酉加民 楊茜梓 宮嘉泰 何晨鵬 蔣亦軒 賀建華 伍樹松*

(1.湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)動物科學(xué)技術(shù)學(xué)院,長沙 410128;2.湖南德諾健康產(chǎn)業(yè)集團有限公司,長沙 410100)

家禽生產(chǎn)是畜牧業(yè)增長最快的產(chǎn)業(yè)之一,為全球提供大量蛋白質(zhì)。球蟲病是家禽生產(chǎn)中最常見的寄生蟲病,每年給家禽生產(chǎn)造成超過8億美元的損失[1]。艾美耳蟲屬(Eimeria)是球蟲病的主要病原體,可引起腸道炎癥,其代謝產(chǎn)生的毒素還可引起全身性中毒癥狀與炎癥[2]。在過去的幾十年里,通常采用在飼糧中添加抗球蟲藥物(如氨溴銨、脫奎寧、雙青尿爾和鹽霉素)的方式來預(yù)防和控制球蟲,然而長期使用這些藥物往往伴隨著耐藥性的產(chǎn)生[3-4]。在全面“飼料禁抗”時代,開發(fā)可防治家禽球蟲病的新型綠色飼料添加劑顯得尤為迫切。

迷迭香酸(RA)是迷迭香、牛至、百里香等中藥材的主要活性成分之一,具有抑菌、抗炎、抗氧化等生物活性[5]。有研究報道,RA可以抑制乙醇誘導(dǎo)的腫瘤壞死因子-α(TNF-α)和白細(xì)胞介素-6(IL-6)的mRNA表達(dá),阻止乙醇誘導(dǎo)的山梨醇的增加,進而緩解酒精性肝炎[6]。在大腸桿菌K88(ETEC K88)誘導(dǎo)斷奶仔豬模型中,飼糧添加RA可以改善ETEC K88攻毒斷奶仔豬結(jié)腸炎癥反應(yīng),緩解斷奶仔豬腹瀉[7]。在硫酸葡聚糖鈉(DDS)誘導(dǎo)的結(jié)腸炎模型中,RA通過降低IL-6、白細(xì)胞介素-1β(IL-1β)、白細(xì)胞介素-22(IL-22)、環(huán)氧化酶-2(COX-2)和誘導(dǎo)型一氧化氮合成酶(iNOS)的蛋白表達(dá)水平,抑制核因子-κB(NF-κB)的激活,發(fā)揮對結(jié)腸炎的改善作用[8]。基于生物信息學(xué)的分析表明,RA可調(diào)控炎癥及氧化應(yīng)激相關(guān)基因表達(dá)[9]。此外,研究顯示,飼糧中添加富含RA的草本植物(迷迭香、百里香、牛至和大蒜)可改善家禽免疫機能和抗氧化能力,降低家禽的發(fā)病率和死亡率[10-11]。本研究以堆型艾美耳球蟲(Eimeriaacervulina,E.acervulina)攻毒黃羽肉雞作為模型,探究RA對堆型艾美耳球蟲攻毒肉雞生長性能、免疫機能以及炎癥反應(yīng)的影響,以期為RA在家禽生產(chǎn)中進一步的研究與應(yīng)用提供參考。

1 材料與方法

1.1 試驗動物與分組

選擇健康的1日齡黃羽肉雞360羽,隨機分為6個組,每組6個重復(fù),每個重復(fù)10羽。對照組和攻毒對照組飼喂基礎(chǔ)飼糧,陽性對照組在基礎(chǔ)飼糧中添加20 mg/kg地克珠利,3個試驗組在基礎(chǔ)飼糧中分別添加40、80、160 mg/kg RA(由湖南某公司提供)。攻毒對照組、陽性對照組和試驗組雛雞在14日齡時灌喂孢子化的堆型艾美耳球蟲卵懸液1 mL(孢子數(shù)量不低于4×104個/mL),對照組灌喂相同體積的生理鹽水。試驗期為8周(56 d)。

