ⅳ期61例;淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移79例,無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移41例。納入標(biāo)準(zhǔn):①所有病例經(jīng)過病理學(xué)診斷確診為結(jié)腸癌;②患者術(shù)前均未行含鉑類藥物化療;③對本研究內(nèi)容知情,同意參加本次試驗(yàn);④臨床資料完整,有完整隨訪記錄。排除標(biāo)準(zhǔn):①合并其他癌癥者;②合并心臟、肝臟及腎臟功能不全者;③有嚴(yán)重感染者。收集結(jié)腸癌患者手術(shù)過程中切除的癌組織及相應(yīng)癌旁正常組織(對照組)石蠟包埋標(biāo)本。本研究獲得醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)后實(shí)施,所有研究對象家屬簽署知情同意書。

1.2方法 FOLFOX4方案:奧沙利鉑100 mg/m2靜脈滴注2 h,第1天;亞葉酸鈣200 mg/m2,靜脈滴注2 h,第1～2天;5-氟尿嘧啶400 mg/m2推注,第1～2天。每2 w重復(fù),共進(jìn)行6個(gè)周期以上化療周期〔6〕。按照世界衛(wèi)生組織實(shí)體瘤客觀療效評價(jià)標(biāo)準(zhǔn)〔7〕判斷,化療效果分為完全緩解(CR)、部分緩解(PR)、穩(wěn)定(SD)與進(jìn)展(PD),其中以CR+PR為有效。采用實(shí)時(shí)熒光定量(qRT-PCR)檢測ZEB1-AS1水平:檢測兩組ZEB1-AS1水平,使用Trizol試劑從上述樣本中抽提總RNA,利用紫外分光光度計(jì)檢測總RNA含量,總RNA反轉(zhuǎn)錄為cDNA,利用熒光定量PCR儀分別對ZEB1-AS1和U6進(jìn)行擴(kuò)增,U6正向引物5′-GCTTCGGCAGCACATATACTAAAAT-3,反向5′-CGCTTCACGAATTTGCGTGTCAT-3′ZEB1-AS1正向引物5′-GAATATTCCTCCCACACCCA-3′,反向5′-TATGGTTTTGACGACTGTGTGAT-3′。采用2-△△Ct計(jì)算基因相對表達(dá)量。

1.3隨訪 所有患者通過門診復(fù)查的方式進(jìn)行隨訪,記錄患者手術(shù)后生存時(shí)間,隨訪期限為從患者手術(shù)完成至隨訪截止日期,或死亡、失訪日期。隨訪5年,隨訪截止日期為2023年1月,隨訪率為100%。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS25.0軟件進(jìn)行t檢驗(yàn)、χ2檢驗(yàn)、生存曲線(Kaplan-Meier)法及Cox回歸模型分析。

2 結(jié) 果

2.1兩組ZEB1-AS1水平比較 研究組ZEB1-AS1水平(2.83±0.84)高于對照組(1.07±0.32),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=41.516,P=0.000)。

2.2結(jié)腸癌組織中ZEB1-AS1表達(dá)水平與患者臨床病理特征的關(guān)系 以結(jié)腸癌患者組織中ZEB1-AS1表達(dá)平均數(shù)(2.83)為界值將結(jié)腸癌患者分成ZEB1-AS1高表達(dá)組(n=57)與低表達(dá)組(n=63),結(jié)腸癌患者ZEB1-AS1表達(dá)與年齡、性別、腫瘤直徑無關(guān)(P>0.05),與TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)(P<0.05)。見表1。

表1 結(jié)腸癌組織中ZEB1-AS1高表達(dá)與患者臨床病理特征的關(guān)系(n)

2.3ZEB1-AS1表達(dá)水平與化療客觀有效率的關(guān)系 化療2～4個(gè)周期后(中位3個(gè)周期),有效53例,無效67例。ZEB1-AS1低表達(dá)患者治療有效率〔38例(60.3%)〕高于ZEB1-AS1高表達(dá)患者〔15例(26.32%)〕,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=12.685,P=0.000)。

2.4結(jié)腸癌組織中ZEB1-AS1表達(dá)水平與生存期的關(guān)系 Kaplan-Meier分析結(jié)果顯示,ZEB1-AS1高表達(dá)患者5年生存率(26.30%)低于低表達(dá)患者(41.30%),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(Log-rank=6.843,P<0.05)。見圖1。

圖1 結(jié)腸癌組織中ZEB1-AS1表達(dá)水平與生存期的關(guān)系

2.5Cox回歸模型分析影響結(jié)腸癌患者預(yù)后不良的因素 單因素Cox分析顯示,TNM分期Ⅳ期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、化療無效、ZEB1-AS1高表達(dá)均是影響結(jié)腸癌患者預(yù)后不良的危險(xiǎn)因素(P<0.05)。見表2;多因素Cox分析顯示,TNM分期Ⅳ期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、化療無效、ZEB1-AS1高表達(dá)均是影響結(jié)腸癌患者預(yù)后不良的獨(dú)立危險(xiǎn)因素(P<0.05)。見表3。

