黃超,方興剛,陳璐,陳漢玉,陳曾鳳

腦膠質(zhì)瘤是常見(jiàn)的顱內(nèi)惡性腫瘤,約占全部顱內(nèi)腫瘤的50%,在兒童惡性腫瘤中排第二位,臨床療效差,積極開(kāi)發(fā)改進(jìn)其治療技術(shù)有重要臨床價(jià)值[1-2]。蛋白激酶B(protein kinase B,Akt)/雙微體同源基因2(mouse double minute 2,MDM2)/p53通路與癌癥的發(fā)生、惡性進(jìn)展關(guān)系密切,使該信號(hào)失活可抑制肝癌、口腔鱗狀細(xì)胞癌細(xì)胞的惡性進(jìn)展[3-4],還可抑制神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞的增殖、體內(nèi)生長(zhǎng)和運(yùn)動(dòng),延緩神經(jīng)膠質(zhì)瘤的發(fā)生及惡性進(jìn)展[5-6];由此可知Akt/MDM2/p53是腦膠質(zhì)瘤的重要治療靶點(diǎn)。益母草堿是自中藥益母草中分離出的一種抗腫瘤化合物,在前列腺癌、急性髓細(xì)胞白血病中均發(fā)揮抗癌活性,且抑制Akt信號(hào)激活是益母草堿發(fā)揮抗癌活性的機(jī)制之一[7-8]。因而預(yù)測(cè)益母草堿可能通過(guò)調(diào)節(jié)Akt/MDM2/p53信號(hào)通路而介導(dǎo)腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞的惡性生物學(xué)行為。本研究通過(guò)體外培養(yǎng)小鼠腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞GL261并構(gòu)建其顱內(nèi)膠質(zhì)瘤小鼠模型,對(duì)此預(yù)測(cè)進(jìn)行驗(yàn)證分析,報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 材料 (1)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物:雄性C57BL/6小鼠(SPF級(jí),7～8周齡,體質(zhì)量19～22 g)購(gòu)自武漢有度生物科技有限公司,生產(chǎn)許可證號(hào)SCXK(鄂)2015-0025,動(dòng)物飼養(yǎng)及實(shí)驗(yàn)操作符合《實(shí)驗(yàn)動(dòng)物管理?xiàng)l例》;GL261小鼠膠質(zhì)瘤細(xì)胞購(gòu)自上海雅吉生物科技有限公司。(2)試藥、試劑:SC79(Akt激活劑,批號(hào)20220806)購(gòu)自上海碧云天生物公司;益母草堿(批號(hào)111823-201704)購(gòu)自安徽新星藥物開(kāi)發(fā)有限責(zé)任公司;兔抗小鼠p-Akt、Akt、p-MDM2、MDM2、p53、Ki67及甘油醛-3-磷酸脫氫酶(glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase,GAPDH)一抗、辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記(horseradish peroxidase,HRP)驢抗兔二抗、膜聯(lián)蛋白V(Annexin V)-異硫氰酸熒光素(fluorescein isothiocyanate,FITC)/碘化丙啶(propidium iodide,PI)細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒、結(jié)晶紫染色液、免疫組織化學(xué)試劑盒、TUNEL細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒購(gòu)自北京百奧萊博科技有限公司;CCK-8細(xì)胞活力檢測(cè)試劑盒購(gòu)自赫澎(上海)生物科技有限公司。(3)儀器、設(shè)備:JMB-SA全波長(zhǎng)酶標(biāo)儀購(gòu)自上海精若科學(xué)儀器有限公司;FACS Calibur全自動(dòng)流式細(xì)胞儀購(gòu)自上海佐明機(jī)械設(shè)備貿(mào)易有限公司;PH-3DMC倒置生物顯微鏡購(gòu)自微特視界科技(深圳)有限公司;HS-4080全自動(dòng)冰凍切片機(jī)購(gòu)自山東歐萊博醫(yī)療器械有限公司;PowerPac HV電泳與轉(zhuǎn)印設(shè)備電源、Trans-Blot?小型蛋白轉(zhuǎn)印槽、Mini-PROTEAN Tetra小型蛋白垂直電泳槽購(gòu)自美國(guó)伯樂(lè)公司。