1.2 飼養(yǎng)管理

所有試驗肉雞采用籠養(yǎng),每籠10羽,通過水壺式飲水器(1～14日齡)或乳頭式飲水器(14～56日齡)全天無限制供應(yīng),每日07:30和16:30各投喂1次飼糧,自由采食,每2～3 d采用傳糞帶清糞的方式清糞1次,隨著雞日齡增加清糞頻率也隨之增加。試驗前1周雞舍采取鍋爐增溫,維持溫度在33 ℃,并隨著肉雞日齡增加逐步降低雞舍內(nèi)溫度至23 ℃。試驗期全程進行常規(guī)免疫和消毒程序,保證雞舍內(nèi)環(huán)境衛(wèi)生質(zhì)量。

1.3 試驗飼糧

試驗用基礎(chǔ)飼糧為玉米-豆粕型,根據(jù)《雞飼養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)》(NY/T 33—2004)中肉雞營養(yǎng)需要,分為0～4周齡與5～8周齡2個階段配制,基礎(chǔ)飼糧組成及營養(yǎng)水平見表1。

表1 基礎(chǔ)飼糧組成及營養(yǎng)水平(風(fēng)干基礎(chǔ))

1.4 樣品采集與指標(biāo)測定

1.4.1 生長性能與死亡率

以重復(fù)為單位記錄1、14、21和56日齡雞體重以及每日的采食量和雞死亡數(shù),并計算雞1～14日齡、15～21日齡和22～56日齡3個階段的平均日采食量、平均日增重、料重比和死亡率。如存在死亡淘汰雞只,平均日采食量和料重比需要及時進行校對。

1.4.2 球蟲計數(shù)

在堆型艾美耳球蟲攻毒后第4、7、10天采用五點法收集每個重復(fù)肉雞的糞便3～4 g,裝于5 mL離心管中,在-20 ℃冰箱保存。用麥克馬斯特法進行球蟲卵囊計數(shù)。取2 g新鮮雞糞便置于干凈的100 mL燒杯內(nèi),先加入8 mL飽和食鹽溶液,用玻璃棒搗碎混勻,再加入50 mL飽和食鹽溶液,混勻后立即用60目篩網(wǎng)過濾,然后立即吸取濾液充滿2個計數(shù)室,在顯微鏡載物臺上靜置3～5 min,在10倍物鏡下鏡檢計數(shù),每個計數(shù)室內(nèi)有100個方格,其體積為1 cm×1 cm×0.15 cm=0.15 mL,分別查完2個計數(shù)室100個方格內(nèi)的卵囊數(shù)量,最后按照如下公式計算每克糞便中卵囊數(shù)量(OPG):

OPG=[(n1+n2)/(2×0.15)]×60/2。

式中:n1、n2分別為上、下計數(shù)室卵囊數(shù)量。

1.4.3 血清生化指標(biāo)

在堆型艾美耳球蟲攻毒后第1周(21日齡)每個重復(fù)隨機抽取1只肉雞,翅靜脈采血5 mL于10 mL離心管中,靜置10 min后3 000 r/min離心,取上層血清分裝于數(shù)個1.5 mL EP管中,-20 ℃保存。采用科華全自動生化儀(卓越450,上海)按說明方法檢測血清生化指標(biāo)。

1.4.4 免疫器官指數(shù)

在21、28、56日齡每個重復(fù)隨機抽取1只肉雞,稱重后處死、解剖,取脾臟、肝臟、法氏囊、胸腺稱重,并計算肝臟、脾臟、法氏囊、胸腺指數(shù)。

肝臟指數(shù)(%)=[肝臟重(g)/活體重(g)]×100;
脾臟指數(shù)(%)=[脾臟重(g)/活體重(g)]×100;
法氏囊指數(shù)(%)=[法氏囊重(g)/
活體重(g)]×100;
胸腺指數(shù)(%)=[胸腺重(g)/活體重(g)]×100。

1.4.5 血清、肝臟炎性因子與免疫學(xué)指標(biāo)

