熊六妹，王桂良，邱萍，徐林芳，龔敏，李興，文劍波

血清HSP70、VEGF聯(lián)合檢測對可切除胰腺癌診斷及術后生存預測價值

熊六妹，王桂良，邱萍，徐林芳，龔敏，李興，文劍波

南方醫(yī)科大學附屬萍鄉(xiāng)醫(yī)院消化內(nèi)科，江西萍鄉(xiāng) 337000

探討血清熱休克蛋白70（heat shock protein 70，HSP70）、血管內(nèi)皮生長因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）聯(lián)合檢測對可切除胰腺癌診斷及術后生存預測價值。選取2015年12月至2018年10月南方醫(yī)科大學附屬萍鄉(xiāng)醫(yī)院124例行手術治療的Ⅰ～Ⅲ期原發(fā)性胰腺癌患者作為胰腺癌組，另選取16例同期于本院進行健康體檢者作為對照組，檢測胰腺癌組患者手術前和手術后以及對照組血清HSP70、VEGF水平，分析兩項指標相關性，研究其與臨床病理及預后的關系。血清HSP70、VEGF 含量：術前>術后7d>術后1個月>對照組（<0.05），胰腺癌組患者術前、術后7d、術后1個月血清HSP70水平與血清VEGF含量呈正相關（<0.05）。胰腺癌組患者術前腫瘤>3cm、腫瘤分化程度低、臨床分期Ⅲ期、淋巴結轉(zhuǎn)移患者血清 HSP70、VEGF含量分別高于腫瘤≤3cm、腫瘤分化程度高、臨床分期Ⅰ期或Ⅱ期、未發(fā)生淋巴結轉(zhuǎn)移者（<0.05）。血清HSP70和VEGF對胰腺癌的診斷均有較好的特異性，聯(lián)合診斷效果更好（<0.05）。HSP70濃度和VEGF濃度均與胰腺癌患者術后生存時間呈負相關（<0.05）。單因素回歸分析和多因素Cox回歸分析顯示腫瘤直徑、淋巴結轉(zhuǎn)移、腫瘤淋巴結轉(zhuǎn)移（tumor-node-metastasis，TNM）分期、分化程度、遠處轉(zhuǎn)移、HSP70和VEGF濃度均是胰腺癌預后的獨立危險因素（<0.05）。胰腺癌患者血清 HSP70和VEGF與惡性生物學行為呈正相關，與生存時間呈負相關，是胰腺癌術后預后的獨立危險因素。

