李彥杰，祁海艷，宋文超，周清波，王長(zhǎng)平，張向宇，肖子淳

(1. 佳木斯大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，黑龍江 佳木斯 154007；2. 佳木斯大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，黑龍江 佳木斯 154007；3. 佳木斯大學(xué)藥學(xué)院，黑龍江 佳木斯 154007)

在現(xiàn)代飼養(yǎng)管理體系中畜禽業(yè)發(fā)展日趨規(guī)?；⒓s化，為了追求更高的生產(chǎn)效率和經(jīng)濟(jì)效益，使得飼養(yǎng)密度逐漸加大，雖然高密度飼養(yǎng)方式在一定程度上能夠提高畜禽產(chǎn)品的產(chǎn)量，但是也給畜禽的福利、健康狀況、產(chǎn)品質(zhì)量等方面帶來了負(fù)面影響。研究表明，飼養(yǎng)密度過大，會(huì)增加畜禽間的相互影響，使個(gè)體采食量、采水量、生活空間不足，引發(fā)動(dòng)物攻擊行為和應(yīng)激反應(yīng)，同時(shí)也增加了畜舍環(huán)境的負(fù)擔(dān)，使畜舍衛(wèi)生條件下降，細(xì)菌病菌繁殖力增加，畜禽抵抗力降低，易誘發(fā)畜禽傳染性疾病[1]。因此，保證畜禽適宜的飼養(yǎng)密度是生產(chǎn)中的一個(gè)重要環(huán)節(jié)[2]。

目前，國(guó)內(nèi)外學(xué)者針對(duì)飼養(yǎng)密度對(duì)畜禽生長(zhǎng)性能、血清免疫及抗氧化指標(biāo)的影響研究主要中在雞[3-6]、鴨[7-8]、豬[9-10]等，而飼養(yǎng)密度對(duì)家兔各項(xiàng)福利指標(biāo)影響的報(bào)道較少。因此，本試驗(yàn)通過設(shè)置不同飼養(yǎng)密度，研究其對(duì)家兔生長(zhǎng)性能、行為指標(biāo)、免疫器官指數(shù)及血清抗氧化指標(biāo)分別進(jìn)行檢測(cè)分析，旨在找出適宜的飼養(yǎng)密度參數(shù)，為籠養(yǎng)模式下家兔的健康福利養(yǎng)殖提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)時(shí)間與場(chǎng)所

試驗(yàn)于2022年2—4月在佳木斯大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心家兔實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物使用許可證號(hào)為SYXK(黑)2021-018。

1.2 試驗(yàn)動(dòng)物

試驗(yàn)選取35日齡體重相近(943.86±51.13)g，發(fā)育健康的普通級(jí)雄性新西蘭白兔120只，購(gòu)于哈爾濱市雙城區(qū)中文養(yǎng)殖場(chǎng)，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào)為SCXK(黑)2021-002。

1.3 試驗(yàn)飼糧

試驗(yàn)飼糧參照谷子林等[11]推薦的家兔所需營(yíng)養(yǎng)值并結(jié)合本地飼料資源進(jìn)行配制，將飼糧加工成顆粒料(直徑4 mm，長(zhǎng)度8～10 mm)。飼糧組成及營(yíng)養(yǎng)水平見表1。

表1 基礎(chǔ)飼糧組成及營(yíng)養(yǎng)水平(風(fēng)干基礎(chǔ))

1.4 試驗(yàn)設(shè)計(jì)與飼養(yǎng)管理

試驗(yàn)采用單因素設(shè)計(jì)，結(jié)合本地的飼養(yǎng)及設(shè)施情況，將120只家兔隨機(jī)分為4組，每組設(shè)6個(gè)重復(fù)(籠)，即Ⅰ組每個(gè)重復(fù)(籠)2只(5只/m2)、Ⅱ組每個(gè)重復(fù)(籠)4只(10只/m2)、Ⅲ組每個(gè)重復(fù)(籠)6只(15只/m2)、Ⅳ組每個(gè)重復(fù)(籠)8只(20只/m2)。共分別飼養(yǎng)家兔Ⅰ組12只、Ⅱ組24只、Ⅲ組36只、Ⅳ組48只。每組家兔均飼養(yǎng)在規(guī)格相同單排列不銹鋼沖洗式試驗(yàn)兔籠內(nèi)，單個(gè)兔籠體積為長(zhǎng)0.8 m×寬0.5 m×高0.35 m。試驗(yàn)開始前對(duì)兔籠及兔舍進(jìn)行洗刷、消毒，并對(duì)所有家兔進(jìn)行免疫接種。兔舍內(nèi)有排風(fēng)裝置，自然采光，家兔每日7：30和16：30各飼喂1次，每個(gè)兔籠配備2個(gè)乳頭式飲水器，可自由飲水。預(yù)試期為5 d，試驗(yàn)期為35 d。

