胡月月 聶繼紅 薛兆坤 劉 藝*

1.烏魯木齊市中醫(yī)醫(yī)院藥學(xué)部，新疆 烏魯木齊 830000；2.新疆醫(yī)科大學(xué)附屬中醫(yī)醫(yī)院藥學(xué)部，新疆 烏魯木齊 830000

“歸芪扶正方”源于新疆醫(yī)科大學(xué)附屬中醫(yī)醫(yī)院的臨床應(yīng)用的經(jīng)驗(yàn)方，主要用于提高機(jī)體免疫力。該方由太子參、黃芪、麥冬、炒六神曲等十五味藥組成，具有益氣養(yǎng)陰、補(bǔ)肺益腎的功效，用于氣陰兩虛、肺腎不足所致的低熱、五心煩熱、夜間潮熱，盜汗，自汗，乏力氣短，干咳少痰，獲得性免疫缺陷綜合征見上述證候者。本方中太子參具有心肌保護(hù)、免疫調(diào)節(jié)等藥理作用[1]，黃芪具有保肝、利尿、降脂、降糖等藥理作用[2]，麥冬具有抗氧化、抗衰老等藥理作用[3]，歸芪扶正顆粒是在中醫(yī)理論指導(dǎo)下使用的臨床經(jīng)驗(yàn)方，原方為湯劑，其服用體積大、易發(fā)霉、攜帶不便，因顆粒無需煎煮、服用及攜帶方便、可保持原劑型的特點(diǎn)和處方要求，故將劑型改為顆粒劑。本實(shí)驗(yàn)在輔料類型和乙醇濃度考察的基礎(chǔ)上，以甘露醇用量、乙醇濃度為影響因素，以成型率、休止角及吸濕率的綜合評(píng)分為評(píng)價(jià)指標(biāo)，采用星點(diǎn)設(shè)計(jì)-響應(yīng)曲面法優(yōu)選歸芪扶正顆粒的最佳成型工藝，并對(duì)顆粒的包裝濕度進(jìn)行考察，為后期的相關(guān)研究打下基礎(chǔ)[4]。

1 儀器與材料

1.1 儀器 AL204萬分之一電子天平(梅特勒-托利多儀器有限公司)；DHG-9245A電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱(上海齊欣科學(xué)儀器有限公司)；干燥器，恒重稱量瓶。

1.2 材料 歸芪扶正浸膏(由新疆醫(yī)科大學(xué)附屬中醫(yī)醫(yī)院提供)；神曲粉(批號(hào)：20180111，湖北孟氏中藥飲片有限公司)；乳糖(批號(hào)：20170906，西安天茂化工有限公司)；微晶纖維素(批號(hào)：20180302，天津市祥瑞鑫化工科技有限公司)；甘露醇(批號(hào)：20180913，上海源葉生物科技有限公司)；淀粉(批號(hào)：20180713，天津化學(xué)試劑有限公司)；蔗糖(批號(hào)：20170525，天津市津東天正精細(xì)化學(xué)試劑廠)；糊精(批號(hào)：20180120，國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司)；氯化鈉(批號(hào)：20180503，廣州友聯(lián)化學(xué)試劑廠)；氯化鉀(批號(hào)：20170822，廣州市結(jié)盈化工科技有限公司)；氯化鎂(批號(hào)：20171109，天津市鼎盛鑫化工有限公司)；硝酸鉀(批號(hào)：20170104，廣州市錦源化學(xué)有限公司)；碳酸鉀(批號(hào)：20180315，天津渤化化學(xué)試劑有限公司)；溴化鈉(批號(hào)：20171023，天津化學(xué)試劑有限公司)；醋酸鉀(批號(hào)：20180509，西安天茂化工有限公司)均為分析純；水為蒸餾水。

2 方法與結(jié)果

炒六神曲為歸芪扶正方中佐藥，其所含酵母菌等有益菌有一定的粘合性，適宜充當(dāng)輔料，故將其粉碎作為部分輔料。中藥顆粒成型工藝優(yōu)選時(shí)需綜合考慮顆粒的成型性、流動(dòng)性以及穩(wěn)定性等相關(guān)因素。在本實(shí)驗(yàn)中選擇顆粒的成型率、吸濕率、休止角為指標(biāo)進(jìn)行全面評(píng)價(jià)(權(quán)重系數(shù)分別為0.5、0.3、0.2)，綜合評(píng)分滿分為100分，優(yōu)選顆粒成型的合適輔料與配比。通過分析實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)確定適宜的乙醇用量，獲得最佳顆粒成型工藝。