胰腺癌；HSP70；VEGF；預測價值

胰腺癌是一種惡性程度極高、預后極差、轉(zhuǎn)移率高的消化系統(tǒng)腫瘤，據(jù)Siegel等[1]統(tǒng)計其5年生存期約10%，發(fā)病率以每年0.5%～1.0%速度增長。胰腺屬于腹膜后位器官，因此胰腺癌患者早期癥狀隱匿，很難發(fā)現(xiàn)，而當患者出現(xiàn)腹痛、黃疸等不適時，已經(jīng)發(fā)展至晚期，錯失手術治療時機。目前臨床上診斷的患者，可手術切除的僅為10%～15%，而轉(zhuǎn)移的可達50%～55%[2]。尋找敏感的腫瘤標志物，對胰腺癌早期診斷和治療監(jiān)測，是十分迫切而重要的課題。血管內(nèi)皮生長因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）是一種高度特異性促血管內(nèi)皮生長因子，包括VEGFA、VEGFB、VEGFC、VEGFD、VEGFE等5個成員，其中研究最多并重要的是VEGFA，它在1983年首次被Senger等[3]所認識并提取。VEGF可以在血管內(nèi)皮細胞、免疫相關細胞及其他細胞起重要作用，在正常生理下可以維持血管穩(wěn)態(tài)、介導血管生成，而在腫瘤環(huán)境中參與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展、侵襲、血管通透性、癌細胞轉(zhuǎn)移[4]。學者提出阻斷VEGF作為腫瘤治療新靶點，如貝伐珠單抗治療非小細胞肺癌、晚期結直腸癌、多形性成膠質(zhì)細胞瘤、卵巢癌和宮頸癌等眾多實體瘤[5]。熱休克蛋白70（heat shock protein 70，HSP70）是一種應激蛋白，機體在缺血、感染、缺氧、熱刺激等應激原打擊下，HSP70表達升高，提高機體的應激能力。其生理作用包括蛋白質(zhì)跨膜運輸、蛋白質(zhì)折疊、聚合、裝配、拆卸及維持細胞內(nèi)環(huán)境穩(wěn)態(tài)。崔曉梅等[6]及Vostakolaei等[7]研究發(fā)現(xiàn)HSP70在很多癌癥中表達升高，可作為腫瘤標志物。本研究旨在聯(lián)合檢測胰腺癌患者血清VEGF與HSP70水平，比較手術前后胰腺癌患者血清HSP70、VEGF含量差異，分析兩項指標的相關性，分析其與臨床病理與預后的關系，為胰腺癌的診斷和術后檢測提供新的分子標志物。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2015年1月至2018年10月南方醫(yī)科大學附屬萍鄉(xiāng)醫(yī)院Ⅰ～Ⅲ期原發(fā)性胰腺癌行手術治療的患者124例作為胰腺癌組，納入標準：①符合《中國胰腺癌綜合診治指南（2020版）》[8]中關于胰腺癌的診斷標準；②Karnofsky評分>60分；③術前未接受過化療、放療或生物治療。排除標準：①嚴重凝血功能障礙患者；②感染急性期；③合并心、肺、肝、腎功能嚴重障礙；④妊娠或哺乳期婦女；⑤合并認知障礙或精神疾病。其中男68例，女56例；高分化46例，中分化30例，低分化48例；臨床分期[9]：Ⅰ期40例，Ⅱ期36例，Ⅲ期48例。另選取16例同期于本院健康體檢者作為對照組，其中男10例，女6例。兩組患者性別、年齡、臨床分期等基本資料比較，差異無統(tǒng)計學意義（>0.05），具有可比性。本研究經(jīng)過南方醫(yī)科大學附屬萍鄉(xiāng)醫(yī)院倫理委員會審核批準（倫理審批號：2020A170-KSO1），患者及其家屬簽署知情同意書。

1.2 ELISA檢測血清HSP70和VEGF

HSP70試劑盒和VEGF試劑盒購于武漢博士德生物工程有限公司，對照組于體檢當日、胰腺癌組于術前、術后7d、術后1個月抽取空腹靜脈血4ml，室溫下4000g/min離心分離血清，酶聯(lián)免疫吸附法操作按試劑盒說明書進行。

1.3 隨訪

所有胰腺癌患者隨訪3年。生存起始時間為胰腺癌手術后，主要終點事件為死亡時間，次要終點事件為隨訪結束。生存期的計算方法為術后到死亡或隨訪結束所歷經(jīng)的時間。

1.4 統(tǒng)計學方法

2 結果

2.1 血清HSP70、VEGF含量比較

術前與術后兩組血清HSP70、VEGF含量比較，差異均有統(tǒng)計學意義（<0.05），見表1。

表1 血清HSP70、VEGF含量比較（）

注：與正常對照組比較，*<0.001；與術前比較，#<0.001；與術后7d比較，△<0.001

2.2 血清HSP70、VEGF對胰腺癌的診斷效能評價

血清HSP70診斷胰腺癌的AUC為0.779，敏感度為66.3%，特異性為93.8%。血清診斷胰腺癌的AUC為0.884，敏感度為86.9%，特異性為74.4%。兩者聯(lián)合診斷胰腺癌的AUC為0.913，敏感度為90.8%，特異性為89.9%。血清HSP70和VEGF對胰腺癌的診斷均有較好的特異性，聯(lián)合診斷效果更好，見圖1。

2.3 胰腺癌組患者血清HSP70、VEGF濃度相關性分析

胰腺癌組患者術前血清HSP70濃度與VEGF濃度、術后7d血清HSP70濃度與VEGF濃度、術后1個月血清HSP70濃度與VEGF濃度均呈現(xiàn)正相關，見圖2。

2.4 胰腺癌組患者術前血清 HSP70、VEGF含量與臨床病理特征的關系分析

胰腺癌組患者術前腫瘤>3cm、腫瘤分化程度低、臨床分期Ⅲ期、淋巴結轉(zhuǎn)移患者血清HSP70、VEGF含量高于腫瘤≤3cm、腫瘤分化程度高、臨床分期Ⅰ期或Ⅱ期、未發(fā)生淋巴結轉(zhuǎn)移者，差異均有統(tǒng)計學意義（<0.05），見表2。