1.5 生長(zhǎng)性能測(cè)定

在試驗(yàn)開始時(shí)(第1 天)和試驗(yàn)結(jié)束當(dāng)天(第35 天)家兔禁食12 h后，分別對(duì)4個(gè)試驗(yàn)組的家兔逐只稱重，并統(tǒng)計(jì)整個(gè)試驗(yàn)期內(nèi)飼料的消耗量，計(jì)算家兔的平均日增重(ADG)=(末重-始重)/試驗(yàn)天數(shù)、平均日采食量(ADFI)=(投料量-剩料量)/(試驗(yàn)天數(shù)×試驗(yàn)兔只數(shù))、料重比(F/G)=平均日采食量/平均日增重。

1.6 行為指標(biāo)測(cè)定

每個(gè)試驗(yàn)組中分別隨機(jī)選取2只同籠家兔，用生物染料對(duì)其耳部進(jìn)行標(biāo)記，采用型號(hào)為Y20小蟻1080P智能攝像機(jī)(每組各1個(gè))，于試驗(yàn)開始后31～35 d進(jìn)行拍攝記錄，拍攝時(shí)間為當(dāng)天的8：00—16：00，每天8 h，共5 d。將所拍攝的視頻用行為分析軟件(Observer XT，Noldus，荷蘭)對(duì)目標(biāo)家兔主要發(fā)生的行為進(jìn)行分析，采用目標(biāo)動(dòng)物取樣法，每隔3 min記錄1次正在發(fā)生的行為，并計(jì)算每組家兔每種行為發(fā)生次數(shù)的百分比。家兔各行為的選擇及定義參照李彥杰等[12]方法，具體見表2。

表2 家兔行為類別及定義

1.7 血清抗氧化指標(biāo)測(cè)定

屠宰前，從每個(gè)試驗(yàn)組中隨機(jī)選取4只家兔進(jìn)行心臟采血，采血前禁食12 h，采血5 mL，置于促凝血真空采血管內(nèi)，待其自然凝固，3 000 r/min，離心15 min，收集血清，-20 ℃保存。采用購(gòu)置于南京建成生物工程研究所的試劑盒進(jìn)行測(cè)定，測(cè)定指標(biāo)包括血清中總抗氧化能力(T-AOC)、超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)的活性以及丙二醛(MDA)的含量。測(cè)定方法嚴(yán)格按照試劑盒的說明書進(jìn)行操作。

1.8 免疫器官指數(shù)測(cè)定

在正式試驗(yàn)第35 天時(shí)，從每個(gè)試驗(yàn)組中隨機(jī)選取4只家兔，通過空氣栓塞法進(jìn)行處死，處死前禁食12 h。處死后迅速取出脾臟、胸腺，并用濾紙吸出多余的血液。電子天平對(duì)免疫器官(脾臟和胸腺)進(jìn)行稱重，計(jì)算免疫器官指數(shù)。

免疫器官指數(shù)(g/kg)=免疫器官重(g)/活體重(kg)。

1.9 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與處理

試驗(yàn)數(shù)據(jù)采用Excel 2003進(jìn)行統(tǒng)計(jì)匯總，利用SPSS 17.0軟件進(jìn)行單因素方差分析(ANOVA)，并采用Duncan氏法進(jìn)行多重比較各試驗(yàn)組間差異，試驗(yàn)結(jié)果以“平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤”表示，差異顯著時(shí)P<0.05，差異極顯著時(shí)P<0.01。

2 結(jié)果與分析

2.1 飼養(yǎng)密度對(duì)家兔生長(zhǎng)性能的影響

由表3可知，在末重和平均日增重方面，Ⅰ組和Ⅱ組家兔的末重和平均日增重均顯著高于Ⅲ組(P<0.05)，且均極顯著高于Ⅳ組(P<0.01)，Ⅲ組家兔的末重和平均日增重顯著高于Ⅳ組(P<0.05)；在平均日采食量方面，Ⅰ組和Ⅱ組家兔的平均日采食量均極顯著高于Ⅲ組和Ⅳ組(P<0.01)，Ⅲ組家兔的平均日采食量極顯著高于Ⅳ組(P<0.01)；在料重比方面，各組之間差異不顯著(P>0.05)。

