李妍，片慧芳，杜旭彬，虞德兵*

(1. 南京農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院，江蘇 南京 210095；2. 南京農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院，江蘇 南京 210095)

近些年來，隨著人們消費(fèi)水平的日益提高，國人普遍追求綠色無污染的畜禽產(chǎn)品?？股卦谔岣咝笄萆a(chǎn)性能、改善蛋品質(zhì)的同時(shí)，也造成了動(dòng)物食品抗生素殘留等問題。因此迫切地需要尋找一種綠色無污染的飼料添加劑替代抗生素的使用。中草藥作為一種唯一允許使用的促生長類藥物飼料添加劑，同時(shí)又具有抗氧化、促生長的功能。因此，開發(fā)使用中草藥添加劑作為新型飼料添加劑替代抗生素具有重要意義。

甘草為豆科植物烏拉爾甘草Glycyrrhizauralensis，光果甘草G.glabra，脹果甘草G.inflata的干燥根及根莖。最早記載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，具有補(bǔ)脾益氣、止咳祛痰、調(diào)和藥性的功效[1]。現(xiàn)代藥理研究表明，甘草具有抗病毒[2]、抗炎[3]等廣泛的藥理活性。李松橋等[4]研究表明，在黃羽肉雞的基礎(chǔ)日糧中添加4%的枸杞渣和甘草混合物能夠在生產(chǎn)性能方面達(dá)到和添加抗生素同等的效果。

蘆丁(rutin)又稱蕓香苷、維生素P等，是廣泛存在于槐米、蕎麥、蕓香等植物中的一種多酚生物類黃酮[5]，蘆丁作為黃酮類化合物的典型代表，在心腦血管疾病的治療方面應(yīng)用廣泛。蘆丁化合物具有廣泛的生物效應(yīng)，包括抗炎[6]、抗氧化[7]等。通過體內(nèi)試驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)，蘆丁可以通過上調(diào)過氧化氫酶(CAT)、超氧化物歧化酶(SOD)等內(nèi)源抗氧化酶的表達(dá)來增強(qiáng)細(xì)胞氧化的防御系統(tǒng)[8]。

目前，尚未有關(guān)于甘草和蘆丁配伍使用的相關(guān)研究，因此本試驗(yàn)通過在產(chǎn)蛋后期的蛋雞中添加不同劑量的甘草與蘆丁，從蛋雞的生產(chǎn)性能，蛋品質(zhì)，血清中激素水平以及腸道抗氧化等方面系統(tǒng)評估甘草和蘆丁配伍使用的效果，以期為甘草和蘆丁在海蘭褐殼蛋雞上的應(yīng)用，以及開發(fā)甘草和蘆丁開發(fā)相關(guān)產(chǎn)品提供理論和實(shí)踐基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

甘草粗提物粉劑(來自什邡恒瑞康生物科技有限公司)和蘆丁粉劑(來自什邡恒瑞康生物科技有限公司)；試驗(yàn)在南京市浦口區(qū)高老莊養(yǎng)殖基地進(jìn)行；試驗(yàn)雞品種為海蘭褐殼蛋雞。

1.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì)與飼養(yǎng)管理

選取300只380日齡的海蘭褐殼蛋雞，隨機(jī)分為5組，每組3個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)20只雞。Ⅰ 組為對照組，僅飼喂基礎(chǔ)日糧；Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ組為試驗(yàn)處理組，分別在飼喂基礎(chǔ)日糧的基礎(chǔ)上添加甘草+蘆丁(300 mg/kg+100 mg/kg、300 mg/kg+200 mg/kg、600 mg/kg+100 mg/kg、600 mg/kg+200 mg/kg)。在進(jìn)行正式試驗(yàn)之前，對5組雞只進(jìn)行為期7 d的預(yù)試驗(yàn)；確保5組雞只產(chǎn)蛋均勻后，進(jìn)行正式試驗(yàn)；正式試驗(yàn)周期為42 d。采用立體三層籠養(yǎng)，每層飼養(yǎng)20只雞；15 h光照，乳頭式飲水器供水。試驗(yàn)季節(jié)為夏季，雞舍內(nèi)溫度維持在(30±2)℃，早、晚濕度為(90±2)%，中午濕度較低，晝夜溫差較大。試驗(yàn)期間蛋雞每天定點(diǎn)飼喂日糧，每天2次；自由飲水。

表1 基礎(chǔ)飼糧組成及營養(yǎng)水平(風(fēng)干基礎(chǔ))