圖1 血清HSP70、VEGF對胰腺癌的診斷價值

圖2 胰腺癌組患者血清HSP70、VEGF含量相關性分析

表2 患者術前血清HSP70、VEGF含量與臨床病理特征的關系分析（）

注：與高分化組比較，*<0.05；與中分化組比較，#<0.05；與Ⅰ期比較，△<0.05；與Ⅱ期比較，▲<0.05

2.5 胰腺癌組患者術前血清 HSP70、VEGF含量與生存時間相關性分析

HSP70和VEGF濃度均與胰腺癌患者術后生存時間呈負相關，濃度越低，生存時間越長，濃度越高，生存時間越短，見圖3。

2.6 HSP70和VEGF對胰腺癌預后的危險因素分析

單因素回歸分析顯示，性別、年齡、腫瘤位置與胰腺癌預后相關不相關；腫瘤直徑、淋巴結轉(zhuǎn)移、TNM分期、分化程度、遠處轉(zhuǎn)移、HSP70和VEGF濃度與胰腺癌預后顯著相關。進一步多因素Cox回歸分析顯示腫瘤直徑、淋巴結轉(zhuǎn)移、TNM分期、分化程度、遠處轉(zhuǎn)移、HSP70和VEGF濃度均是胰腺癌預后的獨立危險因素，見表3。

3 討論

胰腺癌是最致命的癌癥類型之一，由于胰腺癌細胞的分子異質(zhì)性，它始終具有增殖潛力，侵襲性，具有較高的轉(zhuǎn)移率和復發(fā)率，其發(fā)生是個多基因、多步驟、多階段的演變過程。尋找可靠的胰腺癌預后標志物是重要的課題。癌抗原199（cancer antigen 199，CAl99）作為胰腺癌診斷的重要標志物，其敏感度度高，但其他疾病（胰腺炎、膽管相關疾病）也常升高，容易出現(xiàn)假陽性結果。VEGF是目前熟知的腫瘤標志物，如結直腸癌、卵巢癌、胃癌、膀胱癌、非小細胞肺癌等。同時有大量有關其在與腫瘤預后及治療相關研究，研究發(fā)現(xiàn)VEGF在乳腺癌中臨床病理差異及預后明顯相關，Xu等[10]研究發(fā)現(xiàn)VEGF在肝細胞肝癌這種血管豐富的腫瘤表達明顯增高并作為驅(qū)動因素。Pistol-tanase等[11]在其研究中發(fā)現(xiàn)VEGF與胰腺癌的臨床病理特征密切相關，可以作為胰腺癌診斷的候選標志物，本研究也進一步證實此結論。HSP70是一種常見且重要的伴侶蛋白，與腫瘤增殖、轉(zhuǎn)移、血管生成、腫瘤免疫逃逸方面密切相關。大量研究發(fā)現(xiàn)過表達HSP70作為腫瘤診斷的一個敏感的生物標志物，如結腸癌、前列腺癌、乳腺癌、肺癌。同時也監(jiān)測腫瘤的治療效果及反映預后，Li等[12]發(fā)現(xiàn)過表達HSP70抑制了腫瘤細胞對順鉑的敏感度，從而可預測卵巢癌化療的敏感度及不良結局。Giri等[13]及Saluja等[14]研究認為HSP70在包括腫瘤在內(nèi)的胰腺疾病中顯著增加，阻斷HSP70可以抑制腫瘤增殖，為胰腺癌的治療提供新方向。Dutta等[15]認為血清HSP70可作為胰腺癌早期診斷的標志物，但在臨床上運用還需要更多研究進一步證實，目前有關HSP70與胰腺癌的研究多集中在反映放化療敏感度研究[16-18]，對于術后監(jiān)測、預后評估價值的研究目前尚缺乏。

