亚洲免费av电影一区二区三区,日韩爱爱视频,51精品视频一区二区三区,91视频爱爱,日韩欧美在线播放视频,中文字幕少妇AV,亚洲电影中文字幕,久久久久亚洲av成人网址,久久综合视频网站,国产在线不卡免费播放

        ?

        胃癌間充質(zhì)干細胞促進胃癌細胞PD-L1表達的特征觀察*

        2023-10-21 06:50:52魏凌孫麗王倩倩朱偉
        關(guān)鍵詞:充質(zhì)細胞株異質(zhì)性

        魏凌, 孫麗, 王倩倩, 朱偉

        (1.江蘇大學(xué)醫(yī)學(xué)院, 江蘇 鎮(zhèn)江 212013; 2.江蘇大學(xué)附屬昆山醫(yī)院 檢驗科,江蘇 昆山 215300)

        近年來,程序性死亡受體1(programmed death-1, PD-1)/程序性死亡配體1(programmed deathligand 1, PD-L1)是導(dǎo)致腫瘤免疫逃逸的重要免疫檢查點之一。PD-L1 在多種腫瘤中表達,通過與活化T 細胞上的PD-1 結(jié)合導(dǎo)致T 細胞功能受損,從而抑制T 細胞的激活,還能與其他免疫抑制信號協(xié)同作用,促進免疫抑制微環(huán)境的形成[1]。有研究表明,阻斷多發(fā)性骨髓瘤細胞PD-L1 的表達后,T 細胞對骨髓瘤細胞的細胞毒性明顯增強[2]。在非小細胞肺癌中,PD-L1 可通過作用于巨噬細胞,誘導(dǎo)CD4+T細胞向Treg 細胞分化,促進腫瘤進展[3]。間充質(zhì)干細胞作為腫瘤微環(huán)境中重要的基質(zhì)細胞之一,具有自我更新及多向分化的潛能[4]。近年來研究發(fā)現(xiàn),間充質(zhì)干細胞通過細胞間相互作用和旁分泌功能在固有免疫和適應(yīng)性免疫中發(fā)揮重要的免疫調(diào)節(jié)作用[5]。研究表明,胃癌來源的間充質(zhì)干細胞(gastric cancer mesenchymal stem cell, GCMSC)通過分泌白細胞介素-8(Interleukin-8, IL-8),上調(diào)胃癌細胞PD-L1 的表達,促進腫瘤免疫逃逸和耐藥[6-7]。然而,GCMSC 促進胃癌細胞PD-L1 表達的具體特征不明確。本研究觀察GCMSC 對胃癌細胞PD-L1表達的促進作用,并探究胃癌細胞PD-L1 表達對GCMSC 的反應(yīng)性和異質(zhì)性,為進一步研究GCMSC調(diào)控腫瘤細胞PD-L1 的表達機制提供依據(jù)。

        1 材料與方法

        1.1 細胞株

        1.1.1 GCMSC分離與胃癌細胞株的培養(yǎng) GCMSC 的分離獲得江蘇大學(xué)倫理委員會的批準(zhǔn)。將江蘇大學(xué)附屬昆山醫(yī)院收治的胃癌患者手術(shù)取得的新鮮胃癌組織置于75%乙醇中30 s,沖洗表面的血液等雜質(zhì)后轉(zhuǎn)移至含有10 000 u/mL 鏈霉素和青霉素的磷酸鹽緩沖液(phosphate buffer saline, PBS)中15 min備用。在超凈臺中將胃癌組織用無菌手術(shù)剪和鑷子分成約1 mm×1 mm×1 mm 的小塊,均勻鋪于60 mm 細胞培養(yǎng)皿中,在37 ℃、5%二氧化碳細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)15 min 后加入1 mL 含有10%胎牛血清(fetal bovine serum, FBS)的無菌α-MEM 營養(yǎng)液,繼續(xù)培養(yǎng)10 d 左右,每隔3 天更換新鮮培養(yǎng)基。顯微鏡下觀察胃癌組織附近細長梭形呈漩渦狀分布的細胞即為GCMSC,待GCMSC 密度擴增至70%~80%時,將GCMSC 用0.25%胰蛋白酶消化離心后繼續(xù)擴增6~10 代,選擇狀態(tài)較好的細胞用于實驗。原代胃癌細胞來源于患者的胃癌組織,將患者的新鮮胃癌組織絞碎,在3 mg/mL Ⅳ型膠原酶(北京索萊寶科技有限公司,cas:9001-12-1)中分離,并在37 ℃下稀釋,然后將組織懸液置于培養(yǎng)皿中,在含10% FBS 的RPMI 1640 培養(yǎng)基中培養(yǎng)。胃癌細胞株SGC-7901 和MGC-803[美國模式培養(yǎng)物集存庫(American type culture collection, ATCC)]用含10 %FBS 的RPMI 1640 培養(yǎng)基于37 ℃、5%二氧化碳飽和濕度培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。采用2.5 g/L 胰酶消化細胞,每3~5 d 傳代。

