張燕妮,胡玉海

湖北省武漢市漢口醫(yī)院檢驗(yàn)科,湖北武漢 430013

甲狀腺癌是臨床上最常見的惡性內(nèi)分泌系統(tǒng)腫瘤,流行病學(xué)顯示,近年來甲狀腺癌在全球范圍內(nèi)的發(fā)病率均呈明顯上升趨勢(shì)。盡管有75%～85%的甲狀腺癌患者為甲狀腺乳頭狀癌,預(yù)后較好[1]。然而由于腫瘤侵襲性較強(qiáng),長(zhǎng)期隨訪顯示超過25%的甲狀腺乳頭狀癌患者經(jīng)過常規(guī)治療后仍會(huì)出現(xiàn)復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移,其中大部分需經(jīng)二次手術(shù)并輔以放射治療和靶向藥物治療;另一部分仍無法根治,最終死亡[2]。甲狀腺髓樣癌和甲狀腺未分化癌因?yàn)榍忠u性較強(qiáng),進(jìn)展迅速,預(yù)后較差[3]。因此,深入研究甲狀腺癌進(jìn)展標(biāo)志物,對(duì)早期診斷和疾病病情監(jiān)測(cè),以及改善患者預(yù)后具有十分重要的作用。

血管黏附蛋白-1(VAP-1)為內(nèi)皮細(xì)胞黏附分子,主要參與白細(xì)胞滾動(dòng)黏附和向炎癥部位轉(zhuǎn)移,其水平高低與胃癌、肝癌等疾病的復(fù)發(fā)和預(yù)后差密切相關(guān)[4-5]。血管細(xì)胞黏附分子-1(VCAM-1)是一類通過介導(dǎo)白細(xì)胞黏附等導(dǎo)致血管內(nèi)皮細(xì)胞功能受損的黏附分子,與多種腫瘤的預(yù)后也密切相關(guān)[6]。研究表明VAP-1和VCAM-1的水平與甲狀腺癌細(xì)胞侵襲、黏附和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移密切相關(guān)[7-8]。因此本研究擬通過比較血清VAP-1和VCAM-1在甲狀腺癌患者、甲狀腺腺瘤患者和健康者間的變化,進(jìn)而評(píng)估這2項(xiàng)指標(biāo)聯(lián)合檢測(cè)對(duì)甲狀腺癌的診斷價(jià)值,為臨床診斷提供參考。

1 資料與方法

1.1一般資料 選擇2020年7月至2022年5月在本院行甲狀腺全切術(shù)并經(jīng)病理檢查確診的甲狀腺癌患者57例作為甲狀腺癌組,另選取同期確診的甲狀腺腺瘤患者47例作為甲狀腺腺瘤組,同期體檢健康者30例作為健康對(duì)照組。甲狀腺癌組:男13例,女44例;年齡19～69歲,平均(43.77±11.85)歲;甲狀腺乳頭狀癌32例,甲狀腺濾泡狀癌14例,甲狀腺髓樣癌10例,甲狀腺未分化癌1例;TNM分期,Ⅰ～Ⅱ期39例,Ⅲ～Ⅳ期18例;有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移36例。甲狀腺腺瘤組:男16例,女31例;年齡20～52歲,平均(38.60±8.16)歲。健康對(duì)照組:男8例,女22例;年齡21～53歲,平均(37.57±8.62)歲。3組研究對(duì)象性別、年齡比較,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),具有可比性。甲狀腺癌組納入標(biāo)準(zhǔn):(1)為首次確診甲狀腺癌,術(shù)前未接受其他相關(guān)治療;(2)未合并高血壓、心臟病等心腦血管疾病;(3)臨床資料完整。排除標(biāo)準(zhǔn):(1)合并其他系統(tǒng)相關(guān)疾病;(2)患有傳染性疾病;(3)合并其他甲狀腺相關(guān)疾病;(4)近期服用可能影響本研究結(jié)果的藥物。本研究符合相關(guān)醫(yī)學(xué)倫理學(xué)要求并獲得本院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

