王 磊 崔琴丹 趙宏偉 史建勛 黃先菊*

1.無限極(中國)有限公司，廣東 廣州 510000；2.中南民族大學(xué)，湖北 武漢 430074；3.浙江醫(yī)藥高等?？茖W(xué)校，浙江 寧波 315100

胃腸道疾病屬于全球衛(wèi)生流行病之一，據(jù)統(tǒng)計(jì)，全球有5%～10%的人群患有從胃炎到胃癌等不同程度的疾病[1]。胃病的發(fā)生和發(fā)展在一定程度上均與胃黏膜損傷有關(guān)，胃黏膜損傷是一系列外源性或內(nèi)源性攻擊因子進(jìn)入胃內(nèi)刺激胃黏膜所導(dǎo)致的炎癥反應(yīng)，胃黏膜屏障功能被攻擊因子侵襲及胃腺體結(jié)構(gòu)受到破壞時(shí)可誘發(fā)黏膜損傷[2]。其中飲酒是導(dǎo)致胃黏膜損傷最直接的原因，過量飲酒會(huì)明顯增加上消化道大出血的風(fēng)險(xiǎn)[3]。酒精所含有的主要成分乙醇對(duì)胃黏膜組織具有很強(qiáng)的腐蝕性，破壞表面黏液層和頸黏液細(xì)胞，并破壞胃黏膜的正常代謝所需的生理環(huán)境[4]。臨床上用于治療胃黏膜損傷的藥品主要有胃酸中和藥、H2受體拮抗劑、H+泵抑制劑等[5]，然而，服用這些藥物可能存在治療時(shí)間長、愈合緩慢、復(fù)發(fā)率高、副作用大等問題[6]。中醫(yī)將中藥的“四性”和“五味”論運(yùn)用到食物之中，認(rèn)為每種食物也具有“四性”、“五味”。許多食物即藥物。藥食同源類物質(zhì)本身可以作為實(shí)用性的中藥材，同時(shí)也兼具藥食的功能并作用于醫(yī)療保健領(lǐng)域。

藥食同源物質(zhì)大多性味平和，具有良好的安全性。欣樂本草菁萃(Xinle herb extract，XL)根據(jù)中國傳統(tǒng)中藥復(fù)方參苓白術(shù)散進(jìn)行組方，在選取7種藥食同源藥材(黨參、山藥、茯苓、白扁豆、陳皮、砂仁、白術(shù))的基礎(chǔ)上同時(shí)提取融合猴頭菇多糖制成。參苓白術(shù)散作為中國傳統(tǒng)中藥復(fù)方，在中醫(yī)中用于脾胃虛弱，食少便溏，氣短咳嗽，肢倦乏力。成份中的人參、山藥等是具有改善胃腸道功能作用的藥食同源物質(zhì)；復(fù)方中人參補(bǔ)氣，健脾養(yǎng)胃；山藥、桔梗宣肺養(yǎng)肺；白術(shù)、茯苓燥濕健脾；薏苡仁、扁豆健脾化濕；砂仁芳香化濕，和胃降逆；甘草調(diào)和諸藥，諸藥合用，共奏健脾益氣、滲濕止瀉之效。猴頭菇[Hericiumerinaceus(Bull.)Pers.]是齒菌科、猴頭菇屬真菌，也屬于中國傳統(tǒng)的貴重中藥材，《新華本草綱要》中記載，猴頭菇味甘，性平。有利五臟、助消化、滋補(bǔ)、抗癌等功能[7]?，F(xiàn)代研究表明，其含有的多糖成分，對(duì)胃潰瘍、潰瘍性結(jié)腸炎、十二指腸潰瘍、胃炎以及癌癥等都具有一定的療效。楊永剛等[8]通過猴頭菇多糖對(duì)乙酸構(gòu)建的SD大鼠潰瘍性結(jié)腸炎治療，發(fā)現(xiàn)猴頭菇多糖能夠顯著提高潰瘍性結(jié)腸炎大鼠血清中ATP的含量，并具有提高結(jié)腸組織中線粒體膜電位的作用。周輝等[9]通過對(duì)Lewis肺癌荷瘤小鼠灌胃給與猴頭菇多糖，發(fā)現(xiàn)其對(duì)小鼠Lewis肺癌具有劑量依賴性的抑瘤作用。