        1.1.2 制備GCMSC 條件培養(yǎng)基(GCMSC condition medium, GCMSC-CM) GCMSC 在100 mm 細胞培養(yǎng)皿中培養(yǎng),當(dāng)細胞融合度達70%左右時更換新鮮培養(yǎng)基。48 h 后收集細胞培養(yǎng)上清液,3 300 r/min離心5 min,采用33 mm、0.22 μm 一次性針頭式濾器過濾上清液,置入-80 ℃冰箱冷凍保存?zhèn)溆谩?/p>

        1.2 方法

        1.2.1 GCMSC 成脂成骨誘導(dǎo) 將 0.1 mL Supplement Mix Ⅰ和Supplement Mix Ⅱ 加入100 mL基礎(chǔ)分化培養(yǎng)基中配制成完全分化培養(yǎng)基。取3~6 代GCMSC 接種于6 孔細胞培養(yǎng)板,用含有10%FBS 的α-MEM 置于37 ℃、5%二氧化碳的飽和濕度培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。24 h 后觀察細胞,待細胞融合度達到80%左右時更換 2 mL BI MSCgo?間充質(zhì)干細胞成脂或成骨誘導(dǎo)分化培養(yǎng)基(南京福麥斯生物技術(shù)有限公司)繼續(xù)培養(yǎng)12 d,每3 d 換液。油紅O 及茜素紅染色步驟參照Viva Cell Biosciences 試劑盒(上海龍?zhí)锷锛夹g(shù)有限公司)說明書。根據(jù)試劑盒說明書步驟對誘導(dǎo)完成的細胞進行染色,觀察細胞內(nèi)脂滴及礦化結(jié)節(jié)形成大小和數(shù)量。

        1.2.2 流式細胞儀檢測表面標(biāo)記及細胞分選PD-L1陰性和PD-L1 陽性胃癌細胞 取待測胃癌細胞株SGC-7901 按5×105個/孔接種于6 孔板中培養(yǎng)48 h。0.25%胰酶消化細胞,3 300 r/min 離心 5 min,PBS洗滌3 次,棄上清液,收集細胞團塊保存于1.5 mL EP 管中,400 μL PBS 重懸,分別加入3 μL 相應(yīng)流式抗體。4 ℃避光孵育30 min,3 300 r/min離心5 min后200 μL PBS 重懸。流式細胞儀檢測表面標(biāo)記表達,F(xiàn)lowJo 7.6 軟件分析檢測結(jié)果。采用流式細胞儀分選PD-L1 陰性和PD-L1 陽性胃癌細胞。