2.1 樣品的制備 按處方比例取藥材適量，以前期考察的最佳工藝制備樣品，濃縮干燥成干浸膏，粉碎后與炒六神曲一起過4號(hào)篩，等比例逐級(jí)遞增混勻，備用。

2.2 輔料類型篩選 制備顆粒劑的常用輔料為甘露醇、乳糖、微晶纖維素、淀粉、蔗糖、糊精，本實(shí)驗(yàn)結(jié)合相關(guān)需求進(jìn)行選用。取前期制備好的樣品，濃縮得干浸膏，備用。按照表1加入相應(yīng)的輔料混合，過篩，制粒，烘干，整粒，即得。按干浸膏∶輔料∶炒六神曲=6∶2∶1的比例，分別稱取干浸膏與不同輔料進(jìn)行混合，混合均勻后，制粒，并記錄相應(yīng)的軟材性狀、過篩情況、顆粒性狀以及成型率，實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)與實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表2，3，結(jié)果表明，以干浸膏/甘露醇/炒六神曲(6∶2∶1)比例時(shí)軟材效果最好。

表1 輔料配比表

表2 輔料考察相關(guān)結(jié)果表

表3 輔料考察成型率實(shí)驗(yàn)結(jié)果表

2.3 乙醇濃度單因素考察 取前期制備好的樣品，濃縮得干浸膏，備用。按干浸膏∶甘露醇∶炒六神曲=6∶2∶1的比例混合，分別加不同濃度的乙醇進(jìn)行混合，混合均勻后，制粒，并計(jì)算顆粒的成型率、休止角和吸濕率，計(jì)算綜合評(píng)分優(yōu)選最佳的乙醇濃度，實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)與實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表4，結(jié)果表明，以85%乙醇為粘合劑制備的顆粒效果最好。

表4 乙醇濃度單因素考察實(shí)驗(yàn)結(jié)果表

2.4 星點(diǎn)設(shè)計(jì)-響應(yīng)曲面法優(yōu)選最佳成型工藝

2.4.1 因素水平的確定 根據(jù)輔料類型和乙醇濃度的考察結(jié)果，確定以甘露醇用量、乙醇濃度為影響因素，以成型率、吸濕率、休止角為考察指標(biāo)[5]，進(jìn)行2因素5水平星點(diǎn)設(shè)計(jì)，依然設(shè)定綜合評(píng)分滿分為100分。各因素水平見表5，實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表6。

表5 因素水平表

表6 星點(diǎn)設(shè)計(jì)及結(jié)果表

2.4.2 成型率的測(cè)定 按《中國(guó)藥典》2020年版(四部)，照“粒度和粒度分布測(cè)定法”進(jìn)行測(cè)定[6]，計(jì)算成型率。

2.4.3 吸濕率的測(cè)定 精密量取合格顆粒適量，置于恒定濕度(RH)為75%(25 ℃)的干燥器中定時(shí)稱重，計(jì)算吸濕率[7]。

吸濕率(%)=(吸濕后顆粒的質(zhì)量-吸濕前顆粒的質(zhì)量)/吸濕前顆粒的質(zhì)量×100%。

2.4.4 休止角的測(cè)定 上下串聯(lián)3個(gè)漏斗，將顆粒從最上端倒入，直到所產(chǎn)生的顆粒堆頂部與下端的漏斗口接觸為止，按公式tanα=H/R 計(jì)算出休止角。式中：H為顆粒高度 (cm)，R為顆粒底部半徑(cm)[8]。

2.4.5 數(shù)據(jù)處理 通過響應(yīng)曲面軟件進(jìn)行擬合，并以擬合優(yōu)度(R2)及置信度(P)當(dāng)做評(píng)判標(biāo)準(zhǔn)。得回歸方程：Y=91.98+0.35A+0.43B+0.025AB-0.65A2-0.53B2，從表4的方差分析表可以看出A、B、A2、B2具有顯著性影響，影響程度為A>B>B2>A2；失擬項(xiàng)為0.8931>0.05，表明失擬不顯著；相關(guān)系數(shù)R2為0.8697，表明該模型擬合較好，試驗(yàn)誤差小，可用該模型對(duì)不同條件下的試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行測(cè)定。根據(jù)相關(guān)實(shí)驗(yàn)結(jié)果，繪制三維曲面圖。如圖1所示和見表7。