1.2儀器與試劑 PW350全自動(dòng)洗板機(jī)(深圳市匯松科技發(fā)展有限公司),RT-6100全自動(dòng)酶標(biāo)儀(深圳雷杜生命科學(xué)股份有限公司),BY-300C低速臺(tái)式高速離心機(jī)(北京白洋醫(yī)用離心機(jī)有限責(zé)任公司),DW-86L338J醫(yī)用超低溫保存冰箱(青島海爾生物醫(yī)療股份有限公司),人VAP-1 酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)檢測(cè)試劑盒(EK1646,武漢博士德生物工程有限公司),人VCAM-1 ELISA檢測(cè)試劑盒(EK0537,武漢博士德生物工程有限公司)。

1.3方法 甲狀腺癌患者分別于術(shù)前和術(shù)后第3天晨起空腹采集外周靜脈血3 mL,甲狀腺腺瘤組和健康對(duì)照組均晨起空腹采集外周靜脈血3 mL,3 000 r/min離心15 min,取血清于-80 ℃冰箱凍存?zhèn)溆?。采用ELISA檢測(cè)血清VAP-1和VCAM-1水平。ELISA嚴(yán)格按照產(chǎn)品說明書進(jìn)行操作。具體如下:每孔加入250 μL稀釋血清 (即25 μL血清加入225 μL標(biāo)本稀釋液),封板后37 ℃孵育90 min,吸棄酶標(biāo)板內(nèi)液體,每孔加入100 μL生物素標(biāo)記抗人抗體,37 ℃孵育60 min,1×洗滌緩沖液洗板3次,每孔加入100 μL ABC工作液,37 ℃孵育30 min,1×洗滌緩沖液洗板5次,最后每孔加入90 μL TMB顯色液,37 ℃避光25 min,每孔加入100 μL終止液,使用酶標(biāo)儀在450 nm檢測(cè)吸光度(A)。

2 結(jié) 果

2.1各組血清VAP-1和VCAM-1水平比較 甲狀腺癌組術(shù)前血清中VAP-1水平顯著低于甲狀腺腺瘤組和健康對(duì)照組(P<0.05),而血清VCAM-1水平顯著高于甲狀腺腺瘤組和健康對(duì)照組(P<0.05)。血清VAP-1和VCAM-1水平在甲狀腺腺瘤組和健康對(duì)照組間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見表1。

表1 各組血清中VAP-1和VCAM-1水平檢測(cè)比較

2.2甲狀腺癌組手術(shù)前后血清VAP-1和VCAM-1水平比較 和術(shù)前相比,甲狀腺癌組術(shù)后血清VAP-1水平顯著升高(P<0.05),而血清VCAM-1水平顯著降低(P<0.05)。見表2。

表2 甲狀腺癌組手術(shù)前后血清中VAP-1和VCAM-1水平比較

2.3不同臨床病理參數(shù)的甲狀腺癌患者術(shù)前血清VAP-1和VCAM-1水平比較 術(shù)前血清VAP-1、VCAM-1水平在不同腫瘤最大徑、腫瘤病理類型、TNM分期、腫瘤分化程度和有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的甲狀腺癌患者中差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),而不同年齡、性別的甲狀腺癌患者中術(shù)前血清VAP-1、VCAM-1水平差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見表3。

表3 不同臨床病理參數(shù)的甲狀腺癌患者術(shù)前血清VAP-1和VCAM-1水平比較

2.4血清VAP-1和VCAM-1診斷甲狀腺癌的ROC曲線分析 ROC曲線分析結(jié)果顯示,血清VAP-1、VCAM-1單項(xiàng)檢測(cè)診斷甲狀腺癌的曲線下面積(AUC)分別為0.883(95%CI:0.828～0.939)、0.698(95%CI:0.604～0.793),2項(xiàng)聯(lián)合檢測(cè)診斷甲狀腺癌患者的AUC為0.904(95%CI:0.854～0.954)。見表4和圖1。