探討XL對(duì)胃黏膜損傷的保護(hù)作用和腸道菌群的影響，本文基于XL的功效，參考本課題組先前研究[10-11]，首先對(duì)XL進(jìn)行臨床劑量安全性研究，再采用無水乙醇所致胃黏膜損傷模型，對(duì)實(shí)驗(yàn)性大小鼠進(jìn)行給藥，測定XL對(duì)胃黏膜損傷大鼠的保護(hù)作用及對(duì)小鼠腸道菌群的影響，以期對(duì)XL的進(jìn)一步應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)和參考數(shù)據(jù)。

1 材料與儀器

1.1 動(dòng)物、材料與試劑

1.1.1 動(dòng)物 3～4周齡健康Wistar大鼠80只，雌雄各半[生產(chǎn)許可證號(hào)：SCXK(京)2016-0006，北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司]。SPF級(jí)SD雄性大鼠50只，SPF級(jí)雄性BALB/C小鼠40只，來源于湖北省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心[動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào)為SCXK(鄂)2015-0018]。

1.1.2 材料與試劑 XL來自無限極(中國)有限公司研發(fā)中心，密封，4 ℃保存。蒸餾水(武漢三羊泰科技有限公司)；0.9%氯化鈉注射液(武漢濱湖雙鶴藥業(yè)有限責(zé)任公司，批號(hào)：1610200801)；無水乙醇(國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司，產(chǎn)品批號(hào)：20170605)。

1.2 儀器與設(shè)備 XT-2000i型全自動(dòng)動(dòng)物血液細(xì)胞分析儀(日本希森美康公司)；AU 680全自動(dòng)生化分析儀Beckman Coulter K.K.；PB 302 型電子天平(瑞士梅特勒公司)；BS 110S型電子天平(北京賽多利斯天平有限公司)；ASP200S 型真空組織脫水機(jī)、EG1150 型包埋機(jī)、EG1150C 型包埋冷凍臺(tái)、RM2265 型全自動(dòng)切片機(jī)、HI1210 攤片機(jī)、HI1220 烤片機(jī)(Leica Biosystems Nussloch GmbH)；DM2500顯微照相儀(Leica Microsystems)；H-1850R高速冷凍離心機(jī)(湖南湘儀實(shí)驗(yàn)室儀器開發(fā)有限公司)。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 安全性實(shí)驗(yàn)

2.1.1 動(dòng)物分組與飼養(yǎng) 80只3～4周齡健康大鼠，在溫度為20～24 ℃，濕度為40%～70%及12 h 光暗周期環(huán)境下進(jìn)行飼養(yǎng)。適應(yīng)性喂養(yǎng)一周以后，將大鼠稱重并隨機(jī)分為高劑量組、中劑量組、低劑量組及陰性對(duì)照組，均為雌雄各10只。高、中、低三個(gè)劑量組分別灌胃給予5 g/kg、2.5 g/kg、1.25 g/kg三種濃度樣品溶液，陰性對(duì)照組灌胃給予純凈水，每天灌胃一次，灌胃體積均為1.0 mL/100 g體重，分別相當(dāng)于人攝入量(以每日口服3次、體重60 kg計(jì)，折算劑量則為0.05 g/kg)的100倍、50倍、25倍。每天灌胃1次，連續(xù)30 d。

2.1.2 大鼠相關(guān)指標(biāo)的測定

2.1.2.1 一般表現(xiàn)及行為學(xué)觀察 每日觀察并記錄所有動(dòng)物的一般表現(xiàn)、行為、呼吸、中毒表現(xiàn)及死亡情況。每周稱一次體重、兩次食物攝入量。計(jì)算每周及總的食物利用率。每周食物利用率(%)=周體重增重/周飼料攝入量×100%，總食物利用率=試驗(yàn)期間動(dòng)物體重總增重/飼料總攝入量×100%。