1.2 細(xì)胞實(shí)驗(yàn)方法 2022年3—9月于湖北省十堰市太和醫(yī)院實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

1.2.1 篩選益母草堿對(duì)GL261細(xì)胞的最佳藥物作用濃度:解凍復(fù)蘇購(gòu)買的凍存小鼠腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞GL261,以DMEM培養(yǎng)基(含10%胎牛血清+1%雙抗)培養(yǎng),傳代后接種在96孔板培養(yǎng)(1×104個(gè)/孔),細(xì)胞進(jìn)入對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期后分別以0、0.4、0.8、1.2、1.6、2.0 mmol/L濃度益母草堿處理24 h[9],以0 mmol/L益母草堿處理細(xì)胞做對(duì)照組,同時(shí)以不接種細(xì)胞的培養(yǎng)孔做空白對(duì)照組,每孔細(xì)胞加入CCK-8試劑20 μl孵育1.5 h后,按CCK-8細(xì)胞活力檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書指導(dǎo)測(cè)定各組細(xì)胞吸光度,按下式算出各組細(xì)胞存活率:存活率=(益母草堿處理組吸光度-空白對(duì)照組吸光度)/(0 mmol/L益母草堿處理組吸光度-空白對(duì)照組吸光度)×100%。

1.2.2 分組處理細(xì)胞并采集標(biāo)本:GL261細(xì)胞傳代后接種在12孔板(2.5×105個(gè)/孔),隨機(jī)分為對(duì)照組、益母草堿組、益母草堿+SC79組,細(xì)胞進(jìn)入對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期后分組進(jìn)行處理:益母草堿組細(xì)胞以終濃度益母草堿1.6 mmol/L處理,益母草堿+SC79組細(xì)胞以終濃度1.6 mmol/L益母草堿和終濃度5.0 μmol/L的SC79聯(lián)合處理[10],對(duì)照組細(xì)胞不做處理,24 h后收集各組細(xì)胞備用。

1.2.3 蛋白免疫印記法檢測(cè)各組GL261細(xì)胞Akt/MDM2/p53通路相關(guān)蛋白表達(dá)情況:以RIPA裂解液分別提取1.2.2中收集的各組GL261細(xì)胞總蛋白,測(cè)出其濃度后沸水浴內(nèi)加熱變性,每組取出25 μg行電泳實(shí)驗(yàn)后電轉(zhuǎn),將其按分子量大小分離后移到硝酸纖維素膜上,封閉其非特異抗原后分別孵育兔抗小鼠p-Akt(1∶1 000)、Akt(1∶1 000)、p-MDM2(1∶1 000)、MDM2(1∶1 000)、p53(1∶2 000)、GAPDH(1∶2 000)一抗,洗膜后孵育HRP標(biāo)記驢抗兔二抗(1∶2 000)進(jìn)行抗原抗體反應(yīng),洗膜后以化學(xué)發(fā)光法顯影,采集各組蛋白條帶圖像后以Image J軟件定量其灰度值,按下式算出其相對(duì)表達(dá):待測(cè)蛋白相對(duì)表達(dá)=待測(cè)蛋白灰度值/內(nèi)參GAPDH蛋白灰度值。

1.2.4 CCK-8法檢測(cè)各組GL261細(xì)胞增殖、凋亡、遷移和侵襲情況:GL261細(xì)胞傳代接種在96孔板并按照1.2.2中方法分組處理24 h,采用CCK-8法檢測(cè)各組細(xì)胞存活率,具體方法見(jiàn)1.2.1。

1.2.4.1 流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)各組GL261細(xì)胞凋亡 GL261細(xì)胞傳代接種在12孔板并按照1.2.2中方法分組處理24 h,收集各組細(xì)胞以磷酸鹽緩沖液(phosphate buffered saline,PBS)洗滌后計(jì)數(shù),每組取5×105個(gè)細(xì)胞用Annexin V-FITC細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒按其說(shuō)明指導(dǎo)行FITC及PI雙染,洗滌后置于流式細(xì)胞儀內(nèi)檢測(cè)各組細(xì)胞凋亡率。