表2 影響結(jié)腸癌患者預(yù)后不良的單因素分析

表3 影響結(jié)腸癌患者預(yù)后不良的多因素分析

3 討 論

結(jié)腸癌是常見的消化道惡性腫瘤,在全球范圍內(nèi)為男性第3位、女性第2位高發(fā)性惡性腫瘤,每年新發(fā)約120萬例,死亡約60萬例〔8〕。早期癥狀不明顯,隨著癌腫的增大而表現(xiàn)出排便習(xí)慣改變、便血、腹瀉、腹瀉與便秘交替、局部腹痛等癥狀,晚期則表現(xiàn)貧血、體重減輕等全身癥狀。隨著社會(huì)經(jīng)濟(jì)發(fā)展、居民生活方式的轉(zhuǎn)變及人口老齡化的加劇,我國結(jié)腸癌的發(fā)病和死亡呈明顯上升趨勢,且發(fā)病年齡有所提前,嚴(yán)重威脅人類的生命健康〔9〕。ZEB1-AS1基因?qū)儆诜蔷幋aRNA,隸屬于長鏈非編碼(lnc)RNA類〔10〕。該RNA是從具有ZEB1的共享雙向啟動(dòng)子轉(zhuǎn)錄而來,與賴氨酸甲基轉(zhuǎn)移酶2A結(jié)合并促進(jìn)組蛋白修飾,這些修飾被認(rèn)為可促進(jìn)ZEB1的表達(dá)〔11〕。研究表明該基因的表達(dá)與腫瘤進(jìn)展相關(guān),與ZEB1-AS1相關(guān)的疾病包括膀胱癌和鱗狀細(xì)胞癌〔12〕。奧沙利鉑是新一代鉑類抗腫瘤藥物〔13〕。與順鉑、卡鉑相比,奧沙利鉑具有抗癌譜廣、毒副作用小等優(yōu)點(diǎn),尤其可以有效治療進(jìn)展期大腸癌。然而由于藥物使用的盲目性,無論單獨(dú)還是聯(lián)合應(yīng)用,奧沙利鉑的有效率不高〔14〕。

本研究結(jié)果唐銀炳等〔15〕研究結(jié)果一致,ZEB1-AS1在胃癌中表達(dá)上調(diào),與胃癌不良預(yù)后相關(guān);此外,王妮娜等〔16〕研究也顯示,ZEB1-AS1在乳腺癌中高表達(dá),能夠促進(jìn)乳腺癌細(xì)胞遷移和侵襲;高儒旭〔17〕研究顯示,在膀胱癌細(xì)胞中,ZEB1-AS1將通過調(diào)控miR-200b/FSCN1并與轉(zhuǎn)化生長因子(TGF)-β1共同誘導(dǎo)膀胱癌細(xì)胞的增殖。劉芬等〔18〕研究發(fā)現(xiàn)ZEB1-AS1在食管鱗癌中高表達(dá),且與不良預(yù)后相關(guān);時(shí)北京等〔19〕報(bào)道LncRNA-ZEB1-AS1通過與miRNA形成ceRNA網(wǎng)絡(luò)使肝癌預(yù)后不良。以上研究均表明LncRNA-ZEB1-AS1在多種腫瘤中都發(fā)揮促癌基因作用。

本研究結(jié)果說明ZEB1-AS1在結(jié)腸癌患者化療耐藥過程中發(fā)揮重要作用。與宋嬌等〔20〕研究結(jié)果一致,ZEB1-AS1在子宮內(nèi)膜癌中高表達(dá),且其高表達(dá)與子宮內(nèi)膜癌患者淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、遠(yuǎn)端轉(zhuǎn)移相關(guān)。該結(jié)果同時(shí)也證實(shí)過表達(dá)ZEB1-AS1可促進(jìn)子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞的增殖,降低其對順鉑、5-氟尿嘧啶等化療藥物的敏感度。本研究結(jié)果說明結(jié)腸癌患者腫瘤組織中ZEB1-AS1低表達(dá)者應(yīng)用奧沙利鉑輔助化療可能獲得生存受益,ZEB1-AS1表達(dá)水平可以作為奧沙利鉑治療的篩選指標(biāo)。

綜上,ZEB1-AS1在結(jié)腸癌患者中高表達(dá),是影響結(jié)腸癌患者預(yù)后不良的危險(xiǎn)因素,且其高表達(dá)與化療效果、TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān),ZEB1-AS1低表達(dá)者應(yīng)用奧沙利鉑輔助治療有效率高。