2.2 飼養(yǎng)密度對(duì)家兔行為指標(biāo)的影響

由表4可知，不同飼養(yǎng)密度對(duì)家兔的各行為指標(biāo)產(chǎn)生了較大的影響。在趴臥行為發(fā)生率方面，Ⅰ組和Ⅱ組家兔的趴臥行為極顯著低于Ⅲ組和Ⅳ組(P<0.01)，同時(shí)Ⅲ組趴臥行為極顯著低于Ⅳ組(P<0.01)；在運(yùn)動(dòng)和站立行為發(fā)生率方面，Ⅰ組和Ⅱ組家兔的運(yùn)動(dòng)和站立行為差異均不顯著(P>0.05)，其余各組之間差異均極顯著(P<0.01)；在采食和飲水行為發(fā)生率方面，Ⅰ組和Ⅱ組家兔的采食行為均極顯著高于Ⅲ組和Ⅳ組(P<0.01)，而家兔飲水行為隨著飼養(yǎng)密度的增加逐漸升高，但各組之間差異不顯著(P>0.05)；在修飾和啃咬行為發(fā)生率方面，Ⅰ組和Ⅱ組家兔的修飾行為極顯著高于Ⅲ組和Ⅳ組(P<0.01)，而啃咬行為則顯著低于Ⅲ組和Ⅳ組(P<0.05)。

表4 飼養(yǎng)密度對(duì)家兔行為指標(biāo)的影響 %

2.3 飼養(yǎng)密度對(duì)家兔免疫器官指數(shù)的影響

由表5可知，Ⅰ組和Ⅱ組家兔的脾臟指數(shù)、胸腺指數(shù)均高于Ⅲ組和Ⅳ組。其中Ⅰ組和Ⅱ組家兔脾臟指數(shù)均顯著高于Ⅳ組(P<0.05)，Ⅲ組家兔的脾臟指數(shù)與其他各組之間差異不顯著(P>0.05)；Ⅰ組和Ⅱ組家兔的胸腺指數(shù)均顯著高于Ⅲ組和Ⅳ組(P<0.05)；其余各組之間差異不顯著(P>0.05)。

表5 飼養(yǎng)密度對(duì)家兔免疫器官指數(shù)的影響 g/kg

2.4 飼養(yǎng)密度對(duì)家兔血清抗氧化指標(biāo)的影響

由表6可知，隨著飼養(yǎng)密度的增加，家兔血清中T-AOC、SOD和GSH-Px的活性呈現(xiàn)出先升高后下降，而MDA的含量呈現(xiàn)出先下降后上升的趨勢(shì)。其中，Ⅱ組和Ⅲ組家兔的血清T-AOC濃度和SOD活性均顯著高于Ⅳ組(P<0.05)，其他各組之間差異不顯著(P>0.05)；GSH-Px的活性各組之間差異不顯著(P>0.05)；Ⅰ組、Ⅱ組和Ⅲ組家兔血清中MDA含量均顯著低于Ⅳ組(P<0.05)，其他各組之間差異不顯著(P>0.05)。

表6 飼養(yǎng)密度對(duì)家兔血清抗氧化指標(biāo)的影響

3 討論

3.1 飼養(yǎng)密度對(duì)家兔生長(zhǎng)性能的影響

許多研究表明飼養(yǎng)密度對(duì)畜禽生長(zhǎng)性能的影響不同。湯健平等[3]研究發(fā)現(xiàn)，增加飼養(yǎng)密度能顯著降低AA肉仔雞2～6周齡的ADG，但是F/G沒有顯著影響；Thomas等[9]研究表明，隨著飼養(yǎng)密度的升高，豬的ADG和ADFI顯著下降，對(duì)F/G沒有顯著影響。本試驗(yàn)研究結(jié)果表明，隨著家兔飼養(yǎng)密度的增加，家兔的平均日增重、平均日采食量逐漸下降。這與上述研究結(jié)果基本相同。說明高密度飼養(yǎng)降低了家兔的生長(zhǎng)性能，分析其原因是高密度飼養(yǎng)使家兔之間相互干擾的幾率增加，同時(shí)對(duì)領(lǐng)域及食物等有限資源存在競(jìng)爭(zhēng)關(guān)系，導(dǎo)致兔只接觸到飼料的機(jī)會(huì)有所限制，不能自由取食，從而降低了家兔的生長(zhǎng)性能。但也有研究指出飼養(yǎng)密度(5、10、15和20只/m2)對(duì)肉仔雞ADG與ADFI沒有顯著影響[4]；Farkas等[13]研究發(fā)現(xiàn)，不同圈養(yǎng)密度對(duì)肉兔體重、增重等影響均不顯著，這與上述研究結(jié)果不同。其原因可能是由于設(shè)計(jì)的差異(品種、群體大小、飼養(yǎng)管理、營(yíng)養(yǎng)、氣候環(huán)境等)產(chǎn)生了不同的結(jié)果[14]。

