蔡海情， 王微， 曾茂芹， 畢文文， 陳莉， 張黔東， 袁陽(yáng)， 文明，2*

（1.貴州大學(xué)動(dòng)物科學(xué)學(xué)院，貴陽(yáng) 550025； 2.貴州省動(dòng)物生物制品工程技術(shù)研究中心，貴陽(yáng) 550025）

皰疹病毒（Herpesvirus）是一類有囊膜的雙鏈DNA 病毒，其基因組大小約125～241 kbp，包含70～170 個(gè)基因，結(jié)構(gòu)復(fù)雜，由對(duì)稱的正二十面體結(jié)構(gòu)和非對(duì)稱成分組成。一般來(lái)說(shuō)，皰疹病毒與宿主共同進(jìn)化并高度適應(yīng)宿主，宿主包括許多哺乳動(dòng)物、鳥類、爬行動(dòng)物和人等[1]。初次感染后他們能夠建立終身潛伏感染，在此期間病毒反復(fù)感染，給人和動(dòng)物帶來(lái)了重大損害。其中，人類Ⅰ型單純皰疹病毒（herpes simplex virus-Ⅰ， HSV-Ⅰ）可引起人體蔓延性皮炎，在宿主細(xì)胞中呈潛伏感染且終生帶毒，嚴(yán)重危害人類健康[2]；馬立克病病毒（marek’s disease virus，MDV）、傳染性喉氣管炎病毒（infectious laryngotracheitis virus，IBDV）、鴨腸炎病毒（duck enteritis virus，DEV）和偽狂犬病病毒（pseudorabies virus，PRV）等引起畜禽的多種器官損傷和免疫性疾病，嚴(yán)重威脅畜禽養(yǎng)殖業(yè)健康發(fā)展，造成了嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。

通常情況下，皰疹病毒復(fù)制涉及病毒粒子被膜蛋白與細(xì)胞表面受體相互作用，然后通過(guò)細(xì)胞表面的膜融合或內(nèi)吞作用進(jìn)入，脫殼并被運(yùn)送到核孔中，基因組進(jìn)入細(xì)胞核[3]。病毒早期基因編碼DNA 復(fù)制并合成多種蛋白質(zhì)，參與調(diào)節(jié)宿主細(xì)胞新陳代謝或免疫反應(yīng)，晚期基因主要編碼病毒粒子蛋白。由于皰疹病毒復(fù)制給宿主內(nèi)質(zhì)網(wǎng)（endoplasmic reticulum，ER）帶來(lái)了過(guò)重的負(fù)擔(dān)，以產(chǎn)生病毒蛋白并促進(jìn)病毒顆粒運(yùn)輸，從而引起內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激（endoplasmic reticulum stress，ERS）。為了應(yīng)對(duì)ERS 和維持ER 蛋白平衡，細(xì)胞啟動(dòng)未折疊蛋白反應(yīng)（unfolded protein response，UPR）[4]。如單純皰疹病毒（herpes simplex virus，HSV）必需借用宿主細(xì)胞的蛋白合成系統(tǒng)合成自身蛋白，用于組裝子代病毒粒子；細(xì)胞出于自我保護(hù)會(huì)啟動(dòng)ERS 介導(dǎo)的蛋白降解、炎癥反應(yīng)、自噬、凋亡等抑制HSV 病毒蛋白的合成、降解病毒蛋白或誘導(dǎo)伴侶分子表達(dá)，從而誘導(dǎo)UPR[5]；MDV 在復(fù)制時(shí)誘發(fā)嚴(yán)重的免疫抑制，導(dǎo)致促炎細(xì)胞因子過(guò)度表達(dá)，激活UPR 可能單獨(dú)或與其他先天傳感途徑協(xié)同作用，導(dǎo)致核轉(zhuǎn)錄因子κB（nuclear factor-kappa B，NF-κB）被激活，介導(dǎo)免疫病理學(xué)和神經(jīng)損傷[6]。同HSV 和MDV 一樣，DEV 和PRV 也會(huì)引發(fā)ERS，激活UPR，導(dǎo)致炎癥反應(yīng)的加劇和其他級(jí)聯(lián)反應(yīng)[7-8]。