圖3 胰腺癌組患者術前血清HSP70、VEGF含量與生存時間相關性分析

表3 HSP70和VEGF對胰腺癌預后的危險因素分析

因此，本研究探索了血清HSP70、VEGF在胰腺癌患者術后監(jiān)測與預估評估的價值，結果是血清HSP70、VEGF含量術前>術后7d>術后1個月>對照組，差異均有統(tǒng)計學意義。胰腺癌組患者術前、術后7d、術后1個月血清HSP70水平與血清VEGF含量呈正相關。這一結果說明血清HSP70、VEGF與胰腺癌治療轉(zhuǎn)歸相關，HSP70、VEGF水平兩者呈正相關。胰腺癌組患者術前腫瘤>3cm、腫瘤分化程度低、臨床分期Ⅲ期、淋巴結轉(zhuǎn)移患者血清HSP70、VEGF含量高于腫瘤≤3cm、腫瘤分化程度高、臨床分期Ⅰ期或Ⅱ期、未發(fā)生淋巴結轉(zhuǎn)移者，差異均有統(tǒng)計學意義。結果說明隨著腫瘤直徑增大、臨床分期升高、出現(xiàn)淋巴結轉(zhuǎn)移，患者血清HSP70、VEGF表達水平也隨之增高，可進一步說明可作為胰腺癌診斷、預測預后的重要生物學標志物。血清HSP70和VEGF對胰腺癌的診斷均有較好的特異性，聯(lián)合診斷效果更好。HSP70濃度和VEGF濃度均與胰腺癌患者術后生存時間呈負相關，濃度越低，生存時間越長，濃度越高，生存時間越短。單因素回歸分析和多因素Cox回歸分析顯示腫瘤直徑、淋巴結轉(zhuǎn)移、TNM分期、分化程度、遠處轉(zhuǎn)移、HSP70和VEGF濃度均是胰腺癌預后的獨立危險因素。同時也說明HSP70、VEGF可能參與胰腺癌的發(fā)生、發(fā)展及轉(zhuǎn)歸，阻斷HSP70、VEGF可能成為胰腺癌的新靶點，為下一步臨床研究提高新思路。

綜上所述，可切除胰腺癌患者術前血清HSP70、VEGF高表達與臨床病理相關。HSP70和VEGF與惡性生物學行為呈正相關，與生存時間呈負相關，是胰腺癌預后的獨立危險因素。

[1] SIEGEL R L, MILLER K D, FUCHS H E, et al. Cancer Statistics, 2021[J]. CA Cancer J Clin2021, 71(1): 7–33.

[2] VONHOFF D D, ERVIN T, ARENA F P, et al. Increased survival in pancreatic cancer with nab-paclitaxel plus gemcitabine[J]. N Engl J Med, 2013, 369(18): 1691–1703.

[3] SENGER D R, GALLO S J, DVORAK A M, et al. Tumor cells secrete a vascular permeability factor that promotes accumulation of ascites fluid[J]. Science, 1983, 219(4587): 983–985.

[4] BIRKENHAUER E, NEETHIRAJAN S. A double- edged sword: the role of VEGF in wound repair and chemoattraction of opportunist pathogens[J]. Int J Mol Sci.,2015, 16(4): 7159–7172.

[5] ZIRLIK K, DUYSTER J. Anti-angiogenics: current situation and future perspectives[J]. Oncol Res Treat, 2018, 41(4): 166–171.

[6] 崔曉梅, 張惠潔, 郭衛(wèi)東. P53、Fas、HSP70在乳腺癌中的表達及其相關性研究[J]. 中國地方病防治雜志, 2017, 32(12): 1431+1434.

[7] VOSTAKOLAEI M A, HATAMI-BAROOGH L, BABAEI G, et al. Hsp70 in cancer: A double agent in the battle between survival and death[J]. J Cell Physiol, 2021, 236(5): 3420–3444.

[8] 中國抗癌協(xié)會胰腺癌專業(yè)委員會. 中國胰腺癌綜合診治指南(2020版)[J]. 中華外科雜志,2021, 59(2): 81–100.

[9] LIU L, XU H X, HE M, et al. A novel scoring system predicts postsurgical survival and adjuvant chemotherapeutic benefits in patients with pancreatic adenocarcinoma: Implications for AJCC-TNM staging[J]. Surgery,2018, 163(6): 1280–1294.

[10] XU K, WU C L, WANG Z X, et al. VEGF family gene expression as prognostic biomarkers for Alzheimer’s disease and primary liver cancer[J]. Comput Math Methods Med, 2021, 2021: 3422393.

[11] PISTOL-TANASE C, RADUCAN E, DIMA S O, et al. Assessment of soluble angiogenic markers in pancreatic cancer[J]. Biomark Med, 2008, 2(5): 447–455.