        1.2.3 實時熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)(quantitative realtime polymerase chain reaction, qRT-PCR)檢測PDL1 mRNA 表達 在GCMSC-CM 中加入IL-8 和IL-6的中和抗體,濃度為5 μg/mL,室溫孵育1 h 后作用于胃癌細胞株SGC-7901 和MGC-803,24 h 后收集細胞。將細胞分為4 組:以GCMSC-CM 未處理組為Control 組、GCMSC-CM 處理組、GCMSC-CM+anti-IL-8 組及GCMSC-CM+anti-IL-6 組。向各組收集好的細胞中加入1 mL TRIzol 裂解液,室溫靜置10 min 后用移液槍吹打細胞轉(zhuǎn)移至1.5 mL EP 管。加入200 μL 氯仿,手動震蕩30 s,4 ℃靜置15 min直至分層。吸取300 μL 上清液,加入300 μL 異丙醇,4 ℃下靜置2 h。4 ℃、11 441 r/min 離心15 min,棄上清液,加入DEPC 水配制的75%乙醇,4 ℃、9 342 r/min 離心10 min。棄上清液,自然晾干至沉淀呈半透明狀,加入20 μL DEPC 水溶解沉淀,分光光度計檢測RNA 純度及濃度,置入-80 ℃冰箱冷凍保存?zhèn)溆?。qRT-PCR 檢測mRNA,嚴(yán)格按照試劑盒(康為世紀(jì)生物科技股份有限公司,CW2602M)說明書操作。將提取的RNA、Primer Mix、dNTP Mix、DTT、RT Buffer、HiFiScript 及無RNA 酶水置于冰上解凍備用,按比例配制20 μL 反應(yīng)體系:dNTP Mix 4 μL,Primer Mix 2 μL, 5 × RT Buffer 4 μL,DTT 2 μL,Total RNA 1 μg,HiFiScript 1 μL,RNase free ddH2O 補足至20 μL。采用定量分析儀(ABI Quanstudio 3)進行逆轉(zhuǎn)錄,42 ℃反應(yīng)15 min,85 ℃反應(yīng)5 min,進行qRT-PCR,得出CT 值后采用2-ΔΔCt法計算目的基因mRNA 相對表達量。PDL1:正向引物5'-TCACTTGGTAATTCTGGGAGC-3',反向引物5'-CTTTGAGTTTGTATCTTGGATGCC-3',引物長度124 bp。內(nèi)參基因GAPDH:正向引物5'-GGAGCGAGATCCCTCCAAAAT-3',反向引物5'-GG CTGTTGTCATACTTCTCATGG-3',引物長度197 bp。

        1.2.4 Western blotting 檢測PD-L1 蛋白表達 在GCMSC-CM 中加入IL-8 中和抗體及IgG,濃度為5.0 μg/mL,室溫孵育1 h 后作用于胃癌細胞株SGC-7901,24 h 后收集細胞。Rapamycin 預(yù)處理胃癌細胞株SGC-7901,濃度為0.1 μmol/L,DMSO 量與Rapamycin 一致,1 h 后撤除并加入GCMSC-CM 繼續(xù)培養(yǎng)24 h 后收集細胞。將細胞分為6 組:以GCMSC-CM 未處理組為Control 組、GCMSC-CM 處理組、GCMSC-CM+IgG 組、GCMSC-CM+anti-IL-8 組、GCMSC-CM+Reparixin 組及GCMSC-CM+DMSO 組。采用PIPA 裂解液提取收集好的細胞全蛋白,BCA蛋白測定試劑盒(CWBIO)定量檢測PD-L1 蛋白表達。以150 μg 為蛋白上樣量,向電泳槽中加入1 L電泳液,60 V 電泳2 h 后配制轉(zhuǎn)膜液預(yù)冷,將蛋白分離膠轉(zhuǎn)印至甲醇活化后的聚偏二氟乙烯(Polyvinylidenefluoride, PVDF)膜上(350 mA,2 h,4 ℃),50 g/L 脫脂奶粉室溫封閉2~3 h,倒去封閉液,加入稀釋后的一抗,4 ℃孵育過夜。次日將PVDF 膜置于TBST 緩沖液中,于室溫輕輕搖動洗膜30 min,每10 min 更換TBST 緩沖液。倒去TBST,加入相應(yīng)二抗,37 ℃孵育1 h,TBST 清洗30 min。滴加HRP 發(fā)光底物用全自動凝膠成像儀進行PVDF膜成像。內(nèi)參蛋白是GAPDH(南京福麥斯生物技術(shù)有限公司)。