內(nèi)質(zhì)網(wǎng)是合成分泌蛋白和膜蛋白、蛋白翻譯后修飾、調(diào)控鈣離子儲(chǔ)存和脂類合成的細(xì)胞器，具有重要生理功能[9]。一般情況下，新生蛋白在分子伴侶和折疊酶（統(tǒng)稱為內(nèi)質(zhì)網(wǎng)伴侶）的作用下折疊，正確折疊的蛋白質(zhì)被運(yùn)輸?shù)礁郀柣w進(jìn)一步加工，形成分泌蛋白，進(jìn)入內(nèi)膜系統(tǒng)或被分泌到細(xì)胞外發(fā)揮作用。但是，當(dāng)細(xì)胞生長(zhǎng)條件發(fā)生變化（如DNA 損傷、化學(xué)誘導(dǎo)、微生物感染等）時(shí)，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)蛋白質(zhì)發(fā)生未折疊或錯(cuò)誤折疊，未折疊或錯(cuò)誤折疊的蛋白質(zhì)就會(huì)被保留在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)中，通過(guò)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)相關(guān)降解機(jī)制（endoplasmic reticulum associated degradation，ERAD）反轉(zhuǎn)運(yùn)到細(xì)胞質(zhì)中，由蛋白酶體降解。一般情況下上述蛋白會(huì)被激活的ER 分子伴侶和ERAD 處理，當(dāng)細(xì)胞合成的分泌蛋白質(zhì)超過(guò)折疊裝置和ERAD 的能力時(shí)，未折疊的蛋白質(zhì)就會(huì)大量堆積在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)中，并傾向于形成蛋白質(zhì)聚集體，進(jìn)而導(dǎo)致細(xì)胞蛋白質(zhì)合成功能的異常甚至引起細(xì)胞凋亡。為了緩解這種應(yīng)激狀態(tài)，真核細(xì)胞激活了一系列的自我防御機(jī)制，統(tǒng)稱為未折疊蛋白反應(yīng)（UPR），從而恢復(fù)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)穩(wěn)態(tài)[10-14]（圖1）。近年來(lái)，國(guó)內(nèi)外研究人員對(duì)皰疹病毒的研究逐漸增多，主要集中在HSV[15]、PRV[16]、MDV[17]和DEV[18]等，本文概述了上述皰疹病毒對(duì)ERS 及UPR 之間的相互作用，以期為研究其相關(guān)分子機(jī)制提供參考。

圖1 內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激反應(yīng)Fig. 1 Endoplasmic reticulum stress response

1 內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激/未折疊蛋白對(duì)病毒的反應(yīng)機(jī)制