采用上海優(yōu)選生物公司生產(chǎn)的酶聯(lián)免疫吸附測定(ELISA)試劑盒,按照試劑盒說明檢測血清和肝臟中TNF-α、IL-1β、IL-6、補體3(C3)、補體4(C4)、免疫球蛋白A(IgA)、免疫球蛋白G(IgG)、免疫球蛋白M(IgM)含量。

1.5 數(shù)據(jù)處理與分析

試驗數(shù)據(jù)初步整理剔出離群值后,采用SPSS 23.0 軟件進行單因素方差分析,并采用Duncan氏法進行組間多重比較,P<0.05為差異顯著,P<0.01為差異極顯著。試驗數(shù)據(jù)采用平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示。

2 結(jié) 果

2.1 RA對堆型艾美耳球蟲攻毒肉雞糞便卵囊數(shù)量的影響

由圖1可知,堆型艾美耳球蟲攻毒后第4、7、10天,攻毒對照組肉雞OPG均較對照組顯著上升(P<0.05);而與攻毒對照組相比,添加40(攻毒后第10天除外)、80、160 mg/kg RA或20 mg/kg地克珠利均顯著降低了肉雞的OPG(P<0.05)。

CTL:對照組;Model:攻毒對照組;D20:陽性對照組;RA40:40 mg/kg迷迭香酸組;RA80:80 mg/kg迷迭香酸組;RA160:160 mg/kg迷迭香酸組;OPG:每克糞便中卵囊數(shù)量。同一時間數(shù)據(jù)點標(biāo)注不同字母表示差異顯著(P<0.05)。

2.2 RA對堆型艾美耳球蟲攻毒肉雞生長性能與死亡率的影響

由表2可知,各組間肉雞1～14日齡平均日增重、平均日采食量和料重比均無顯著差異(P>0.05)。與對照組相比,堆型艾美耳球蟲攻毒顯著降低了肉雞15～21日齡平均日增重(P<0.05);與攻毒對照組相比,添加160 mg/kg RA顯著提高了堆型艾美耳球蟲攻毒肉雞15～21日齡平均日增重(P<0.05);各組間肉雞15～21日齡平均日采食量和料重比均無顯著差異(P>0.05)。各組間肉雞22～56日齡平均日增重、平均日采食量和料重比均無顯著差異(P>0.05)。

由表2可知,與對照組相比,攻毒對照組15～21日齡肉雞死亡率上升了3.52%;與攻毒對照組相比,陽性對照組、40 mg/kg RA組、80 mg/kg RA組和160 mg/kg RA組肉雞死亡率分別降低了3.52%、3.52%、5.18%、3.52%。與對照組相比,攻毒對照組22～56日齡肉雞死亡率上升了6.58%;與攻毒對照組相比,陽性對照組、40 mg/kg RA組、80 mg/kg RA組和160 mg/kg RA組肉雞死亡率分別降低了4.84%、5.06%、7.15%、10.85%。

表2 RA對堆型艾美耳球蟲攻毒肉雞生長性能和死亡率的影響

2.3 RA對堆型艾美耳球蟲攻毒肉雞免疫器官指數(shù)的影響

由表3可知,與對照組相比,堆型艾美耳球蟲攻毒顯著提高了肉雞21日齡肝臟指數(shù)和脾臟指數(shù)(P<0.05),但對法氏囊指數(shù)與胸腺指數(shù)無顯著影響(P>0.05);與攻毒對照組相比,添加160 mg/kg RA顯著降低了堆型艾美耳球蟲攻毒肉雞21日齡肝臟指數(shù)(P<0.05)。

由表4可知,與對照組相比,堆型艾美耳球蟲攻毒對肉雞28日齡法氏囊指數(shù)、肝臟指數(shù)、脾臟指數(shù)、胸腺指數(shù)均無顯著影響(P>0.05);與攻毒對照組相比,添加40、80、160 mg/kg RA或20 mg/kg地克珠利對堆型艾美耳球蟲攻毒肉雞28日齡法氏囊指數(shù)、肝臟指數(shù)、脾臟指數(shù)、胸腺指數(shù)均無顯著影響(P>0.05)。

