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        蝴蝶蘭WRKY57基因的克隆、亞細胞定位及響應(yīng)脫落酸功能分析

        2023-10-19 05:51:06朱飛雪程玉江
        江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué) 2023年18期
        關(guān)鍵詞:植物

        朱飛雪, 程玉江, 郭 麗

        (1. 河南農(nóng)業(yè)職業(yè)學(xué)院園藝園林學(xué)院,河南中牟 451450; 2. 河南東寶園林綠化工程有限公司,河南鄭州 451450)

        脫落酸(ABA)是植物體內(nèi)重要的天然激素,在植物細胞分化、休眠、組織發(fā)育等過程中發(fā)揮著至關(guān)重要的作用[1]。當植物受到外部環(huán)境脅迫時,ABA的合成、轉(zhuǎn)運及分布會受到顯著影響[2]。WRKY蛋白是植物中特異的轉(zhuǎn)錄因子家族,其特征為WRKY在蛋白質(zhì)序列中存在高度保守的WRKY結(jié)構(gòu)域,WRKY結(jié)構(gòu)域由1個保守的核心序列WRKY-GQK和1個鋅指基序組成[3]。WRKY蛋白可根據(jù)WRKY保守結(jié)構(gòu)域的數(shù)量和氨基酸序列分為3型:Ⅰ型WRKY蛋白包含2個WRKY結(jié)構(gòu)域,而Ⅱ、Ⅲ型WRKY皆由1個WRKY結(jié)構(gòu)域組成;但不同型WRKY的鋅指基序不同,在Ⅰ、Ⅱ型WRKY蛋白的C末端具有C2H2基序,而Ⅲ型的C末端則為C2HC[4]。此外,根據(jù)序列相似性,Ⅱ型分為a、b、c、d、e 5個亞型[5]。已有研究表明,WRKY轉(zhuǎn)錄因子在應(yīng)對生物脅迫和調(diào)控植物生長發(fā)育方面發(fā)揮著重要作用,然而其對植物激素的串聯(lián)反應(yīng)鮮有研究涉及。

        自從WRKY轉(zhuǎn)錄因子首次在蘭科植物中被發(fā)現(xiàn)以來,關(guān)于WRKY基因的研究主要集中于生物學(xué)進展上,多項研究證實WRKY轉(zhuǎn)錄因子參與腺毛生長、種子萌發(fā)、果實成熟、葉片衰老等過程[6-8]。Raineri等研究表明,在水分脅迫下,HaWRKY76轉(zhuǎn)基因株系和野生型向日葵轉(zhuǎn)基因植株表現(xiàn)出更強的抗逆性和更高的產(chǎn)量[9]。王茹等發(fā)現(xiàn),番茄SlWRKY6轉(zhuǎn)錄因子的過表達可誘導(dǎo)植株細胞壁螯合重金屬,從而對植株重金屬累積具有負調(diào)控作用[10]。低溫脅迫下,馬鈴薯StWRKY15基因的過表達可顯著提高脯氨酸、可溶性糖、總蛋白含量,降低丙二醛分泌,從而減輕寒冷脅迫對植株帶來的不利影響[11]。在水稻中,OsWRKY11可被熱應(yīng)激和轉(zhuǎn)基因誘導(dǎo)上調(diào)表達,從而增強水稻幼苗對高溫脅迫的耐受性[12]。此外,WRKY轉(zhuǎn)錄因子在病害[13]、蟲害[7,14-15]等生物脅迫方面亦發(fā)揮著重要作用。

        蘭科是最大的被子植物之一,約占被子植物總量的10%,在全世界約有750屬25 000余種。目前關(guān)于蘭科植物的研究主要集中在花朵發(fā)育、色素機制、菌根共生等方面[16]。隨著分子生物學(xué)技術(shù)特別是高通量測序技術(shù)的廣泛應(yīng)用,已經(jīng)探索了蘭科MADS-box、MYB家族的全基因組特征和響應(yīng)環(huán)境變化的功能分析[17]。蝴蝶蘭(Phalaenopsisaphrodite)是我國栽培的重要蘭科植物,具有較高的觀賞價值和經(jīng)濟價值。然而,該品種的過度挖取和生態(tài)環(huán)境惡化,使得蝴蝶蘭種質(zhì)資源和生存環(huán)境維護日趨嚴峻[18]。WRKY家族是植物中最大的超家族之一,然而對蘭科植物WRKY轉(zhuǎn)錄因子的結(jié)構(gòu)及功能卻知之甚少?;诖?本研究從蝴蝶蘭中克隆并分析了PaWRKY57基因,探索了該基因的理化特性、亞細胞定位、組織表達、響應(yīng)脫落酸的功能分析,旨在為蝴蝶蘭的育種和遺傳改良提供理論依據(jù)。