在病毒感染后，細(xì)胞激活未折疊蛋白反應(yīng)通路，使它們免受內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激（ERS）所誘導(dǎo)的凋亡反應(yīng)[19]。病毒復(fù)制時(shí)，其劫持宿主翻譯裝置，產(chǎn)生大量蛋白，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)的動(dòng)態(tài)平衡遭到破壞，導(dǎo)致錯(cuò)誤折疊和未折疊蛋白的快速積累，激活ERS，進(jìn)而啟動(dòng)未折疊蛋白反應(yīng)（UPR）[20]。一些病毒甚至利用內(nèi)質(zhì)網(wǎng)作為復(fù)制位點(diǎn)，以達(dá)到在細(xì)胞內(nèi)快速增殖的目的，如丙型肝炎病毒（hepatitis C virus，HCV）[21]和非洲豬瘟病毒（African swine fever virus，ASFV）[22]。此外，大量研究發(fā)現(xiàn)乙型肝炎病毒（hepatitis B virus，HBV）[23]、黃病毒（flavivirus）[24]、博爾納病毒（borna virus）[25]等均可引起ERS，機(jī)體為減輕ERS 利用UPR 來(lái)恢復(fù)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)的相對(duì)穩(wěn)定。哺乳動(dòng)物細(xì)胞中，病毒引起的ERS主要由以下ER跨膜受體介導(dǎo)：RNA 樣蛋白激酶樣內(nèi)質(zhì)網(wǎng)激酶（protein kinase RNA-like ER kinase，PERK）、肌醇需求激酶1（inositol-requiring kinase 1，IRE1）及激活轉(zhuǎn)錄因子6（activating transcription factor 6，ATF6）。在正常細(xì)胞中3 個(gè)感受器與內(nèi)質(zhì)網(wǎng)駐留伴侶免疫結(jié)合球蛋白（binding immunoglobulin protein，BIP）或葡萄糖調(diào)節(jié)蛋白78（glucoseregulated protein 78，GRP78）結(jié)合而維持抑制狀態(tài)，當(dāng)細(xì)胞發(fā)生ERS 時(shí)，BIP 優(yōu)先與錯(cuò)誤折疊蛋白質(zhì)結(jié)合，PERK 和ATF6 解離以減輕應(yīng)激[26-27]。PERK 使真核細(xì)胞起始因子2 的α 亞基（α-subunit of eukaryotic initiation factor 2，eIF2α）磷酸化，終止鳥嘌呤三核苷酸磷酸（guanosine triphosphate,GTP）與鳥嘌呤二核苷酸磷酸（guanosine diphosphate，GDP）的交換作用，從而減緩或暫停蛋白質(zhì)合成，緩解內(nèi)質(zhì)網(wǎng)的超負(fù)荷。ATF6則上調(diào)ER 蛋白和ERAD 表達(dá)，擴(kuò)大內(nèi)質(zhì)網(wǎng)折疊能力來(lái)緩解ERS。IRE1 被未折疊蛋白的直接結(jié)合激活，并剪接X(jué)BP1（X box-binding protein 1），XBP1 是活躍的轉(zhuǎn)錄因子，通過(guò)上調(diào)多種折疊酶及與蛋白質(zhì)折疊相關(guān)的UPR目標(biāo)基因，參與蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)、脂質(zhì)合成等過(guò)程以校正內(nèi)質(zhì)網(wǎng)穩(wěn)態(tài)[28]。活化的IRE1、ATF6 和PERK 可分別通過(guò)各自的信號(hào)通路啟動(dòng)UPR。

1.1 PERK-eIF2α通路

PERK 屬于絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶，與IRE1同為Ⅰ型跨膜蛋白并且結(jié)構(gòu)相似，ER腔中感測(cè)到錯(cuò)誤折疊或未折疊蛋白質(zhì)時(shí)，PERK 與BIP/GRP78發(fā)生解離，形成二聚體，引發(fā)反式自磷酸化，激活下游信號(hào)通路[29]。PERK 經(jīng)寡聚和自動(dòng)磷酸化形成活性PERK 使真核細(xì)胞翻譯起始因子2 的α 亞基（eIF2α）磷酸化，減少內(nèi)質(zhì)網(wǎng)蛋白質(zhì)合成，緩解ERS[30-31]。然而，這種數(shù)量有限的活性eIF2α 會(huì)選擇性地增加激活轉(zhuǎn)錄因子4（activating transcription factor 4，ATF4）的翻譯。ATF4 是一種促進(jìn)細(xì)胞生存的轉(zhuǎn)錄因子，激活后可參與細(xì)胞凋亡、生物合成和胞內(nèi)氧化還原反應(yīng)等過(guò)程[32]。ATF4 誘導(dǎo)生長(zhǎng)阻滯和DNA 損傷誘導(dǎo)蛋白34（growth arrest and DNA damage-inducible protein34，GADD34），它是蛋白磷酸酶1（PP1）的調(diào)節(jié)亞基，可引起生長(zhǎng)停滯和誘導(dǎo)DNA 損傷，其招募PP1 磷酸化eIF2α，使PERK-eIF2α 下調(diào)，減輕翻譯衰減，最后在UPR中構(gòu)成1 個(gè)負(fù)反饋環(huán)[33]，維持蛋白質(zhì)合成過(guò)程中的“起始-終止”這一動(dòng)態(tài)平衡。但在過(guò)度、持久的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激條件下，活化的PERK 無(wú)法維持這一動(dòng)態(tài)平衡，細(xì)胞無(wú)法恢復(fù)到正常的生理狀態(tài)，就會(huì)啟動(dòng)調(diào)控細(xì)胞凋亡的未折疊蛋白反應(yīng)信號(hào)通路PERK-ATF4-CHOP。凋亡相關(guān)蛋白CHOP（pro-apoptotic CCAAT/enhancer-binding protein homologous protein）是一種29 kD 的蛋白質(zhì)，具有169 個(gè)（人類）或168 個(gè)（嚙齒動(dòng)物）氨基酸殘基[34]，屬于CCAAT/增強(qiáng)子結(jié)合蛋白家族，參與編碼、增殖、分化、表達(dá)以及能量代謝等基因的調(diào)節(jié)。研究證明CHOP 包含2 個(gè)功能結(jié)構(gòu)域，1 個(gè)N 端轉(zhuǎn)錄激活結(jié)構(gòu)域和1 個(gè)C 端堿性亮氨酸拉鏈（basicleucine zipper，bZIP）結(jié)構(gòu)域，bZIP 在誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡中起著至關(guān)重要的作用[35-36]。CHOP 介導(dǎo)的GADD34 激活促進(jìn)elF2α 蛋白去磷酸化，逆轉(zhuǎn)翻譯抑制。內(nèi)質(zhì)網(wǎng)釋放翻譯有助于未折疊蛋白的積累，同時(shí)允許編碼促凋亡蛋白的mRNAs 翻譯[37]。因此，CHOP被認(rèn)為是ERS誘導(dǎo)凋亡蛋白最重要的介導(dǎo)物之一，參與多種基因的調(diào)控及表達(dá)[38]，如CHOP、生長(zhǎng)阻滯和DNA 損傷誘導(dǎo)蛋白153（growth arrest and DNA damage-inducible protein153，GADD153）在UPR 中發(fā)揮協(xié)同作用，激活凋亡相關(guān)靶點(diǎn)GADD34、死亡受體5（death receptor-5，DR5）、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)氧化還原酶-1（endoplasmic reticulum oxidoreductase 1，ERO1）等促進(jìn)細(xì)胞凋亡[37]。

