沈 浪，李 旭，曹 亮，王振中，肖 偉*，耿劍亮*

紅花八角葉中1個新的酚酸類化合物

沈 浪1，李 旭2，曹 亮2，王振中2，肖 偉2*，耿劍亮1*

1. 廣東藥科大學中藥學院，廣東 廣州 510006 2. 中藥制藥過程控制與智能制造技術全國重點實驗室，江蘇康緣藥業(yè)股份有限公司，江蘇 連云港 222001

對紅花八角的干燥葉進行化學成分研究。綜合應用各種現(xiàn)代色譜分離技術進行系統(tǒng)的分離純化，根據化合物的理化性質和核磁共振波譜數(shù)據進行結構鑒定。從紅花八角葉50%乙醇提取物經HP-20大孔吸附樹脂30%乙醇洗脫部位中共分離鑒定5個化合物，分別為7---甲氧基芐基莽草酸（1）、黑麥草內酯（2）、去氫催吐蘿芙木醇（3）、蚱蜢酮（4）、chakyunglupulin A（5）?；衔?為新的酚酸類化合物，2～5為首次從該屬植物中分離得到。

紅花八角；7---甲氧基芐基莽草酸；黑麥草內酯；去氫催吐蘿芙木醇；蚱蜢酮；chakyunglupulin A

紅花八角Tutcher為五味子科（Schisandraceae）八角屬Linn.植物，別名山八角、野八角[1-2]。味苦、辛，性溫，由于其具有散瘀消腫、祛風除濕、止痛的功效，民間常用其根和樹皮入藥，外用治療風濕骨痛、跌打損傷、挫傷骨折[3-4]。文獻報道紅花八角中主要含有苯丙素類[5-9]、倍半萜類[9-13]、酚苷類[14]、黃酮類[15-17]、三萜[5]、揮發(fā)油[18]及其他類成分，現(xiàn)代藥理學研究表明紅花八角提取物及部分化合物具有多種生物活性，包括抗炎鎮(zhèn)痛和解痙作用[17,19]、調節(jié)免疫功能[20]、抗抑郁[8]等。

目前對紅花八角的研究大多集中在根與樹皮，而對其葉的研究鮮有報道。而藥理實驗研究表明紅花八角葉的醇提液具有中樞及外周鎮(zhèn)痛作用，對多種疼痛及急性軟組織損傷具有較好的止痛和消腫作用，此外還能解除胃腸平滑肌的痙攣以及具有抗炎作用[20]。以紅花八角葉入藥的中成藥金紅片對于治療慢性淺表性胃炎具有較好療效[21-23]。為了全面揭示紅花八角葉的藥效物質基礎，為其進一步的合理開發(fā)利用奠定基礎，本課題組對紅花八角葉開展了系統(tǒng)的化學成分研究，前期本課題組已經從紅花八角葉50%乙醇提取物經大孔吸附樹脂50%乙醇洗脫部分中分離鑒定了24個木脂素類成分（包括9個新化合物）[24]；1個新的酚酸苷和1個新的苯并呋喃衍生物[25]以及14個酚酸類成分（包括8個新化合物）[26]。為了進一步豐富其化學多樣性，對紅花八角葉50%乙醇提取物經HP-20大孔吸附樹脂30%乙醇洗脫部位進行化學成分研究，從中分離鑒定5個化合物，分別鑒定為7---甲氧基芐基莽草酸（7---methoxybenzyl shikimic acid，1）、黑麥草內酯（loliolide，2）、去氫催吐蘿芙木醇（dehydrovomifoliol，3）、蚱蜢酮（grasshopper ketone，4）、chakyunglupulin A（5），其中化合物1為新的酚酸類化合物，2～5為首次從該屬植物中分離得到。

1 儀器與材料

Brucker AVANCE 400型核磁共振儀，F(xiàn)inni-gan LCQ Advantage MAX質譜儀，Waters Snapt G2 mass spectrometer高分辨質譜儀，Shimadzu分析高效液相色譜（Shimadzu LC-6AD series pump，配置UV檢測器），Shimadzu制備型高效液相色譜，P2000旋光測定儀、FT/IR-480 plus紅外光譜儀（KBr壓片）、JASCOV-550型紫外-可見光譜儀（日本Jasco公司)。分析高效液相色譜柱為Phenomenex Gemini（C18，250 mm×4.6 mm，5 μm），制備高效液相色譜柱為C18柱（250 mm×20 mm，5 μm，Nacalai tesque Inc.，日本）。薄層硅膠GF254和柱色譜硅膠（青島海洋化工廠），HP-20型大孔樹脂（Mitsubishi-Chemical，日本），反相ODS填料（Merck公司），Sephadex LH-20填料（Amersham Biosciences公司），Toyo-pearl HW-40填料（Toyo Soda MFG）。

紅花八角葉于2018年從江西吉安藥材市場購買，并由江蘇康緣藥業(yè)股份有限公司的生藥鑒定學專家吳舟教授鑒定為五味子科八角屬植物紅花八角Tutcher，藥材標本（2018ID101）保存于暨南大學中藥及天然藥物研究所。