2.1.2.2 血液學(xué)及生化指標(biāo) 灌胃30 d后，末次灌胃后大鼠禁食16 h，大鼠用戊巴比妥鈉溶液腹腔注射麻醉，真空采血管腹主動(dòng)脈取抗凝血(EDTAK2抗凝)及未抗凝血后，腹主動(dòng)脈放血處死，抗凝血用于檢測血液學(xué)指標(biāo)，未抗凝血分離血清后用于檢測血液生化指標(biāo)。血液學(xué)指標(biāo)檢測如下數(shù)據(jù)：測定血紅蛋白(Hb)、紅細(xì)胞計(jì)數(shù)及分類(WBC&DC)；血液生化指標(biāo)檢測如下數(shù)據(jù)：丙氨酸氨基轉(zhuǎn)換酶(ALT)、天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)換酶(AST)、尿素氮(BUN)、肌酐(Cr)、血糖(GLU)、白蛋白(ALB)、總蛋白(TP)、總膽固醇(TCHO)、甘油三酯(TFG)，計(jì)算白蛋白/球蛋白比值(ALB/GIO)。

2.1.2.3 大體解剖及病理觀察 試驗(yàn)結(jié)束時(shí)，對(duì)所有大鼠進(jìn)行大體檢查，肉眼觀察各組大鼠的器官和組織生理病理狀況。HE染色法對(duì)陰性對(duì)照組及高劑量組大鼠的主要臟器進(jìn)行組織病理學(xué)檢查，包括肝、腎、脾、胃腸、卵巢(雌性)、睪丸(雄性)等。

2.1.2.4 臟器重量和臟/體比值 摘取各組大鼠肝、腎、脾、胃腸、卵巢(雌性)、睪丸(雄性)，濾紙吸干表面水分，稱量上述臟器的絕對(duì)重量，臟/體(%)=臟器絕對(duì)重量/動(dòng)物體重×100%(動(dòng)物體重為禁食后的體重)。

2.2 對(duì)胃黏膜損傷的保護(hù)作用及腸道菌群影響

2.2.1 對(duì)胃黏膜損傷的保護(hù)

2.2.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組及給藥 雄性SD大鼠50只，體重160～180 g，隨機(jī)分為正常組、模型組、低劑量組(0.033 g/mL)、中劑量組(0.067 g/mL)及高劑量組(0.2 g/mL)。適應(yīng)性喂養(yǎng)5 d后，每天1次灌胃給藥，連續(xù)4周，對(duì)照組和模型組給予等體積的生理鹽水。

2.2.1.2 胃黏膜損傷觀察 4周后全部動(dòng)物嚴(yán)格禁食24 h(不禁水)，此期間亦禁止給予受試物。除空白對(duì)照組外，所有試驗(yàn)動(dòng)物給予無水乙醇1 mL/只，1 h后處死動(dòng)物，暴露完整胃，結(jié)扎幽門，灌注適量10%甲醛，固定20 min，然后沿胃大彎剪開，洗凈胃內(nèi)容物，展開胃黏膜，用游標(biāo)卡尺測量出血點(diǎn)或出血帶長度和寬度，評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)詳見表1。

表1 酒精損傷肉眼觀察表

觀察指標(biāo)：各實(shí)驗(yàn)組胃黏膜損傷程度及損傷發(fā)生率(%)、損傷積分指數(shù)和損傷抑制率。損傷發(fā)生率(%)=某組出現(xiàn)出血或潰瘍的大鼠數(shù)量/該組大鼠數(shù)量×100%；損傷積分指數(shù)=組損傷評(píng)分總和/組動(dòng)物數(shù)量；損傷抑制率(%)=(A-B)/A×100%(A、B分別為模型組與試驗(yàn)組的損傷積分)。

病理組織學(xué)觀察及評(píng)分：大體檢查完畢，將每只動(dòng)物胃黏膜損傷最嚴(yán)重的部位切下，固定于10%甲醛溶液，常規(guī)切片，HE染色，鏡下觀察。注意選擇胃黏膜正橫切面，包括黏膜全層的區(qū)域觀察。評(píng)分方法：以充血、出血、黏膜細(xì)胞變性壞死在整個(gè)黏膜上皮層的累計(jì)程度分為5級(jí)。充血權(quán)重為1，出血權(quán)重為2，上皮細(xì)胞變性壞死權(quán)重為3，評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)及病變總積分公式詳見表2。