1.2 IRE1-XBP1通路

IRE1是含有絲氨酸-蘇氨酸激酶結(jié)構(gòu)域和內(nèi)切核酸酶結(jié)構(gòu)域的雙活性酶[39]。IRE1 在哺乳動(dòng)物中存在2 種異構(gòu)體—IRE1α 和IRE1β，IRE1α 主要存在于哺乳動(dòng)物細(xì)胞中，IRE1β 一般在消化道上皮細(xì)胞中表達(dá)[40]。當(dāng)IRE1從GRP78解離時(shí)，通過(guò)同源二聚化和反式自磷酸化機(jī)制促進(jìn)IRE1α的活化，進(jìn)而激活蘇氨酸激酶和核酸內(nèi)切酶活性?；罨腎RE1 從XBP1 中移除26 個(gè)核苷酸組成的內(nèi)含子，形成剪接的XBP1（S），隨后被翻譯成bZIP 轉(zhuǎn)錄因子，進(jìn)而激活增強(qiáng)ER 蛋白折疊能力、磷脂生物合成和ERAD 基因的轉(zhuǎn)錄[41-42]。XBP1（S）還能激活Hsp40 家族成員P58IPK，P58IPK 可以結(jié)合PERK 并抑制其對(duì)磷酸化eIF2a 的活性。IRE1 本身可以通過(guò)調(diào)節(jié)其依賴衰變（regulated IRE1-dependent mRNA decay，RIDD）途徑降解ER結(jié)合的mRNAs，從而限制蛋白質(zhì)翻譯并降低ER管腔內(nèi)部蛋白質(zhì)折疊負(fù)荷[43]。但在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)持續(xù)應(yīng)激時(shí)，胞質(zhì)中游離的IRE1 與腫瘤壞死因子α 受體相關(guān)因子2（tumor necrosis factor receptor associated factor 2，TRAF2）結(jié)合并使其活化，TRAF2 能進(jìn)一步激活NF-κB 和C-jun N 末端激酶（c-jun-Nterminal kinase，JNK）通路，從而激活細(xì)胞內(nèi)的炎癥反應(yīng)誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡[44]。在ERS 的早期階段，JNK 介導(dǎo)的B 細(xì)胞瘤蛋白2（B-cell lymphoma protein-2，BCL-2）磷酸化導(dǎo)致Beclin1 的解離和自噬激活[45]。此外，IRE1-XBP1 信號(hào)通路在病毒感染中起著重要作用。首先，病毒感染后ERAD 的激活加速了蛋白質(zhì)的降解[46]；其次，CHOP 誘導(dǎo)凋亡，并在誘導(dǎo)自噬中發(fā)揮作用；第三，IRE1 介導(dǎo)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)中部分mRNA 選擇性降解，減少宿主相關(guān)蛋白產(chǎn)生，促進(jìn)自身復(fù)制，但每種病毒由IRE1-XBP1介導(dǎo)的細(xì)胞反應(yīng)不同[47]。