1.3 樣本采集

于試驗(yàn)進(jìn)行42 d時(shí)，每個(gè)重復(fù)隨機(jī)選取2只體重相近、健康狀況良好的蛋雞禁飼12 h(不禁水)用于屠宰試驗(yàn)。從頸動(dòng)脈處放血，采集血液于離心管中，3 000 r/min離心15 min，取上清液(血清)并于-80 ℃保存?zhèn)溆?。待雞只死亡后剖開腹腔采集空腸組織3～5 cm，將5 cm的腸段縱向打開，用冷生理鹽水沖洗內(nèi)容物。使用無菌玻璃顯微鏡載玻片通過刮擦收集黏膜，在液氮中快速冷凍，然后-80 ℃儲(chǔ)存。

1.4 測定指標(biāo)及方法

1.4.1 生產(chǎn)性能指標(biāo)測定

每天記錄各重復(fù)雞只的產(chǎn)蛋數(shù)及蛋重，每7 d統(tǒng)計(jì)1次采食量，計(jì)算飼養(yǎng)日產(chǎn)蛋率、平均蛋重、平均日采食量以及料蛋比。

1.4.2 蛋品質(zhì)指標(biāo)測定

試驗(yàn)結(jié)束后，以重復(fù)為單位隨機(jī)抽取3枚雞蛋，每組9枚，用以檢測蛋形指數(shù)、蛋白高度、蛋黃顏色、蛋黃重、哈氏單位、蛋殼厚度及蛋殼強(qiáng)度等指標(biāo)。蛋形指數(shù)和蛋殼厚度采用游標(biāo)卡尺測定；蛋殼強(qiáng)度采用蛋殼強(qiáng)度測定儀(KQ-1A型)檢測(北京天翔飛域科技有限公司)；蛋白高度、哈氏單位和蛋黃顏色采用EMT-7300型多功能蛋品質(zhì)自動(dòng)分析儀檢測(日本Touhoku Rhythm Co. Ltd.公司)；蛋黃在分離蛋清后采用電子天平進(jìn)行稱重。

1.4.3 血清及空腸黏膜抗氧化水平相關(guān)指標(biāo)測定

測定蛋雞血清、空腸黏膜中谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)、超氧化物歧化酶(SOD)、過氧化氫酶(CAT)和丙二醛(MDA)含量，(試劑盒購自南京建成生物工程研究所)，按照生產(chǎn)商的說明操作。

1.4.4 血清中相關(guān)激素指標(biāo)測定

用酶聯(lián)免疫檢測試劑盒測定蛋雞血清中雌二酮(E2)、促卵泡素(FSH)、孕酮(P4)、促黃體素(LH)含量，試劑盒購自南京建成生物工程研究所，按照生產(chǎn)商的說明書方法進(jìn)行操作。

1.5 統(tǒng)計(jì)分析

所有數(shù)據(jù)由Excel 2019初步整理后，通過使用SPSS 20.0軟件的單向變異分析(ANOVA)分析所有數(shù)據(jù)，使用Duncan進(jìn)行多重比較評估組間的差異，結(jié)果用“平均值士標(biāo)準(zhǔn)誤”表示，P<0.05作為差異顯著性判斷標(biāo)準(zhǔn)，P<0.01為差異極顯著判斷標(biāo)準(zhǔn)。

2 結(jié)果分析

2.1 不同添加水平的甘草和蘆丁對蛋雞生產(chǎn)性能的影響

添加不同水平的甘草和蘆丁后，對蛋雞生產(chǎn)性能的測定結(jié)果見表2。試驗(yàn)前3周，與對照組相比，飼糧中添加不同水平的甘草和蘆丁對產(chǎn)蛋率、平均蛋重、平均日采食量、料蛋比均無顯著影響(P>0.05)。在試驗(yàn)4～6周，與對照組相比，Ⅲ組和Ⅴ組產(chǎn)蛋率均有顯著提高(P<0.05)，分別提高了9.56%和10.56%；Ⅴ組比對照組平均蛋重有極顯著提高(P<0.01)，較對照組提高了7.63%；各試驗(yàn)組料蛋比均有極顯著下降(P<0.01)，分別降低了10.53%、11.74%、10.53%、14.17%；而平均日采食量與對照組相比無顯著差異(P>0.05)。在整個(gè)試驗(yàn)期間，與對照組相比，Ⅲ組和Ⅴ組產(chǎn)蛋率均有極顯著提高(P<0.01)，分別提高了7.90%和9.46%。Ⅴ組平均蛋重有顯著提高(P<0.05)，較對照組提高了5.58%。各試驗(yàn)組料蛋比均有極顯著下降(P<0.01),分別降低了6.58%、9.88%、7.82%、11.93%。而平均日采食量與對照組相比無顯著差異(P>0.05)。