1.2.4.2 細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)檢測(cè)各組GL261細(xì)胞遷移 GL261細(xì)胞傳代接種在12孔板并按照1.2.2中方法分組處理24 h,收集各組細(xì)胞PBS洗滌、計(jì)數(shù)后每組取5×106個(gè)細(xì)胞接種在24孔板培養(yǎng)10 h,于每孔中央劃一條直線后除去劃痕內(nèi)細(xì)胞,以倒置生物顯微鏡拍照后以Image J軟件定量各組細(xì)胞劃痕面積S0h,繼續(xù)培養(yǎng)24 h后再次拍照后定量各組劃痕面積S24h,按下式計(jì)算各組細(xì)胞遷移率:遷移率(%)=(S0h-S24h)/S0h×100%。

1.2.4.3 Transwell實(shí)驗(yàn)檢測(cè)各組GL261細(xì)胞侵襲:GL261細(xì)胞傳代接種在12孔板并按照1.2.2中方法分組處理24 h,收集各組細(xì)胞PBS洗滌、以不含胎牛血清的DMEM培養(yǎng)基重懸計(jì)數(shù)后,每組取5×106個(gè)細(xì)胞接種在以基質(zhì)膠包被的24孔Transwell板上室并同時(shí)于下室中加入DMEM培養(yǎng)基(含10%胎牛血清+1%雙抗),培養(yǎng)24 h后取下室細(xì)胞洗滌、固定、行結(jié)晶紫染色、洗滌,以倒置生物顯微鏡拍照后以Image J軟件定量各組侵襲到下室的細(xì)胞數(shù)量,即為各組細(xì)胞侵襲數(shù)。

1.3 動(dòng)物實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 構(gòu)建顱內(nèi)膠質(zhì)瘤小鼠模型并篩選其益母草堿最佳作用劑量:參考文獻(xiàn)[11]構(gòu)建顱內(nèi)膠質(zhì)瘤小鼠模型,取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的GL261細(xì)胞,計(jì)數(shù)后制成密度為2×105/μl的單細(xì)胞懸液,以4%戊巴比妥鈉(0.01 ml/g)腹腔注射麻醉小鼠后俯臥固定在腦立體定位儀上,頭頂去毛備皮后分離暴露顱骨,定位矢狀縫右2 mm、前囟前1 mm處開(kāi)骨窗,于小鼠右側(cè)腦尾狀核區(qū)接種上述細(xì)胞懸液5 μl,進(jìn)針深至硬腦膜下3 mm,緩慢注射后留針3 min,然后緩慢拔針并縫合傷口,消毒后繼續(xù)飼養(yǎng),共造模33只,死亡3只,成功30只,隨機(jī)數(shù)字表法分為對(duì)照組、益母草堿低劑量組、益母草堿中劑量組、益母草堿高劑量組、益母草堿高劑量+SC79組,每組6只,益母草堿低劑量組、益母草堿中劑量組、益母草堿高劑量組小鼠分別以90、180、360 ng/g益母草堿(于造模后1 d開(kāi)始處理,以生理鹽水溶解制為9、18、36 ng/μl的藥液,灌胃10 μl/g,1次/d)灌胃[12-13];同時(shí)腹腔注射生理鹽水10 μl/g(于造模后2周開(kāi)始處理,1次/d);益母草堿高劑量+SC79組小鼠以益母草堿360 ng/g(于造模后1 d開(kāi)始處理,以生理鹽水溶解制為36 ng/μl藥液,灌胃10 μl/g,1次/d)灌胃,同時(shí)腹腔注射SC79 40 μg/g(于造模后2周開(kāi)始處理,以生理鹽水溶解制為4 μg/μl的藥液,注射10 μl/g,1次/d)[14],至造模后3周給藥結(jié)束。

1.3.2 小鼠顱內(nèi)膠質(zhì)瘤細(xì)胞增殖:給藥結(jié)束24 h后頸椎脫臼處死各組小鼠,剪下頭顱并解剖取出大腦內(nèi)膠質(zhì)瘤組織,OCT包埋后速凍成塊,全自動(dòng)冰凍切片機(jī)切片,復(fù)溫后置于預(yù)冷丙酮內(nèi)固定,以3%過(guò)氧化氫酶、兔源抗小鼠Ki67一抗依次孵育后,采用免疫組織化學(xué)試劑盒按其說(shuō)明指導(dǎo)行免疫組化染色,封片后以倒置生物顯微鏡采集任意6個(gè)視野圖片,采用Image J軟件定量各組Ki67陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)和總細(xì)胞數(shù)后按下式計(jì)算其Ki67陽(yáng)性率:Ki67陽(yáng)性率=Ki67陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)/總細(xì)胞數(shù)×100%。