1.3 ATF6途徑

ATF6 是一種bZIP 轉(zhuǎn)錄因子，但最初是作為Ⅱ型跨膜蛋白合成的，其含有內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激敏感的管腔結(jié)構(gòu)域、跨膜結(jié)構(gòu)域和胞質(zhì)N-末端結(jié)構(gòu)域[27]。ATF6作為ERS的下游啟動(dòng)因子，由內(nèi)質(zhì)網(wǎng)衍生的囊泡包裝，并移位到高爾基復(fù)合體，在高爾基復(fù)合體中被絲氨酸蛋白酶位點(diǎn)1（serine protease site-1，S1P）切割管腔結(jié)構(gòu)域，N-端部分隨后被金屬蛋白酶位點(diǎn)2（metalloprotease site-2 protease，S2P）切割，釋放含活性的N 端DNA 結(jié)合域ATF6（N）[48]。ATF6（N）移位到細(xì)胞核并激活提高ER 折疊能力的基因，如ERS 反應(yīng)元件（endoplasmic reticulum stress element，ERSE）基因、BIP、GRP94、蛋白二硫化物異構(gòu)酶（protein disulfide isomerase，PDI）、CHOP 等，同時(shí)激活XBP1 和ERAD 等基因的轉(zhuǎn)錄[49]。

總體而言，這3 個(gè)分支通過(guò)減少內(nèi)質(zhì)網(wǎng)多肽鏈的合成、降解內(nèi)質(zhì)網(wǎng)定位的蛋白和擴(kuò)大內(nèi)質(zhì)網(wǎng)折疊能力來(lái)修復(fù)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激（圖2）。

圖2 未折疊蛋白反應(yīng)通路Fig. 2 Unfolded protein reaction pathway

2 皰疹病毒與內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激

根據(jù)國(guó)際病毒分類委員會(huì)（International Committee on Taxonomy of Viruses，ICTV）的定義，皰疹病毒包含ɑ、β、γ 3 個(gè)亞科，還有其他新發(fā)現(xiàn)未分類的，如鸚鵡酸ɑ 皰疹病毒5、獼猴γ 皰疹病毒1等[1]。皰疹病毒在自然宿主范圍內(nèi)受到限制，并高度適應(yīng)宿主，嚴(yán)重感染通常只在胎兒、免疫功能低下的人或某些宿主中體現(xiàn)。皰疹病毒作為胞內(nèi)寄生生物，在細(xì)胞內(nèi)的復(fù)制有一套自己的控制系統(tǒng)，在其感染期間，病毒能夠劫持宿主的翻譯機(jī)器，大量合成自身相關(guān)蛋白，使內(nèi)質(zhì)網(wǎng)充滿病毒蛋白，導(dǎo)致內(nèi)質(zhì)網(wǎng)直接或間接發(fā)生應(yīng)激，引起未折疊蛋白反應(yīng)[50]。病毒蛋白在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)中的積聚對(duì)蛋白質(zhì)折疊提出了更高的要求，可能導(dǎo)致內(nèi)質(zhì)網(wǎng)穩(wěn)態(tài)失衡甚至影響宿主細(xì)胞的存活。皰疹病毒不僅利用宿主細(xì)胞器來(lái)生產(chǎn)病毒糖蛋白，甚至利用內(nèi)質(zhì)網(wǎng)作為復(fù)制位點(diǎn)來(lái)組裝子代病毒。以下集中概述HSV-Ⅰ、PRV、MDV 和DEV 等皰疹病毒對(duì)ERS 及UPR之間的的相互作用，