        1.2.5 酶 聯(lián) 免 疫 吸 附 試 驗(enzyme-linked immunoadsordent assay, ELISA)檢測血清游離PD-L1和IL-8水平 收集胃癌患者手術(shù)前血清樣本,分裝后-80 ℃冷凍保存,采用ELISA 檢測血清游離PDL1(sPD-L1)和IL-8 的水平,具體步驟參照ELISA試劑盒(南京福麥斯生物技術(shù)有限公司)說明書。

        1.3 統(tǒng)計學(xué)方法

        數(shù)據(jù)分析采用SPSS 16.0 統(tǒng)計軟件。計量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示,比較用單因素方差分析的Newman-Keuls 檢驗,兩兩比較用非配對t檢驗;相關(guān)性分析用Pearson 法。P<0.05 為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

        2 結(jié)果

        2.1 GCMSC鑒定結(jié)果

        體外成脂成骨誘導(dǎo)實驗顯示,GCMSC 可誘導(dǎo)分化為骨細胞和脂肪細胞(見圖1A)。免疫表型分析顯示,GCMSC 中CD45、CD34、CD19 呈低表達,CD105、CD90 和CD29 呈高表達(見圖1B)。

        圖1 GCMSC鑒定

        2.2 GCMSC-CM 促進胃癌細胞株P(guān)D-L1表達的持續(xù)性

        GCMSC-CM 處理SGC-7901 細胞24、48 和72 h后,PD-L1 mRNA 相對表達量分別為(5.07±0.45)、(5.09±0.53)、(4.93±0.20),去除GCMSC-CM 24、48 h 后,PD-L1 mRNA 相對表達量分別為(2.26±0.18)、(1.84±0.14),未處理為(1.01±0.16)。6 個不同時間的PD-L1 mRNA 相對表達量比較,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(F=69.670,P=0.000)。GCMSC-CM 處理SGC-7901 細胞24、48、72 h 后,SGC-7901 細胞的PD-L1 mRNA 相對表達量較未處理時均上調(diào);去除GCMSC-CM 后48 h,SGC-7901 細胞的PD-L1 mRNA相對表達量逐漸恢復(fù)(見圖2A)。

        圖2 不同時間胃癌細胞株P(guān)D-L1 mRNA和蛋白表達的比較

        GCMSC-CM 處理MGC-803 細胞24、48 和72 h后,PD-L1 mRNA 相對表達量分別為(3.22±0.05)、(2.39±0.27)、(2.20±0.01),去除GCMSC-CM 24、48 h 后,PD-L1 mRNA 相對表達量分別為(1.88±0.56)、(0.60±0.10),未處理為(1.08±0.42)。6 個不同時間的PD-L1 mRNA 相對表達量比較,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(F=13.310,P=0.000)。GCMSC-CM 處理MGC-803 細胞24、48 和72 h 后,MGC-803 細胞的PD-L1 mRNA 相對表達量較未處理時均上調(diào);去除GCMSC-CM 48 h 后,MGC-803 細胞的PD-L1 mRNA相對表達量逐漸恢復(fù)(見圖2B)。

        Western blotting 結(jié)果也顯示,GCMSC-CM 處理SGC-7901 細胞24 h 后PD-L1 蛋白表達增加,PD-L1蛋白相對表達量為(1.07±0.12),去除GCMSC-CM后72 h 內(nèi)PD-L1 的表達逐漸恢復(fù),去除GCMSCCM 24、48、72 h 后,PD-L1 蛋白相對表達量分別為(0.9±0.05)、(0.72±0.03)、(0.52±0.11),未處理為(0.78±0.06)(見圖2C)。