        1 材料與方法

        1.1 植物材料處理

        試驗于2021年6—10月在河南農(nóng)業(yè)職業(yè)學(xué)院人工氣候室中進行。蝴蝶蘭品種為滿天紅,為河南東寶綠化工程園林有限公司培養(yǎng)的二年生組培苗。供試野生型擬南芥(Arabidopsisthaliana)種子為擬南芥Col-0生態(tài)型,過表達擬南芥種子為PaWRKY57轉(zhuǎn)化型,供試煙草品種為本氏煙草(Nicotianabenthamiana),購自福州愛若莎生物科技有限公司。供試脫落酸(ABA,C15H20O4)購自Sigma-Aldrich化工試劑公司。供試培養(yǎng)基質(zhì)為泥炭、蛭石按體積比2 ∶ 1復(fù)配。

        將二年生的蝴蝶蘭組培苗置于75%相對濕度的人工氣候室中培養(yǎng),光—暗周期為16 h—8 h,光照度為150 μmol/(m2·s),晝、夜溫度分別為26、22 ℃;并在0、2、4、8、12、24、48 h取樣保存于 -80 ℃ 環(huán)境。用于瞬時轉(zhuǎn)化的本氏煙草培養(yǎng)環(huán)境同蝴蝶蘭組培苗。

        將野生Col-0生態(tài)型擬南芥種子置于裝滿培養(yǎng)基質(zhì)的缽體中,標記為WT,基質(zhì)含水量為75%,轉(zhuǎn)移至人工氣候室中。相關(guān)過表達轉(zhuǎn)化品系培養(yǎng)方式同Col-0生態(tài)型。對于過表達擬南芥的外源脫落酸處理:采用10 mmol/L ABA噴灑擬南芥的葉子直至滴落,并在處理后0、12、24、48 h取樣。

        1.2 WRKY基因克隆及序列分析

        1.2.1WRKY基因的克隆 采用MiniBEST Plant RNA 提取試劑盒[TaKaRa,寶生物工程(大連)有限公司]對蝴蝶蘭進行總RNA提取,采用PrimeScript RT Master Mix試劑盒[TaKaRa,寶生物工程(大連)有限公司]逆轉(zhuǎn)錄合成第一鏈cDNA,將cDNA稀釋100倍以適合PCR反應(yīng),引物由Oligo5.0軟件根據(jù)PaWRKY57基因序列設(shè)計(表1),并通過RT-PCR克隆全長PaWRKY57基因。PCR反應(yīng)程序如下:94 ℃ 3 min;98 ℃ 10 s,56 ℃ 15 s,72 ℃ 30 s,32個循環(huán);72 ℃ 5 min。PCR產(chǎn)物采用2%瓊脂糖凝膠電泳檢測其質(zhì)量和純度。將擴增的片段純化并連接到pEASYBlunt載體,然后將該載體轉(zhuǎn)化到Trans5α細胞中,并測試其克隆陽性反應(yīng)。

        表1 qRT-PCR引物序列信息

        1.2.2WRKY基因的序列分析 通過Expasy系統(tǒng)(http://web.expasy.org/compute_pi/)在線預(yù)測氨基酸序列的物理和化學(xué)性質(zhì),包括分子量和等電點[19]。使用WOLF PSORT (http://www.genscript.com/psort/wolf_psort.html)對蛋白質(zhì)亞細胞定位進行在線預(yù)測。使用SMART(http://smart.embl-heidelberg.de/)對保守域進行在線預(yù)測。多序列比對通過Clustal W (http://www.clustal.org/clustal2/)和DNAMAN5.0軟件(Lynnon Biosoft,https://www.lynnon.com/dnaman.html)進行。AtWRKY和OsWRKY轉(zhuǎn)錄因子的氨基酸序列從TAIR 9.0 (http://www.arabidopsis.org/index.jsp)和植物轉(zhuǎn)錄因子數(shù)據(jù)庫(http://planttfdb.cbi.pku.edu.cn/)下載。采用MEGA 7.0軟件的鄰接法(NJ)構(gòu)架系統(tǒng)發(fā)育樹,bootstrap設(shè)置為1 000[20]。