2 提取與分離

取干燥的紅花八角葉15.5 kg，用8～10倍量50%乙醇回流提取3次，每次2 h，合并提取液，減壓回收乙醇，噴霧干燥得紅花八角葉干膏粉2 kg。將得到的總提取物用適量水分散后，經HP-20大孔吸附樹脂柱色譜，用水及30%、50%和95%乙醇梯度洗脫，得到4個洗脫部位：水洗脫部位（ID-1，1.28 kg）、30%乙醇洗脫部位（ID-2，326.1 g）、50%乙醇洗脫部位（ID-3，203.5 g）和95%乙醇洗脫部位（ID-4，107.8 g）。取30%乙醇水洗脫部分ID-2（300 g）進行硅膠柱色譜分離，二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到6個流分Fr. 2A～2F。再經過硅膠柱色譜、ODS柱色譜、Sephadex LH-20、Toyopearl HW-40、半制備HPLC以及重結晶等方法分離純化。從Fr. 2B中得到化合物1（8.5 mg）、2（52.6 mg）、3（15.5 mg）、4（24.9 mg）和5（36.4 mg）。

3 結構鑒定

化合物1的1H-NMR (400 MHz, CD3OD) 圖譜中顯示2組相互偶合的芳香質子信號 [H7.31 (2H, d,= 8.5 Hz, H-2′, 6′), 6.91 (2H, d,= 8.5 Hz, H-3′, 5′)]，表明結構中含有1個對位取代苯環(huán)；1個甲氧基氫信號 [H3.79 (3H, s, 4′-OCH3)]；1個連氧的亞甲基氫信號 [H5.14 (1H, d,= 12.2 Hz, H-7′a), 5.11 (1H, d,= 12.2 Hz, H-7′b)]；1個烯烴質子信號 [H6.80 (1H, t,= 1.4 Hz, H-2)] 和3個連氧次甲基氫信號 [H4.36 (1H, brs, H-3), 3.68 (1H, dd,= 7.1, 4.2 Hz, H-4), 3.99 (1H, dd,= 12.0, 5.1 Hz, H-5)]；13C-NMR (100 MHz, CD3OD) 結合DEPT-135譜可觀察到15個碳信號，包括4個季碳信號 (C129.6, 130.4, 161.2, 168.0)、8個次甲基碳信號 (C67.3, 68.4, 72.5, 114.9×2, 131.1×2, 139.2)、2個亞甲基碳信號 (C31.4, 67.4) 和1個甲氧基碳信號 (C55.7)。

在1H-1H COSY譜中（圖1）可觀察到H-2/H-3/H-4/H-5/H2-6相關，結合HMBC譜中H-2/C-4,6,7；H-4/C-2,6；H-5/C-1以及 H-6/C-2,4的遠程相關可構建一個莽草酸結構片段。莽草酸結構片段的絕對構型主要通過與文獻進行了光譜數(shù)據的比對[27]。最后，在HMBC譜中還可以觀察到H-7′/C-1′,2′,6′,7的遠程相關，確定結構中含有-甲氧基苯甲醇結構片段與莽草酸片段的C-7位羧酸成酯，因此確定了化合物1的結構。

化合物1的碳氫信號歸屬見表1，經SciFinder網絡檢索，化合物1為新的酚酸類化合物，命名為7---甲氧基芐基莽草酸，化合物結構見圖1。

圖1 化合物1的主要1H-1H COSY () 和HMBC ()相關

表1 化合物1的核磁數(shù)據 (400/100 MHz, CD3OD)

化合物2：白色粉末，HR-ESI-MS給出/219.099 9 [M＋Na]+（計算值219.099 7），確定化合物分子式為C11H16O3，不飽和度為4。1H-NMR (400 MHz, CD3OD): 5.74 (1H, s, H-7), 2.43 (1H, dt,= 13.2, 2.6 Hz, H-4a), 1.99 (1H, dt,= 15.0, 2.6 Hz, H-2a), 1.76 (3H, s, CH3-11), 1.75 (1H, dd,= 13.2, 4.0 Hz, H-4b), 1.54 (1H, dd,= 15.0, 4.0 Hz, H-2b), 1.46 (3H, s, 9-CH3), 1.27 (3H, s, 10-CH3)；13C-NMR (100 MHz, CD3OD): 185.7 (C-8), 174.4 (C-6), 113.3 (C-7), 89.0 (C-5), 67.3 (C-3), 48.0 (C-2), 46.4 (C-4), 37.2 (C-1), 31.0 (C-10), 27.4 (C-11), 27.0 (C-9)。氫譜、碳譜數(shù)據與文獻報道一致[28]，故鑒定化合物2為黑麥草內酯。