        2.3 GCMSC通過分泌IL-6和IL-8上調(diào)胃癌細胞株中PD-L1的表達

        IL-8 或IL-6 中和抗體作用GCMSC-CM 后處理SGC-7901 和MGC-803 細胞24 h,采用qRT-PCR 檢測PD-L1 mRNA 表達。結(jié)果表明,GCMSC-CM 處理后,SGC-7901 細胞PD-L1 mRNA 相對表達量為(3.87±0.29),使用IL-8 或IL-6 中和抗體作用GCMSC-CM 處理組分別為(2.42±0.33)、(3.09±0.26),未處理為(1.01±0.12)。不同處理組SGC-7901 細胞PD-L1 mRNA 相對表達量比較,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(F=42.300,P=0.000)(見圖3A)。

        圖3 GCMSC-CM促進胃癌細胞PD-L1表達

        MGC-803 細胞在接受GCMSC-CM 后處理后,PD-L1 mRNA 相對表達量為(3.76±0.32),使用IL-8 或IL-6 中和抗體作用GCMSC-CM 處理組分別為(1.62±0.53)、(3.22±0.05),未處理為(1.05±0.33)。不同處理組MGC-803 細胞PD-L1 mRNA 相對表達量比較,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(F=17.410,P=0.000)(見圖3B)。

        Western blotting 結(jié)果也顯示,當(dāng)加入Reparixin時,GCMSC-CM 對GC 細胞PD-L1 的促進作用顯著降低。GCMSC-CM 未處理組PD-L1 蛋白相對表達量為(0.52±0.06),GCMSC-CM 處理后,SGC-7901 細胞PD-L1 蛋白相對表達量為(0.94±0.08),GCMSCCM+IgG 組和使用IL-8 中和抗體作用GCMSC-CM 處理組分別為(0.87±0.07)和(0.70±0.11),GCMSCCM+Reparixin 組和GCMSC-CM+DMSO 組PD-L1 蛋白相對表達量分別為(0.4±0.05)和(0.7±0.09)(見圖3C)。

        2.4 GC患者sPD-L1與IL-8的相關(guān)性

        35 例GC 患者血清sPD-L1 水平為(38.78±1.96),IL-8 水平為(32.76±9.71)(見圖4)。GC 患者血清IL-8 與sPD-L1 水平呈正相關(guān)(r=0.347,P=0.041)。見圖5。

        圖4 GC患者血清IL-8和sPD-L1的水平

        圖5 GC患者IL-8和sPD-L1的相關(guān)性

        2.5 GCMSC-CM促進PD-L1表達存在GC異質(zhì)性

        GCMSC-CM 處理SGC-7901 24 h 后,流式細胞術(shù)分離PD-L1 陰性和PD-L1 陽性細胞,再次用GCMSC-CM 處理分選細胞,檢測PD-L1 的表達。流式細胞術(shù)結(jié)果顯示,再次用GCMSC-CM 處理后,PD-L1 陽性細胞組PD-L1 表達水平升高(P<0.05),而PD-L1 陰性細胞組PD-L1 表達并未升高(P>0.05)(見圖6A)。GCMSC-CM 處理GC 組織中分離出的原代GC 細胞,結(jié)果顯示,原代GC 細胞PD-L1水平也升高。將GCMSC-CM 組的PD-L1 陽性和PDL1 陰性細胞進行分選(見圖6B),用含10% FBS 的RPMI 1640 培養(yǎng)24 h,結(jié)果顯示,撤除GCMSC-CM后,PD-L1 陽性的原代GC 細胞中PD-L1 的表達降低(見圖6C)。

        圖6 GC 細胞中PD-L1表達存在對GCMSC-CM 反應(yīng)異質(zhì)性

        3 討論

        腫瘤微環(huán)境中,免疫細胞和細胞因子在調(diào)控腫瘤生長及轉(zhuǎn)移中發(fā)揮了重要作用。PD-L1 作為一個免疫抑制分子能夠被腫瘤細胞等多種細胞調(diào)控。近年來,免疫檢查點抑制劑(ICIs)療法,尤其是抗PD-1/PD-L1 療法,已成為除化療和放療外應(yīng)用最普遍的胃癌治療手段之一。但PD-L1 在腫瘤微環(huán)境中具體受到哪些細胞影響尚未闡明[8-15]。