1.3.3 小鼠顱內(nèi)膠質(zhì)瘤細(xì)胞凋亡情況檢測(cè):按1.3.1中方法構(gòu)建顱內(nèi)膠質(zhì)瘤小鼠模型18只,隨機(jī)數(shù)字表法分為對(duì)照組、益母草堿組、益母草堿+SC79組,每組6只,以360 ng/g益母草堿和40 μg/g的SC79分組處理,具體給藥方式見(jiàn)1.3.3,給藥結(jié)束24 h后頸椎脫臼處死各組小鼠,取腦內(nèi)膠質(zhì)瘤組織0.4 g置液氮內(nèi)備用,剩余膠質(zhì)瘤組織按1.3.3中方法做冰凍切片、復(fù)溫、固定,用TUNEL細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒按其說(shuō)明指導(dǎo)行TUNEL染色,封片后以倒置生物顯微鏡采集任意6個(gè)視野圖片,采用Image J軟件定量各組凋亡細(xì)胞數(shù)和總細(xì)胞數(shù)后按下式計(jì)算其凋亡率:凋亡率=凋亡細(xì)胞數(shù)/總細(xì)胞數(shù)×100%。

1.3.4 檢測(cè)各組小鼠顱內(nèi)膠質(zhì)瘤組織Akt/MDM2/p53通路相關(guān)蛋白表達(dá):取出1.3.1中各組小鼠膠質(zhì)瘤組織分別提取其中總蛋白,進(jìn)行免疫印跡實(shí)驗(yàn)檢測(cè)其中Akt/MDM2/p53通路相關(guān)蛋白表達(dá)。

2 結(jié) 果

2.1 不同濃度益母草堿對(duì)GL261細(xì)胞增殖的影響比較 0.4、0.8、1.2、1.6、2.0 mmol/L的益母草堿均可抑制GL261細(xì)胞增殖,且抑制作用隨益母草堿濃度的升高而增強(qiáng)(后續(xù)研究選擇接近IC50值的1.6 mmol/L益母草堿),見(jiàn)圖1。

注:與0 mmol/L的益母草堿比較,aP<0.05。

2.2 益母草堿對(duì)GL261細(xì)胞Akt/MDM2/p53通路相關(guān)蛋白的影響比較 與對(duì)照組比較,益母草堿組細(xì)胞p-Akt/Akt、p-MDM2/MDM2降低(P<0.05),p53蛋白表達(dá)升高(P<0.05);與益母草堿組比較,益母草堿+SC79組細(xì)胞p-Akt/Akt、p-MDM2/MDM2升高(P<0.05),p53蛋白表達(dá)降低(P<0.05),見(jiàn)圖2、表1。

表1 各組GL261細(xì)胞Akt/MDM2/p53通路相關(guān)蛋白相對(duì)表達(dá)比較

注:A.對(duì)照組;B.益母草堿組; C.益母草堿+SC79組。

2.3 益母草堿對(duì)GL261細(xì)胞增殖、凋亡、遷移與侵襲的影響比較 與對(duì)照組比較,益母草堿組細(xì)胞存活率、遷移率與侵襲數(shù)降低(P<0.05),凋亡率升高(P<0.05);與益母草堿組比較,益母草堿+SC79組細(xì)胞存活率、遷移率與侵襲數(shù)升高(P<0.05),凋亡率降低(P<0.05),見(jiàn)圖3、圖4、圖5、表2。

表2 各組GL261細(xì)胞存活率、凋亡率、遷移率與侵襲數(shù)比較

圖3 流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)各組GL261細(xì)胞凋亡

圖4 劃痕實(shí)驗(yàn)檢測(cè)各組GL261細(xì)胞遷移(×200)