表2 不同添加水平的甘草和蘆丁對蛋雞生產(chǎn)性能的影響

2.2 不同添加水平的甘草和蘆丁對蛋品質(zhì)的影響

由表3可知，在試驗(yàn)第3周，飼糧中添加不同水平的甘草和蘆丁對蛋品質(zhì)均無顯著影響(P>0.05)；在試驗(yàn)第6周，與對照組相比，Ⅲ 組和Ⅴ組蛋殼厚度和蛋形指數(shù)均有極顯著提高(P<0.01)，其中蛋殼厚度分別提高了和11.76%和14.71%，蛋形指數(shù)分別提高了4.65%和5.43%。而蛋殼強(qiáng)度、蛋黃顏色、蛋白高度、蛋黃重和哈氏單位與對照組相比均無顯著差異(P>0.05)。

表3 不同添加水平的甘草和蘆丁對蛋雞蛋品質(zhì)的影響

2.3 不同添加水平的甘草和蘆丁對血清抗氧化水平的影響

由表4可知，與對照組相比，Ⅲ 組和Ⅴ 組血清中SOD的活性均顯著增加(P<0.05)，分別增加了49.25%和138.81%；Ⅲ 組和Ⅴ 組血清中MDA的含量均有極顯著降低(P<0.01)，且分別降低了18.40%和27.99%。而血清中GSH-Px和CAT的活性與對照組相比均無顯著變化(P>0.05)。

表4 不同添加水平的甘草和蘆丁對蛋雞血清和空腸黏膜抗氧化水平的影響

與對照組相比，Ⅱ 組、Ⅲ 組和Ⅴ 組空腸黏膜中CAT活性均有極顯著的提高(P<0.01)；分別提高了24.94%、28.98%和47.39%；Ⅲ 組和 Ⅴ組空腸黏膜中MDA的含量極顯著降低(P<0.01)，較對照組降低了7.90%和9.46%。而空腸黏膜中SOD和GSH-Px的活性與對照組相比均無顯著變化(P>0.05)。

2.4 不同添加水平的甘草和蘆丁對血清激素水平的影響

由表5可知，與對照組相比，Ⅴ 組E2和P4的含量均有顯著增加(P<0.05)，分別提高了21.28%和27.99%。Ⅱ 組、Ⅲ 組和Ⅴ 組FSH的含量均有極顯著增加(P<0.01)，分別提高了7.29%、9.04%和14.87%。

表5 不同添加水平的甘草和蘆丁對蛋雞血清激素水平的影響

3 討論

3.1 甘草和蘆丁配伍對蛋雞生產(chǎn)性能的影響

中草藥類添加劑能夠提高蛋雞生產(chǎn)性能，一般認(rèn)為是其通過提高機(jī)體免疫力，減少輸卵管炎癥，維持子宮內(nèi)環(huán)境來實(shí)現(xiàn)的。本試驗(yàn)在基礎(chǔ)日糧中添加一定劑量的甘草和蘆丁能夠提高蛋雞的產(chǎn)蛋率，究其原因，可能與甘草及其提取物能夠通過調(diào)節(jié)體液和細(xì)胞介導(dǎo)的免疫反應(yīng)來增強(qiáng)家禽機(jī)體的免疫力有關(guān)[9]，除此之外，研究顯示蘆丁作為一種多酚生物類黃酮，能夠促進(jìn)大鼠免疫器官胸腺和脾的發(fā)育，從而提高大鼠機(jī)體的免疫力[10]。

個(gè)體差異、年齡、飼料的能量水平等都會(huì)影響蛋雞的采食量，本試驗(yàn)中各試驗(yàn)組較之對照組的采食量均無顯著差異，但各試驗(yàn)組的料蛋比與對照組相比均有極顯著下降，且以甘草+蘆丁的添加劑量為300 mg/kg+200 mg/kg、600 mg/kg+200 mg/kg的試驗(yàn)組下降最為明顯。說明一定劑量的甘草和蘆丁配伍可以提高蛋雞生產(chǎn)性能，其機(jī)理有待進(jìn)一步研究。