化合物3：黃色油狀物，HR-ESI-MS給出/245.115 8 [M＋Na]+（計算值245.115 4），確定化合物分子式為C13H18O3，不飽和度為5。1H-NMR (400 MHz, CD3OD): 7.00 (1H, d,= 15.8 Hz, H-7), 6.44 (1H, d,= 15.8 Hz, H-8), 5.94 (1H, s, H-4), 2.61 (1H, d,= 17.2 Hz, H-2a), 2.31 (3H, s, CH3-10), 2.27 (1H, d,= 17.2 Hz, H-2b), 1.91 (3H, s, CH3-13), 1.07 (3H, s, CH3-12), 1.03 (3H, s, CH3-11)；13C-NMR (100 MHz, CD3OD): 200.7 (C-9), 200.4 (C-3), 164.6 (C-5), 148.4 (C-7), 131.7 (C-8), 128.0 (C-4), 80.0 (C-6), 50.5 (C-2), 42.7 (C-1), 27.6 (C-10), 24.7 (C-12), 23.5 (C-11), 19.2 (C-13)。氫譜、碳譜數(shù)據與文獻報道一致[29]，故鑒定化合物3 (+)-去氫催吐蘿芙木醇。

化合物4：黃色油狀物，HR-ESI-MS給出/247.131 2 [M＋Na]+（計算值247.131 0），確定化合物分子式為C13H20O3，不飽和度為4。1H-NMR (400 MHz, CD3OD): 5.82 (1H, s, H-8), 4.20 (1H, m, H-3), 2.19 (1H, m, H-4a), 2.18 (3H, s, CH3-10), 1.92 (1H, m H-2a), 1.41 (1H, m, H-2b), 1.37 (6H, s, CH3-12, 13), 1.35 (1H, m, H-4b), 1.15 (3H, s, CH3-11)；13C-NMR (100 MHz, CD3OD): 211.5 (C-7), 200.8 (C-9), 119.9 (C-6), 101.1 (C-8), 72.4 (C-5), 64.4 (C-3), 49.9 (C-2), 49.7 (C-4), 37.0 (C-1), 32.3 (C-12), 30.8 (C-13), 29.3 (C-11), 26.5 (C-10)。氫譜、碳譜數(shù)據與文獻報道一致[30]，故鑒定化合物4為蚱蜢酮。

化合物5：無色油狀物，HR-ESI-MS給出/237.110 7 [M＋Na]+（計算值237.110 3），確定化合物分子式為C11H18O4，不飽和度為3。1H-NMR (400 MHz, CD3OD): 5.79 (1H, s, H-2), 4.11 (1H, m, H-6), 2.48 (1H, ddd,= 11.7, 4.1, 2.2 Hz, H-5a), 2.02 (1H, ddd,= 13.0, 4.4, 2.2 Hz, H-7a), 1.60 (3H, s, CH3-11), 1.41 (1H, t,= 12.3 Hz, H-5b), 1.32 (3H, s, CH3-10), 1.30 (3H, s, CH3-9), 1.28 (1H, overlapped, H-17b)；13C-NMR (100 MHz, CD3OD): 183.9 (C-1), 174.0 (C-3), 113.7 (C-2), 88.6 (C-4), 65.3 (C-6), 50.7 (C-7), 48.8 (C-5), 36.2 (C-8), 30.3 (C-10), 25.8 (C-11), 25.3 (C-9)。氫譜、碳譜數(shù)據與文獻報道一致[31]，故鑒定化合物5為chakyunglupulin A。

利益沖突 所有作者均聲明不存在利益沖突

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A new phenolic acid from leaves of

SHEN Lang1, LI Xu2, CAO Liang2, WANG Zhen-zhong2, XIAO Wei2, GENG Jian-liang1

1. School of Traditional Chinese Medicine Guangdong Pharmaceutical University, Guangzhou 510006, China 2. National Key Laboratory on Technologies for Chinese Medicine Pharmaceutical Process Control and Intelligent Manufacture, Kanion Pharmaceutical Co., Ltd., Lianyungang 222001, China

To study the constituents from the dried leaves of.The chemical constituents were isolated by various chromatographic techniques and their structures were identified by physicochemical properties and nuclear magnetic resonance spectroscopic data of the compounds.Five compounds were obtained from ID-2 and characterized as 7---methoxybenzyl shikimic acid (1), loliolide (2), dehydrovomifoliol (3), grasshopper ketone (4), chakyunglupulin A (5), respectively.Compound 1 is a new phenolic acid, and compounds 2—5 are identified fromfor the first time.

Tutcher; 7--pmethoxybenzyl shikimic acid; loliolide; dehydrovomifoliol; grasshopper ketone; chakyunglupulin A

R284.1

A

0253 - 2670(2023)20 - 6592 - 04

10.7501/j.issn.0253-2670.2023.20.004

2023-05-18

2021年國家中醫(yī)藥管理局岐黃學者項目（國中醫(yī)藥人教函[2022]6號）

沈 浪，男，在讀本科生。E-mail: 905154412@qq.com

通信作者：肖 偉，中國工程院院士，博士生導師，研究方向為中藥新劑型研究與開發(fā)。E-mail: xw_kanion@163.com

耿劍亮，博士，研究方向為代謝組學，中藥及天然藥物活性成分研究。E-mail: gengjianliang8521@126.com

[責任編輯 王文倩]