胡 林

（華潤江中藥業(yè)股份有限公司，江西 南昌 330041）

近年來，人們對(duì)藥品安全問題越來越關(guān)注，為保障藥品質(zhì)量安全，企業(yè)越來越注重產(chǎn)品質(zhì)量檢查，因此，對(duì)藥品檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室的能力也就有更高要求。藥品檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室通常包括理化實(shí)驗(yàn)室和微生物實(shí)驗(yàn)室兩部分。經(jīng)過多年的發(fā)展，理化實(shí)驗(yàn)室具備較高水平，已經(jīng)逐步形成現(xiàn)代化理化檢驗(yàn)分析能力，擁有現(xiàn)代化檢驗(yàn)分析儀器，同時(shí)，理化檢驗(yàn)員具備高學(xué)歷及專業(yè)技能，基本能滿足高質(zhì)量發(fā)展要求。而微生物實(shí)驗(yàn)室沒能得到很好的發(fā)展。直到現(xiàn)在微生物檢測設(shè)備儀器發(fā)展緩慢，檢驗(yàn)員大都是其他崗位調(diào)配，缺乏微生物專業(yè)知識(shí)，實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化程度不高，質(zhì)量管理體系文件落后。隨著藥品行業(yè)的發(fā)展，生產(chǎn)部門要求微生物檢驗(yàn)?zāi)軌蚣皶r(shí)有效地提供準(zhǔn)確產(chǎn)品數(shù)據(jù)，為中間體的后續(xù)生產(chǎn)和成品的及時(shí)放行提供質(zhì)量依據(jù)，因此，提高微生物實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量管理水平勢在必行。

1 微生物的特點(diǎn)

微生物是一大類個(gè)體微小的生物群體，其生物特性就決定其檢驗(yàn)的特殊性。首先，樣品中微生物污染程度。在檢驗(yàn)前，對(duì)所檢樣品的微生物污染程度是未知，因此，所選取的方法和稀釋梯度都只能在檢測結(jié)果中進(jìn)行推斷。其次，樣品中微生物污染種類。微生物種類繁多，且同一種微生物的生理結(jié)構(gòu)和形態(tài)也隨時(shí)間不同而不同，樣品受污染的影響就復(fù)雜。受時(shí)間及空間的影響，同一批次產(chǎn)品可能被不同特性的微生物污染，需要采取不同的檢測方法才能更好地檢測出樣品微生物的污染情況。再次，樣品中微生物污染分布。由于樣品受微生物污染的不確定性，因此，在分布中呈現(xiàn)不均勻。不同部位的微生物檢測結(jié)果完全不同，即使同一部位多次取樣，最后的結(jié)果也不會(huì)相同。不同于化學(xué)物質(zhì)，微生物生長和分布具有復(fù)雜和多樣的特點(diǎn)。因此，在判斷微生物檢驗(yàn)結(jié)果的時(shí)候，檢驗(yàn)員的微生物專業(yè)知識(shí)水平就尤為重要。除此之外，檢驗(yàn)過程中，任何一個(gè)步驟過程都有可能出現(xiàn)微生物污染，這都直接影響檢驗(yàn)結(jié)果，所以對(duì)微生物檢驗(yàn)整體控制的必要性也尤為突出。

2 微生物檢驗(yàn)的特點(diǎn)

《中華人民共和國藥典》（簡稱《中國藥典》）是國家監(jiān)督管理藥品的法定標(biāo)準(zhǔn)，制藥企業(yè)在進(jìn)行微生物檢驗(yàn)的時(shí)候，均參照《中國藥典》里的微生物限度法進(jìn)行檢驗(yàn)。微生物限度檢查法系檢查非規(guī)定滅菌制劑及其原料、輔料受微生物污染程度的方法，檢查項(xiàng)目包括需氧菌數(shù)、霉菌數(shù)、酵母菌數(shù)總數(shù)及控制菌檢查。與理化檢驗(yàn)具有明確的檢驗(yàn)方法不同，微生物檢驗(yàn)只有指導(dǎo)原則，針對(duì)不同產(chǎn)品并無檢驗(yàn)方法，需要根據(jù)實(shí)驗(yàn)室的實(shí)際情況進(jìn)行各自的方法學(xué)，因此可能出現(xiàn)同樣的樣品，在不同的實(shí)驗(yàn)室會(huì)有不同的微生物檢驗(yàn)方法。根據(jù)樣品的理化特性與生物學(xué)特性，采取適宜的方法制備供試液，這就需要檢驗(yàn)員具有足夠的檢驗(yàn)經(jīng)驗(yàn)和微生物知識(shí)，才能對(duì)樣品采取合理的處理方法。雖然，藥典有供試液的制備方法，但很多情況下企業(yè)的樣品依然需要根據(jù)自己的實(shí)際情況進(jìn)行供試液的制備。