2.1 Ⅰ型單純皰疹病毒

Ⅰ型單純皰疹病毒（HSV-Ⅰ）屬于α皰疹病毒亞科，感染細(xì)胞后引起ERS，通過(guò)調(diào)控UPR 和ERAD 機(jī)制促進(jìn)病毒復(fù)制，抑制細(xì)胞凋亡。Burnett 等[51]研究發(fā)現(xiàn)，HSV-Ⅰ在感染早期可有效解除UPR，只激活A(yù)TF6 信號(hào)通路，而PERK 和IRE1/XBP1 通路被抑制；在HSV-Ⅰ感染后期，eIF2α/ATF4 信號(hào)臂活性增加，提示病毒粒子組裝和輸出完成，釋放UPR 信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的抑制；同時(shí)發(fā)現(xiàn)，插入病毒序列的ICP0 真核載體啟動(dòng)子對(duì)ERS有明顯的響應(yīng)，提示HSV-Ⅰ可能利用ICP0作為傳感器來(lái)調(diào)節(jié)細(xì)胞的應(yīng)激反應(yīng)。Zhang 等[52]研究HSV-1 UL41 蛋白在抑制IRE1/XBP1 時(shí)發(fā)現(xiàn)，UL41 的異位表達(dá)使XBP1 翻譯降低，并阻斷ERS誘導(dǎo)劑毒胡蘿卜素（thapsigargin，Tg）誘導(dǎo)的XBP1剪接激活；野生型HSV-1（wild type HSV-1，WT-HSV-1）可降低Tg 誘導(dǎo)的XBP1mRNA 轉(zhuǎn)錄，而UL41缺失突變體R2621 則不能；然而，未經(jīng)藥物預(yù)處理的WT HSV-Ⅰ和R2621 均可降低XBP1（S）的mRNA 轉(zhuǎn)錄和蛋白翻譯，推測(cè)在R2621感染過(guò)程中可能存在其他機(jī)制對(duì)XBP1（S）有抑制作用；同時(shí)發(fā)現(xiàn)HSV-Ⅰ可以通過(guò)抑制IRE1/XBP1 來(lái)避免可能對(duì)病毒復(fù)制不利的細(xì)胞反應(yīng)，這可能與XBP1（S）靶基因編碼的ERAD 蛋白降解病毒蛋白有關(guān)。此前XBP1（S）也被報(bào)道能增強(qiáng)樹突狀細(xì)胞中β 干擾素的產(chǎn)生，從而抑制該病毒的復(fù)制[53]。因此HSV-Ⅰ感染細(xì)胞后發(fā)生UPR 的分子機(jī)制還需要進(jìn)一步深入研究。

2.2 偽狂犬病病毒

偽狂犬病病毒（PRV）屬于α 皰疹病毒亞科，通過(guò)破壞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)的動(dòng)態(tài)平衡，誘導(dǎo)ERS 并觸發(fā)未折疊蛋白反應(yīng)。Yang 等[54]研究發(fā)現(xiàn)，PRV 感染的早期階段ERS 標(biāo)志物GRP78表達(dá)增加，提示ERS 被激活，而隨著時(shí)間的延長(zhǎng)，GRP78的表達(dá)不再增加，表明PRV 只有在感染早期誘導(dǎo)ERS反應(yīng)，且應(yīng)激反應(yīng)強(qiáng)弱與病毒復(fù)制水平并無(wú)平行關(guān)系，且在感染24 h時(shí)達(dá)到峰值；同時(shí)對(duì)UPR 3個(gè)分支的檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，IRE1-XBP1 和eIF2α-ATF4 通路被激活，并通過(guò)PERK-eIF2α-CHOP-Bcl2 軸誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡；在整體水平檢測(cè)ERS 與病毒復(fù)制的關(guān)系時(shí)用毒胡蘿卜素（Tg）、?；切苋パ跄懰幔╰auroursodeoxycholic acid，TUDCA）和衣霉素（tunicamycin，Tm）處理細(xì)胞，其中Tg 處理過(guò)的細(xì)胞能使GRP78過(guò)量表達(dá)，顯著上調(diào)PRV 的復(fù)制，TUDCA 和Tm 下調(diào)病毒復(fù)制。Chen 等[16]在研究豬圓環(huán)病毒二型和PRV 合并感染時(shí)發(fā)現(xiàn)，ERS 可以通過(guò)PERK-eIF2α-ATF4-CHOP 途徑激活，且在感染36～72 h 內(nèi)PRV 抑制豬圓環(huán)病毒二型的增殖；進(jìn)一步的研究表明，PRV 在二者合并感染中起主導(dǎo)作用，并進(jìn)一步激活I(lǐng)RE1-XBP1-EDEM 途徑，一定程度上增強(qiáng)了細(xì)胞凋亡。但關(guān)于PRV 激活ERS 引起UPR、炎癥反應(yīng)、細(xì)胞自噬、凋亡等生物學(xué)過(guò)程之間的級(jí)聯(lián)機(jī)制尚不明確。