表3 RA對堆型艾美耳球蟲攻毒肉雞21日齡免疫器官指數(shù)的影響

表4 RA對堆型艾美耳球蟲攻毒肉雞28日齡免疫器官指數(shù)的影響

由表5可知,與對照組相比,堆型艾美耳球蟲攻毒對56日齡肉雞肝臟指數(shù)、脾臟指數(shù)、胸腺指數(shù)法氏囊指數(shù)無顯著影響(P>0.05);與攻毒對照組相比,添加160 mg/kg RA顯著增加了56日齡肉雞法氏囊指數(shù)(P>0.05)。

表5 RA對堆型艾美耳球蟲攻毒肉雞56日齡免疫器官指數(shù)的影響

2.4 RA對堆型艾美耳球蟲攻毒肉雞血清與肝臟免疫學(xué)指標(biāo)的影響

由表6可知,與對照組相比,堆型艾美耳球蟲攻毒顯著提高了肉雞21日齡血清中C3、C4含量(P<0.05),顯著降低了21日齡肉雞血清IgM含量(P<0.05),但對血清中IgA、IgG含量無顯著影響(P>0.05);與攻毒對照組相比,添加40、80、160 mg/kg RA或20 mg/kg地克珠利均顯著降低了堆型艾美耳球蟲攻毒肉雞21日齡血清中C3、C4含量(P<0.05),添加80、160 mg/kg RA顯著提高了血清中IgA含量(P<0.05),添加40、160 mg/kg RA顯著降低了血清中IgG含量(P<0.05),添加160 mg/kg RA或20 mg/kg地克珠利顯著提高了血清中IgM含量(P<0.05)。

與對照組相比,堆型艾美耳球蟲攻毒顯著提高了肉雞21日齡肝臟中C3、C4含量(P<0.05),顯著降低了肝臟中IgA含量(P<0.05),但對肝臟中IgG和IgM含量無顯著影響(P>0.05);與攻毒對照組相比,添加160 mg/kg RA或20 mg/kg地克珠利顯著降低了肝臟中C3含量(P<0.05),添加40、80、160 mg/kg RA或20 mg/kg地克珠利均顯著降低了肝臟中C4含量(P<0.05),添加80 mg/kg RA顯著提高了肝臟中IgA含量(P<0.05),添加160 mg/kg RA顯著提高了肝臟中IgG含量(P<0.05),添加40、80、160 mg/kg RA或20 mg/kg地克珠利均顯著提高了肝臟中IgM含量(P<0.05)。

表6 RA對堆型艾美耳球蟲攻毒肉雞21日齡血清與肝臟免疫學(xué)指標(biāo)的影響

2.5 RA對堆型艾美耳球蟲攻毒肉雞血清與肝臟炎性因子含量的影響

由表7可知,與對照組相比,堆型艾美耳球蟲攻毒顯著提高了21日齡肉雞血清與肝臟IL-1β、IL-6、TNF-α含量(P<0.05);與攻毒對照組相比,添加20 mg/kg地克珠利或40、80、160 mg/kg RA均顯著降低了21日齡肉雞血清與肝臟IL-1β、IL-6、TNF-α含量(P<0.05)。

表7 RA對堆型艾美耳球蟲攻毒肉雞21日齡血清與肝臟炎性因子含量的影響

2.6 RA對堆型艾美耳球蟲攻毒肉雞血清生化指標(biāo)的影響

由表8可知,與對照組相比,堆型艾美耳球蟲攻毒顯著提高了肉雞21日齡血清中谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)活性(P<0.05),對其他血清生化指標(biāo)無顯著影響(P>0.05);與攻毒對照組相比,添加20 mg/kg地克珠利或40、80、160 mg/kg RA顯著降低了堆型艾美耳球蟲攻毒肉雞21日齡血清中ALT活性(P<0.05),添加40、80 mg/kg RA顯著降低了血清中尿素氮(UN)含量(P<0.05),添加40 mg/kg RA顯著降低了血清中總膽固醇(TC)含量(P<0.05)。