表2 急性胃黏膜損傷鏡下評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)表

2.2.2 對(duì)腸道菌群的調(diào)節(jié)作用

2.2.2.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組及給藥 雄性BALB/C小鼠40只，體重18～22 g，隨機(jī)分為對(duì)照組、低劑量組(0.033 g/mL)、中劑量組(0.067 g/mL)及高劑量組(0.2 g/mL)。每天灌胃給藥一次，連續(xù)4周，對(duì)照組給予等體積的生理鹽水。

2.2.2.2 小鼠腸道菌群的檢測 給藥前，將小鼠稱重后隨機(jī)分組，給藥后每周固定時(shí)間稱重一次，實(shí)驗(yàn)結(jié)束后繪制體重變化曲線。三周后全部動(dòng)物分組收集新鮮糞便，每天固定時(shí)間收集一次，連續(xù)6 d，稀釋糞便后涂布平板，進(jìn)行腸道菌群檢測計(jì)數(shù)。

雙歧桿菌：采用TPY瓊脂培養(yǎng)基，是GB標(biāo)準(zhǔn)中分離培養(yǎng)雙歧桿菌的方法，厭氧培養(yǎng)，菌落小，扁平，呈乳脂色至白色。乳桿菌：采用乳酸桿菌選擇性培養(yǎng)基，菌落大飽滿，突出，凸起，全緣和無色。腸球菌：采用腸球菌瓊脂，該培養(yǎng)基用于腸球菌的快速選擇性的分離培養(yǎng)的計(jì)數(shù)，形成表面圓整、黑色并產(chǎn)生黑色素至培養(yǎng)基中的菌落。腸桿菌：采用腸道菌計(jì)數(shù)瓊脂(VRBDA)，該培養(yǎng)基可用于腸道菌計(jì)數(shù)和腸桿菌科的鑒別，形成菌落呈紫色和棕色。擬桿菌：采用BDS培養(yǎng)基，該培養(yǎng)基用于擬桿菌的分離培養(yǎng)，厭氧培養(yǎng)，形成的菌落表面圓整，全緣和無色。梭桿菌：采用SPS培養(yǎng)基，該培養(yǎng)基可用于梭桿菌的分離培養(yǎng)，厭氧培養(yǎng)，菌落小，表面圓整，全緣和無色。梭菌：采用強(qiáng)化梭菌瓊脂，強(qiáng)化梭菌瓊脂用于梭菌的培養(yǎng)和計(jì)數(shù)，厭氧培養(yǎng)，菌落小，表面圓整，全緣和無色。

2.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 所有計(jì)量資料均以均值加減標(biāo)準(zhǔn)差表述，采用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)軟件分析。兩組間差異顯著性檢驗(yàn)采用兩獨(dú)立樣本的t檢驗(yàn)，多組均數(shù)間顯著性比較用單因素方差分析(one-way AVONA)，以P<0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

3.1 安全性實(shí)驗(yàn)

3.1.1 一般表現(xiàn)及行為學(xué)觀察 實(shí)驗(yàn)過程中，各組動(dòng)物外觀、行為、毛發(fā)等一般表現(xiàn)正常，無死亡情況發(fā)生。各組大鼠體重正常增長，受試物各劑量組與陰性對(duì)照組相比均無顯著性差異(P>0.05)。每周攝食量、每周食物利用率、體重總增重、總攝食量及總食物利用率等與陰性對(duì)照組比較，均無顯著性差異(P>0.05)。

3.1.2 血液學(xué)指標(biāo) 受試物各劑量組與陰性對(duì)照組相比，雌性大鼠高劑量組的嗜酸性粒細(xì)胞比例略低于對(duì)照組；雄性大鼠中劑量組白細(xì)胞數(shù)量略高于對(duì)照組；雄性大鼠低劑量組單核細(xì)胞比例略高于對(duì)照組；雄性大鼠高劑量組和中劑量組紅細(xì)胞數(shù)量和血紅蛋白濃度略高于對(duì)照組；這些差異均很小且劑量效應(yīng)關(guān)系不明顯，屬于正常生理范圍內(nèi)的波動(dòng)[12-14]，無毒理學(xué)意義。其余指標(biāo)的差異均無顯著性意義(P>0.05)。結(jié)果詳見表3。