2.3 馬立克病病毒

馬立克病病毒（MDV）屬于皰疹病毒科、α 皰疹病毒亞科、馬立克病病毒屬。Neerukonda 等[17]在研究馬立克病病毒感染誘導(dǎo)UPR 時(shí)發(fā)現(xiàn)，MDV激活UPR，通過(guò)增加GRP78/BIP 表達(dá)、促進(jìn)XBP1剪接和誘導(dǎo)α-甘露糖苷酶樣蛋白表達(dá)等增強(qiáng)ERS；MDV 在體內(nèi)感染過(guò)程中可檢測(cè)到部分UPR激活，其調(diào)節(jié)水平受MDV 癌蛋白meq 的影響，其后在MDV 誘導(dǎo)的原發(fā)性淋巴瘤中發(fā)現(xiàn)ATF6被激活，提示ATF6在腫瘤發(fā)展中起一定作用[55]。MDV編碼的極早期或早期蛋白可能會(huì)阻斷UPR 激活，防止UPR 感受器長(zhǎng)時(shí)間激活而導(dǎo)致的細(xì)胞凋亡，以促進(jìn)自身復(fù)制。

2.4 鴨腸炎病毒

鴨腸炎病毒（DEV）又稱鴨瘟病毒（duck plague virus，DPV），是皰疹病毒科α 皰疹病毒亞科的成員。DEV 感染會(huì)引起雛鴨的組織損傷、淋巴管受損和血管損傷等，是一種急性、敗血癥傳染病[56]。Yin 等[57]發(fā)現(xiàn)DEV 感染觸發(fā)機(jī)體ERS，表現(xiàn)為GRP78 表達(dá)增加和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)形態(tài)的擴(kuò)張，DEV 復(fù)制增加；感染鴨胚成纖維細(xì)胞后，PERK和IRE1被激活，二者還可能參與DEV 誘導(dǎo)的自噬。Zhang等[18]利用中國(guó)標(biāo)準(zhǔn)攻毒株DEV（DEV-CSC）誘導(dǎo)鴨胚成纖維細(xì)胞，DEV-CSC 感染可顯著降低DEF 細(xì)胞內(nèi)Ca2+水平，抑制細(xì)胞活力，誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，提示DEV-CSC 感染顯著上調(diào)CHOP、GRP78 和ATF6的表達(dá)，可能是由于ERS 形成的微環(huán)境有利于DEV 的復(fù)制，但其中的分子機(jī)制和相關(guān)聯(lián)級(jí)反應(yīng)還有待研究，特別是促凋亡機(jī)制；大劑量DEVCSC 感染通過(guò)Ca2+介導(dǎo)的ERS/UPR 激活細(xì)胞凋亡，這一機(jī)制可能與鈣網(wǎng)蛋白有關(guān)。在DEV 感染后，鈣網(wǎng)蛋白在Ca2+穩(wěn)態(tài)和ERS/UPR 誘導(dǎo)中的作用也需要進(jìn)一步的研究。