3.2 飼養(yǎng)密度對(duì)家兔行為指標(biāo)的影響

集約化高密度生產(chǎn)過程中把動(dòng)物限制在一個(gè)較小的活動(dòng)范圍內(nèi)，生存環(huán)境比較惡劣，正常行為得不到滿足，這種限制動(dòng)物表達(dá)自身天性自由的外界環(huán)境刺激會(huì)導(dǎo)致其表現(xiàn)出異常行為，影響畜禽體質(zhì)健康[15]。Dixon等[16]利用19只家兔，先后飼喂于面積為 0.88、1.68、3.35 m2空間內(nèi)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)面積開闊飼養(yǎng)條件下的家兔活動(dòng)能力強(qiáng)，且相互之間交流密切，從小空間轉(zhuǎn)移到大空間家兔活動(dòng)行為能力顯著增強(qiáng)。Sommerville等[17]發(fā)現(xiàn)，較高的空間容忍度會(huì)增加家兔運(yùn)動(dòng)能力和社交活動(dòng)，減少休息和舒適行為。本試驗(yàn)研究結(jié)果與上述報(bào)道相似，隨著飼養(yǎng)密度的增加Ⅲ組和Ⅳ組家兔趴臥行為極顯著上升，而運(yùn)動(dòng)和站立行為則極顯著下降。這主要是由于家兔活動(dòng)空間的限制及飼養(yǎng)密度過大導(dǎo)致腿部條件變差[18]，從而趴臥行為增多，運(yùn)動(dòng)和站立行為減少；同時(shí)高飼養(yǎng)密度下，家兔出現(xiàn)聚堆擁擠的現(xiàn)象，導(dǎo)致局部環(huán)境溫度升高。因此，家兔可通過增加趴臥休息和減少活動(dòng)降低其基礎(chǔ)代謝率，來緩解密度應(yīng)激帶來的負(fù)面影響。

食物和水是維持動(dòng)物生命的基本條件。而有關(guān)飼養(yǎng)密度對(duì)畜禽采食和飲水的影響報(bào)道并不一致。本試驗(yàn)研究表明，Ⅰ組和Ⅱ組家兔的采食行為極顯著高于Ⅲ組和Ⅳ組，且飲水行為隨著飼養(yǎng)密度的增加呈上升趨勢(shì)。這與王長(zhǎng)平等[5]研究結(jié)果基本一致。其原因主要是家兔采取減少采食來降低自身代謝，并通過增加飲水來緩解高飼養(yǎng)密度帶來的應(yīng)激[15]。而張東龍等[19]研究發(fā)現(xiàn)，高飼養(yǎng)密度下鵪鶉的取食行為增加，飲水行為減少，這與本試驗(yàn)的結(jié)果不同，分析其原因可能是動(dòng)物個(gè)體間的差異以及籠養(yǎng)的數(shù)量不同，但具體原因還需進(jìn)一步探討。

家兔的修飾和啃咬行為在一定程度上反映了對(duì)飼養(yǎng)環(huán)境的適應(yīng)程度[20]。本研究發(fā)現(xiàn)，Ⅰ組和Ⅱ組家兔的修飾行為極顯著高于Ⅲ組和Ⅳ組，而啃咬行為則顯著低于Ⅲ組和Ⅳ組。其原因主要是飼養(yǎng)密度過高，會(huì)導(dǎo)致家兔飼養(yǎng)福利惡化，使得其所處生存環(huán)境不舒適，同時(shí)家兔的天性不能自由表達(dá)，心理長(zhǎng)期處于壓抑狀態(tài)，易引發(fā)出現(xiàn)異常行為。因此，飼養(yǎng)密度過高，會(huì)導(dǎo)致家兔的修飾舒適行為比例下降，而啃咬異常行為比例升高。