表3 XL對(duì)大鼠血液學(xué)指標(biāo)的影響結(jié)果表

3.1.3 血液生化指標(biāo) 受試物各劑量組與陰性對(duì)照組相比，雌性大鼠低劑量組的白蛋白含量、中劑量組的肌酐含量、中劑量和低劑量組的白蛋白/球蛋白比值均略高于對(duì)照組；雄性大鼠中劑量組甘油三酯、高劑量組的血糖值也略高于對(duì)照組。結(jié)果詳見表4。

表4 XL對(duì)大鼠血液生化指標(biāo)的影響結(jié)果表

3.1.4 臟器重量及臟/體比值 受試物各劑量組與陰性對(duì)照組相比，僅雄性大鼠的低劑量組腎臟重量高于對(duì)照組，但無劑量效應(yīng)關(guān)系，屬于正常范圍內(nèi)的波動(dòng)[12-14]，無毒理學(xué)意義。各項(xiàng)指標(biāo)均無顯著性差異(P>0.05)。

3.1.5 大體解剖及組織病理學(xué) 檢查各組動(dòng)物，大體解剖心臟、肝臟、脾臟、肺臟、腎臟、胃腸等主要臟器，未見肉眼可見的毒性病理性改變，與陰性對(duì)照組比較其外觀、顏色和臟器大小正常，均未出現(xiàn)明顯滲出、增生、水腫、萎縮等病變。陰性組動(dòng)物病理學(xué)檢查結(jié)果表明，5只大鼠肝臟出現(xiàn)局灶性、輕微肝細(xì)胞脂肪變性，其他大鼠肝結(jié)構(gòu)清晰，各種細(xì)胞未見明顯病理變化；所有大鼠脾臟被膜及小梁形態(tài)完整，紅、白髓分界清晰，脾小體形態(tài)、體積、數(shù)量正常，未見明顯病理變化；所有大鼠腎結(jié)構(gòu)正常，腎小球、腎小管及間質(zhì)均未見明顯病理變化；所有大鼠卵巢組織結(jié)構(gòu)正常，卵巢中可見不同發(fā)育階段的卵泡及黃體，未見明顯病理變化；所有大鼠睪丸內(nèi)有大量緊密排列的曲細(xì)精管，管內(nèi)的各級(jí)生殖細(xì)胞發(fā)育正常，管腔內(nèi)可見精子，未見明顯病理變化；7 只大鼠胃黏膜出現(xiàn)輕微的局灶性上皮細(xì)胞變性、壞死、脫落，黏膜下層水腫。其他動(dòng)物胃黏膜表面結(jié)構(gòu)清晰，黏膜下層、肌層及漿膜層未見病理改變，部分可見胃內(nèi)容物及少量脫落的黏膜上皮，未見明顯病理變化；4 只大鼠的腸黏膜上皮細(xì)胞變性壞死脫落，腸絨毛斷裂脫落。其他動(dòng)物腸黏膜表面有許多葉狀絨毛突起于腸腔，絨毛可見豐富的吸收細(xì)胞及少量的杯狀細(xì)胞。部分腸黏膜上皮細(xì)胞脫落，與腸內(nèi)容物混合，附著于腸黏膜表面，未見炎性細(xì)胞浸潤，未見其它明顯病理變化。

而受試物高劑量組病理學(xué)檢查結(jié)果表明，5只大鼠肝臟出現(xiàn)局灶性、輕微肝細(xì)胞脂肪變性。其他大鼠肝結(jié)構(gòu)清晰，各種細(xì)胞未見明顯病理變化；所有大鼠脾臟被膜及小梁形態(tài)完整，紅、白髓分界清晰，脾小體形態(tài)、體積、數(shù)量正常，未見明顯病理變化；腎臟組織結(jié)構(gòu)正常，腎小球、腎小管及間質(zhì)均未見明顯病理變化；卵巢組織結(jié)構(gòu)正常，卵巢中可見不同發(fā)育階段的卵泡及黃體，未見明顯病理變化；睪丸內(nèi)有大量緊密排列的曲細(xì)精管，管內(nèi)各級(jí)生殖細(xì)胞發(fā)育正常，管腔內(nèi)可見精子，未見明顯病理變化；7 只大鼠胃黏膜出現(xiàn)輕微的局灶性上皮細(xì)胞變性、壞死、脫落，黏膜下層水腫，1只大鼠胃黏膜壞死并伴有出血，其他動(dòng)物胃黏膜表面結(jié)構(gòu)清晰，黏膜下層、肌層及漿膜層未見病理改變，部分可見胃內(nèi)容物及少量脫落的黏膜上皮，未見明顯病理變化；2 只大鼠的腸黏膜上皮細(xì)胞變性壞死脫落，腸絨毛斷裂脫落，1只大鼠的腸黏膜壞死并伴有出血，1只大鼠的腸黏膜壞死并伴有淋巴組織增生，其他動(dòng)物腸黏膜表面有許多葉狀絨毛突起于腸腔，絨毛可見豐富的吸收細(xì)胞及少量的杯狀細(xì)胞。部分腸黏膜上皮細(xì)胞脫落，與腸內(nèi)容物混合，附著于腸黏膜表面，未見炎性細(xì)胞浸潤，未見其它明顯病理變化。