2.1 計(jì)數(shù)適用性檢查

計(jì)數(shù)適用性檢查需要使用到大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌、白色念珠菌、黑曲霉這五種菌株進(jìn)行檢驗(yàn)。其中大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌為細(xì)菌，白色念珠菌為真菌，黑曲霉為霉菌，他們代表不同類型的微生物，在做方法學(xué)的時(shí)候能夠具有代表性。微生物檢驗(yàn)方法學(xué)的需求在于試驗(yàn)條件的影響，特別是樣品中的物質(zhì)對(duì)微生物生長是否具有抑制或者促進(jìn)作用。每個(gè)實(shí)驗(yàn)室就需要根據(jù)自身的情況設(shè)計(jì)方法學(xué)，就會(huì)出現(xiàn)同樣的樣品可采取不同的檢驗(yàn)方法。計(jì)數(shù)方法主要包括平皿法和薄膜過濾法。中成藥和中藥提取物，由于含有大量不溶性物質(zhì)，不能完全通過薄膜過濾，會(huì)有沉淀在薄膜上，因此大部分會(huì)采用平皿法對(duì)樣品進(jìn)行微生物方法學(xué)驗(yàn)證。固體制劑的樣品進(jìn)行處理的時(shí)候，都需要加入緩沖液制備成液體供試品，然后根據(jù)樣品的污染情況稀釋成一定比例，再加入菌種進(jìn)行方法學(xué)驗(yàn)證。然而，部分中藥具有抑菌效果，可采取加抑菌劑或者增加稀釋劑的方法來處理樣品。非無菌藥品的微生物限度標(biāo)準(zhǔn)表明，需氧菌總數(shù)與霉菌和酵母菌總數(shù)的限度是不一致的，那在供試品稀釋的時(shí)候就會(huì)出現(xiàn)，稀釋程度越高有利于微生物的生長并且方便計(jì)數(shù)，能夠得到較好的檢驗(yàn)數(shù)據(jù)?？墒亲詈蟮慕Y(jié)論，就會(huì)出現(xiàn)在限度范圍內(nèi)需氧菌總數(shù)能夠進(jìn)行檢測，而霉菌和酵母菌總數(shù)的檢驗(yàn)數(shù)據(jù)就不靈敏，不能有效對(duì)樣品的進(jìn)行監(jiān)控。因此，在選擇適宜稀釋級(jí)進(jìn)行微生物檢驗(yàn)方法學(xué)的時(shí)候，需要根據(jù)樣品的微生物限度標(biāo)準(zhǔn)來制定方案，才能保證計(jì)數(shù)方法學(xué)通過后的順利實(shí)行。

2.2 控制菌適用性檢查

控制菌檢查是依據(jù)《中國藥典》的要求，基于藥品的給藥途徑和對(duì)患者健康潛在的危害以及中藥的特殊性而制訂的。因此不同的樣品其控制菌檢查項(xiàng)目是不同的。相比于計(jì)數(shù)方法學(xué)，控制菌檢查具有明確的檢驗(yàn)方法，各企業(yè)可依據(jù)法規(guī)要求進(jìn)行樣品的方法學(xué)驗(yàn)證?？刂凭谴_定菌種，在判斷的時(shí)候，都在相應(yīng)鑒定培養(yǎng)基上出現(xiàn)陽性生化反應(yīng)作為判斷依據(jù)。如果在相應(yīng)培養(yǎng)基上有類似的微生物生長，并且想繼續(xù)驗(yàn)證該微生物是否是相應(yīng)種屬的控制菌，那就要開展各類生化鑒別實(shí)驗(yàn)，包括：細(xì)菌生化試驗(yàn)、糖發(fā)酵試驗(yàn)、賴氨酸脫酶試驗(yàn)等等，同時(shí)還可以開展基因方面的分子鑒別，通過特定基因序列的比對(duì)來確定試驗(yàn)中出現(xiàn)微生物的種屬。因此控制菌試驗(yàn)對(duì)檢驗(yàn)員的生物學(xué)水平具有較高的要求，這樣檢驗(yàn)員才能順利開展相應(yīng)試驗(yàn)。