2.5 其他皰疹病毒

除了上述幾種皰疹病毒外，還有其他多種皰疹病毒及其亞型引起內(nèi)質(zhì)網(wǎng)的應(yīng)激并激活未折疊蛋白反應(yīng)。如γ皰疹病毒亞科的卡波西肉瘤相關(guān)皰疹病毒（kaposis sarcomaassociated herpesvirus，KSHV）[58-59]、皰疹病毒家族β亞群的原型致病成員之一人巨細(xì)胞病病毒（human cytomegalo virus，HCMV）[60-61]、水痘帶狀皰疹病病毒（varicellazoster virus，VZV）[62]、Epstein-Barr 病毒（Epstein-Barr virus，EBV）[63]等，均可不同程度地激活未折疊蛋白的1 條或幾條信號(hào)通路，從而抑制或促進(jìn)病毒的復(fù)制，影響細(xì)胞的凋亡。

3 展望

皰疹病毒是無(wú)處不在的雙鏈DNA 包膜病毒，會(huì)造成終生感染并導(dǎo)致一系列疾病。其不同成員在感染過(guò)程中激活的ERS 所表現(xiàn)出的對(duì)病毒感染、復(fù)制的影響既有共性，又呈現(xiàn)出差異。病毒誘導(dǎo)的差異可能與糖基化、磷酸化蛋白數(shù)量和位置等有關(guān)，也與病毒復(fù)制時(shí)宿主細(xì)胞與特定病毒受體結(jié)合有關(guān)，被不同的伴侶分子識(shí)別，從而進(jìn)入不同的加工成熟路徑，并由此向內(nèi)質(zhì)網(wǎng)壓力感受系統(tǒng)傳導(dǎo)不同水平的壓力信號(hào)。此外，ERS 反應(yīng)是保守的應(yīng)激反應(yīng)，可以感知和響應(yīng)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)蛋白穩(wěn)態(tài)，UPR 作為對(duì)ERS 的響應(yīng)，通過(guò)轉(zhuǎn)錄因子PERK、IRE1 和ATF6 的聯(lián)合作用，減弱蛋白質(zhì)瞬時(shí)翻譯，選擇性地上調(diào)反應(yīng)基因，提高蛋白質(zhì)折疊能力，并降解末端錯(cuò)誤折疊的蛋白質(zhì)，使內(nèi)質(zhì)網(wǎng)恢復(fù)穩(wěn)態(tài)。但是，由于皰疹病毒基因組編碼多達(dá)11種不同的囊膜糖蛋白，其復(fù)制和轉(zhuǎn)錄翻譯必然占用大量?jī)?nèi)質(zhì)網(wǎng)資源，極易超出內(nèi)質(zhì)網(wǎng)穩(wěn)態(tài)，造成ERS 和UPR，最終介導(dǎo)細(xì)胞的凋亡。部分皰疹病毒似乎已經(jīng)進(jìn)化出某種篡改未折疊蛋白反應(yīng)的機(jī)制，很可能抑制宿主細(xì)胞抗病毒轉(zhuǎn)錄反應(yīng)，或促進(jìn)自身復(fù)制的相關(guān)基因轉(zhuǎn)錄。到目前為止，有效的ERS 誘導(dǎo)藥物毒胡蘿卜素和衣霉素在UPR 研究中發(fā)揮了很大作用，但這些藥物通常不能概括病理狀態(tài)下的ERS，而且它們也有已知的靶點(diǎn)效應(yīng)。所以研究皰疹病毒自然感染引起ERS 之間的分子機(jī)制和病毒與宿主之間反饋機(jī)制，可發(fā)現(xiàn)病毒復(fù)制、轉(zhuǎn)錄和翻譯的關(guān)鍵節(jié)點(diǎn)，為疫苗研制和抗病毒藥物研究奠定理論基礎(chǔ)。但這些途徑仍有許多未知之處，但越來(lái)越清楚的是，ERS 和UPR 不僅關(guān)聯(lián)皰疹病毒還與許多人類疾病密切相關(guān)。探究UPR 的分子機(jī)制對(duì)許多人類疾病和動(dòng)物疫病以及設(shè)計(jì)通過(guò)調(diào)節(jié)UPR 來(lái)治療疾病或疫病具有重要意義。