圖5 Transwell實(shí)驗(yàn)檢測(cè)各組GL261細(xì)胞侵襲(結(jié)晶紫染色,×200)

2.4 不同劑量益母草堿對(duì)小鼠顱內(nèi)膠質(zhì)瘤細(xì)胞增殖的影響比較 與對(duì)照組小鼠顱內(nèi)膠質(zhì)瘤Ki67陽(yáng)性率(65.42±8.83)%比較,益母草堿低劑量組(50.14±4.41)%、益母草堿中劑量組(34.89±3.63)%、益母草堿高劑量組(19.87±2.04)%均降低,并呈劑量依賴性(F/P=57.126/<0.001);與益母草堿組比較,益母草堿+SC79組(59.26±8.12)%升高(t/P=16.050/<0.001),見(jiàn)圖6。

注:紅色箭頭表示Ki67陽(yáng)性染色的細(xì)胞。

2.5 益母草堿對(duì)小鼠顱內(nèi)膠質(zhì)瘤細(xì)胞凋亡的影響比較 與對(duì)照組小鼠顱內(nèi)膠質(zhì)瘤組織細(xì)胞凋亡率(5.16±0.87)%比較,益母草堿組(40.52±7.13)%顯著升高(t/P=20.076/<0.001);與益母草堿組比較,益母草堿+SC79組(8.24±2.06)%顯著降低(t/P=18.328/<0.001),見(jiàn)圖7。

注:紅色箭頭表示TUNEL陽(yáng)性染色的凋亡細(xì)胞。

2.6 益母草堿對(duì)小鼠顱內(nèi)膠質(zhì)瘤組織Akt/MDM2/p53通路相關(guān)蛋白的影響比較 與對(duì)照組比較,益母草堿組膠質(zhì)瘤組織p-Akt/Akt、p-MDM2/MDM2降低(P<0.05),p53蛋白表達(dá)升高(P<0.05);與益母草堿組比較,益母草堿+SC79組膠質(zhì)瘤組織p-Akt/Akt、p-MDM2/MDM2升高(P<0.05),p53蛋白表達(dá)降低(P<0.05),見(jiàn)圖8、表3。

表3 各組小鼠顱內(nèi)膠質(zhì)瘤組織Akt/MDM2/p53通路相關(guān)蛋白相對(duì)表達(dá)比較

注:A.對(duì)照組;B.益母草堿組;C.益母草堿+SC79組。

3 討 論

膠質(zhì)細(xì)胞瘤為浸潤(rùn)性生長(zhǎng),與正常腦組織界限不明顯,手術(shù)治療難以完全切除,臨床中會(huì)輔助進(jìn)行放療、化療,雖可延緩病情進(jìn)展,但復(fù)發(fā)率高并伴隨較大不良反應(yīng),因而仍需積極開(kāi)發(fā)新型治療策略[15-16]。益母草是我國(guó)廣泛應(yīng)用的傳統(tǒng)藥物,具有較強(qiáng)的抗癌活性[17]。益母草堿是益母草主要活性成分,研究顯示,益母草堿可呈時(shí)間和劑量依賴性的方式抑制宮頸癌細(xì)胞生長(zhǎng)、增殖,并可增強(qiáng)其對(duì)順鉑的敏感性[9];在前列腺癌中,益母草堿可通過(guò)促使前列腺癌細(xì)胞周期阻滯和凋亡來(lái)減輕其惡性生物學(xué)行為[7]。在本研究中,以0.4、0.8、1.2、1.6、2.0 mmol/L益母草堿處理GL261細(xì)胞均可抑制其增殖,且抑制作用隨益母草堿濃度的升高而增強(qiáng),以1.6 mmol/L益母草堿處理GL261細(xì)胞可升高其凋亡率,并降低其存活率、遷移率、侵襲數(shù),表明益母草堿可抑制腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞增殖、遷移、侵襲并促使其凋亡。體內(nèi)實(shí)驗(yàn)顯示,90、180、360 ng/g的益母草堿可降低小鼠膠質(zhì)瘤組織中Ki67陽(yáng)性表達(dá)并呈劑量依賴性,以360 ng/g的益母草堿處理顱內(nèi)膠質(zhì)瘤模型小鼠可升高膠質(zhì)瘤組織細(xì)胞凋亡率,證實(shí)益母草堿可抑制腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞在小鼠顱內(nèi)增殖并誘導(dǎo)其凋亡,揭示益母草堿可減弱腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞在體內(nèi)外增殖活性及促使其凋亡,并可抑制其體外遷移及侵襲,對(duì)腦膠質(zhì)瘤發(fā)揮明顯抗癌功效。