3 微生物實(shí)驗(yàn)室的管理

3.1 人員

微生物實(shí)驗(yàn)室的人員，需要具備非常強(qiáng)的微生物專業(yè)知識(shí)，熟悉相關(guān)法律法規(guī)及綜合素質(zhì)較高的人員。目前，微生物實(shí)驗(yàn)室人員大都由理化檢驗(yàn)及其他部門調(diào)崗而來，所以工作人員也就缺乏微生物相關(guān)專業(yè)知識(shí)及工作經(jīng)驗(yàn)。微生物檢驗(yàn)方法不同于其他檢驗(yàn)，樣品的檢驗(yàn)結(jié)果，要檢驗(yàn)員憑自身的專業(yè)水平進(jìn)行統(tǒng)計(jì)和分析，具有非常強(qiáng)的主觀性。因此，對(duì)于微生物檢驗(yàn)人員需制定相應(yīng)的管理措施，保證檢驗(yàn)員具有相應(yīng)的專業(yè)知識(shí)。首先，優(yōu)化微生物實(shí)驗(yàn)室人員架構(gòu)，實(shí)驗(yàn)室必須至少有一名具有微生物專業(yè)背景的人員。實(shí)驗(yàn)室的培訓(xùn)工作和文件起草等工作，由具有微生物專業(yè)知識(shí)的人完成。并且，開展理論知識(shí)的培訓(xùn)，讓?shí)徫簧系拿總€(gè)檢驗(yàn)員都具備一定的專業(yè)知識(shí)，能隨時(shí)開展微生物檢驗(yàn)。其次，完善考核制度，定期對(duì)檢驗(yàn)員進(jìn)行微生物實(shí)驗(yàn)各項(xiàng)操作考核，增強(qiáng)檢驗(yàn)員對(duì)微生物生長特性的敏感性，進(jìn)而保證檢驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。再次，對(duì)員工的培訓(xùn)效果進(jìn)行評(píng)估和總結(jié)，可通過內(nèi)外部能力比對(duì)的方式，考察其是否達(dá)到相應(yīng)的效果。每年都對(duì)檢驗(yàn)人員的微生物知識(shí)和操作技能進(jìn)行培訓(xùn)和考核，才能保障其微生物專業(yè)知識(shí)及高水平的檢驗(yàn)?zāi)芰?，進(jìn)而對(duì)微生物檢驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)確性達(dá)到有效保障。

3.2 設(shè)備

微生物檢驗(yàn)是無菌操作，要達(dá)到這條件，就需要穩(wěn)定的實(shí)驗(yàn)設(shè)備。微生物檢驗(yàn)最重要的設(shè)備是滅菌器，其性能效果直接決定檢驗(yàn)結(jié)果，因此滅菌設(shè)備的管理就是重中之重。滅菌設(shè)備作為特種設(shè)備，其操作人員必須具備上崗資格，還要有輪換人員，保障每次使用的安全性。操作滅菌器的時(shí)候，要進(jìn)行滅菌溫度曲線的日常管理，對(duì)每次滅菌過程中溫度的上升、保溫的時(shí)間、腔體內(nèi)的壓力等都應(yīng)進(jìn)行監(jiān)控。而且，設(shè)備每年都要進(jìn)行滅菌運(yùn)行和性能確認(rèn)，確保設(shè)備的各項(xiàng)數(shù)據(jù)指標(biāo)都達(dá)到規(guī)范需求，滅菌程序符合設(shè)計(jì)及認(rèn)證標(biāo)準(zhǔn)，進(jìn)而保證滅菌的有效性。微生物檢驗(yàn)的環(huán)境也必須得到有效保障，潔凈區(qū)每年都應(yīng)進(jìn)行過濾效果及風(fēng)速等檢定，并對(duì)效果進(jìn)行評(píng)估，形成靜態(tài)和動(dòng)態(tài)的空氣環(huán)境檢測流程，進(jìn)而控制微生物操作中的微生物污染。生物安全柜和超凈工作臺(tái)是兩種不同類型的設(shè)備，在使用過程中，需要根據(jù)設(shè)備的特定進(jìn)行日常維護(hù)，并制定性能驗(yàn)證方案。同時(shí)，其他檢驗(yàn)相關(guān)設(shè)備包括：細(xì)菌培養(yǎng)箱、霉菌培養(yǎng)箱、電子天平等都需要進(jìn)行日常監(jiān)控，完善設(shè)備使用日志，這樣就可追溯影響微生物檢測結(jié)果的因素。