3.2 甘草和蘆丁配伍對蛋品質(zhì)以及相關(guān)激素的影響

蛋形指數(shù)、蛋殼厚度等是衡量蛋品質(zhì)的重要指標(biāo)之一，蛋形指數(shù)是一個(gè)形狀變量，它的遺傳力較高，會(huì)影響種蛋的孵化率。蛋殼厚度是影響蛋殼耐壓強(qiáng)度的主要因素?fù)?jù)報(bào)道，在產(chǎn)蛋后期蛋雞的基礎(chǔ)日糧中添加甘草提取物可以有效提高蛋殼強(qiáng)度、蛋殼厚度等[11]。在基礎(chǔ)日糧中添加蘆丁能夠通過增強(qiáng)機(jī)體對氨基酸的利用率從而改善蛋形指數(shù)[12]。本試驗(yàn)中甘草+蘆丁的添加劑量為300 mg/kg+200 mg/kg、600 mg/kg+200 mg/kg的試驗(yàn)組，蛋形指數(shù)和蛋殼厚度都較對照組有極顯著提高，這可能是與一定劑量的甘草和蘆丁配伍使用能夠提高機(jī)體雌激素水平以及增強(qiáng)機(jī)體抗炎抗菌的能力有關(guān)。

長期持續(xù)性的產(chǎn)蛋行為會(huì)對子宮造成不可逆的損傷[13]，而雌激素和孕酮能夠通過募集調(diào)動(dòng)免疫活性細(xì)胞，發(fā)揮局部免疫調(diào)控功能從而減少蛋殼的異常礦化[14]。隨著蛋雞日齡的增長，雌激素和孕酮的合成及分泌受阻，進(jìn)而影響輸卵管及子宮部的免疫調(diào)控[15]，加劇異常礦化，最終導(dǎo)致蛋品質(zhì)的下降。

孕酮(P4)在蛋雞的排卵過程中起著至關(guān)重要的作用[16]，孕酮的合成主要與促性腺激素(如FSH和LH)的調(diào)節(jié)有關(guān)[17]。本試驗(yàn)中甘草+蘆丁的添加劑量為300 mg/kg+200 mg/kg、600 mg/kg+200 mg/kg的試驗(yàn)組，增加了蛋雞血清P4、E2和FSH等激素水平，這可能與一定劑量的甘草和蘆丁配伍能夠調(diào)節(jié)卵巢性腺激素分泌，增加卵巢顆粒細(xì)胞有關(guān)[18]。

3.3 甘草和蘆丁配伍對蛋雞抗氧化功能的影響

雞只隨著年齡的增長，機(jī)能衰退，體內(nèi)自由基增多，致使內(nèi)源抗氧化酶與自由基動(dòng)態(tài)失衡，雞體長期處于氧化應(yīng)激狀態(tài)，從而影響蛋雞的生產(chǎn)性能和健康狀況[19]。MDA被認(rèn)為是氧化應(yīng)激的標(biāo)志[20]，SOD、GSH-Px和CAT都是可以清除體內(nèi)過多自由基的內(nèi)源性抗氧化酶[21]。有資料顯示，甘草中的18β-甘草次酸能夠防止自由基的產(chǎn)生和脂質(zhì)過氧化，從而起到保護(hù)肝臟的作用[22]。此外，有研究結(jié)果表明蘆丁可以通過提高SOD、GSH-Px和CAT的活性來防止氧化應(yīng)激[23]。試驗(yàn)組蛋雞添加甘草+蘆丁(添加劑量為300 mg/kg+200 mg/kg、600 mg/kg+200 mg/kg)后，血清和空腸黏膜中MDA含量顯著降低，血清中SOD和空腸黏膜中CAT活性顯著提高。表明一定劑量的甘草和蘆丁配伍使用具有增強(qiáng)機(jī)體內(nèi)源抗氧化酶的活性和降低脂質(zhì)過氧化的功能。

4 結(jié)論

本試驗(yàn)甘草+蘆丁的添加劑量為300 mg/kg+200 mg/kg、600 mg/kg+200 mg/kg能夠增強(qiáng)動(dòng)物機(jī)體的免疫力，提高血清和腸黏膜抗氧化水平，增加血清中相關(guān)激素含量，改善蛋品質(zhì)量。雖然，在本試驗(yàn)中甘草和蘆丁配伍效果最好的添加劑量為600 mg/kg+200 mg/kg，但從經(jīng)濟(jì)成本方面考慮，添加劑量為300 mg/kg+200 mg/kg的甘草和蘆丁配伍組合更為適宜。