Akt/MDM2/p53信號(hào)通路可通過(guò)調(diào)控氧化應(yīng)激、細(xì)胞衰老、DNA損傷等介導(dǎo)癌癥的發(fā)生發(fā)展[18]。Akt磷酸化可促進(jìn)轉(zhuǎn)錄因子MDM2的穩(wěn)定和核易位,從而引發(fā)隨后的泛素化和腫瘤抑制因子p53的降解[19-20]。據(jù)報(bào)道,增強(qiáng)Akt和MDM2磷酸化可降低p53表達(dá),驅(qū)動(dòng)致癌物誘導(dǎo)的肺癌、乳頭狀瘤和肝細(xì)胞癌等惡性腫瘤發(fā)生[21]。Zhao等[22]發(fā)現(xiàn)Akt/MDM2/p53參與介導(dǎo)杜鵑酮對(duì)肺癌的抗腫瘤過(guò)程,Akt激活劑SC79可逆轉(zhuǎn)杜鵑酮對(duì)肺癌細(xì)胞的抗增殖、促凋亡和促細(xì)胞周期阻滯效應(yīng)。Wang等[6]研究證實(shí)抑制膠質(zhì)瘤細(xì)胞中的Akt/MDM2/p53信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)可降低膠質(zhì)瘤細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲能力。此外,Zhuang等[8]發(fā)現(xiàn)益母草堿在抑制急性髓細(xì)胞白血病細(xì)胞增殖生長(zhǎng)過(guò)程中可抑制Akt信號(hào)激活。本研究結(jié)果顯示,以1.6 mmol/L益母草堿處理GL261細(xì)胞及其顱內(nèi)膠質(zhì)瘤模型小鼠可降低p-Akt/Akt、p-MDM2/MDM2并升高p53蛋白表達(dá);因而推測(cè)益母草堿減輕腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞惡性生物學(xué)行為可能是通過(guò)促使Akt/MDM2/p53信號(hào)失活實(shí)現(xiàn)的。為了驗(yàn)證此推測(cè),本研究以益母草堿和Akt激活劑SC79聯(lián)合處理GL261細(xì)胞及其顱內(nèi)膠質(zhì)瘤模型小鼠,結(jié)果顯示SC79可減弱益母草堿對(duì)腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞增殖、體內(nèi)生長(zhǎng)、遷移、侵襲的抑制作用,消除其對(duì)細(xì)胞凋亡的促進(jìn)作用,最終逆轉(zhuǎn)其對(duì)腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞惡性生物學(xué)行為的減輕作用,揭示益母草堿對(duì)腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞發(fā)揮抗癌功效是通過(guò)抑制Akt/MDM2/p53激活實(shí)現(xiàn)的。

綜上所述,益母草堿可抑制腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞增殖、體內(nèi)生長(zhǎng)、遷移與侵襲,促使其在體內(nèi)外凋亡,抑制Akt/MDM2/p53信號(hào)可能是其發(fā)揮抗腫瘤作用的機(jī)制。本研究證實(shí)了益母草堿可作為治療腦膠質(zhì)瘤的候選藥物,并為其臨床應(yīng)用推廣提供了科學(xué)依據(jù),有利于開(kāi)發(fā)更有效的腦膠質(zhì)瘤治療技術(shù)。

利益沖突：所有作者聲明無(wú)利益沖突

作者貢獻(xiàn)聲明

黃超:設(shè)計(jì)研究方案,實(shí)施研究過(guò)程,論文撰寫;方興剛:提出研究思路,實(shí)施研究過(guò)程,分析試驗(yàn)數(shù)據(jù),論文修改;陳璐:提出研究思路,分析試驗(yàn)數(shù)據(jù),資料搜集整理,論文審核;陳漢玉、陳曾鳳:統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,論文修改,論文審核