[12] LI X F, HUA T, LI Y, et al . The HSP70 gene predicts prognosis and response to chemotherapy in epithelial ovarian cancer[J]. Ann Transl Med, 2021, 9(9): 806.

[13] GIRI B, SETHI V, MODI S, et al. “Heat shock protein 70 in pancreatic diseases: Friend or foe”[J]. J Surg Oncol,2017, 116(1): 114–122.

[14] SALUJA A, DUDEJA V. Heat shock proteins in pancreatic diseases[J]. J Gastroenterol Hepatol,2008, 23 Suppl 1: S42–45.

[15] DUTTA S K, GIROTRA M, SINGLA M, et al. Serum HSP70: a novel biomarker for early detection of pancreatic cancer[J]. Pancreas,2012, 41(4): 530–534.

[16] GOPAL U, MOWERY Y, YOUNG K, et al. Targeting cell surface GRP78 enhances pancreatic cancer radiosensitivity through YAP/TAZ protein signaling[J]. J Biol Chem, 2019, 294(38): 13939–13952.

[17] Yoshidomi K, Murakami A, Yakabe K, et al. Heat shock protein 70 is involved in malignant behaviors and chemosensitivities to cisplatin in cervical squamous cell carcinoma cells[J]. J Obstet Gynaecol Res, 2014, 40(5): 1188–1196.

[18] Mori Y, Terauchi R, Shirai T, et al. Suppression of heat shock protein 70 by siRNA enhances the antitumor effects of cisplatin in cultured human osteosarcoma cells[J]. Cell Stress Chaperones, 2017, 22(5): 699–706.

Value of combined detection of serum HSP70 and VEGF in the diagnosis and prediction of post-operative survival of resectable pancreatic cancer

Department of Gastroenterology, Southern Medical University Affiliated Pingxiang Hospital, Pingxiang 337000, Jiangxi, China

To investigate the value of combined detection of serum heat shock protein 70 (HSP70) and vascular endothelial growth factor (VEGF) in the diagnosis and prediction of postoperative survival of stage Ⅰ to Ⅲ resectable pancreatic cancer.A total of 124 patients with primary resectable pancreatic cancer undergoing surgery in the Southern Medical University Affiliated Pingxiang Hospitalwere enrolled as the pancreatic cancer group from December 2015 to October 2018, while other 16 healthy controls during the same period were enrolled as the control group. The levels of serum HSP70 and VEGF in two groups were detected. The correlation between the two indicators was analyzed. The relationship with clinicopathology and prognosis was studied.The levels of serum HSP70 and VEGF in the pancreatic cancer group were higher than those in the control group before and after surgery (<0.05). The levels of serum HSP70 and VEGF at 7 d and 1 month after surgery were lower than those before surgery in the pancreatic cancer group (<0.05). In pancreatic cancer group, level of serum HSP70 was positively correlated with serum VEGF before surgery, at 7 d and 1 month after surgery (<0.05). There were statistically significant differences in preoperative tumor >3cm, low differentiation degree of tumor, clinical stage Ⅲ serum HSP70 and VEGF levels in patients with lymph node metastasis were higher than those with ≤3cm tumor, high differentiation degree of tumor, clinical stage Ⅰor Ⅱ and no lymph node metastasis (<0.05). Both serum HSP70 and VEGF have good specificity for the diagnosis of pancreatic cancer, and the combined diagnosis effect is better (<0.05). Both HSP70 concentration and VEGF concentration were negatively correlated with postoperative survival time of patients with pancreatic cancer (<0.05). Univariate regression analysis and multivariate Cox regression analysis showed that tumor diameter, lymph node metastasis, tumor-node-metastasis (TNM) stage, differentiation degree, distant metastasis, HSP70 and VEGF concentration were independent risk factors for prognosis of pancreatic cancer (<0.05).Serum HSP70 and VEGF in patients with pancreatic cancer are positively correlated with malignant biological behavior, and negatively correlated with survival time, which are independent risk factors for postoperative prognosis of pancreatic cancer.

Pancreatic cancer; Heat shock protein70; Vascular endothelial growth factor; Predictive value effect

R735.35

A

10.3969/j.issn.1673-9701.2023.26.016

萍鄉(xiāng)市科技局課題（2022PY011）

王桂良，電子信箱：guiliangwang@126.com

（2022–10–18）

（2023–08–30）