表8 RA對堆型艾美耳球蟲攻毒肉雞21日齡血清生化指標(biāo)的影響

3 討 論

3.1 堆型艾美耳球蟲攻毒對肉雞生長性能與OPG的影響

球蟲病的發(fā)生與發(fā)展十分復(fù)雜,通常是由多種不同種類艾美爾球蟲共同感染的結(jié)果。不同的艾美爾球蟲致病性與典型癥狀不盡相同[12],例如,毒害艾美爾球蟲與柔嫩艾美爾球蟲毒性最大,導(dǎo)致腸絨毛完全破壞,產(chǎn)生出血和死亡;布氏艾美耳球蟲和巨型艾美爾球蟲導(dǎo)致腸壁腫脹、瘀點和上皮細(xì)胞松動;而堆型艾美耳球蟲和變位艾美爾球蟲感染的典型癥狀是導(dǎo)致水分流失和營養(yǎng)吸收減少,進而導(dǎo)致日增重降低、料重比增加[13-15]。本試驗中,堆型艾美耳球蟲攻毒使肉雞平均日增重顯著降低,死亡率增加,與堆型艾美耳球蟲感染的典型癥狀一致,且從堆型艾美耳球蟲攻毒肉雞的糞便檢測到大量堆型艾美耳球蟲蟲卵,表明本研究成功建立了肉雞的堆型艾美耳球蟲攻毒模型。

3.2 RA對堆型艾美耳球蟲攻毒肉雞生長性能的影響

Bozkurt等[16]研究表明,在飼糧中添加12或24 mg/kg牛至精油可以提高堆型艾美耳球蟲攻毒肉雞的體增重。Alp等[17]研究表明,在飼糧中添加300或600 mg/kg牛至精油可以緩解柔嫩艾美爾球蟲與堆型艾美耳球蟲攻毒引起的平均日增重下降,并降低攻毒肉雞的料重比。Fotea等[18]研究表明,當(dāng)迷迭香精油添加量為0.5%時,可提高育肥期肉雞的生長性能和飼料利用率。本試驗中,在飼糧中添加160 mg/kg RA顯著提高了堆型艾美耳球蟲攻毒肉雞15～21日齡平均日增重,這與前人的研究結(jié)果一致,說明飼糧中添加RA對堆型艾美耳球蟲攻毒導(dǎo)致的肉雞生長性能下降有一定的緩解效果。

3.3 RA對堆型艾美耳球蟲攻毒肉雞OPG的影響

在生產(chǎn)中,通常采用OPG衡量球蟲感染嚴(yán)重程度[19-21]。在進行堆型艾美耳球蟲攻毒的第4天,各攻毒組的糞便中均檢測到球蟲的排出,在第7天OPG達(dá)到高峰,隨后OPG緩慢下降。這說明堆型艾美耳球蟲進入肉雞消化道7 d內(nèi)快速地繁殖導(dǎo)致數(shù)量上巨大增長,使得通過糞便排出的球蟲卵囊數(shù)量增加。Arczewska-Wosek等[21]研究表明,在飼糧中添加1 000 mg/kg植物精油混合物(迷迭香、百里香、紫雛菊、丹參、牛至)可有效減少巨型艾美爾球蟲、柔嫩艾美爾球蟲攻毒肉雞OPG。本試驗中,飼糧中添加40、80、160 mg/kg RA或20 mg/kg地克珠利均減少了攻毒4、7、10 d肉雞糞便OPG。體外研究表明,4 mg/mL富含RA的植物精油可以破壞85%～90%的艾美爾球蟲卵囊[22]。這可能是飼糧中添加RA顯著降低肉雞OPG的原因之一。