3.3 飼養(yǎng)密度對(duì)家兔免疫器官指數(shù)的影響

胸腺是幼兔的中樞免疫器官和重要淋巴器官，是T細(xì)胞發(fā)育的場(chǎng)所，其功能與機(jī)體免疫密切相關(guān)；而脾臟作為機(jī)體最大的外周免疫器官，在動(dòng)物免疫功能中也起著重要作用，它內(nèi)部含有多種免疫細(xì)胞，如B細(xì)胞、巨噬細(xì)胞和T細(xì)胞[21]。一般認(rèn)為免疫器官重量增加是因?yàn)槠渥陨砑?xì)胞生長(zhǎng)發(fā)育和分裂增殖所致，是免疫增強(qiáng)的表現(xiàn)，免疫器官重量下降時(shí)免疫抑制的表現(xiàn)[22]。張璐爽等[7]研究表明，低密度飼養(yǎng)下肉鴨的脾臟絕對(duì)和相對(duì)重量都高于中、高密度組。邵丹等[6]研究表明，低密度組8只/m2的黃羽肉胸腺重極顯著高于高密度組24只/m2。本試驗(yàn)結(jié)果表明，隨著飼養(yǎng)密度的增加，Ⅲ組和Ⅳ組家兔的胸腺指數(shù)和脾臟指數(shù)均呈下降趨勢(shì)，這與上述研究結(jié)果相符，表明高飼養(yǎng)密度下家兔的免疫力是受抑制的。究其原因是高密度飼養(yǎng)增加了畜舍環(huán)境的負(fù)擔(dān)，使畜舍衛(wèi)生條件下降，細(xì)菌病菌繁殖力增加[23]；同時(shí)高飼養(yǎng)密度會(huì)使家兔個(gè)體單位的生存空間減少，籠內(nèi)空氣流通較差，有害氣體增多，導(dǎo)致家兔免疫力下降，繼而影響其免疫器官的發(fā)育。

3.4 飼養(yǎng)密度對(duì)家兔血清抗氧化指標(biāo)的影響

氧化應(yīng)激是畜禽受到體內(nèi)外環(huán)境中有害條件的刺激，其體內(nèi)重要的生物分子損傷后產(chǎn)生活性氧自由基所引起的細(xì)胞和組織的生理和病理反應(yīng)[24]。T-AOC是用于衡量機(jī)體抗氧化系統(tǒng)功能狀況的綜合指標(biāo)，機(jī)體的抗氧化系統(tǒng)的酶促體系主要由 SOD、GSH-Px等抗氧化酶組成，而MDA其含量可反映出機(jī)體脂質(zhì)過氧化物的生成速率和強(qiáng)度，也反映出機(jī)體組織氧化損傷的程度[25]。本試驗(yàn)結(jié)果表明，隨著飼養(yǎng)密度的增加，家兔血清中T-AOC含量及SOD、GSH-Px的活性呈現(xiàn)出先升高后下降，而MDA的含量呈現(xiàn)出先下降后升高趨勢(shì)，這與肖克權(quán)等[10]、劉硯涵等[8]飼養(yǎng)密度對(duì)生長(zhǎng)豬、北京鴨的血清抗氧化指標(biāo)研究結(jié)果基本相同。其原因是適當(dāng)?shù)脑黾语曫B(yǎng)密度，會(huì)使家兔體內(nèi)啟動(dòng)抗氧化保護(hù)模式來消除體內(nèi)少量的自由基，并減少脂質(zhì)過氧化物的生成。當(dāng)飼養(yǎng)密度過高時(shí)，動(dòng)物機(jī)體所產(chǎn)生大量的自由基會(huì)打破其體內(nèi)氧化還原的平衡狀態(tài)，造成體內(nèi)活性氧增多，抗氧化物減少，出現(xiàn)氧化應(yīng)激，而氧化應(yīng)激能夠刺激ROS大量形成，導(dǎo)致脂質(zhì)過氧化物增加[26-27]。同時(shí)高密度飼養(yǎng)所導(dǎo)致的采食量下降會(huì)引起機(jī)體分解代謝加強(qiáng)，從而使機(jī)體自由基產(chǎn)生增多[28]。因此，飼養(yǎng)密度對(duì)家兔抗氧化指標(biāo)影響是多方面綜合性的。

4 結(jié)論

根據(jù)試驗(yàn)結(jié)果可知，隨著飼養(yǎng)密度的增加，家兔6只/籠(15只/m2)、8只/籠(20只/m2)的生長(zhǎng)性能下降，行為狀態(tài)發(fā)生較大的幅度變化，且8只/籠(20只/m2)的免疫功能和抗氧化能力顯著下降。因此，本試驗(yàn)在考慮飼養(yǎng)籠具利用率的基礎(chǔ)上，以4只/籠(10只/m2)的飼養(yǎng)密度效果最佳。