圖1 血清VAP-1和VCAM-1檢測(cè)診斷甲狀腺癌的ROC曲線

表4 血清VAP-1和VCAM-1單項(xiàng)及聯(lián)合檢測(cè)診斷甲狀腺癌的效能

3 討 論

據(jù)國(guó)家癌癥中心最新統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)顯示,我國(guó)甲狀腺癌不僅發(fā)病率和病死率呈現(xiàn)持續(xù)上升趨勢(shì),而且5年生存率與發(fā)達(dá)國(guó)家相比仍有14%左右的差距。因此加大高危人群的早期篩查和診治勢(shì)在必行。目前超聲檢查由于其具有無創(chuàng)、易操作、快速等諸多優(yōu)勢(shì),成為臨床上對(duì)甲狀腺癌篩查的首選方法。但是眾多研究表明,單純依靠超聲方法對(duì)甲狀腺癌診斷的靈敏度、特異度和準(zhǔn)確度均不足80%[9-10]。這與超聲檢查主要依據(jù)病變形態(tài)、大小、病灶鈣化、病灶血流狀況等指標(biāo)進(jìn)行診斷密切相關(guān)。而細(xì)針穿刺活檢技術(shù),由于其可以在超聲引導(dǎo)下準(zhǔn)確判斷組織病變狀況,故具有較好的臨床診斷特異度,但是由于其具有有創(chuàng)性,且研究顯示部分經(jīng)該技術(shù)穿刺的患者會(huì)增加淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、骨轉(zhuǎn)移和肺轉(zhuǎn)移等情況的發(fā)生,增加致死率[10]。因此尋找血液標(biāo)志物有其重要的臨床意義。

近年來有關(guān)甲狀腺癌患者血清標(biāo)志物、患者清除甲狀腺癌術(shù)后的殘余甲狀腺組織(簡(jiǎn)稱為清甲)效果、清甲治療后對(duì)患者預(yù)后的影響等研究已取得了較大進(jìn)步,如促甲狀腺激素(TSH)、甲狀腺球蛋白(Tg)和甲狀腺球蛋白抗體(TgAb)等已在臨床廣泛應(yīng)用,其中Tg被美國(guó)甲狀腺協(xié)會(huì)(ATA)等推薦為臨床上行甲狀腺癌全切術(shù)后復(fù)發(fā)及轉(zhuǎn)移的重要監(jiān)測(cè)指標(biāo)[11]。但由于Tg水平受到TSH調(diào)控,同時(shí)易受患者生理狀態(tài)、血液中其他免疫因子的影響,故在2015版ATA指南[12]及我國(guó)關(guān)于甲狀腺癌的指南[13]中已明確術(shù)前血清Tg水平增高不能作為診斷甲狀腺癌的依據(jù)。但鑒于術(shù)后Tg水平升高可能提示甲狀腺癌術(shù)后體內(nèi)殘留甲狀腺組織或癌組織,且Tg的最佳區(qū)分水平仍未明確,故術(shù)后Tg水平仍不足以用于監(jiān)測(cè)甲狀腺癌的預(yù)后,需輔以影像學(xué)證據(jù)[14-15]。因此,有必要篩選更為敏感的血清生物學(xué)標(biāo)志物來輔助診斷和監(jiān)測(cè)甲狀腺癌。