        1.3 亞細胞定位測定

        利用在線軟件Plant-mPLoc 9.0(http://linux1.softberry.com/all.htm)和Cell-PLoc 2.0軟件[21](http://www.csbio.sjtu.edu.cn/bioinf/Cell-PLoc-2/)對蝴蝶蘭PaWRKY57蛋白進行亞細胞定位。根據(jù)PaWRKY57序列設(shè)計不含有終止密碼子(ORF)的XbaI/SmaI酶切位點特異性引物(表1),并以蝴蝶蘭cDNA為模板進行PCR擴增,利用雙酶切技術(shù)(NEB)將產(chǎn)物與pBI121-綠色熒光蛋白(GFP)載體用T3連接酶連接,最終構(gòu)建pBI121-GFP ∶PaWRKY57融合表達載體。將新鮮的表達載體轉(zhuǎn)化到根癌農(nóng)桿菌菌株GV3101中,5 000 r/min離心10 min,棄上清,在沉淀物中加入新鮮的煙草浸潤緩沖液(0.15 μmol/L乙酰丁香酮、10 mmol/L MgCl2、10 mmol/L MES(嗎啉乙磺酸),pH值為5.6),最終D600 nm調(diào)節(jié)為0.8。室溫靜置2 h后接種至5葉齡的健康本式煙葉表皮。采用共聚焦激光掃描顯微鏡(LSM710,Carl Zeiss,Jena,德國)觀察。

        1.4 實時定量PCR分析

        采用同基因克隆方式提取植物RNA,合成cDNA,使用ChamQ SYBR qPCR Master Mix(南京諾唯贊生物科技股份有限公司)在Step One Plus實時PCR系統(tǒng)(Thermo Fisher,Waltham,MA,美國)上進行RT-qPCR分析。反應(yīng)程序如下:95 ℃ 5 min;95 ℃ 15 s,60 ℃ 60 s,40個循環(huán)。在分析PaWRKY57的表達水平時,使用蝴蝶蘭的18S-1300作為內(nèi)參基因(表1)。qRT-PCR結(jié)果采用2-△△CT算法進行相對表達量分析。

        1.5 PaWRKY57的擬南芥植株轉(zhuǎn)化

        pBI121-35S ∶PaWRKY57通過根癌農(nóng)桿菌介導(dǎo)的花朵浸泡法轉(zhuǎn)化擬南芥[13]。感染擬南芥花朵45~60 s后,在黑暗中培養(yǎng)20 h,在含有50 mg/L卡那霉素(C18H38N4O15S)的MS培養(yǎng)基上篩選轉(zhuǎn)基因種子,并將傳代植物用于進一步試驗。

        1.6 轉(zhuǎn)化植株葉綠素含量及內(nèi)源性技術(shù)含量測定

        葉綠素含量(葉綠素a、葉綠素b)測定皆采用乙醇丙酮浸提法,采用紫外分光光度計(UV-1800,上海美譜達儀器有限公司)在663、646 nm處測定,具體步驟參照李合生的方法[22]。采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)測定擬南芥葉片中內(nèi)源激素脫落酸(ABA)、油菜素內(nèi)酯(BR)、赤霉素(GA)、吲哚乙酸(IAA)的含量,具體步驟參考Xu等所述[23]。

        1.7 數(shù)據(jù)處理與統(tǒng)計分析

        采用Microsoft Excel 2020對試驗數(shù)據(jù)進行整理,采用SPSS 23.0軟件進行單因素方差分析(ANOVA),采用鄧肯氏多重比較進行統(tǒng)計分析(α=0.05),采用Origin 2022進行圖形繪制。