圖1 乙醇濃度-輔料比例等高線圖(左)和效應(yīng)面圖(右)

表7 數(shù)值分析結(jié)果表

2.4.6 讀圖與取值 由軟件分析所得最佳工藝條件，輔料理論最佳比例23.84%，理論最佳乙醇濃度87.06%，結(jié)合效應(yīng)面圖和等高線圖 (圖1)，并考慮實(shí)際情況，確定最佳成型工藝為輔料比例為24%，乙醇濃度為87%。

2.4.7 驗(yàn)證試驗(yàn) 按處方比例取當(dāng)相應(yīng)的藥材，并按照最佳提取工藝提取制備相應(yīng)干浸膏，按照最佳成型工藝制作顆粒，平行做3份。經(jīng)測(cè)算得綜合評(píng)分分別為93.5、91.9、92.8(RSD為0.86%)。結(jié)果表明其預(yù)測(cè)值與實(shí)際值是基本一致的，實(shí)驗(yàn)表明方程可預(yù)測(cè)試驗(yàn)結(jié)果，該工藝重復(fù)性好，穩(wěn)定可靠。

2.5 臨界相對(duì)濕度的測(cè)定 為了保證顆粒能夠在適宜的濕度下包裝，需要測(cè)定其臨界相對(duì)濕度。按照表7配制出不同鹽的過飽和溶液，精密稱定顆粒數(shù)份，每個(gè)實(shí)驗(yàn)平行三份樣品，分別置于相應(yīng)干燥器中，放置48 h，形成相應(yīng)的濕度環(huán)境，將顆粒放入相應(yīng)干燥器中，每個(gè)器皿中放置7 d后，精密稱定，計(jì)算吸濕率，測(cè)定臨界相對(duì)濕度(CRH)[9]，實(shí)驗(yàn)安排與結(jié)果見表8和圖2。由圖2看出，本顆粒在包裝時(shí)，環(huán)境濕度應(yīng)控制在65%以下。

圖2 臨界相對(duì)濕度圖

表8 相關(guān)溶液在25 ℃時(shí)的相對(duì)濕度

3 討論

處方中炒六神曲所含酵母菌等有益菌有一定的粘合性，適宜充當(dāng)輔料，故將其粉碎作為部分輔料，可以減少?gòu)S家生產(chǎn)成本，還可以充分提高組方中藥的利用率。

臨界相對(duì)濕度是衡量中藥固體制劑吸潮難易程度的一個(gè)重要指標(biāo)。采用不同鹽的過飽和溶液可形成不同的濕度環(huán)境，在臨界相對(duì)濕度的測(cè)定時(shí)，可在這些不同濕度環(huán)境下測(cè)定顆粒的吸濕率，并以吸濕率-相對(duì)濕度繪制臨界相對(duì)濕度曲線明確其臨界相對(duì)濕度，可保證顆粒能夠在適宜的濕度下進(jìn)行包裝。經(jīng)過“2.5 臨界相對(duì)濕度的測(cè)定”明確了制備好的歸芪扶正顆粒在進(jìn)行包裝時(shí)，環(huán)境濕度應(yīng)控制在65%以下，確保不影響其整個(gè)生產(chǎn)流程。

根據(jù)前期研究結(jié)果分析得出用吸水率、成型率、休止角為指標(biāo)用綜合評(píng)分得出用，再用星點(diǎn)設(shè)計(jì)-響應(yīng)曲面法優(yōu)選最合適添加的乙醇濃度、甘露醇使用量及干浸膏、輔料和炒六神曲的最優(yōu)比例，采取響應(yīng)曲面中心設(shè)計(jì)是因?yàn)槠溥B續(xù)的序列、完整的設(shè)計(jì)、階段的優(yōu)選、精準(zhǔn)的結(jié)果。

本實(shí)驗(yàn)通過輔料類型篩選確定了輔料的種類，并結(jié)合星點(diǎn)設(shè)計(jì)-響應(yīng)曲面法優(yōu)化歸芪扶正顆粒的成型工藝，確定了輔料用量和乙醇濃度，并明確其包裝濕度范圍。通過驗(yàn)證試驗(yàn)可知，星點(diǎn)設(shè)計(jì)-響應(yīng)曲面法優(yōu)選得到的歸芪扶正顆粒成型工藝穩(wěn)定可行，制備的顆粒具有成型率高、流動(dòng)性好、抗吸濕性強(qiáng)的特征，為該制劑之后的大生產(chǎn)提供參考。