3.2 對(duì)胃黏膜損傷的保護(hù)作用及腸道菌群影響

3.2.1 對(duì)胃黏膜損傷的保護(hù)

3.2.1.1 急性胃黏膜損傷情況分析 圖1結(jié)果顯示，除空白組外，其余大鼠均出現(xiàn)了黏膜出血，組織壞死(如圖1黑色箭頭所示)。模型組動(dòng)物損傷最嚴(yán)重，表現(xiàn)為大塊的瘀血，呈鮮紅色。高、中、低劑量給藥組則表現(xiàn)為點(diǎn)狀或條狀出血，出血面積明顯縮小。根據(jù)評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)計(jì)算各組動(dòng)物損傷評(píng)分如表所示，XL可劑量依賴性的保護(hù)無水乙醇所致胃黏膜損傷。

圖1 無水乙醇所致急性胃黏膜損傷實(shí)拍圖

3.2.1.2 病理學(xué)組織結(jié)果 病理學(xué)檢查結(jié)果與肉眼大體觀察一致，正常組大鼠胃黏膜組織整體結(jié)構(gòu)基本正常，黏膜上皮無明顯壞死，黏膜層無明顯出血及炎癥，血管無明顯充血。模型組大鼠胃黏膜組織整體結(jié)構(gòu)異常，部分胃小凹結(jié)構(gòu)不清，黏膜層可見出血伴大量炎癥細(xì)胞浸潤，如虛線粗箭頭所示；黏膜層小血管可見充血，如虛線細(xì)箭頭所示，部分黏膜上皮糜爛，部分上皮細(xì)胞壞死脫落，如實(shí)線箭頭所示。低劑量動(dòng)物胃黏膜組織整體結(jié)構(gòu)異常，黏膜層可見出血，如虛線粗箭頭所示；部分小血管充盈少量紅細(xì)胞，如虛線細(xì)箭頭所示；黏膜層可見部分壞死，如實(shí)線箭頭所示。中劑量動(dòng)物胃黏膜組織整體結(jié)構(gòu)輕度異常，黏膜層可見輕度出血及小血管充血，如虛線粗箭頭所示；部分黏膜層糜爛，上皮細(xì)胞壞死變性，如實(shí)線箭頭所示。高劑量動(dòng)物胃黏膜組織整體結(jié)構(gòu)輕度異常，黏膜層可見部分細(xì)胞壞死，腺體結(jié)構(gòu)破壞，如虛線粗箭頭所示：組織無明顯出血，小血管無明顯充血。說明XL可劑量依賴性保護(hù)胃黏膜損傷(見圖2及表5)。

圖2 各組動(dòng)物胃黏膜病理圖

表5 急性胃黏膜損傷鏡下評(píng)分表

3.2.2 對(duì)腸道菌群的調(diào)節(jié)作用 給藥3周以后，XL空白組及各劑量組小鼠體重均增加，各組間不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。各組間除腸桿菌數(shù)量無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異外，其他菌種均出現(xiàn)了上升或下降。除與對(duì)照組相比，益生菌雙歧桿菌(低、中劑量給藥組)、乳桿菌(高劑量給藥組)及擬桿菌(中、高劑量給藥組)數(shù)量均上升。而非益生菌如腸球菌(中、高劑量給藥組)則出現(xiàn)明顯下降，梭桿菌(低、高劑量給藥組)及梭菌(低劑量給藥組)略有下降(對(duì)照組各批次小鼠腸道菌群計(jì)數(shù)情況詳見表6，XL對(duì)腸道菌群的調(diào)節(jié)作用分析結(jié)果如圖3所示)。上述結(jié)果說明本產(chǎn)品對(duì)腸道菌群具有良好的調(diào)節(jié)作用。