        2 結(jié)果與分析

        2.1 蝴蝶蘭PaWRKY57基因克隆及蛋白質(zhì)理化性質(zhì)分析

        以蝴蝶蘭cDNA為模板用PaWRKY57的特異性引物PaWRKY57-F/R進行PCR擴增,然后采用2%瓊脂糖凝膠電泳檢測,得到全長2 049 bp的特異性條帶(圖1-A)。PaWRKY57具有1個開放閱讀框(ORF),編碼682個氨基酸。利用Expasy在線工具預(yù)測結(jié)果表明,PaWRKY57蛋白的理論等電點為6.17,分子質(zhì)量為76 416.43 ku,不穩(wěn)定指數(shù)為45.24,脂肪系數(shù)為45.79,平均親水性系數(shù)為 -0.906,顯示PaWRKY57蛋白是一種不穩(wěn)定的親水蛋白。二級結(jié)構(gòu)由19.50%的α-螺旋、15.25%延伸鏈、4.84%β-轉(zhuǎn)角和60.41%的無規(guī)則卷曲結(jié)構(gòu)組成(圖1-B)。

        2.2 蝴蝶蘭PaWRKY57基因序列和系統(tǒng)發(fā)育樹分析

        根據(jù)SMART在線工具分析,選取與PaWRKY57同源植物的WRKY保守結(jié)構(gòu)域構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹。結(jié)果表明,PaWRKY57與WRKY家族Ⅲ型的水稻OsWRKY45,擬南芥的AtWRKY30、AtWRKY41、AtWRKY53、AtWRKY70進行序列對比,發(fā)現(xiàn)其皆具有WRKY家族典型的“WRKYGQK”域,表明PaWRKY57屬于Ⅲ型家族(圖2-A)。為進一步確定PaWRKY57的分類地位,采用MEGA 7.0軟件對WRKY之間的進化關(guān)系進行系統(tǒng)發(fā)育樹分析,結(jié)果顯示13個蝴蝶蘭WRKY轉(zhuǎn)錄因子分別屬于Ⅲ型(PaWRKY70、PaWRKY57、PaWRKY53)、Ⅰ型(PaWRKY2、PaWRKY3、PaWRKY24、PaWRKY4)、Ⅱa型(PaWRKY40)、Ⅱb型(PaWRKY31)、Ⅱc型(PaWRKY49)、Ⅱd型(PaWRKY21、PaWRKY11)、Ⅱe型(PaWRKY65)??偠灾?確定PaWRKY57屬于Ⅲ型亞家族(圖2-B)。

        2.3 PaWRKY57在不同組織和ABA處理下的葉片表達模式

        基因表達模式通常與基因功能密切相關(guān)。為了更好地了解PaWRKY57的功能,分析了其在蝴蝶蘭不同組織(根系、假鱗莖、葉片、花朵)中的表達水平。結(jié)果表明,PaWRKY57基因在所有組織中都有陽性表達,但在這4個器官中表現(xiàn)出不同的表達水平,其中在假鱗莖中表達水平最低,在葉片中相對表達量最高(圖3-A),表明PaWRKY57與葉片發(fā)育最為相關(guān)。作為一種植物激素反應(yīng)因子,PaWRKY57對外源性脫落酸反應(yīng)強烈,噴施ABA后PaWRKY57的表達水平顯著增加,并在處理后2 h達到峰值,而其在12 h的表達水平與2 h相當,此后急劇下降(圖3-B),這種“升—降—升—降”的表達模式表明PaWRKY57與外源脫落酸之間存在較為復(fù)雜的調(diào)控關(guān)系。

        2.4 PaWRKY57的亞細胞定位

        為了在蛋白質(zhì)水平上探索PaWRKY57在細胞中的可能駐位點,借助在線分析工具WoLF PSORT預(yù)測了PaWRKY57蛋白的分布位置。如圖4所示,PaWRKY57可能存在于細胞核中;為了確定PaWRKY57的亞細胞準確位置,構(gòu)建了一個PaWRKY57 ∶ GFP融合蛋白,通過農(nóng)桿菌介導(dǎo)浸潤在本氏煙草中瞬時表達。結(jié)果表明,在激光共聚焦顯微鏡下,細胞核DNA被二脒基-2-苯基吲哚的藍色熒光(DAPI)染色,PaWRKY57 ∶ GFP綠色熒光與藍色熒光大部分重疊,表明PaWRKY57位于細胞核內(nèi)。