VAP-1是一種內(nèi)皮黏附分子,可促進(jìn)淋巴細(xì)胞黏附于血管內(nèi)皮,還可以通過調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)錄因子、趨化因子和其他黏附分子來調(diào)節(jié)炎癥微環(huán)境[16]。在結(jié)直腸癌患者中,癌組織的VAP-1 無論是在mRNA水平還是蛋白水平均顯著降低,血清VAP-1水平也顯著低于健康對(duì)照者[17]。因此本研究分析了甲狀腺癌患者血清VAP-1的水平,結(jié)果顯示甲狀腺癌患者血清VAP-1水平也顯著降低,術(shù)后VAP-1水平明顯增高,術(shù)前血清VAP-1水平在不同腫瘤最大徑、腫瘤病理類型、TNM分期、腫瘤分化程度和有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的甲狀腺癌患者中差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),而不同年齡、性別的甲狀腺癌患者術(shù)前血清VAP-1水平差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。采用ROC曲線分析甲狀腺癌患者血清VAP-1水平對(duì)甲狀腺癌的診斷價(jià)值,結(jié)果顯示血清VAP-1單項(xiàng)檢測(cè)診斷甲狀腺癌的AUC分別為0.883(95%CI:0.828～0.939)。這說明甲狀腺癌患者血清VAP-1水平可以很好地用于診斷甲狀腺癌,同時(shí)也是甲狀腺癌患者疾病進(jìn)展的一個(gè)重要標(biāo)志物。

VCAM-1可通過介導(dǎo)細(xì)胞間及細(xì)胞與間質(zhì)之間的黏附從而參與細(xì)胞分化、炎癥、對(duì)移植組織的反應(yīng)和腫瘤擴(kuò)散等多種生物學(xué)過程[18]。前期研究表明在甲狀腺乳突狀癌中VCAM-1水平升高,其水平增加可能與組織分化、T細(xì)胞活化和腫瘤細(xì)胞的傳播密切相關(guān),但確切作用仍不清楚[19]。在本研究中發(fā)現(xiàn)甲狀腺癌患者VCAM-1水平顯著高于甲狀腺腺瘤患者和健康對(duì)照者。與術(shù)前相比,術(shù)后甲狀腺癌患者VCAM-1水平顯著降低。通過對(duì)不同病理類型的甲狀腺癌進(jìn)行研究,發(fā)現(xiàn)不同甲狀腺癌類型的患者血清VCAM-1水平差異較大,未分化型甲狀腺癌患者血清VCAM-1水平顯著高于分化型甲狀腺癌。此外甲狀腺癌患者術(shù)前血清中VCAM-1水平在不同腫瘤最大徑、腫瘤病理類型、TNM分期、腫瘤分化程度和有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的甲狀腺癌患者中差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),而不同年齡、性別的甲狀腺癌患者術(shù)前血清VCAM-1水平差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。采用ROC曲線分析血清VCAM-1對(duì)甲狀腺癌的診斷價(jià)值,結(jié)果顯示VCAM-1單項(xiàng)檢測(cè)診斷甲狀腺癌患者的AUC為0.698(95%CI:0.604～0.793)。

ROC曲線分析顯示血清VAP-1和VCAM-1聯(lián)合檢測(cè)診斷甲狀腺癌的AUC為0.904(95%CI:0.854～0.954),大于2項(xiàng)指標(biāo)單項(xiàng)檢測(cè),因此血清VAP-1和VCAM-1聯(lián)合檢測(cè)可用于輔助臨床對(duì)甲狀腺癌的早期診斷和疾病進(jìn)展的判斷,這樣有助于臨床對(duì)不良預(yù)后甲狀腺癌患者早期采取必要手段進(jìn)行干預(yù)治療,進(jìn)而提升患者生存率。

綜上所述,本研究發(fā)現(xiàn)甲狀腺癌患者血清VAP-1水平明顯降低, VCAM-1水平明顯升高,這2項(xiàng)指標(biāo)的水平在不同腫瘤最大徑、腫瘤病理類型、TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和腫瘤分化程度的甲狀腺癌患者中有差異。VAP-1和VCAM-1聯(lián)合檢測(cè)可以提高對(duì)甲狀腺癌早期診斷的效能,有助于臨床早期診斷和監(jiān)測(cè)疾病進(jìn)展。