圖3 XL對(duì)腸道菌群的調(diào)節(jié)作用分析結(jié)果圖

表6 對(duì)照組各批次小鼠腸道菌群計(jì)數(shù)情況表

4 討論

XL是在傳統(tǒng)中藥復(fù)方參苓白術(shù)散的基礎(chǔ)上，融合了猴頭菇多糖，復(fù)方中含有的所有中藥材均屬于藥食同源類藥材。參苓白術(shù)散作為由藥食同源類藥材組成的傳統(tǒng)中藥復(fù)方，在使用上就相比于其它中藥或化學(xué)藥更具有安全性。已有研究[13-15]表明，參苓白術(shù)散具有調(diào)節(jié)胃腸運(yùn)動(dòng)、促進(jìn)機(jī)體代謝和提高免疫力，改善由葡聚糖硫酸鈉(DSS)誘發(fā)的潰瘍性結(jié)腸炎(UC)炎癥反應(yīng)，改善腸道損傷情況，對(duì)哺乳期母鼠腸道菌群紊亂導(dǎo)致的仔鼠腸道穩(wěn)態(tài)失衡以及減輕仔鼠斷奶應(yīng)激也具有調(diào)節(jié)作用。猴頭菇在生活中和臨床上常用作于“養(yǎng)胃”食品，研究[16]發(fā)現(xiàn)，猴頭菇多糖能促進(jìn)胃黏膜血流量增加，催化多種胃黏膜因子保護(hù)作用，起到抗?jié)?、保護(hù)胃黏膜及治療應(yīng)激性胃黏膜損傷的效果。猴頭菇多糖還可通過調(diào)節(jié)超氧化物歧化酶的活性，對(duì)慢性胃損傷型大鼠有保護(hù)作用[17]。XL與傳統(tǒng)中藥復(fù)方參苓白術(shù)散相比，由于其組方中含有的猴頭菇多糖，使其具有調(diào)節(jié)胃腸運(yùn)動(dòng)，改善腸道菌群功效的同時(shí)，還具有胃黏膜保護(hù)作用。本研究以鼠類為研究對(duì)象，對(duì)XL進(jìn)行安全性評(píng)價(jià)。使用不同劑量的XL灌胃給予到大鼠中，30 d后觀察其對(duì)大鼠的行為學(xué)、血液生化、臟器重量及組織病理的影響。結(jié)果表明，不同劑量的XL(5 g/kg、2.5 g/kg、1.25 g/kg)對(duì)大鼠外觀、行為、毛發(fā)均無影響，無死亡情況，大鼠體重正常生長；對(duì)大鼠血液學(xué)及血液生化指標(biāo)均無毒理學(xué)意義；所有大鼠的臟/體比值均無顯著性差異；組織病理學(xué)結(jié)果顯示，除了高劑量XL組大鼠出現(xiàn)了部分胃、肝臟和腸道的輕微損傷外，其余大鼠均無明顯的組織病理學(xué)病變。無水乙醇所致大鼠的急性胃黏膜損傷模型，會(huì)出現(xiàn)胃黏膜出血、充血、糜爛、潰瘍等病理，常用于研究藥物的胃黏膜保護(hù)作用，目前普遍認(rèn)為其發(fā)病原因和機(jī)制是由多種因素共同作用，其發(fā)生與致潰瘍因子(胃酸、胃蛋白酶分泌、幽門螺桿菌感染、迷走神經(jīng)亢進(jìn)等)和防御因子(黏液分泌、黏膜抵抗等)之間的平衡被打破有關(guān)[18]。在動(dòng)物模型中，胃黏膜損傷指數(shù)和組織形態(tài)病理學(xué)是觀察胃黏膜損傷程度的最直觀指標(biāo)[19]。因此，課題組檢測了不同劑量XL對(duì)無水乙醇所致大鼠胃黏膜損傷的影響，發(fā)現(xiàn)XL可以明顯減輕無水乙醇所致的胃黏膜損傷，模型組動(dòng)物胃黏膜表現(xiàn)為大塊的瘀血，呈鮮紅色；病理學(xué)結(jié)果顯示，模型組大鼠黏膜層出血伴隨大量炎癥細(xì)胞浸潤，部分黏膜上皮糜爛，部分上皮細(xì)胞脫落壞死。模型組動(dòng)物黏膜組織整體結(jié)構(gòu)異常。而XL各劑量給藥組則明顯改善上述現(xiàn)象，黏膜表現(xiàn)為點(diǎn)狀或條狀出血，出血性損傷明顯較少。上述結(jié)果表明，XL可劑量依賴性地保護(hù)無水乙醇所致的大鼠胃黏膜損傷。