        2.5 過表達PaWRKY57及響應(yīng)ABA處理的表型分析

        選擇來自T2代的獨立轉(zhuǎn)基因系進行表型觀察。通過觀察擬南芥的整個生長周期,發(fā)現(xiàn)過表達PaWRKY57的轉(zhuǎn)基因植株比野生生態(tài)型(WT)植株開花更早(圖5-A),同時葉片衰老黃化更迅速(圖5-B、圖5-C),噴施ABA進一步加快了葉片的衰老;即相同培養(yǎng)周期內(nèi),過表達PaWRKY57或過表達噴施ABA其葉形無明顯變化,但葉黃化更明顯。為此測定了植株葉片葉綠素含量,結(jié)果表明,PaWRKY57過表達以及噴施ABA條件下均顯著降低了擬南芥葉片葉綠素a、葉綠素b含量(圖5-D~E)。在葉綠素a與葉綠素b含量比值中,轉(zhuǎn)基因與野生型擬南芥無明顯差異,且均顯著低于 ABA+PaWRKY57處理(圖5-G)。綜上,過表達PaWRKY57使植株生長史時間縮短,在此基礎(chǔ)上噴施ABA則加速葉片衰老。

        2.6 ABA處理下過表達擬南芥葉片激素變化分析

        由圖6所示,在擬南芥的葉片中檢測到了內(nèi)源激素,包括脫落酸、赤霉素、油菜素內(nèi)酯、吲哚乙酸。結(jié)果顯示,脫落酸噴施處理下,轉(zhuǎn)化擬南芥中的ABA、GAs含量呈相同變化趨勢,即隨著脫落酸噴施處理時間的延長,ABA、GAs含量呈先升高后降低的趨勢,脫落酸處理后各處理ABA、GAs含量均表現(xiàn)為ABA+PaWRKY57>PaWRKY57>WT,且ABA+PaWRKY57均在處理后12 h出現(xiàn)峰值,此時PaWRKY57、ABA+PaWRKY57、WT間兩兩均差異顯著(圖6-A、圖6-B)。而在脫落酸噴施處理后,各處理BR含量均呈上升趨勢,且各處理BR含量均呈WT>PaWRKY57>ABA+PaWRKY57(圖6-C)。IAA含量與BR含量存在相反變化趨勢,即隨著處理時間延長,IAA含量均呈下降趨勢,但同時各處理IAA含量均呈WT>PaWRKY57>ABA+PaWRKY57(圖6-D)。

        3 討論

        蝴蝶蘭為蘭科(Orchidaceae)蝴蝶蘭屬(Phalaenopsis)多年生觀賞性草本植物,蝴蝶蘭以其花姿優(yōu)美、葉色翠綠、香氣馥郁、葉藝優(yōu)雅等特點深受園藝愛好者喜愛[24]。本研究從蝴蝶蘭中克隆得到PaWRKY57蛋白,生物學(xué)信息表明:PaWRKY57理論等電點為6.17,分子質(zhì)量為76 416.43 ku,脂肪系數(shù)為45.79,且不穩(wěn)定指數(shù)大于40(45.24)、平均親水性系數(shù)為負值(-0.906)。根據(jù)Expasy系統(tǒng)標準判別顯示,PaWRKY57蛋白是一種不穩(wěn)定的親水蛋白[19]。

        本研究序列對比分析表明,蝴蝶蘭WRKY蛋白存在完整的WRKYGQK序列。前人研究發(fā)現(xiàn)不同植物WRKY轉(zhuǎn)錄因子的基序保守序列不同,而被子植物進化而來的WRKY蛋白發(fā)生突變、存在大概率事件[25]。然而,本研究中PaWRKY57結(jié)構(gòu)域的核心序列不包含突變序列(圖2-A),表明PaWRKY57結(jié)構(gòu)域高度保守且其氨基酸序列在進化過程中沒有發(fā)生大量變化。系統(tǒng)發(fā)育分析顯示PaWRKY57、AtWRKY53等隸屬于WRKY轉(zhuǎn)錄因子家族的Ⅲ型家族;而PaWRKY57、OsWRKY47同屬一個小分支中,說明兩者在功能上可能與水稻OsWRKY47相似?;陔p酶切技術(shù)構(gòu)建pBI121-GFP ∶ PaWRKY57融合表達載體,雙熒光染色分析顯示在本氏煙葉葉片中PaWRKY57存在于細胞核內(nèi)。