        間充質(zhì)干細胞是一群多能干細胞,擁有自我更新及多向分化的能力,具有免疫調(diào)節(jié)功能,最初是骨髓中分離獲得,目前已經(jīng)可以從多種組織中獲取,如臍帶、皮膚、肌肉、牙髓和脂肪組織等[16-18]。早期實驗研究證明骨髓間充質(zhì)干細胞通過旁分泌可溶性細胞因子或Exosomes 促進腫瘤體內(nèi)生長及血管形成[19-20]。骨髓間充質(zhì)干細胞對腫瘤具有趨向性,在多種趨化因子的作用下到達腫瘤微環(huán)境并被馴化為腫瘤相關(guān)間充質(zhì)干細胞[21]。多發(fā)性骨髓瘤患者來源的骨髓間充質(zhì)干細胞可通過PD-1/PD-L1 軸誘導(dǎo)CD8+T 細胞死亡,抑制CD8+T 細胞穿孔素和顆粒酶B 的釋放并促進骨髓瘤細胞免疫逃逸[22]。本團隊在臨床胃癌組織中分離培養(yǎng)出較骨髓間充質(zhì)干細胞具有更強促瘤潛能的GCMSC[23]。實驗結(jié)果表明,胃癌微環(huán)境中T 細胞、GCMSC 及腫瘤細胞相互作用共同調(diào)節(jié)PD-L1 表達,進一步促進胃癌細胞抵抗CTL 的細胞毒性作用并發(fā)生免疫逃逸[24-26]。

        本研究從胃癌患者組織中分離培養(yǎng)出GCMSC并收集GCMSC 上清液。胃癌細胞與GCMSC-CM 共培養(yǎng)24、48 和72 h 后,PD-L1 表達均明顯升高,然而當(dāng)撤除GCMSC-CM 后,胃癌細胞的PD-L1 表達均無法保持在一個較高水平,表明胃癌細胞PD-L1 表達的升高依賴于GCMSC-CM 的持續(xù)作用。為了進一步驗證GCMSC 對胃癌細胞PD-L1 的作用,本研究使用IL-6 和IL-8 的中和抗體抑制了胃癌細胞中IL-6和IL-8 的表達,當(dāng)使用IL-6 或IL-8 中和抗體阻斷GCMSC-CM IL-6 或IL-8 與其受體結(jié)合時,GCMSCCM 促進PD-L1 表達作用被逆轉(zhuǎn),尤其是阻斷IL-8后效果更明顯,表明IL-8 通過與CXCR1/2 相互作用激活偶聯(lián)G 蛋白,進而激活信號分子調(diào)控基因表達。Reparixin 是CXCR1/2 激活的非競爭性變構(gòu)抑制劑。Western blotting 檢測結(jié)果也顯示,當(dāng)加入Reparixin時,GCMSC-CM 對GC 細胞PD-L1 的促進作用明顯減弱。同時,ELISA 結(jié)果顯示胃癌患者血清IL-8 和PD-L1 的表達呈正相關(guān),進一步證明GCMSC 通過IL-6 和IL-8 促進PD-L1 的表達。為進一步探討GCMSC 上調(diào)胃癌細胞PD-L1 表達是否存在異質(zhì)性,本研究用流式細胞術(shù)將GCMSC-CM 處理后的胃癌細胞分為PD-L1 陰性和PD-L1 陽性細胞群,結(jié)果顯示,PD-L1 陽性細胞群被GCMSC-CM 再次作用后,PD-L1 水平持續(xù)升高而PD-L1 陰性細胞群沒有明顯變化。這些結(jié)果表明GCMSC 對胃癌細胞PD-L1 的上調(diào)作用的異質(zhì)性,不同細胞對GCMSC-CM 處理的反應(yīng)不同,其具體機制還需進一步探索。WEI 等[27]分析9 769 例腫瘤患者的臨床資料,其中包含32 種不同類型的腫瘤,發(fā)現(xiàn)不同免疫微環(huán)境下PD-L1 陽性腫瘤細胞存在異質(zhì)性。巨噬細胞通過激活NFκB 信號上調(diào)腫瘤細胞PD-L1 表達,進而促進腫瘤細胞惡性增殖、血管形成及腫瘤轉(zhuǎn)移,并抵抗傳統(tǒng)化療藥物、CTL 的細胞毒性作用及抗PD-1/PD-L1 抗體治療;而活化的T 細胞激活STAT1 信號形成的PDL1 陽性腫瘤細胞則敏感且易發(fā)生凋亡。此現(xiàn)象揭示了腫瘤內(nèi)部微環(huán)境的復(fù)雜性,深入了解腫瘤微環(huán)境,闡明腫瘤細胞PD-L1 表達的調(diào)控機制對提高免疫治療效率非常關(guān)鍵。