3.3 培養(yǎng)基

培養(yǎng)基，是供給微生物生長繁殖的，由不同營養(yǎng)物質(zhì)組合配制而成的營養(yǎng)基質(zhì)?，F(xiàn)在技術(shù)水平的發(fā)展，都使用商業(yè)化培養(yǎng)基，使用方便，種類繁多。但不同公司之間的產(chǎn)品存在差異，需要制定完善的驗(yàn)收制度。首先，確認(rèn)廠家資質(zhì)，并要求提供生產(chǎn)培養(yǎng)基的質(zhì)量證書和報(bào)告單。其次，接收到的培養(yǎng)基按照規(guī)定進(jìn)行適應(yīng)性實(shí)驗(yàn)，檢定是否滿足本實(shí)驗(yàn)室的檢驗(yàn)要求。再次，對(duì)不同廠家培養(yǎng)基之間的性能差異進(jìn)行登記，以便選擇更適用于本實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)基。培養(yǎng)基的使用和存放，可根據(jù)培養(yǎng)基使用說明書的要求來進(jìn)行。由于培養(yǎng)基非常容易吸潮，因此使用和存放的濕度也是考慮的因素。培養(yǎng)基由于富含營養(yǎng)物質(zhì)，非常適合微生物生長，在使用后，無法判斷是否有微生物在培養(yǎng)基中進(jìn)行生長繁殖。因?yàn)?，平皿上是否有菌是通過肉眼可見菌落進(jìn)行判斷，但經(jīng)過培養(yǎng)后的培養(yǎng)基，可能存在肉眼不可見的微生物。因此，使用后的培養(yǎng)基必須經(jīng)過滅菌處理，這不僅可以殺死里面可能存在的微生物，而且破壞培養(yǎng)基的營養(yǎng)，減少培養(yǎng)基的效果。建立健全培養(yǎng)基的整個(gè)使用流程體系，從購買到配制再到銷毀，完善培養(yǎng)基管理體系，這樣就能有效保障微生物實(shí)驗(yàn)室的順利運(yùn)行。

3.4 菌種

實(shí)驗(yàn)室的菌種均是從官方菌種保藏機(jī)構(gòu)獲得的標(biāo)準(zhǔn)菌株，轉(zhuǎn)接一代后開始在本實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行保藏。按照管理文件的要求，建立完善的管理記錄及保藏條件。菌種必須具有詳實(shí)的標(biāo)識(shí)，含各項(xiàng)信息，包括：菌種名稱、來源、編號(hào)、特征、傳代時(shí)間、培養(yǎng)基名稱、培養(yǎng)條件、保藏方法、保藏位置等，并采用雙人復(fù)核的方法。菌種從領(lǐng)取到使用，再到銷毀應(yīng)建立全監(jiān)控臺(tái)賬，由實(shí)驗(yàn)室負(fù)責(zé)人對(duì)過程進(jìn)行監(jiān)督。同時(shí)，微生物檢驗(yàn)員應(yīng)輪換進(jìn)行菌種的傳代及活化，并開展相應(yīng)的鑒別工作，其包括：形態(tài)鑒別、生化反應(yīng)等，如有條件還可進(jìn)行基因鑒別。這樣使得檢驗(yàn)員能夠熟悉各菌種的特性特點(diǎn)，也可提高檢驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。