        基因表達模式是反映基因功能表達導(dǎo)向的重要指標,在植物組織中高表達的WRKY家族往往主導(dǎo)該組織的生長發(fā)育[26]。如編碼擬南芥WRKY轉(zhuǎn)錄因子的TESTA GLABRA2(TTG2)早期存在于種皮中,而進入生長期后則主要在葉片中表達[27]。擬南芥WRKY轉(zhuǎn)錄因子家族的37個成員中有32個存在于葉片表達域中,表明WRKY在葉細胞成熟中發(fā)揮特殊作用[28]。本研究中,組織表達分析表明,PaWRKY57在根系、假鱗莖、葉片、花序中均有表達,但在葉片中的表達水平顯著高于其他組織,表明其在葉片相關(guān)生理調(diào)控中扮演著重要角色。脫落酸噴施處理下葉片PaWRKY57表現(xiàn)出“升—降—升—降”的表達模式,同時在噴施ABA后PaWRKY57基因在2、12 h具有最高的表達水平;雙峰的表達模式意味著ABA在誘導(dǎo)PaWRKY57的過程中可能存在多激素潮汐式的波動影響[29]。

        WRKY轉(zhuǎn)錄因子在植物生長發(fā)育中的作用已被眾多研究證實,最新的研究發(fā)現(xiàn)WRKY在植物葉片衰老、矮化等表型的形態(tài)建成方面起著關(guān)鍵作用[30]。一些研究表明,擬南芥AtWRKY53在葉片衰老早期顯著上調(diào),其在轉(zhuǎn)基因擬南芥植物中的過表達加速了葉片衰老進程,而沉默AtWRKY53則延緩了葉片衰老[31]。Besseau等研究發(fā)現(xiàn),敲除AtWRKY54、AtWRKY70的雙突變體植株衰老更快[32]。為進一步研究PaWRKY57轉(zhuǎn)錄因子的功能,通過花浸泡法獲得過表達PaWRKY57植株,與WT擬南芥相比,同一培養(yǎng)期內(nèi),過表達PaWRKY57的轉(zhuǎn)基因植物開花提前且葉片黃化明顯,表明該基因的過表達可能正調(diào)控植物的衰老過程。

        ABA是WRKY調(diào)控網(wǎng)絡(luò)中的關(guān)鍵節(jié)點之一,在轉(zhuǎn)錄信號通路中充當催化劑或抑制劑[33]。茶樹的CsWRKY2基因在葉片中的表達量較高,ABA信號通路通過調(diào)控CsWRKY2基因在植物對寒冷和干旱脅迫的響應(yīng)中發(fā)揮重要作用[34]。鐵皮石斛的DoWRKY5抑制ABI5基因響應(yīng)ABA的表達,并與ABAR調(diào)節(jié)因子負調(diào)控ABA信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路[35]。本研究中,在轉(zhuǎn)基因植株上噴施ABA,轉(zhuǎn)基因植株葉片黃化加劇、葉綠素a/b含量比值更高;此外,液相色譜分析顯示,噴施ABA條件下過表達植株抑生型激素(ABA、GAs)含量更高,而促生長激素(BR、IAA)含量更低。表明PaWRKY57是一個衰老基因且對ABA反應(yīng)敏感,ABA作為促進劑正向調(diào)控著PaWRKY57的功能表達。

        4 結(jié)論

        本研究表明,蝴蝶蘭PaWRKY57是一種不穩(wěn)定的親水性蛋白,具有一個開放閱讀框(ORF),編碼682個氨基酸。亞細胞定位顯示,PaWRKY57蛋白位于細胞核中,根據(jù)其預(yù)測的亞細胞定位可能在細胞內(nèi)發(fā)揮作用。結(jié)構(gòu)域分析和同源性比較表明,PaWRKY57蛋白具有WRKYGQK結(jié)構(gòu)域,屬于WRKY家族Ⅲ型家族,系統(tǒng)發(fā)育分析表明PaWRKY57與水稻OsWRKY47在生物學(xué)功能上密切相關(guān)。實時熒光PCR分析顯示,PaWRKY57在根系、假鱗莖、葉片、花序中表達,在葉片中表達量最高,且在ABA處理下波動較大。與野生型擬南芥品系(WT)相比,PaWRKY57過表達品系的生育周期縮短、葉片黃化嚴重、葉綠素含量降低、促生型植物激素含量降低、抑生型植物激素含量增加。綜上,PaWRKY57是一個響應(yīng)ABA信號的轉(zhuǎn)錄因子,可能參與了ABA信號介導(dǎo)調(diào)控的蝴蝶蘭衰老過程。期待研究結(jié)果可為進一步研究PaWRKY57的功能和為未來蝴蝶蘭的遺傳改良與培育提供理論依據(jù)。

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