        綜上所述,GCMSC-CM 通過IL-6 和IL-8 上調(diào)胃癌細胞中PD-L1 的表達并且這種上調(diào)作用依賴于GCMSC-CM 的持續(xù)作用。此外,GCMSC-CM 對胃癌細胞的作用取決于胃癌細胞本身PD-L1 的表達。本研究僅闡述了GCMSC-CM 影響胃癌細胞PD-L1 的異質(zhì)性,后續(xù)將深入探索其具體機制,為GCMSC 治療胃癌提供新的思路。

        猜你喜歡
        充質(zhì)細胞株異質(zhì)性
        miR-490-3p調(diào)控SW1990胰腺癌細胞上皮間充質(zhì)轉(zhuǎn)化
        間充質(zhì)干細胞外泌體在口腔組織再生中的研究進展
        基于可持續(xù)發(fā)展的異質(zhì)性債務(wù)治理與制度完善
        間充質(zhì)干細胞治療老年衰弱研究進展
        三七總皂苷對A549細胞上皮-間充質(zhì)轉(zhuǎn)化的影響
        現(xiàn)代社區(qū)異質(zhì)性的變遷與啟示
        穩(wěn)定敲低MYH10基因細胞株的建立
        Rab27A和Rab27B在4種不同人肝癌細胞株中的表達
        穩(wěn)定抑制PAK2蛋白表達的HUH—7細胞株的建立
        1949年前譯本的民族性和異質(zhì)性追考
        亚洲国产精品日本无码网站| 精品国产午夜久久久久九九| 婷婷开心五月综合基地| 国产亚洲中文字幕一区| 99在线精品免费视频| 亚洲精品国产av成拍色拍| 亚洲成a∨人片在线观看无码 | 一本色综合网久久| 又粗又粗又黄又硬又深色的| 中年熟妇的大黑p| 99热视热频这里只有精品| 日本a一区二区三区在线| 亚洲日本国产精品久久| 国产成人精品无码一区二区老年人 | 综合色就爱涩涩涩综合婷婷| 久久国产精久久精产国| 国产精品女同久久免费观看| 国产护士一区二区三区| 亚洲第一网站免费视频| 亚洲熟妇无码一区二区三区导航| 色窝窝在线无码中文| 国产免费人成视频在线观看播放| 国产精品久久国产精麻豆| 国99精品无码一区二区三区| 伊人狠狠色丁香婷婷综合| 久久久精品免费观看国产| 久久久精品亚洲懂色av| 蜜臀av毛片一区二区三区| 国产又黄又爽又色的免费| 一级一级毛片无码免费视频| 人妻熟女中文字幕av| 欧美国产亚洲日韩在线二区| 亚洲成a人片在线观看天堂无码| 女人被躁到高潮嗷嗷叫| 日韩人妻免费视频一专区| 日韩欧美成人免费观看| 青草热久精品视频在线观看| 国产丝袜在线福利观看| 97在线视频人妻无码| аⅴ资源天堂资源库在线| 亚洲—本道中文字幕久久66|