3.4 RA對堆型艾美耳球蟲攻毒肉雞免疫器官指數(shù)的影響

免疫器官指數(shù)常用來評價雞的免疫狀態(tài)[23]。脾臟是禽類最大的外周免疫器官,參與機體的細(xì)胞免疫與體液免疫。法氏囊是禽類特有的中樞免疫器官,主導(dǎo)機體的體液免疫。胸腺為T淋巴細(xì)胞分化、發(fā)育和成熟提供場所。肝臟是體內(nèi)最大的網(wǎng)狀內(nèi)皮細(xì)胞吞噬系統(tǒng),對抗原的過濾、清除、吞噬和調(diào)節(jié)和免疫反應(yīng)的作用。在早期研究中,去除法氏囊的雞對繼發(fā)性艾美球蟲感染產(chǎn)生保護性免疫的能力沒有顯著影響[24],而切除胸腺的大鼠對原發(fā)性和繼發(fā)性球蟲感染的抵抗力均顯著降低[25]。有研究報道,球蟲感染會損害肉雞肝臟組織結(jié)構(gòu)[26]。宋鴻雁等[27]的研究表明,斯氏艾美耳球蟲感染導(dǎo)致新西蘭兔肝臟嚴(yán)重受損,且血清中ALT、谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)、乳酸脫氫酶(LDH)、ALP活性與總膽紅素(T-BIL)含量極顯著增高。本試驗中,堆型艾美耳球蟲攻毒導(dǎo)致肉雞脾臟指數(shù)、肝臟指數(shù)顯著增加,但對法氏囊指數(shù)、胸腺指數(shù)無顯著影響,這與前人的研究結(jié)果基本一致。進一步對血清生化指標(biāo)進行分析發(fā)現(xiàn),血清中ALT活性在堆型艾美耳球蟲攻毒后顯著增加,而血清中ALT活性升高是肝臟炎癥或肝細(xì)胞受損的表現(xiàn)[28]。前人研究發(fā)現(xiàn),在對乙酰氨基酚誘導(dǎo)的小鼠急性肝損傷模型中,小鼠血清ALT活性顯著升高,RA可以降低血清ALT活性,緩解對乙酰氨基酚誘導(dǎo)的小鼠急性肝損傷[29]。本試驗中,飼糧中添加160 mg/kg RA顯著降低了堆型艾美耳球蟲攻毒肉雞21日齡的肝臟指數(shù)與血清中ALT活性,說明RA對肉雞肝臟損傷有一定的修復(fù)作用。

3.5 RA對堆型艾美耳球蟲攻毒肉雞血液與肝臟免疫學(xué)指標(biāo)的影響

前人研究表明堆型艾美耳球蟲攻毒可使雞血清補體含量升高[30]。本試驗結(jié)果表明,堆型艾美耳球蟲攻毒顯著提高了肉雞血清、肝臟中C3、C4含量。體外研究表明,RA可以特異性連接到C3b的a9-鏈上,抑制補體的激活[31]。本試驗中,飼糧添加RA降低了堆型艾美耳球蟲攻毒肉雞肝臟中C3、C4含量。研究顯示,雞感染艾美爾球蟲后,會產(chǎn)生大量的特異性IgA、IgG、IgM,這些抗體主要分布在血清、膽汁和腸道分泌物中;雛雞初次感染毒害艾美耳球蟲后,血清中IgA、IgG、IgM含量顯著升高[32]。本試驗中,堆型艾美耳球蟲攻毒提高了肉雞血清中IgA、IgM含量,降低了肝臟中IgA、IgM含量。臺瑞青[33]的研究表明,在飼糧中添加200 mg/kg RA可以提高育肥豬血清中IgM含量。Sanbongi等[34]研究發(fā)現(xiàn),RA可顯著抑制過敏原特異性IgG。而Farouk等[35]給感染大腸桿菌的肉雞飼喂添加了迷迭香的飼糧后,血清中IgG含量增加。Al Sheyab等[36]研究表明,迷迭香提取物增加了小鼠血清中IgM和IgG含量。本試驗中,RA提高了堆型艾美耳球蟲攻毒肉雞血清中IgM含量,而使IgG含量下降,這與Sanbongi等[34]的研究結(jié)果一致。