人體胃腸道內(nèi)分布著大量的菌群，龐大的微生物體系是機(jī)體趨于健康態(tài)的“橋梁”，它們不但控制著物質(zhì)的消化吸收和機(jī)體免疫，而且具有預(yù)防和治療代謝性疾病等作用[20]。中藥中豐富的化學(xué)成分往往對(duì)腸道菌群具有調(diào)節(jié)作用，可維持菌群的相對(duì)平衡，一些活性成分可以直接被腸道菌群吸收利用，直接起到增加特定腸道菌群豐度的作用[21]。研究[22]表明，參苓白術(shù)散在治療危重病患者腸道菌群失調(diào)效果顯著，可改善患者腸黏膜通透性，降低腸道菌群失調(diào)嚴(yán)重程度，改善患者腸道菌群失調(diào)伴隨癥狀與體征。因此在以上相關(guān)研究基礎(chǔ)上，本研究旨在探索XL對(duì)腸道菌群的調(diào)節(jié)作用，挖掘腸道菌群與胃黏膜保護(hù)作用的關(guān)系，進(jìn)一步探究XL是否具有胃黏膜保護(hù)和調(diào)節(jié)腸道菌群的雙重作用。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，XL長期給藥可以明顯增加小鼠腸道益生菌雙歧桿菌、乳桿菌及擬桿菌的數(shù)量，略降低非益生菌腸球菌、梭桿菌及梭菌的數(shù)量。腸道菌群作為保護(hù)腸道健康的重要部分，腸道菌群紊亂與疾病的發(fā)生密切相關(guān)，研究[23]表明，腸道菌群的紊亂與胃黏膜損傷的發(fā)生也密切相關(guān)。XL能夠通過上調(diào)小鼠腸道內(nèi)益生菌的數(shù)量，略降低非益生菌的數(shù)量來達(dá)到調(diào)節(jié)腸道菌群的目的，這可能是其發(fā)揮保護(hù)胃黏膜損傷的機(jī)制之一。結(jié)合上述XL可保護(hù)無水乙醇所致大鼠胃黏膜損傷，我們有理由相信，XL作為一種藥食同源的保健食品，在保護(hù)胃腸道方面具有相當(dāng)大的潛力。本研究雖證明XL在治療無水乙醇所致的胃黏膜損傷以及調(diào)節(jié)腸道菌群方面有顯著療效，但未從其具體物質(zhì)基礎(chǔ)開展具體研究，XL治療胃黏膜損傷和調(diào)節(jié)腸道菌群的具體機(jī)理研究有待進(jìn)一步開展。

綜上所述，XL臨床劑量范圍內(nèi)無明顯毒副作用，具有明顯的胃黏膜保護(hù)和調(diào)節(jié)腸道菌群雙重作用，且由于其藥食同源的屬性，本方在“藥食同補(bǔ)”理論方面具有積極的貢獻(xiàn)意義。

6 結(jié)論

通過上述研究，XL在實(shí)驗(yàn)過程中未出現(xiàn)明顯的毒副作用，同時(shí)其可以保護(hù)胃黏膜損傷，優(yōu)化調(diào)整腸道菌群，對(duì)胃腸道功能具有正向調(diào)節(jié)作用。但其多成分、多途徑、多靶點(diǎn)共同調(diào)控的機(jī)制有待進(jìn)一步挖掘。