3.5 生物安全

微生物實(shí)驗(yàn)室的生物安全是保障實(shí)驗(yàn)室安全的重要工作。環(huán)境中存在各式各樣的微生物，特別是耐受性強(qiáng)的芽孢菌，很容易引起培養(yǎng)物的污染，進(jìn)而影響檢驗(yàn)結(jié)果的判斷。此外，外來檢品中還可能存在各種病原性微生物，這就需要微生物檢驗(yàn)人員具有敏銳的生物安全防護(hù)意識(shí)，做好自身及周邊的保護(hù)。因此，實(shí)驗(yàn)室制定各項(xiàng)生物安全制度，就是為了保障檢驗(yàn)的準(zhǔn)確性和實(shí)驗(yàn)室人員的安全。微生物實(shí)驗(yàn)室應(yīng)建立廢棄物與泄漏物的應(yīng)急處理方案，并將方案以圖片的形式貼在顯眼處，保證任何人在遇到緊急情況的時(shí)候，能夠按照方案進(jìn)行緊急處理。定期開展全面的消毒效果驗(yàn)證，包括：紫外燈、臭氧發(fā)生器、消毒液等嚴(yán)格控制消毒過程，確保消毒的有效性。針對(duì)實(shí)驗(yàn)室可能出現(xiàn)的微生物污染源，包括：外來樣品攜帶的微生物、人員進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室攜帶的微生物、空氣流動(dòng)帶來的微生物等，建立可追溯文件，即可以找到檢驗(yàn)過程中，可能出現(xiàn)的偏差，也可以有效加強(qiáng)實(shí)驗(yàn)室的風(fēng)險(xiǎn)控制。對(duì)于可能出現(xiàn)的污染微生物，檢驗(yàn)員必須具備較強(qiáng)的專業(yè)能力，能夠區(qū)分污染對(duì)微生物檢驗(yàn)結(jié)果的影響，并熟練使用專業(yè)技術(shù)手段來進(jìn)行生物安全方面的控制。同時(shí)，防止交叉污染也是生物安全防護(hù)的重點(diǎn)之一。為防止交叉污染，微生物檢驗(yàn)室區(qū)域應(yīng)該獨(dú)立于其他實(shí)驗(yàn)室區(qū)域，嚴(yán)格控制檢驗(yàn)人員數(shù)量。

4 實(shí)驗(yàn)室體系文件的管理

文件體系是微生物實(shí)驗(yàn)室管理的重要環(huán)節(jié)。實(shí)驗(yàn)室需要根據(jù)實(shí)際情況制定質(zhì)量管理體系文件。體系文件要能反映實(shí)驗(yàn)室的檢測能力和范圍，保證檢驗(yàn)結(jié)果的公正性，充分體現(xiàn)影響質(zhì)量活動(dòng)的各種要素，并且人員能夠按照體系文件將實(shí)際工作落到實(shí)處，進(jìn)而有效控制質(zhì)量活動(dòng)的開展。實(shí)驗(yàn)室嚴(yán)格按照各項(xiàng)條款編寫文件，明確分工并責(zé)任到人，確保質(zhì)量管理體系有效運(yùn)行。質(zhì)量管理體系文件建立后，各種質(zhì)量活動(dòng)都如實(shí)進(jìn)行填寫，真實(shí)地反映實(shí)驗(yàn)室的運(yùn)行情況。實(shí)驗(yàn)室還配備監(jiān)督員，在負(fù)責(zé)人的指導(dǎo)下，監(jiān)督各項(xiàng)質(zhì)量活動(dòng)，使所有工作都在體系受控中運(yùn)行。實(shí)驗(yàn)室人員是文件系統(tǒng)的重要因素，其對(duì)管理體系的理解和執(zhí)行等都直接影響各項(xiàng)質(zhì)量活動(dòng)的正常運(yùn)行。由于微生物檢驗(yàn)的特殊性，檢驗(yàn)員的專業(yè)水平直接影響檢驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性，所以更需要運(yùn)用質(zhì)量體系來管理微生物檢驗(yàn)員。比如：開展經(jīng)常性的培訓(xùn)與監(jiān)督，并將結(jié)果形成考核機(jī)制，提升員工的技能水平，不斷完善其微生物檢驗(yàn)?zāi)芰Α?/p>

5 總結(jié)

藥品企業(yè)微生物實(shí)驗(yàn)室管理是一項(xiàng)特殊且系統(tǒng)的工作，直接影響到企業(yè)的發(fā)展，尤其是現(xiàn)在制藥企業(yè)對(duì)于產(chǎn)品質(zhì)量的關(guān)注程度越來越高，產(chǎn)品的好壞直接影響客戶對(duì)企業(yè)的滿意度。隨著大眾對(duì)生物風(fēng)險(xiǎn)管理意識(shí)的增強(qiáng)，監(jiān)管部門對(duì)環(huán)境監(jiān)控的力度增大，提高藥品微生物控制水平也是現(xiàn)代質(zhì)量管理理念的要求。只有不斷提升微生物檢驗(yàn)?zāi)芰?，完善?shí)驗(yàn)室管理能力，嚴(yán)格做到質(zhì)量控制，藥品企業(yè)微生物檢驗(yàn)行業(yè)就會(huì)有很好的發(fā)展。