3.6 RA對堆型艾美耳球蟲攻毒肉雞血清與肝臟炎性細(xì)胞因子含量的影響

TNF-α作為炎癥中主要的細(xì)胞因子,是在細(xì)菌、病毒、免疫復(fù)合物、補體因子、細(xì)胞因子等刺激下產(chǎn)生,能夠激活適應(yīng)性免疫系統(tǒng)、其他促炎細(xì)胞因子(IL-1β和IL-6)和生長因子的轉(zhuǎn)錄,以及活化單核細(xì)胞和巨噬細(xì)胞[37]。雞外周血白細(xì)胞來源的巨噬細(xì)胞在受到柔嫩艾美耳球蟲孢子和裂殖子刺激時,TNF-α的產(chǎn)生呈現(xiàn)劑量與時間依賴性[38-39]。IL-1β是參與初始炎癥反應(yīng)的重要細(xì)胞因子,它誘導(dǎo)趨化因子的產(chǎn)生,從而促進炎癥細(xì)胞在炎癥部位的募集[40],且在感染球蟲的肉雞體內(nèi)檢測到它的表達(dá)上調(diào)[41]。IL-6負(fù)責(zé)B細(xì)胞最終成熟并產(chǎn)生抗體,并在感染堆型艾美耳球蟲、巨大艾美爾和柔嫩艾美爾球蟲的雞的上皮內(nèi)淋巴細(xì)胞中表達(dá)增強,這表明IL-6在適應(yīng)性免疫中發(fā)揮作用[42]。這些研究表明炎性細(xì)胞因子在球蟲病的發(fā)病機制中扮演重要角色。本試驗中,進行堆型艾美耳球蟲攻毒后,肉雞血清、肝臟中TNF-α、IL-1β和IL-6含量顯著上升,說明堆型艾美耳球蟲球蟲攻毒激活了肉雞適應(yīng)性免疫系統(tǒng)并引起肝臟炎癥。研究表明,RA顯著降低大鼠肝臟中TNF-α、IL-1β的mRNA表達(dá)水平,緩解缺血再灌注引起的肝臟急性炎癥[43]。最近的研究發(fā)現(xiàn),RA與百里香酚復(fù)配能夠降低脂多糖攻毒小鼠空腸黏膜中IL-6含量[44]。在本試驗中,在飼糧中添加RA顯著降低了堆型艾美耳球蟲攻毒肉雞血清和肝臟中TNF-α、IL-1β、IL-6含量,說明RA緩解了堆型艾美耳球蟲攻毒引起的炎癥與肝臟損傷。信號轉(zhuǎn)導(dǎo)和轉(zhuǎn)錄激活因子3(STAT3)和NF-κB協(xié)同調(diào)控多個靶基因,并協(xié)同調(diào)控相關(guān)細(xì)胞因子和趨化因子,STAT3直接與p65和p50相互作用,促進NF-κB募集到STAT3啟動子,反之亦然[45]。研究表明,RA在DDS誘導(dǎo)的慢性結(jié)腸炎小鼠模型中可以抑制NF-κB和STAT3核轉(zhuǎn)位[8]。因此,RA可能是通過抑制NF-κB和STAT3核轉(zhuǎn)位,下調(diào)下游的炎性細(xì)胞因子(TNF-α、IL-1β、IL-6),進而緩解由堆型艾美耳球蟲感染引起的肝臟炎癥。值得注意的是,在一項早期的研究中發(fā)現(xiàn),抑制腫瘤壞死因子使得蘇賽斯雞在感染球蟲時體重下降減緩[42],因此,球蟲攻毒后,機體發(fā)生炎癥反應(yīng),導(dǎo)致基礎(chǔ)代謝增快和能量消化增加,這可能是攻毒對照組15～21日齡肉雞平均日增重顯著降低的原因之一。

4 結(jié) 論

綜上所述,在本試驗條件下,飼糧添加160 mg/kg RA可提高堆型艾美耳球蟲攻毒1周后肉雞的平均日增重和血清中免疫球蛋白(IgA、IgM)含量,降低肝臟指數(shù)和血清、肝臟中補體(C3、C4)和炎癥細(xì)胞因子(IL-1β、IL-6、TNF-α)含量,其效果優(yōu)于20 mg/kg地克珠利或40～80 mg/kg RA。以上結(jié)果表明,飼糧添加160 mg/kg RA可有效緩解堆型艾美耳球蟲引起的肉雞生長緩慢、免疫失衡與肝臟炎癥。